Инкапсуляция Термогенный преадипоциты для трансплантации в жировой ткани депо

1Department of Human Sciences, The Ohio State University, 2Department of Minimally Invasive Surgery, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 3NSF Nanoscale Science and Engineering Center for Affordable Nanoengineering of Polymeric Biomedical Devices, The Ohio State University
Published 6/02/2015
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Cite this Article

Copy Citation

Xu, L., Shen, Q., Mao, Z., Lee, L. J., Ziouzenkova, O. Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots. J. Vis. Exp. (100), e52806, doi:10.3791/52806 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Сотовый инкапсуляции была разработана для улавливания жизнеспособных клеток в полупроницаемых мембран. Насаждаемое инкапсулированные клетки могут обмениваться низкие метаболитов молекулярным весом в тканях обрабатываемой хозяина для достижения долгосрочного выживания. Полупроницаемую мембрану позволяет привиты инкапсулированные клетки, чтобы избежать отторжения иммунной системой. Процедура инкапсуляции была разработана для того, чтобы контролируемое высвобождение биологически активных соединений, таких как инсулин, других гормонов, и цитокинов. Здесь мы опишем метод инкапсуляции для катаболических клеток, которые потребляют липидов для производства тепла и диссипации энергии (термогенез) в внутрибрюшного жировой ткани у мышей с ожирением. Инкапсуляция термогенных катаболических клеток может быть потенциально применимы для предупреждения и лечения ожирения и диабета 2 типа. Другое потенциальное применение катаболических клеток может включать в себя детоксикации от спиртов или других токсичных метаболитов, загрязнителей окружающей среды.

Introduction

Увеличение заболеваемости хроническими болезнями 1 стимулировало исследования по трансплантации терапевтических клеточных популяций 2. Сингенные или аллогенных стволовых клеток являются наиболее часто используемые типы клеток для этих приложений 2. Тем не менее, эти процедуры не позволяют контролировать дифференциации и миграции стволовых клеток после имплантации и не рентабельным. Трансплантация генетически модифицированных клеток с выгодных функций предвидит улучшения лечения многих заболеваний. Тем не менее, генетические модификации клеток признаны иммунной системы хозяина, следовательно, эти процедуры требуют иммуносупрессии 3. Инкапсуляция клеток, продуцирующих инсулин был разработан доктором Чанг 4. Методика основана на инкапсуляции клеток в альгинатных капель, которые погружают в раствор хлорида кальция. Альгинатные молекулы состоят из маннуроновой (М) и гулуроновой кислоты (G), и может быть подключен с помощью Ca 2+, После желатинизации, гранулы суспендируют в поли-L-лизин (PLL) раствора. Во время этого этапа ФАПЧ связывается с G и М в молекулах альгината, который устанавливает мембрану капсулы. Пористость оболочки капсулы можно модулировать путем изменения концентрации М и PLL, времени инкубации и температуры. Связывание PLL также зависит от типа и концентрации альгината. Альгинатные матрицы, сшитый Са 2+, неустойчивы в физиологической среде или в общих буферных растворов с высокой концентрацией фосфата и цитрата ионов. Эти буферы могут извлечь Ca 2+ из альгината и жидкое ядро. Сжижение альгината ядра обеспечивает пространство внутри капсулы для сотовых движения и роста. Клетки, инкапсулированные в альгинат полианионного с поликатионный поли-L-лизина (APL) непроницаемы для иммуноглобулинов, но есть приток питательных веществ и отток токсинов. Эти свойства позволяют APL на длительный срок суrvival инкапсулированных клеток после трансплантации в генетически различных хостов. Эллиот и др. Сообщили выживание функционирует инкапсулированные клетки поджелудочной железы свиньи у пациента-человека девять лет после имплантации 5.

Методы инкапсуляции могут быть классифицированы в микрокапсуляции (3-800 мкм) и макроинкапсулирование (больше, чем 1000 мкм). Микрокапсулы более долговечны, чем макрокапсулы 6. С момента своего открытия д-ра Чанга и коллегами в 1964 году, микрокапсулы широко используется для инкапсуляции анаболических клеток, продуцирующих инсулин, других гормонов и биологически активных молекул 7. Эти процедуры столкнулась с рядом проблем в принимающей ткани, включая фиброз и иммунного ответа 8. Первоначально побочные эффекты, связанные с качеством биополимеров были решены. Тем не менее, трансплантация клеток анаболических еще инициирует побочные эффекты, такие как фиброз, в результате гормональной overprкий ВВЕДЕНИ Е вне специализированного железы.

В последние десятилетия, ожирение и диабет типа 2 достигло масштабов эпидемии 9. Более 30% взрослых людей во всем мире имеют избыточный вес и ожирение 10. Увеличение внутрибрюшного (IAB) образование жира увеличивает частоту хронического воспаления и способствует сахарный диабет 2 типа, сердечно-сосудистые заболевания, некоторые виды рака и других заболеваемости среди 11-13. Несколько линий доказательств предположил, что патогенез связан с IAB жира может быть предотвращено путем конкретных адипоцитов. Последние исследования показали, что трансплантация подкожных адипоцитов в IAB области может улучшить обмен веществ и уменьшить ожирение и инсулинорезистентность у грызунов в естественных условиях 14. Эффективное снижение ожирения и резистентности к инсулину была связана с термогенный адипоцитов, способных рассеивать энергию в виде тепла 15,16. Термогенный модификация адипоцитов может быть достигнуто путем стабильной трансфекциигенов, участвующих в митохондриального протонного разобщением, таких как разобщение белка 1 (UCP1) или генов, регулирующих экспрессию UCP1 и других термогенных генов 15,16. Наши недавние исследования показали, что дефицит в альдегиддегидрогеназы 1 A1 (aldh1a1) приводит к термогенный ремоделирования IAB жира, что уменьшает ожирение и резистентность к инсулину у этих мышей 17,18. Следует отметить, что инкапсуляция термогенный aldh1a1 недостаточной (aldh1a1 - / -) преадипоциты опосредует же терапевтический эффект в IAB жира у тучных мышей дикого типа, что указывает новые терапевтические возможности для лечения IAB жира 18. В экспериментальных условиях, инкапсулированные клетки позволит исследователям изучать эффекты конкретных клеточных популяций в экономически эффективным образом 19. Здесь мы обсуждаем метод инкапсуляции термогенного катаболического клеточной линии и ее лаборатории и терапевтического применения в мышиной модели ожирения. Протокол описывает три фазы для производства микрокапсул (рис 1): формирование альгината микросфер (рис 1А), формирование поликатионного поли-L-лизина (PLL) мембран на поверхности микросфер (рис 1B), и удаления альгината ядра (рис 1в).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Протокол исследования был одобрен этическими комитетами университета штата Огайо. Эксперименты на животных были одобрены протоколом IACUC. Все процедуры были выполнены в соответствии с биозащитой уровня 2 с ламинарного потока. Мы выполнили все стандартные требования и процедуры безопасности. Методика микрокапсулы для приготовления микрокапсул было выполнено, как описано 17, 18.

1. Подготовка материалов

  1. Подготовка 10 мл 2% -ного раствора альгината натрия в автоклаве физиологического солевого раствора (0,9% NaCl в воде). Готовят 0,05% раствор PLL в физиологическом растворе. Подготовьте эти решения накануне и перемешивают в течение ночи. Фильтры решения с 0,22 мкм фильтр перед использованием.
  2. Подготовка 50 мМ цитрата натрия и 100 мМ CaCl 2 в 0,9% растворов NaCl и автоклаве их.
  3. Автоклав все решения, иглы, электроды, и стаканы. Тщательно чистые иглы с проводами, чтобы избежать засорения,
  4. Определить соответствующее количество клеток будет использоваться для капсул (102 микрокапсулы необходимы для каждого см 2 скважины и есть приблизительно 500 клеток на капсулу 18). Используйте 1 мл альгината натрия в два миллиона клеток.
  5. Приготовьте 'роста фибробластов среды ", содержащий 10% сыворотку теленка и 100 ед / мл пенициллина / стрептомицина в высокой концентрацией глюкозы (4,500 мг / л глюкозы) среде Игла, модифицированной Eagle (DMEM).
    1. Приготовьте 'дифференциации среде I', содержащего 10% фетальной бычьей сыворотки, 10 мкг / мл инсулина, 1 мкМ дексаметазон, 0,5 мМ 3-изобутил-1-метил ксантина и 100 ед / мл пенициллина / стрептомицина в среде DMEM.
    2. Приготовьте 'дифференциации Medium II' содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки, 10 мкг / мл инсулина, и 100 ед / мл пенициллина / стрептомицина в DMEM.
  6. Подготовка буфера для лизиса, содержащего ингибитор протеазы один таблетку в 10 мл Радио-иммунопреципитации буфера (RIПА буфер).

2. альгинат Microbeads Подготовка (1А)

  1. Удалить старые среды от клеточной культуры колбу. Промыть клетки с 10 мл PBS. Доведите клеток в суспензии с 0,25% трипсин-ЭДТА (2 мл на одну сливной T175 колбу).
  2. Граф клеток в суспензии клеток использованием гемоцитометра. Используйте 10 мл аликвоты из клеточной суспензии и клетки рассчитывать в соответствии с инструкциями изготовителя. Центрифуга остальные клетки в среде центрифугированием при 480 х г при комнатной температуре в течение 5 мин.
  3. Приостановка осадок клеток в альгинат натрия, как описано в шаге 1.4. Передача альгинат натрия-клеток решение 5 мл шприца.
  4. Удалить воздушные пузырьки в растворе, добавить 23-иглы и шприца инвертировать, чтобы создать 1 мл карман воздуха.
  5. Поместите небольшой стакан (180 мл), содержащей 144 мл 100 мМ CaCl 2 раствора под иглы носик инкапсулятора. Прикрепите электрод инкапсулятор с наконечником approximленно 2,5 см выше поверхности раствора 100 мМ CaCl 2.
  6. Поместите плотно в шприц, содержащий раствор альгината натрия-клеток в шприцевой насос. Прикрепите резиновую трубку к отверстию шприца. Нажмите на поршень, пока раствор альгината натрия-клеток не входит в середине трубки. Отрегулируйте напряжение до 5,4 кВ. Установите диаметр 12.06 мм на шприцевой насос. Регулировка скорости 3 мл / ч. Запустите насос. Включите инкапсулятора и поддерживать напряжение на 5,4 кВ.
  7. Закрыть окно капотом и избежать ненужного вибрации до конца формирования альгинатных микросфер. Ведь раствор проходит через иглу, укрепить альгината шаровидные микрогранулы в 100 мМ CaCl 2 решения для дополнительных 20 мин до покрытия PLL.

3. Покрытие Microbeads с PLL (1В)

  1. Снимите стакан, содержащий шаровидные микрогранулы альгинат натрия-клеток и передать эти MiCRobEADS в 50 мл центрифужную пробирку. Удалить CaCl 2 раствор из микрогранулами таблетки.
  2. Вымойте шаровидные микрогранулы альгинат-клеток путем добавления 30 мл 0,9% NaCl. Встряхнуть пробирку вручную осторожно. Удалить 0,9% NaCl с 25 мл пипетки после микросферы уже осаждают гравитации. Повторите еще два раза в общей сложности 3 стирок.
  3. Использование 10 мл 0,05% раствора ФАПЧ на каждый 1 мл раствора альгината натрия. Добавьте 0,05% PLL и вихрь в 1000 оборотов в мин в течение 10 мин.
    Примечание: Как правило, 10 мин достаточно для PLL покрытием.
  4. После PLL покрытие формируют, удаления раствора PLL и мыть капсулы 3 раза, как описано в 3.2.

4. Удаление альгината Core (рис 1С)

  1. Добавить 30 мл 50 мМ раствора цитрата натрия. Подождите 5 минут или пока все альгинат натрия растворяют. Вымойте капсулы три раза, как описано в шаге 3.1.1.
  2. Извлеките 0,9% NaCl, добавляют 20 мл культуральной среды в 50 мл пробиркуи передавать все капсулы, содержащие клетки в клеточной культуральной колбе. Ручка инкапсулированные клетки в стандартных условиях культивирования клеток 18.

5. В пробирке приложений для изучения ксенотрансплантатов и клетка-хозяин взаимодействий или кинетики метаболитов Приток / отток между клетками (рис 2)

  1. Хозяева Культура клеток на 24-луночный планшет до сливной для совместных культур. Используйте 'роста фибробластов Medium »для культивирования преадипоциты.
  2. Передача микрокапсулы в 24 пластинчатых клеток, содержащих принимающих сливной ямы. Добавить микрокапсулы для достижения монослоя (102 микрокапсулы / см 2 а).
  3. Вызвать предварительно дифференциацию адипоцитов с дифференциацией среднего I. Каждый 48 ч, изменение средств массовой информации к дифференциации среднего II в течение шести дней. Lyse клетки в RIPA буфера. Используйте 50 мкг белка на состоянии анализировать экспрессию белка с помощью Вестерн-блот.

6. В Vivo заявки на TreatmЛОР ожирения (Рисунок 3)

  1. Смешайте 4% изофлуран с кислородом для индукции анестезии и 2% изофлуран с кислородом для поддержания анестезии. Подтвердите адекватную глубину анестезирующего по ног крайнем случае.
    1. Применить анти-зуд мазь на глазах, чтобы защитить роговицу от высыхания.
  2. Использование инкапсулированные клетки, которые постоянно меченные искусственного белка флуоресценции, такие как зеленой флуоресценции белка (GFP).
  3. Использовать шприц 3 мл и 20 иглы, чтобы придать инкапсулированных клеток.
    1. Инъекционные 0,5 х 10 6 клеток суспендировали в 0,2 мл PBS в каждую IAB депо жира, который находится в внутрибрюшинного области между гонад и почек, как показано на рисунке 3. Используйте этот объем PBS и номер ячейки для мышей со средней массы 40 г. Регулировка количества клеток и объем у мышей, которые имеют различный вес и для определения зависимости от дозы эффектов.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

1 показано, что каждый шаг производства микрогранул можно контролировать под микроскопом. показано, как совместное культивирование адипоцитов с монослоем инкапсулированных клеток. является типичным примером количественного исследования с использованием адипоцитов / микрокапсул со-культуры, что были описаны в разделе 5. лизатов адипоциты были проанализированы с использованием Вестерн-блот. Капсула не анализировались в этом эксперименте. Первичный ATGL и β-актина антитела были использованы в разведении 1: 1000. Отношение ATGL чтобы β-актина показаны в виде средней SD трех независимых экспериментов. Аналогичная совместно культура подходы могут быть использованы для анализа мРНК и изучение последствий инкапсулированных клеток и адипоцитов взаимодействий в совместных культурах. Данные показывают, что инкапсулированные термогенный aldh1a1 - / - адипоциты индуцируют значительно более высокие уровни ATGL липазы и липолиза в адипоцитах 18 по сравнению с encapsulaТед WT адипоциты.

Рисунок 3 показывает, что GFP указывает местоположение и целостность капсул в принимающей жировой ткани. Выражение GFP также является показателем жизнеспособности клеток.

Качественная оценка

Качество герметизации или имплантации инкапсулированных клеток может быть оценена с помощью микроскопии, МРТ и с помощью иммуногистохимического анализа обработанных жировой ткани 18.

Количественный подход

Учитывая уникальный экспрессию GFP в живых трансплантированные клетки, измерение уровней экспрессии GFP позволяют инкапсулированные клетки должны быть определены количественно в ткани 18, как описано .GFP и другие белки могут быть обнаружены с помощью определенных анти-GFP антител в гомогената целого жировой ткани депо. Уровни белка GFP в этом гомогенате предоставить информацию о количестве жизнеспособных клеток имплантировали.


Рисунок 1: Схема процедуры для производства микрокапсул. (А) альгината микрошарики под микроскопом (20х). (Б) внешний слой после нанесения покрытия с ФАПЧ (20x). (С) Окончательный микрокапсулы после растворения ядра альгинат (20X). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 2
Рисунок 2: микрокапсулы со-культуры с культурами приверженцем клеточной линии () Схематическое (нижняя панель) из со-культуры микрокапсул (круги, плавающие в СМИ) с прилипших адипоцитов.. (Б) Сравнение выражения ATGL от3T3-L1 адипоцитах совместно культивировали с бесклеточными, WT, или aldh1a1 - / - адипоцитов, содержащих микрокапсулы. Значение значение Р определяли с помощью теста Манна-Уитни U. Верхние вкладыши показывает один представитель Вестерн-блот. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 3
Рисунок 3:. Принципиальная из внутрибрюшного (висцерального IAB,) жира инъекции инкапсулированных клеток фотографическое изображение введенного IAB жировой ткани показывает обесцвеченные кластеров, инкапсулированных клеток через 80 дней после трансплантации (треугольник). Они IAB увлечением площадку были встроены в парафин и проанализированы. Гематоксилином и эозином (Н & Е) показывает окрашивание кластеров инкапсулированных клеток (стрелки), имплантированных микрокапсул (С), инкапсулированныхклетки (CC), принимающие адипоциты (A). То же самое изображение анализируется под флуоресцентным светом показывает GFP-меченых трансплантированных клеток на внутренней круглых интактных капсул. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Различные методы были использованы для инкапсуляции клеток, в том числе сушки, экструзии, и эмульсии 19. В этом методе, альгината шарики подвергают экструзии через иглу, затем покрывают ФАПЧ и альгинат сердечника будет растворено, чтобы завершить инкапсуляции. Хотя этот метод был использован в течение многих лет, образование шариков с желаемым размером сферической формы и по-прежнему сложным. Размер капсул в значительной степени зависит от вязкости раствора альгината натрия, диаметр экструдера, а расстояние между кончиком иглы и раствор CaCl 2 20. Чем короче расстояние между кончиком иглы и поверхностью CaCl раствора 2, мелкие гранулы произведены. Описанный протокол приводит к получению APL с порами (<32 кДа). Размер пор может быть экспериментально проверена с помощью флуоресцентных иммуноглобулины (> 32 кДа) и флуоресцентные небольших пептидов, как описано ранее 18. Это SИзе поры достаточно, чтобы поддержать выживание клеток в культурах в пробирке в течение 2 недель и после имплантации в естественных условиях в жировой ткани, по крайней мере, 80 дней 18. Форма Microbead является важным фактором, влияющим на выживание инкапсулированных клеток. Потрескавшиеся шарики со многими спутниковыми микросфер увеличить выступ клеток 21. Формирование Спутниковое произошло, когда низкая концентрация и низкая вязкость промежуточного G альгината решения применяются 22, в то время как формирование хвоста из-за высокого G альгината 23. Как поперечная сила также может способствовать трещины бисера, мы рекомендуем нежный процедуру промывки для микросфер и предложить оптимальные условия для производства надежных капсул, пригодных для в пробирке со-культур и прививки в тканях в естественных условиях.

Микрокапсулирования было доказано, чтобы быть эффективным методом для имплантации биологических препаратов для защиты, такие как клетки, цитокиновс, ферменты, гормоны, и bioabsorbents из окружающей среды и иммунного ответа 24. Контролируемое высвобождение гормонов или цитокинов из инкапсулированных клеток тестировали на его терапевтический эффект в самых разнообразных заболеваний, включая ожирение 18, сахарный диабет 5, печеночной недостаточности и анемии 25 26. Тем не менее, эффективность привитых инкапсулированных клеток анаболических часто уменьшается из-за фиброза. Здесь мы опишем новое применение термогенных катаболических клеток для лечения ожирения и резистентности к инсулину 18. Инкапсуляция aldh1a1 - / - адипоциты, и, возможно, другие катаболические клетки, имеют несколько преимуществ по сравнению с инкапсуляцией анаболических клеток aldh1a1 -. / - Преадипоциты самопроизвольно прилипают к внутренней поверхности мембраны APL 18 и дифференцировать в адипогенной среды НАМ жира, что предотвращает избыточную пролиферацию их в капсулы и быстрого разрыва капсул. В сложения ип, эти клетки уменьшается воспалительные реакции и катаболические свойства 27. Иммуногистохимический данные показывают, что имплантация APL инкапсулированные aldh1a1 - / - адипоциты в IAB жира на 80 дней не сопровождалось выраженной иммунной реакции и фиброза у мышей 18; Однако, больше исследований должны быть выполнены в будущем, чтобы оценить потенциальные воспалительные эффекты. В первую очередь, дефицит aldh1a1 увеличивает экспрессию термогенный UCP1 в адипоциты. Aldh1a1 дефицит снижает аутокринную производства ретиноевой кислоты увеличением уровней ретинальдегида 28. Этот путь влияет множество транскрипционных путей 28,29, которые могут быть вовлечены в производство собственных и паракринных термогенных факторов. Примечательно, инкапсулированные aldh1a1 - / - адипоциты клетки производят аналогичную термогенный отклик в принимающих ожирением мышей дикого. Герметичная aldh1a1 - / - адипоциты, кажется, производят паракринную фактор (ы), яncreasing количество UCP1 -позитивных клеток в принимающей WT жировой ткани 18. Вместе, эти термогенный ответы привели к сокращению льготного впрыскиваемого IAB жира. Фенотип увековечена aldh1a1 - / - преадипоциты оказывает многие свойства, которые делают это изменение гена перспективным кандидатом для инкапсуляции технологии восстановительной диеты вызванной ожирением.

В последнее время многие другие биологические в том числе цитокинов irisin Мир-133а 30, meteorin как гормон паращитовидных 31-гормона, связанных с белком 32, как сообщалось, оказывать термогенный ремоделирования подкожной белой жировой ткани. Необходимы дополнительные исследования, чтобы определить, если эти факторы термогенные подходят для инкапсуляции технологий и методов лечения ожирения в отношении подкожного и / или IAB жира. Микрокапсулы, содержащие катаболические клетки могут быть потенциально пригодны для удаления избытка вредных метаболитов в токсичной среды. Например, пациентс могут извлечь выгоду из облегченного катаболизма алкоголя или дезоксиглюкозоном, первый реактивный метаболит у пациентов с сахарным диабетом. Тем не менее, будущие исследования необходимы, чтобы определить, если эти приложения могут иметь терапевтические преимущества.

В целом, эти исследования дают доказательства правильности концепции, что усиление термогенного ответ в IAB жира может быть по инициативе небольшой группы инкапсулированном aldh1a1 - / - преадипоциты. Кроме того, эти исследования показали, возможность тканеспецифической лечения вводили имплантаты инкапсулированных катаболических термогенных клеток.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

Мы хотели бы поблагодарить Дженнифер Петрозино и Дэвид DiSilvestro для редакционного помощи. Это исследование было поддержано Award Количество 20020728 от американского Совета яйцо и премии Количество 10040042 от Ново Нордиск Pharmaceuticals, а также Инновационного центра пищевых продуктов, Бюро по международным делам, Центр перспективных исследований Foods функциональной и предпринимательству при ОГУ, а также Национальный научный фонд предоставить ЕЕС-0914790 (LJL). Проект описывается поддержали Award Количество R21OD017244 (OZ) и UL1RR025755 (OSUCCC) из Национального центра по исследованию ресурсов, финансируется Управлением Директор Национальных Институтов Здоровья (OD) при поддержке НИЗ для медицинских исследований и NCI P30CA16058. Содержание исключительно ответственности авторов и не обязательно отражают официальную точку зрения Национального центра исследовательских ресурсов или Национального института здравоохранения.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Encapsulation device (VAR V1) Nisco LIN-0042 None
KD scientific syringe pump KD scientific 780100Y None
Olympus microscope  Olympus Optical IX70-S8F2 None
Sodium alginate Sigma MKBP8122V None
Poly-L-lysine hydrobromide (PLL) Sigma 020M5006V None
Calcium chloride Sigma SLBJ2662V None
Sodium citrate tribasic dihydrate Sigma 030M0200 None
Sodium chloride Sigma SLBD2595V None
Mini-PROTEAN TGX Gels Bio-Rad 456-1093 None
ATGL primary antibody (from rabbit) Cell Signaling 2138S None
Secondary anti body (anti rabbit) LI-COR 926-68071 None
Radio-Immunoprecipitation Assay (RIPA) buffer Boston BioProducts D25Y6Z None
Phosphate buffered saline (PBS) Sigma RNBD2893 None
Trypsin Gibco 25200-056 None
Cortizone 10 anti-itch ointment Cortizone 10 C4029138 None
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) Gibco 11965-092 None
Newborn calf serum (CS) Sigma N4762 None
Fetal bovine serum (FBS) Sigma F4135 None
3-Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX) Sigma I0516 None
Dexamethasone Sigma D4902 None
Insulin (bovine) Sigma I5879 None
Protease inhibitor cocktail tablets Roche 4693159001 None

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Vogeli, C., et al. Multiple chronic conditions: prevalence, health consequences, and implications for quality, care management, and costs. Journal of general internal medicine. 22, Suppl 3. 391-395 (2007).
  2. Vija, L., et al. Mesenchymal stem cells: Stem cell therapy perspectives for type 1 diabetes. Diabetes & metabolism. 35, 85-93 (2009).
  3. Acarregui, A., Orive, G., Pedraz, J. L., Hernandez, R. M. Therapeutic applications of encapsulated cells. Methods in molecular biology. 1051, 349-364 (2013).
  4. Chang, T. M. Semipermeable Microcapsules. Science. 146, 524-525 (1964).
  5. Elliott, R. B., et al. Live encapsulated porcine islets from a type 1 diabetic patient 9.5 yr after xenotransplantation. Xenotransplantation. 14, 157-161 (2007).
  6. Lim, F., Sun, A. M. Microencapsulated islets as bioartificial endocrine pancreas. Science. 210, 908-910 (1980).
  7. Vos, P., Spasojevic, M., Faas, M. M. Treatment of diabetes with encapsulated islets. Advances in experimental medicine and biology. 670, 38-53 (2010).
  8. Cotton, C. K. Engineering challenges in cell-encapsulation technology. Trends in biotechnology. 14, 158-162 (1996).
  9. Yach, D., Stuckler, D., Brownell, K. D. Epidemiologic and economic consequences of the global epidemics of obesity and diabetes. Nature medicine. 12, 62-66 (2006).
  10. Ng, M., et al. Global, regional, and national prevalence of overweight and obesity in children and adults during 1980-2013: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013. Lancet. 384, 766-781 (2014).
  11. Kissebah, A. H., et al. Relation of body fat distribution to metabolic complications of obesity. The Journal of clinical endocrinology and metabolism. 54, 254-260 (1982).
  12. Bray, G. A., et al. Relation of central adiposity and body mass index to the development of diabetes in the Diabetes Prevention Program. The American journal of clinical nutrition. 87, 1212-1218 (2008).
  13. Klein, J., et al. What are subcutaneous adipocytes really good for. Experimental dermatology. 16, 45-70 (2007).
  14. Tran, T. T., Yamamoto, Y., Gesta, S., Kahn, C. R. Beneficial effects of subcutaneous fat transplantation on metabolism. Cell metabolism. 7, 410-420 (2008).
  15. Seale, P., Kajimura, S., Spiegelman, B. M. Transcriptional control of brown adipocyte development and physiological function--of mice and men. Genes & development. 23, 788-797 (2009).
  16. Kozak, L. P. Genetic variation in brown fat activity and body weight regulation in mice: lessons for human studies. Biochimica et biophysica acta. 1842, 370-376 (2014).
  17. Zhang, X., He, H., Yen, C., Ho, W., Lee, L. J. A biodegradable, immunoprotective, dual nanoporous capsule for cell-based therapies. Biomaterials. 29, 4253-4259 (2008).
  18. Yang, F., et al. The prolonged survival of fibroblasts with forced lipid catabolism in visceral fat following encapsulation in alginate-poly-L-lysine. Biomaterials. 33, 5638-5649 (2012).
  19. Chang, T. M. Artificial cells with emphasis on bioencapsulation in biotechnology. Biotechnology annual review. 1, 267-295 (1995).
  20. Chang, T. M. Hybrid artificial cells: microencapsulation of living cells. ASAIO journal. 38, 128-130 (1992).
  21. Koo, J., Chang, T. M. Secretion of erythropoietin from microencapsulated rat kidney cells: preliminary results. The International journal of artificial organs. 16, 557-560 (1993).
  22. Weidenauer, U., Bodmer, D., Kissel, T. Microencapsulation of hydrophilic drug substances using biodegradable polyesters. Part I: evaluation of different techniques for the encapsulation of pamidronate di-sodium salt. Journal of microencapsulation. 20, 509-524 (2003).
  23. Smidsrod, O., Skjak-Braek, G. Alginate as immobilization matrix for cells. Trends in biotechnology. 8, 71-78 (1990).
  24. Lewinska, D., Rosinski, S., Werynski, A. Influence of process conditions during impulsed electrostatic droplet formation on size distribution of hydrogel beads. Artificial cells, blood substitutes, and immobilization biotechnology. 32, 41-53 (2004).
  25. Chan, E. S., Lee, B. B., Ravindra, P., Poncelet, D. Prediction models for shape and size of ca-alginate macrobeads produced through extrusion-dripping method. Journal of colloid and interface science. 338, 62-72 (2009).
  26. Bhujbal, S. V., Paredes-Juarez, G. A., Niclou, S. P., de Vos, P. Factors influencing the mechanical stability of alginate beads applicable for immunoisolation of mammalian cells. Journal of the behavior of biomedical materials. 37, 196-208 (2014).
  27. Gushchina, L. V., Yasmeen, R., Ziouzenkova, O. Moderate vitamin A supplementation in obese mice regulates tissue factor and cytokine production in a sex-specific manner. Archives of biochemistry and biophysics. 539, 239-247 (2013).
  28. Ziouzenkova, O., et al. Retinaldehyde represses adipogenesis and diet-induced obesity. Nature. 13, 695-702 (2007).
  29. Yasmeen, R., Jeyakumar, S. M., Reichert, B., Yang, F., Ziouzenkova, O. The contribution of vitamin A to autocrine regulation of fat depots. Biochimica et biophysica acta. 1821, 190-197 (2012).
  30. Liu, W., et al. miR-133a regulates adipocyte browning in vivo. PLoS genetics. 9, e1003626 (2013).
  31. Rao, R. R., et al. Meteorin-like is a hormone that regulates immune-adipose interactions to increase beige fat thermogenesis. Cell. 157, 1279-1291 (2014).
  32. Kir, S., et al. Tumour-derived PTH-related protein triggers adipose tissue browning and cancer cachexia. Nature. 513, 100-104 (2014).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats