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 JoVE Medicine

आयु वर्ग के चूहों में आम मन्या धमनी आड़ साथ स्थायी दूरस्थ मध्य मस्तिष्क प्रदर्शन का अध्ययन करने के लिए निरंतर विकलांगता के साथ cortical Ischemia

*1,2, *1,2, 3, 1, 4, 4,5,6, 7, 2, 1

1Wolfson Centre for Age-Related Diseases, King's College London, University of London, 2Department of Neuroimaging, James Black Centre, Institute of Psychiatry, King's College London, University of London, 3Institute of Neuroscience and Psychology, Wellcome Surgical Institute, College of Medical, Veterinary and Life Sciences, University of Glasgow, Glasgow, 4Research Service, Edward Hines Jr. VA Hospital, 5Neurology Service, Edward Hines Jr. VA Hospital, 6Department of Molecular Pharmacology and Therapeutics, Neuroscience Research Institute, Loyola University Chicago, 7Department of Oncology, The Gray Institute for Radiation, Oncology and Biology, University of Oxford

* These authors contributed equally
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    Summary

    यहाँ हम एक प्रोटोकॉल मन्या धमनियों के एक साथ बड़े रोड़ा cortical दौरे और निरंतर घाटे को उत्पन्न करने के साथ बुजुर्ग मादा चूहों में स्थायी बाहर का मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा उत्पादन करने के लिए उपस्थित थे। हम 24 घंटा और स्ट्रोक के बाद 8 सप्ताह में संरचनात्मक एमआरआई का उपयोग कर घाव आकार की पुष्टि दिखा।

    Date Published: 2/23/2016, Issue 108; doi: 10.3791/53106

    Cite this Article

    Wayman, C., Duricki, D. A., Roy, L. A., Haenzi, B., Tsai, S. Y., Kartje, G., et al. Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability. J. Vis. Exp. (108), e53106, doi:10.3791/53106 (2016).

    Abstract

    स्ट्रोक आम तौर पर मन्या (या अन्य धमनी) atherosclerosis, उच्च रक्तचाप, मोटापा और मधुमेह सहित comorbidities की एक सीमा के साथ बुजुर्ग लोगों में होता है। तदनुसार, जब पशुओं में स्ट्रोक के लिए उपचारों का मूल्यांकन, यह महत्वपूर्ण उत्कृष्ट चेहरे की वैधता के साथ एक मॉडल का चयन करने के लिए है। इस्कीमिक स्ट्रोक सभी स्ट्रोक के 80% के लिए खातों, और इनमें से अधिकांश मध्य मस्तिष्क धमनी (एमसीए) के क्षेत्र में पाए जाते हैं, अक्सर दौरे कि ज्ञानेन्द्रिय कोर्टेक्स को प्रभावित है, शरीर की contralateral पक्ष पर लगातार plegia या केवल पेशियों के कारण उत्प्रेरण। हम बुजुर्ग चूहों में इस्कीमिक स्ट्रोक, जो निरंतर ज्ञानेन्द्रिय विकलांगता और पर्याप्त cortical दौरे का कारण बनता है के उत्पादन के लिए एक विधि के इस वीडियो में प्रदर्शित करता है। विशेष रूप से, हम इस धमनी की एक छोटी खंड रोक देना Diathermy संदंश का उपयोग करके बुजुर्ग मादा चूहों में स्थायी बाहर का मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा (MCAO) प्रेरित। घाव को ipsilateral तरफ कैरोटिड धमनी तो पी थीermanently occluded और contralateral कैरोटिड धमनी क्षणिक 60 मिनट के लिए occluded था। हम रोधगलितांश आकार को मापने के 24 घंटा और स्ट्रोक के बाद 8 सप्ताह में संरचनात्मक टी 2 भारित चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई) के प्रयोग से। इस अध्ययन में, मतलब रोधगलितांश मात्रा 4.5% ± ipsilateral गोलार्द्ध के 2.0% (मानक विचलन) 24 घंटे में (मस्तिष्क Gerriet के समीकरण का उपयोग सूजन के लिए सही एन = 5) था। के रूप में यह निरंतर ज्ञानेन्द्रिय घाटे की प्रेरण, जो pathophysiological तंत्र और उपन्यास उपचार की व्याख्या के लिए महत्वपूर्ण है परमिट यह मॉडल व्यवहार्य और नैदानिक ​​प्रासंगिक है।

    Introduction

    स्ट्रोक समय दुनिया भर में मृत्यु का तीसरा सबसे आम कारण है और विकलांगता 1 का प्रमुख कारण है। इस्कीमिक स्ट्रोक है, जो सभी स्ट्रोक के 80% शामिल हैं, अक्सर कोर्टेक्स मोटर समारोह में और प्रभावित पक्ष में 2-4 की ओर ध्यान में सनसनी में हानि (जैसे, प्रोप्रियोसेप्शन), जिससे में दौरे में यह परिणाम है। मध्य मस्तिष्क धमनी (एमसीए) वाहिकाओं है कि विलिस के चक्र से आपूर्ति खींचता है और आंतरिक मन्या धमनी 5 से उपजा का सबसे बड़ा है। एमसीए मस्तिष्क पोत सबसे अधिक इस्कीमिक स्ट्रोक में प्रभावित है, इस क्षेत्र में स्ट्रोक सभी इस्कीमिक स्ट्रोक 6.7 का 65% के लिए लेखांकन के साथ है। एमसीए दोनों cortical और subcortical क्षेत्रों और एमसीए स्ट्रोक की वजह से मस्तिष्क संबंधी असामान्यताएं की आपूर्ति रोड़ा 7 का सही स्थान पर निर्भर करता है। समीपस्थ एमसीए अवरोध lenticulostriatal धमनियों के माध्यम से गहरी के इलाके प्रभावित करते हैं और बड़े दोनों कोर्टी शामिल दौरे का कारणकैलोरी और subcortical क्षेत्रों के। इसके विपरीत, अधिक बाहर का अवरोध है कि रक्त के प्रवाह के लिए पूरी तरह cortical क्षेत्रों से वंचित छोटे cortical दौरे का उत्पादन करते हैं।

    बड़ी आबादी के अध्ययन में, मानव स्ट्रोक घावों ipsilateral गोलार्द्ध 8,9 के 5-14% से लेकर; घातक स्ट्रोक स्ट्रोक के 10% के लिए खातों और बड़ा दौरे को जन्म देता है, एक hemicraniectomy की आवश्यकता होती है intracranial दबाव को कम करने के लिए, और छोटे घावों के साथ रोगियों को अधिक 10 जीवित रहने की संभावना है। हम एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मॉडल है कि घावों कि कई मानव स्ट्रोक के रूप में गोलार्द्ध के एक समान अनुपात पर कब्जा का उत्पादन प्रदर्शित करता है।

    स्ट्रोक एक विषम रोग है; इस्कीमिक स्ट्रोक के 75% (intracranial छोटे जहाजों की बाधा से) या तो lacunar दौरे से प्रेरित कर रहे हैं; cardioembolic स्ट्रोक; या बड़े धमनी atherosclerosis, जो स्ट्रोक के 30% के लिए खातों। रोगसूचक atherosclerosis सबसे अधिक बार इस मुद्दे पर जहां आम सेल्सियस पर मनाया जाता हैarotid धमनी (सीसीए) आंतरिक और बाह्य मन्या धमनियों में 11 शाखाएं हैं।

    स्ट्रोक के पूर्व नैदानिक ​​मॉडल संभव के रूप में अपनी pathophysiology अनुकरण करने के लिए और स्ट्रोक का जोखिम वाले कारकों को शामिल करना चाहिए के रूप में मानव की स्थिति के समान होना चाहिए। इस्कीमिक स्ट्रोक के 92% 65 वर्ष की आयु से अधिक लोगों में होता है, और जैसा कि पहले 12 चर्चा की अन्य जोखिम वाले कारकों, मोटापा, उच्च रक्तचाप, और atherosclerosis शामिल हैं। बेहतर इन जोखिम कारकों का प्रतिनिधित्व करने के लिए, यह एक मॉडल है कि प्राकृतिक स्थिति के pathophysiological सुविधाओं में से कुछ साझा कर सकते हैं का उपयोग करने के लिए सिफारिश की है। इस प्रोटोकॉल में, हम मन्या धमनियों के माध्यम से उन्नत उम्र और रक्त प्रवाह को बाधित भी शामिल है।

    मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा की क्लासिक मॉडल (MCAO) समीपस्थ एमसीए रोड़ा, जो पूर्वकाल में रक्त के प्रवाह को कम कर देता है और मध्य मस्तिष्क धमनियों की intraluminal रेशा मॉडल है। इस मॉडल का उपयोग कम रोड़ा बार एल केंद्रितsubcortical क्षेत्र के लिए esion, जबकि अब रोड़ा बार बड़े बुजुर्ग चूहों में एक उच्च मृत्यु दर में जिसके परिणामस्वरूप दोनों cortical और subcortical क्षेत्रों के क्षेत्रों, भर्ती घावों में परिणाम कर सकते हैं। इसकी तुलना में, हमारे समूह द्वारा इस्तेमाल मॉडल एक craniotomy और ड्यूरा रक्त और एमसीए के एक छोटे से हिस्से द्विध्रुवी cauterizing संदंश का उपयोग कर के विनाश की जमावट के द्वारा पीछा के उद्घाटन के प्रदर्शन शामिल है। इस Diathermy मॉडल Tamura एट अल द्वारा 1981 में कागज से अनुकूलित है। 23 और craniectomy के उपयोग intracranial दबाव है, जो बंद खोपड़ी की एक विशेषता है, और उच्च reproducibility में परिणाम और हमारे सर्जरी पलटन में एक कम मृत्यु दर उठाया सीमित कर सकता है कुछ अन्य मॉडलों की तुलना में 13। प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य दौरे और निरंतर विकलांगता उत्पन्न करने के लिए हम स्थायी रूप से (प्रति चेन एट अल। 14 हम का उपयोग गैर-आक्रामक टी 2 भारित चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग के रूप में समीपस्थ सीसीए रोक देना और बाहर का सीसीए क्षणिक रोक देना एमआरआई) हद तक और मस्तिष्क रोधगलन के स्थान, और ज्ञानेन्द्रिय प्रांतस्था में सूजन मस्तिष्क की डिग्री मूल्यांकन करने के लिए।

    Protocol

    इस प्रोटोकॉल संस्थागत दिशा निर्देशों किंग्स कॉलेज लंदन द्वारा निर्धारित द्वारा अनुमोदित किया गया था, और ब्रिटेन के गृह मंत्रालय के दिशा निर्देशों और पशु (वैज्ञानिक प्रक्रिया) 1986 के दिशा-निर्देशों के अधिनियम संस्थाओं के बीच भिन्न हो सकते हैं के अनुसार में प्रदर्शन किया गया था; इस प्रक्रिया के प्रयास करने से पहले संस्थागत दिशा निर्देशों के पालन सुनिश्चित करें। आदेश में जब उपकरण को छू सड़न रोकनेवाला तकनीक बनाए रखने के लिए, एल्यूमीनियम पन्नी का एक बड़ा टुकड़ा आटोक्लेव और इस का उपयोग लपेट के लिए उपकरण माइक्रोस्कोप और संज्ञाहरण मशीन पर के रूप में इस तरह के आसपास संभालती है। बाँझ फिल्म चिपटना (प्लास्टिक की चादर) का भी इस्तेमाल किया जा सकता है।

    1. तैयारी

    1. स्ट्रोक सर्जरी से पहले कम से कम 48 घंटे के लिए जेल तरल पदार्थ पैक (पशु चिकित्सा वसूली जेल) और मुलायम चाउ के साथ चूहों परिचित। पशु अक्सर प्रक्रिया के बाद खाने और पीने के साथ कठिनाई मिल के रूप में, सर्जरी से पहले इन मदों के लिए पशुओं को पेश neophobia कम से कम। लकड़ी जुगल blo के साथ सदन बुजुर्ग चूहोंCKS ऊंचा हो गया दांतों की घटनाओं को कम करने के लिए (धारा 6 देखें)।
    2. autoclaving द्वारा शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं शुरुआत (कम से कम 121 डिग्री सेल्सियस, 15 साई, 15 मिनट के लिए) से पहले सभी सर्जिकल उपकरण जीवाणुरहित। 70% इथेनॉल में 1% chlorhexidine का उपयोग करते हुए सभी कार्य सतहों स्वच्छ बनाना और शल्य पर्दे का उपयोग करें और प्रक्रिया की अवधि के लिए सड़न रोकनेवाला तकनीक बनाए रखें।
    3. वरीय पंजा करने के लिए गोलार्द्ध contralateral पर घावों प्रेरित। घावों या तो छोड़ दिया है या सही गोलार्द्ध प्रत्येक चूहे के पसंदीदा forepaw पर निर्भर करता है, Montoya सीढ़ी परीक्षण 15 (चित्रा 4 देखें) में पूर्व ऑपरेटिव आधार रेखा द्वारा निर्धारित करने के लिए आवंटित। सादगी के लिए, जब इस पांडुलिपि में इस प्रक्रिया का वर्णन, बाएं पंजा पंजा पसंदीदा है, और सर्जरी के दाएँ गोलार्द्ध पर प्रदर्शन कर रहे हैं। इन व्यवहार परीक्षण के लिए लिस्टर Hooded या लांग इवांस चूहों का प्रयोग के रूप में वे जल्दी सीखते हैं।
      नोट: सीढ़ी परीक्षण दोनों ठीक है और सकल कुशल मीटर में परिवर्तन को मापने के लिए बनाया गया हैमोटर प्रणाली क्षति के बाद ovements। सीढ़ी एक केंद्रीय मंच के प्रत्येक पक्ष पर सात चरणों के होते हैं। अगर सीढ़ी परीक्षण के लिए उपकरण उपलब्ध नहीं है, सिलेंडर परीक्षण परीक्षण मनमानी के लिए एक उपयुक्त विकल्प है, लेकिन ध्यान दें स्ट्रोक के इस मॉडल में इस परीक्षण पर केवल एक क्षणिक घाटा होता है, और इसलिए निम्नलिखित लंबी अवधि वसूली को मापने के लिए अनुपयुक्त हो जाएगा कि उपचार।
      1. हर कदम के कुएं में तीन चीनी छर्रों (पक्ष के अनुसार 21 छर्रों) रखें। 10 मिनट के लिए सीढ़ी तंत्र में चूहों की जगह लिया गया और छर्रों की संख्या और प्रत्येक पक्ष पर विस्थापित छर्रों की संख्या रिकॉर्ड है।
        नोट: कार्य के बाद ऑपरेशन में शामिल होने के लिए, चूहों बेस लाइन पर 75% छर्रों का एक न्यूनतम पुनः प्राप्त करना होगा।

    2. सर्जरी

    1. 16-18 महीने (250 400 ग्राम) में महिला बुजुर्ग लिस्टर-Hooded चूहों का प्रयोग करें और 1.5 एल में 5% isoflurane के साथ संज्ञाहरण प्रेरित / मिनट हे 2. संज्ञाहरण के अधिष्ठापन के बाद, को कमisoflurane के स्तर पर और सर्जरी के लिए एक पर्याप्त लेकिन कम से कम गहराई (जैसे, 1.5-2%) में इसे बनाए रखने के। एक चेहरे नकाब से जानवर को एनेस्थीसिया देने, और isoflurane के लिए सर्जन के जोखिम को सीमित करने के लिए एक सफाई प्रणाली का उपयोग करें।
      1. , नकली पशुओं पर craniotomy सहित करने के लिए सभी प्रक्रियाओं का प्रदर्शन, लेकिन नहीं के रूप में इस प्रक्रिया के व्यवहार घाटे 16 उत्पादन कर सकते हैं। प्रयोगात्मक लक्ष्यों पर विचार करें जब MCAO प्रयोगों डिजाइन, और तय किया जाए या नहीं craniotomy के लिए नियंत्रित करने के लिए एक दिखावा समूह शामिल किया जाना चाहिए।
    2. प्रशासन दर्द से राहत के पूर्व या ऑपरेशन पेरी (Carprieve, 0.25 मिलीग्राम / किग्रा, एस।) में कटौती।
      1. 19 से 1 मिलीलीटर जोड़ें मिलीलीटर शेयर समाधान बनाने के लिए और प्रति 300 ग्राम चूहे 0.6 मिलीलीटर इंजेक्षन करने के लिए बाँझ 0.9% खारा। Carprieve के उपयोग Carprofen अधिक पसंद है क्योंकि पूर्व आरटी पर स्थिर है।
    3. दाएँ गोलार्द्ध पर उदर गर्दन क्षेत्र और लौकिक क्षेत्र पर फर दाढ़ी त्वचा को बेनकाब करने के लिए। शल्य साइटों यू कीटाणुरहितइथेनॉल के फाहे गाते हैं। बालों को हटाने के लिए स्थानीय IACUC दिशा निर्देशों का पालन करने के लिए सुनिश्चित करें।
      1. चीरा साइट पर फर की मात्रा को कम करने के लिए यह कदम ऑपरेटिंग क्षेत्र से दूर प्रदर्शन करना।
    4. एक corkboard एक हीटिंग पैड पर लापरवाह स्थिति में एक बाँझ कपड़ा के साथ कवर पर चूहे रखें। सिर और गर्दन के बाल काटे क्षेत्रों के लिए lidocaine क्रीम लगाओ। पर नजर रखने और एक homeothermic प्रणाली के साथ 36.5-37.5 डिग्री सेल्सियस के बीच जानवर के तापमान को बनाए रखने के लिए एक गुदा जांच डालें।
      1. सुखाने को रोकने के लिए आंखों पर lacrilube मरहम रखो। चूहे atropine सल्फेट के घोल का एक इंजेक्शन (600 माइक्रोग्राम / एमएल समाधान के 0.05 मिलीलीटर, subcutaneously) सांस की नली स्राव को कम करने दीजिए।
        नोट: इस तरह के शोधकर्ताओं ने रक्त गैसों और दबाव के रूप में शारीरिक चर को मापने पर विचार करना चाहिए।
    5. सर्जरी शुरू करने से पहले, hindpaw चुटकी वापसी की जाँच करें और सजगता पलक पूर्ण संज्ञाहरण पुष्टि करने के लिए।
    6. एक विदारक सूक्ष्म तहतगुंजाइश है, एक छुरी का उपयोग कर अवगत कराया गर्दन पर एक 2 सेमी केंद्रीय midline चीरा बनाते हैं। लार ग्रंथियों धीरे दोनों पक्षों पर श्वासनली के लिए पार्श्व ले जाएँ।
    7. लूप गैर absorbable रेशम त्वचा है कि एक तरफ आम मन्या धमनी overlies आसपास सीवन। धीरे रेशम सीवन का उपयोग कर साइट से त्वचा दूर खींचने के लिए और इन corkboard सर्जिकल टेप का उपयोग करते हुए आम मन्या धमनी प्रकट करने के लिए नीचे चिपके रहते हैं। ध्यान से कुंद धमनियों प्रावरणी और vagal नसों ठीक संदंश का उपयोग आसपास से मुक्त काटना।
      1. इस कदम के दौरान मांसपेशियों या वेगस तंत्रिकाओं को नुकसान नहीं सावधान रहें, क्योंकि यह खिला ख़राब होगा, निगलने और साँस लेने में।
    8. एक बार जब आम मन्या धमनी सामने आ रहा है, गैर absorbable रेशम सीवन (5/0) का उपयोग मन्या को अलग-थलग करने के लिए, पहले रिवर्स ठीक संदंश के साथ विदारक और तंत्रिका के साथ संपर्क बनाने के लिए नहीं सावधान किया जा रहा द्वारा वेगस तंत्रिका से मन्या अलग। एक बार पोत looped किया गया है (लेकिन बंधा नहीं) सीवन, टी के साथसिवनी के सिरों को एक साथ सर्जिकल टेप का उपयोग करते हुए इस कदम को नष्ट किया जा रहा रोकने के लिए नकल। टांके overlying त्वचा वापस पकड़ निकालें।
    9. दूसरे पक्ष के लिए दोहराएँ (धारा 2.7-2.8)
    10. एक बाँझ खारा लथपथ धुंध घाव में जगह सर्जरी के शेष के दौरान नम ऊतकों रखने के लिए। शिथिल त्वचा सिवनी और क्षेत्र में एक अतिरिक्त खारा लथपथ धुंध जगह आगे निर्जलीकरण को रोकने के लिए।
    11. एक पार्श्व स्थिति में चूहों की जगह और सही कक्षा और बाहरी श्रवण नहर के बीच मध्य में त्वचा में एक चीरा बनाते हैं। त्वचा पांच लोचदार 3 मिमी हुक corkboard पर टिकी retractors तक का उपयोग वापस लेना और फिर खोपड़ी प्रकट करने के लिए temporalis पेशी काटना कुंद।
    12. खुले साइट के ऊपर एक अंगूठे पहिया समायोजित गुरुत्वाकर्षण संचालित खारा ड्रिप (प्रवाह की दर लगभग 2 मिलीग्राम / मिनट) प्लेस और हड्डी मलबा हटाने और सर्जरी के इस चरण के दौरान अवगत कराया साइट से खून बह रहा नाबालिग स्पष्ट करने (एक Aspirator प्रणाली स्थापित संप्रदायआयनों 2.13-2.16)।
      1. कान के पास खोपड़ी के उच्चतम बिंदु पर खारा वितरण नोक, और निम्नतम बिंदु पर Aspirator नोक रखें। क्षेत्र को और अधिक खारा आपूर्ति करने के लिए बेहतर पोत का दाग़ना के लिए किसी भी खून के स्रोत कल्पना करने के लिए, समय की राशि जानवरों संज्ञाहरण के तहत कर रहे कम करने bleeds दौरान पहिया समायोजित करें।

    आकृति 1
    चित्रा 1. स्थायी बाहर का मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा मॉडल के सर्जिकल सेट करें। उपकरण चूहे craniotomy के लिए सेट अप में इस्तेमाल सही गोलार्द्ध के लिए दिखाया गया है, और इनसेट, craniectomy साइट के चारों ओर खींचने की मशीन और खारा ड्रिप की स्थिति। यह भी पता चला वाहिका की प्रमुख विशेषताएं हैं; मध्य मस्तिष्क धमनी (लाल) और अवर मस्तिष्क की नस (नीला) दिखाए जाते हैं, और छायांकित क्षेत्र इंगित करता है जहां धमनी की जमावट होती है।रोड़ा की पुष्टि अवर मस्तिष्क की नस काटने के नीचे एमसीए द्वारा किया जाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

    1. उजागर क्षेत्र पर एक craniotomy प्रदर्शन (लगभग 5 मिमी एक्स 5 मिमी), एक मोटे 1.6 मिमी हीरा लेपित ड्रिल गड़गड़ाहट में लगभग 8,000 आरपीएम के साथ एक दंत ड्रिल का उपयोग उजागर क्षेत्र ड्रिलिंग whilst परिपत्र और पार्श्व दबाव नहीं है और नीचे दबाव के आवेदन सुनिश्चित । एक बार हड्डी काफी पतली है कि यह पूरी तरह से पारदर्शी लग रहा है, संदंश का उपयोग कर हटा दें।
    2. एक घर का बना Dural हुक, ठीक संदंश की एक टिप झुकने लगभग 180 ° एक चाप के लिए फार्म द्वारा किए गए प्रयोग करें, ध्यान, ड्यूरा खोलने के लिए बड़े सतह रक्त वाहिकाओं से बचने के लिए सतर्क किया जा रहा है, क्योंकि वे नाजुक और टूटना करने के लिए आसान कर रहे हैं।
      नोट: मस्तिष्क के उजागर क्षेत्र मध्य मस्तिष्क धमनी (एमसीए) प्रकट होगा; वांछित खंडउपायों लंबाई में लगभग 2 मिमी (चित्रा 1 देखें, इनसेट)।
    3. जहां अवर मस्तिष्क की नस पार से, धमनी बंटवारे के मुद्दे पर और फिर एमसीए की दुम शाखाओं जब तक पूरी तरह से अवरोधित 17 Diathermy संदंश की एक जोड़ी का उपयोग के साथ एमसीए जमना। 0.25 मिमी बताया सुझावों के साथ कोणीय जौहरी Diathermy संदंश का प्रयोग करें।
      1. जब धमनी occluding, खारा प्रवाह इस क्षेत्र शांत रखने के लिए, रक्त वाहिका का पालन करने से coagulating संदंश रोकने के रूप में आवश्यक परिवर्तन। जब occluded, रक्त वाहिका काला दिखाई देता है और रक्त प्रवाह के कोई संकेत मौजूद होना चाहिए; रक्त के प्रवाह को आंशिक रूप से occluded वाहिकाओं में देखा जा सकता है।
      2. इस बिंदु पर एमसीए कटौती को पूरा रोड़ा पुष्टि करने के लिए। microvascular कैंची, जहां अवर मस्तिष्क की नस को पार एमसीए के नीचे में कटौती का उपयोग करना।
      3. अगले कदम के लिए जारी रखने से पहले एक खारा लथपथ धुंध पैड के साथ उजागर क्षेत्र को कवर किया।
    4. चूहे एक लापरवाह posi के लिए वापस बारीtion और गर्दन पर फिर से खोलना शिथिल बंधे सिवनी फिर से बेनकाब करने के लिए मन्या धमनियों। स्थायी रूप से मन्या के आसपास रेशम सीवन में एक गाँठ बांधने क्षणिक 60 के लिए 125 ग्राम दबाव के साथ एक 13 मिमी स्टेनलेस स्टील धमनी क्लिप का उपयोग कर occluded है whilst छोड़ दिया मन्या धमनी, द्वारा अवरोधित एमसीए (दाएं) के रूप में एक ही पक्ष पर कैरोटिड धमनी ligate मि। शिथिल इस समय के दौरान गर्दन में चीरा सिवनी और शीर्ष पर एक बाँझ खारा लथपथ धुंध जगह निर्जलीकरण को रोकने के लिए।
    1. ध्यान दें कि जानवर के दाहिने हाथ की ओर सर्जन के बाएं हाथ की ओर हो जाएगा, लापरवाह स्थिति को देखते हुए।
    2. नकली पशुओं के लिए, गर्दन और लौकिक क्षेत्रों के उदर भाग को खोलने के लिए और मांसपेशियों को अलग आम मन्या धमनियों का पता लगाने के लिए है, लेकिन रोक देना नहीं है। नकली पशुओं की प्रक्रियाओं से गुजरना करने के लिए है, लेकिन कोई नहीं craniotomy सहित, के रूप में इस प्रक्रिया के व्यवहार घाटे 16 उत्पादन कर सकते हैं। अन्य t की चकाचौंध बनाए रखने के लिएविदेश मंत्री ने सदस्यों (जैसे, बाद में व्यवहार परीक्षण के दौरान), चीरों और suturing प्रदर्शन करते हैं।

    चित्र 2
    चित्रा 2. अग्रानुक्रम मन्या मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा निम्नलिखित रोड़ा। सही आम मन्या धमनी (सीसीए) स्थायी रूप से एक रेशम सीवन (5/0) रक्त वाहिनियों के आसपास (छवि के बाएं हाथ की ओर) बांधने से occluded है। छोड़ दिया सीसीए (दाईं ओर) एक microvascular दबाना का उपयोग 1 घंटे के लिए occluded है। ये सर्जरी प्रत्येक पक्ष (सफेद) पर वेगस तंत्रिका के साथ संपर्क बनाने के लिए नहीं ख्याल रख प्रदर्शन किया गया। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

    1. छोड़ आम मन्या रोड़ा के 1 घंटे के दौरान अस्थायी क्षेत्र में चीरा सिवनी।
    2. चूहों खारा subcutaneously के 20 (प्रत्येक दिशा में दो साइटों के लिए 5 मिलीलीटर) जलयोजन बनाए रखने के लिए मिलीलीटर दें (देखें6.2)।
    3. जब 60 मिनट बीत चुका है, क्लिप को हटा दें। आसपास की मांसपेशियों को topically खारा लागू करें, और गर्दन absorbable sutures (4/0) के चमड़े के नीचे निरंतर सिलाई का उपयोग करने में चीरा बंद करें।

    3. पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल

    1. अप करने के लिए 4 घंटे के लिए संज्ञाहरण से उबरने के लिए एक 31 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में चूहे रखें।
      नोट: शोधकर्ताओं अन्य तापमान और durations स्थानीय अभ्यास के लिए अनुसार उपयोग करने के लिए पसंद कर सकते हैं।
    2. 24 घंटे में दोहराएँ carprieve (0.25 मिलीग्राम / किग्रा), दर्द से राहत के लिए। सभी जानवरों Carprieve का एक ही खुराक प्राप्त क्योंकि, इस पहलू को व्यवस्थित करने के लिए नियंत्रित किया जाता है। Carprieve का कोई भी न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव नगण्य होने की संभावना है।
    3. कम से कम पहले तीन दिनों के लिए निर्जलीकरण को रोकने के लिए दैनिक खारा इंजेक्शन दे। धारणा है कि एक चूहे प्रति किलो शरीर के वजन (प्रत्येक 24 घंटे) 65 एमएल तरल पदार्थ की आवश्यकता पर, यह सुनिश्चित करें कि प्रत्येक 300 ग्राम प्रति दिन चूहे ~ 22 मिलीलीटर तरल पदार्थ प्राप्त करता है।

    4. कोनरोधगलितांश के firmation

    1. मापने के लिए रोधगलितांश मात्रा संरचनात्मक एमआरआई का उपयोग करें।
      नोट: इस तरह के एक वैकल्पिक तरीका tetrazolium क्लोराइड (टीटीसी) है, जो पहले संरचनात्मक एमआरआई डेटा 18 से जोड़ा गया है के रूप में ऊतकीय धुंधला हो जाना, का उपयोग करने के लिए हो सकता है। बहरहाल, यह केवल अध्ययन के अंत बिंदु पर इस्तेमाल किया जा सकता है, और longitudinally नहीं।
      1. MCAO के शामिल होने के बाद चौबीस घंटे, 0.9 एल / मिनट मेडिकल एयर और 1 एल / मिनट 2 हे, एक वर्ग निकालना पिंजरा चुंबकीय अनुनाद कुंडली में सुरक्षित में isoflurane (प्रेरण के लिए 5%, रखरखाव के लिए 1-1.5%) के साथ चूहों anesthetize (43 मिमी व्यास) और एक 7 टेस्ला क्षैतिज बोर स्कैनर में जगह है।
      2. प्राप्त टी 2 भारित एक तेजी से स्पिन गूंज अनुक्रम का उपयोग स्कैन: समय गूंज (ते) 60 मिसे, पुनरावृत्ति समय (टीआर) 4,000 मिसे, देखने के क्षेत्र (FOV) 40 x 40 मिमी, अधिग्रहण मैट्रिक्स 128 x 128, 40 x 0.5 मिमी अधिग्रहण लगभग 8 मिनट में मोटी स्लाइस। बाद में, resampl का उपयोग करके 20 x 1 मिमी मोटी स्लाइस में 40 स्लाइस परिवर्तितमेडिकल इमेजिंग सॉफ्टवेयर में आईएनजी समारोह।
    2. 20 खंडों में रोधगलितांश के पार के अनुभागीय क्षेत्र को मापने के द्वारा एक चिकित्सा छवि प्रदर्शन पैकेज में घाव मात्रा में प्राप्त करते हैं। मोटाई (1 मिमी) से इन क्षेत्रों की राशि से गुणा करके कुल मात्रा प्राप्त करते हैं। समूह की गणना मतलब मात्रा और मानक विचलन। घाव प्रतिशत मात्रा गणना के लिए, यह भी ipsilesional और contralesional गोलार्द्धों के संस्करणों के अधिग्रहण।
    3. मस्तिष्क शोफ के कारण सूजन के लिए सही करने के लिए, Gerriets 'फार्मूले 18 का उपयोग कर इन मूल्यों को समायोजित। केवल स्लाइस कि कोर्टेक्स होते हैं और एक मानक चूहे एटलस 19 के अनुसार अधिक सुधार से बचने के लिए सेरिबैलम या घ्राण बल्ब शामिल नहीं है, के रूप में यह नकारात्मक घाव मात्रा में उत्पन्न कर सकते हैं शामिल हैं।
      1. टी 2 भारित छवियों का मोल फिर से 8 सप्ताह के स्ट्रोक सर्जरी के बाद।

    5. भविष्य अध्ययन के लिए नमूना आकार की गणना का आकलन neuroprotection और व्यवहार वसूली </ P>

    1. न्यूनतम नमूने का आकार है कि भविष्य काल्पनिक न्यूरोप्रोटेक्टिव दो समूहों (बनाम। उपचार नियंत्रण) का उपयोग करते हुए तीन अलग-अलग परिमाण के उपचार प्रभाव (25% की कमी, 50% की कमी, 75% की कमी) की पहचान करने के प्रयोगों में आवश्यक हो जाएगा का उपयोग अनुमान लगाने के लिए नमूने का आकार गणना प्रदर्शन एक प्राथमिकताओं एल्गोरिदम शक्ति विश्लेषण सॉफ्टवेयर 20 में लागू किया है।
      नोट: अपने स्वयं के डेटा के साथ इसी तरह का आकलन करना है पाठकों को सक्षम करने के लिए, वहाँ स्वतंत्र रूप से उपलब्ध बिजली विश्लेषण सॉफ्टवेयर से स्क्रीनशॉट (प्रतिनिधि परिणाम देखें) कर रहे हैं। निम्नलिखित मानकों का उपयोग करें: स्वीकार्य झूठी सकारात्मक दर (यानी, प्रकार मैं त्रुटि दहलीज; α) ≤0.05, और बिजली (जो बराबर होती है 1-β) ≥0.80 (यानी, 80% से अधिक बिजली)। स्पष्टीकरण और एक चर्चा 21 के लिए नीचे देखें।

    6. बुजुर्ग पशु कल्याण के बाद के झटके सर्जरी

    1. उपलब्ध अतिरिक्त नरम चाउ एक बनाओएन डी पुनर्जलीकरण जेल पैक कि चूहों आसान तक पहुँचने के लिए विस्तारित सुझावों के साथ पानी की बोतलें के अलावा, सर्जरी से पहले के आदी थे। इसके अलावा, ढीला बिस्तर के बजाय पिंजरों में एक absorbable वसूली पैड पहले 24 घंटे के लिए (यानी, लकड़ी चिप बचने के लिए), और अतिरिक्त बिस्तर घोंसले के शिकार हैं। Pureed भोजन (जैसे, बच्चे को भोजन) का उपयोग के रूप में निगलने में कठिनाई के साथ चूहों गला दबा कर सकता है।
    2. दैनिक जानवरों वजन 7 दिन वसूली पर नजर रखने के लिए। वजन घटाने के निर्जलीकरण और तनाव का एक प्राथमिक संकेत है। सर्जरी के बाद पहले कुछ दिनों में वजन घटाने मुख्यतः (कम खिलाने के कारण शरीर के वजन के बजाय हानि) निर्जलीकरण को दर्शाता है।
    3. जहां एक बूढ़ा चूहा वजन घटाने सर्जरी के लिए असंबंधित पता चलता है, तरल पदार्थ के एक बराबर वजन के साथ खो शरीर के वजन की जगह है और ऊपर और नीचे के दांतों का निरीक्षण किया। कहाँ दांत ऊंचा हो गया है, (धारा 2.1 के रूप में) isoflurane के साथ चूहे anesthetize, और एक लापरवाह स्थिति में जगह
      1. 1 मिलीलीटर सिरिंज प्रति बैरल ते पीछे जगहETH कोमल ऊतकों की रक्षा के लिए। उच्च रोटरी गति से लेकिन धीमी गति से, फर्म हाथ आंदोलनों (जैसे, 3 सेकंड में कटौती) के साथ एक हाथ से आयोजित परिपत्र देखा (जैसे, लगभग 3 सेमी व्यास) का उपयोग कर काट। चूहे के दाँत कटौती के बीच शांत करने की अनुमति दें। सुनिश्चित करें कि रोटरी देखा खराद का धुरा पर मुहिम शुरू की है, इसलिए है कि देखा है दांत रोटेशन की दिशा में सामना करते हैं। यह इस तरह के हालात के लिए तैयार व्यक्तिगत रूप से लिपटे निष्फल रोटरी आरी रखने लायक है।
        नोट: जब भी एक कठिन गोली आहार पर बनाए रखा अतिवृद्धि बुजुर्ग चूहों में हो सकता है। हम अनुशंसा करते हैं कि नियमित रूप से दांतों बुजुर्ग चूहों में जाँच कर रहे हैं।
    4. जहां एक बुजुर्ग चूहे वजन घटाने और piloerection सर्जरी के लिए असंबंधित पता चलता है, एक पशु चिकित्सक से उपचार के विकल्प पर चर्चा की। नम्रता से पशु की हत्या पर विचार करें। इस तरह के जानवरों की एमआरआई एक पिट्यूटरी ट्यूमर (अक्सर बुजुर्ग मादा चूहों में) है कि अप्रभावी और घातक है दिखा सकते हैं।

    Representative Results

    स्थायी MCAO प्रदर्शन craniotomy द्वारा प्रेरित किया गया था, जमावट और Diathermy द्वारा मध्य मस्तिष्क धमनी ipsilesional आम मन्या धमनी की स्थायी रोड़ा और contralesional आम मन्या धमनी के 60 मिनट रोड़ा के साथ संयुक्त के विनाश के द्वारा पीछा किया। उपकरणों की स्थापना के एक योजनाबद्ध और एमसीए occluded चित्र 1 में दिखाया गया है, और चित्रा 2 (ऊपर) में मन्या धमनियों की।

    स्ट्रोक परिणाम 24 घंटा और 40 x 0.5 मिमी स्लाइस पर रोधगलितांश मात्रा (रीढ़ की हड्डी के व्याख्यान चबूतरे अंत करने के लिए घ्राण बल्ब का व्याख्यान चबूतरे अंत से) को मापने के द्वारा स्ट्रोक के बाद 8 सप्ताह मूल्यांकन किया गया था एक चिकित्सा छवि प्रदर्शन पैकेज में ब्याज टूलकिट के क्षेत्र का उपयोग कर। एक प्रतिनिधि टी 2 भारित संरचनात्मक एमआरआई स्कैन 24 घंटा और 8 सप्ताह (चित्रा 3 ए) में एक ही पशु के लिए दिखाया गया है। रोधगलितांश मात्रा चूहे एक hyperintense संकेत दिखा मस्तिष्क के क्षेत्रों द्वारा की पहचान की थी; T2 वजन के रूप मेंएड छवियों को एक चमकदार सफेद क्षेत्र के रूप में पानी या प्लाज्मा दिखा। यह ज्ञात है शोफ और ब्रेन स्ट्रोक के बाद सूजन में वृद्धि हुई है कि वहाँ है, और यह एक टी 2 भारित स्कैन जो रोधगलितांश मात्रा 18 के histological माप करने के लिए जोड़ा गया है से मापा जा सकता है। हालांकि, सूजन वर्तमान जल्दी स्ट्रोक (जैसे, 24 घंटे में) के बाद अंतिम घाव मात्रा (जैसे, 8 सप्ताह में) के एक overestimation करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं और इसलिए हम भी उपस्थित मतलब रोधगलितांश की मात्रा समायोजित Gerriet के सूत्रों का उपयोग। चित्रा 3 बी से मतलब आंकड़ों से पता चलता कच्चे (असमायोजित) घाव 24 घंटे में 62.8 मिमी 3 के रूप में मात्रा (± 25.4 मिमी 3 एसडी, शीर्ष ग्राफ); इस प्रभावित गोलार्द्ध (± 4.2% एसडी, मध्य ग्राफ) के 9.8% रह रहे हैं। जब मस्तिष्क Gerriets 'फार्मूले इस मूल्य 4.5% (± 2.0% एसडी, नीचे ग्राफ) को कम किया जाता है का उपयोग सूजन के लिए सही।

    स्ट्रोक गंभीरता भी Montoya सीढ़ी परीक्षण 15 का उपयोग मापा गया था। संक्षिप्त, एक मेंnimals 4 सप्ताह पहले MCAO करने के लिए स्ट्रोक सर्जरी के लिए चीनी छर्रों को पुनः प्राप्त करने के लिए पूर्व से प्रशिक्षित है, और एक निरंतर घाटा पुष्टि करने के लिए स्ट्रोक (चित्रा 4) के बाद 8 सप्ताह के लिए परीक्षण किया गया। चूहे 10 मिनट के लिए सीढ़ी तंत्र में रखा गया था और पुनः प्राप्त छर्रों की संख्या (21 छर्रों के बाहर) दर्ज किया गया था और एक प्रतिशत (समूह ± मानक त्रुटियों का मतलब है) के रूप में प्रदर्शित किया। एक प्रतिगमन विश्लेषण डेटा के लिए लाइन फिट करने के लिए किया गया था।

    चित्रा 5 (उम्मीदवार उपचारों के संभावित प्रभाव के लिए) रोधगलितांश मात्रा डेटा का उपयोग कर नमूने का आकार गणना से पता चलता है, एक टी परीक्षण के लिए बिजली विश्लेषण सॉफ्टवेयर में एक एल्गोरिथ्म का उपयोग करते हुए "दो स्वतंत्र साधन (दो समूहों) के बीच अंतर" का उपयोग और (uncorrected का उपयोग विश्लेषण ) साधन और चित्रा 3 बी से मानक विचलन। चित्रा 5 और 1 टेबल शो में जानकारी 12 चूहों एक चिकित्सा है कि संसाधनों का पता लगाने के लिए कम कर समूह के प्रति आवश्यक होगा कि24 घंटे में 50% से arct मात्रा, जबकि चित्रा 6 शक्ति का एक "XY साजिश" जानवरों के अलग नंबरों का उपयोग कर। तालिका 1 का सार हर समय बिंदुओं के लिए नमूने का आकार गणना से पता चलता हासिल की।

    चित्र तीन
    चित्रा 3. टी 2 भारित संरचनात्मक एमआरआई रोधगलितांश और ब्रेन स्ट्रोक के बाद सूजन के आकार को मापने के लिए प्रयोग किया जाता है। (ए) एक ही चूहे के मस्तिष्क 24 घंटा की एक टी 2 भारित चुंबकीय अनुनाद छवि और स्ट्रोक के शामिल होने के बाद 8 सप्ताह। सफेद क्षेत्र घाव का प्रतिनिधित्व करता है, लेकिन यह भी कुछ vasogenic शोफ कि 8 सप्ताह तक का निराकरण होता है। (बी) रोधगलितांश मात्रा में ब्याज टूलकिट का एक चिकित्सा छवि प्रदर्शन पैकेज क्षेत्र का उपयोग करके मापा गया था, और एक ग्राफ 3 बार इस्तेमाल अंक (एन = 6) ± एसडी मतलब का प्रतिनिधित्व करने पर प्लॉट किए जाते हैं। कच्चे घाव मात्रा (मस्तिष्क के लिए सही नहीं एड के कारण सूजनईएमए), प्रभावित गोलार्द्ध का प्रतिशत घाव (सूजन के लिए uncorrected), और मस्तिष्क Gerriets 'सूत्रों का उपयोग सूजन के लिए सही गोलार्द्ध का प्रतिशत घाव यहाँ दिखाए जाते हैं। एसडी बजाय SEM से आदेश नमूने का आकार गणना (चित्रा 5) प्रदर्शन करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

    चित्रा 4
    चित्रा 4. सीढ़ी परीक्षण लोभी और छर्रों को वापस लाने में दोष से पता चलता है। इस स्ट्रोक मॉडल में बहुत कम सहज वसूली हुई थी। बुजुर्गों में स्ट्रोक चूहों लगातार निपुणता, गोली के "सीढ़ी परीक्षण" तक पहुँचने का उपयोग कर साप्ताहिक परीक्षण द्वारा दिखाया impairs। इनसेट: एक चूहे व्यवहार परीक्षण के प्रदर्शन की एक तस्वीर। ग्राफ मतलब (स्टैंड से पता चलता ±पुनः प्राप्त (21 से बाहर छर्रों का अर्द त्रुटि) संख्या, एक प्रतिशत) प्रति सप्ताह प्रभावित forepaw द्वारा के रूप में व्यक्त किया। एन = 5. यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

    चित्रा 5
    चित्रा 5. नमूना आकार गणना एक वांछित उपचारात्मक प्रभाव का पता लगाने के लिए आवश्यक चूहों के समूह संख्या निर्धारित करने के लिए। इस स्क्रीन शॉट, बिजली विश्लेषण सॉफ्टवेयर से लिया, पता चलता है कि समूह प्रति 12 चूहों एक चिकित्सा है कि 50% से रोधगलितांश मात्रा कम हो पता लगाने के लिए आवश्यक होगा 24 घंटे में। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

    चित्रा 6
    चित्रा 6 पावर शक्ति है कि विभिन्न (कुल) वृद्ध चूहों की संख्या का उपयोग कर प्रयोगों के लिए प्राप्त किया जाएगा पता चलता जानवरों के विभिन्न कुल संख्या का उपयोग कर हासिल की। शक्ति विश्लेषण सॉफ्टवेयर से एक "मूल्यों की एक श्रृंखला के लिए XY साजिश", मापदंडों दी चित्र में दिखाया गया 5। तालिका 1 हमारे सभी परिणामों का सार है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

    स्ट्रोक के बाद के समय: घाव की मात्रा में कमी का पता लगाने के लिए आवश्यक समूह प्रति चूहों की संख्या:
    75% 50% 25%
    24 घंटा 6 12 42
    8 सप्ताह 4 5 17

    टेबल काल्पनिक भविष्य प्रयोगों के लिए समूह के प्रति नमूना आकार के 1. गणना। शक्ति विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग कर गणना (आंकड़े 5 और देखें 6)। टेबल इस अध्ययन में timepoints से प्रत्येक में एक 25%, 50% और 75% घाव मात्रा में कमी का पता लगाने के लिए एक दो समूह प्रयोग के लिए आवश्यक समूह प्रति चूहों की संख्या से पता चलता है।

    Discussion

    मूषक में MCAO अक्सर मानव स्ट्रोक मॉडल करने के लिए इस्तेमाल किया एक तकनीक है। यह मॉडल प्रोटोकॉल में नोट करने के लिए कुछ जानकारी है। सबसे पहले, यह प्रयोग भर पशु के शरीर का तापमान बनाए रखने के लिए के रूप में इस रोधगलितांश के आकार और एक अध्ययन में मौत की संख्या को प्रभावित आवश्यक है। यह सही सीसीए के क्षणिक रोड़ा दौरान isoflurane बंद और isoflurane के लिए जोखिम को कम करने से बचने की दर बढ़ाने के लिए एक गरम, शांत वातावरण में चूहों रखने के लिए संभव हो सकता है। शोधकर्ताओं कि क्या अतिरिक्त प्रेरण के तनाव outweighs एक छोटी संज्ञाहरण अवधि पर विचार करना चाहिए। चूहों के वाहिका (जैसे, एमसीए शाखाओं में बंटी) के भीतर और जानवरों 22 के साथियों के बीच होती है। ऐसा नहीं है जब एक नए अध्ययन की शुरुआत इसे ध्यान में सहन करने के लिए महत्वपूर्ण है। विभिन्न सीसीए रोड़ा बार मूल्यांकन किया जा सकता है (जैसे, 30, 45, 60 और 90 मिनट)। इस अध्ययन में 60 मिनट की एक रोड़ा समय किया जाता है। अन्य अध्ययनों में हम चाहते हैं कि 45 पाया हैमिनट अवरोध एक समान आकार की cortical रोधगलितांश लेकिन सुधार जीवित रहने की दरों की वास्तविक सबूत के साथ कारण। तदनुसार, सर्जन एक छोटी रोड़ा समय के साथ शुरू की है (उदाहरण के लिए, 30 मिनट) देखना है कि क्या पर्याप्त मात्रा में घाव (और / या आवश्यक व्यवहार घाटे) प्राप्त कर रहे हैं और उसके बाद ही जहां आवश्यक रोड़ा बार वृद्धि हुई है। व्यवहार घाटे समान रोड़ा समय के साथ बुजुर्ग चूहों की तुलना में वयस्क चूहों में कायम नहीं कर रहे हैं।

    एमआरआई कि क्या (एक विशेष रोड़ा समय के बाद) का न्याय करने के घाव मात्रा में अध्ययन के लक्ष्यों के लिए उपयुक्त हैं इस्तेमाल किया जा सकता है। एक छोटा सा घाव (40) से बाहर कम से कम दस 0.5 मिमी राज्याभिषेक स्लाइस अवधि होगी। एक मध्यम आकार के घाव दस और बीस राज्याभिषेक स्लाइस के बीच की अवधि होगी। एक बड़े घाव बीस और तीस राज्याभिषेक स्लाइस के बीच की अवधि होगी। एक बहुत बड़े घाव चालीस स्लाइस के तीस से अधिक अवधि होगी। हमारे अनुभव में, बहुत बड़े घावों (तीस से अधिक स्लाइस) और / या हर्नियेशन acros के सबूत के साथ चूहोंएस midline आमतौर पर गरीब रोग का निदान है: छोटे रोड़ा बार माना जा सकता है। एमआरआई भी रोधगलितांश स्थान का आकलन करने के लिए उपयोगी है: कुछ और दुमदारी स्थित हैं और कुछ और rostrally स्थित हैं।

    जब दोनों आम मन्या धमनियों से वेगस तंत्रिका को अलग करने के लिए अतिरिक्त ख्याल रखना। रेल्स (छीलन) स्ट्रोक सर्जरी के बाद हो सकता है और यह कुछ पशुओं में तंत्रिका क्षति के कारण हो सकता है, हालांकि वर्तमान में कारण स्पष्ट नहीं है: हमारे अनुभव में, रोग का निदान इन जानवरों के लिए बहुत खराब है और यह आमतौर पर नम्रता से उन्हें मारने के लिए सिफारिश की है।

    स्थायी प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य cortical दौरे और बुजुर्ग चूहों में स्वीकार्य पोस्ट ऑपरेटिव जीवित रहने की दरों में Diathermy MCAO मॉडल का परिणाम है। तकनीक करता है, हालांकि, एक stereomicroscope के तहत इनवेसिव सर्जरी की आवश्यकता होती है। यह सड़न रोकनेवाला तकनीक बनाए रखने के लिए अगर पशुओं की सर्जरी से उबरने के लिए अच्छी तरह से कर रहे हैं महत्वपूर्ण है। केयर, जबकि प्रकाश में लाने और धमनी coagulating एमसीए को नुकसान नहीं लिया जाना चाहिएऔर cortical सतह को नुकसान कोर्टेक्स के अन्यथा उजागर क्षेत्र को कम से कम किया जाना चाहिए रोधगलितांश क्षेत्र का हिस्सा हो सकता है। यह जितना संभव हो उतना अनुभव प्राप्त करने के लिए प्रक्रिया स्थापित करने के लिए और इससे पहले कि एक अध्ययन के उम्मीदवार के उपचारों का परीक्षण करने के लिए, उदाहरण के लिए किया जाता है लगातार दौरे रोड़ा बार प्राप्त करने और निर्धारित करने के लिए सिफारिश की है। प्रयोगकर्ता सर्जरी सत्र के भीतर किसी भी उपचार randomize चाहिए ( "ब्लॉक randomization") जहां संभव हो। यह ध्यान देने योग्य है कि इस मॉडल एमसीए reperfusion शामिल नहीं है (जब तक क्षणिक एमसीए बंधाव Diathermy के बजाय प्रयोग किया जाता है) के लायक है। मृत्युदर इन बड़े cortical दौरे के साथ बुजुर्ग चूहों में उच्च किया जा सकता है, लेकिन यह कम रोड़ा बार का उपयोग करके और जहां संभव हो (जैसे, रोड़ा के दौरान) सामान्य संज्ञाहरण के लिए जोखिम कम करके मृत्यु दर को कम करने के लिए संभव होना चाहिए। एक वाहक के रूप में 70% और 30% एन 2 हे हे 2 के उपयोग isoflurane के निचले स्तर पर अनुमति देने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है: isoflu करने के लिए यह कम जोखिमराणे उच्च जीवित रहने की दरों में हो सकता है।

    एक और बात पर विचार करना है कि atherosclerosis एक क्रमिक प्रक्रिया है, जबकि इस प्रोटोकॉल में हम तीव्र सीसीए रोड़ा साथ यह अनुकरण है। हालांकि, रक्त प्रवाह और निरंतर घाटे में पर्याप्त कमी मिलकर अवरोध है कि कई स्ट्रोक रोगियों में हो अनुकरण। स्थायी बाहर का MCAO मिलकर बिना चूहों में सीसीए रोड़ा स्ट्रोक के लिए प्रेरित करने में विफल रहता है reproducibly 14: बिना मिलकर सीसीए रोड़ा इसके अलावा, हमने पाया है काफी सहज वसूली होती है कि 8 सप्ताह से अधिक स्ट्रोक के उपचारों के दीर्घकालिक व्यवहार मूल्यांकन अलग करता है। इसके विपरीत, हम चाहते हैं कि बाहर का मिलकर साथ MCAO सीसीए रोड़ा बुजुर्ग चूहों में लंबी अवधि के घाटे को प्रेरित करता दिखा।

    अंत में, चूहों में इस प्रक्रिया, स्ट्रोक कि मानव हालत में देखा उन के आकार और स्थान में समान हैं का कारण बनता है कि एक निरंतर विकलांगता उपन्यास उपचार और पुन की व्याख्या के परीक्षण सक्षम करने के लिए उपयोग कर सकते हैं साथइस्कीमिक स्ट्रोक के बाद जोड़ी तंत्र।

    Disclosures

    Materials

    Name Company Catalog Number Comments
    Carprofen Norbrook Vm No; 02000/4229 give 0.25 mg/kg
    Atropine Sulfate AmTech RXATRINJ-100
    Alcohol swabs UHS 20021
    Lidocaine cream (Emla) AstraZeneca 0012901 Apply a pea sized drop to the shaved neck and temporal regions
    Homeothermic Blanket System Harvard Instruments 507222F
    Forceps Fine Science Tools 11019-12
    Isoflurane Abbott B506
    Silk sutures Harvard Apparatus 723288
    Cautery system Eschmann
    0.25 mm Jeweler cautery forceps Eschmann 8330349
    fine Dumont forceps Fine Science Tools 11251-10
    Thumb driven saline drip system
    Vacusafe aspirator system INTEGRA BIOSCIENCES 158320
    1.6 mm coarse diamond coated Steel burrs K801 104 016
    Handheld dental drill NSK NSKVMAXVRE (Handpiece NSKEX6B)
    Vannas Spring Scissors Fine Science Tools 15000-03
    Microvascular scissors World Precision Instruments 501790
    4-0 Vicryl sutures Ethicon
    Vascular clip and applicator
    Operating microscope Zeiss
    Compact Anaesthesia System Isoflurane K/F Single Gas VetTech Solutions
    Carbon Steel Scalpel blades No. 10 Swann-Morton 201
    25 g needles Terumo NN-2525R
    syringes (1 ml and 5 ml) Terumo SS+01T1 / SS*05SE1
    Saline (Sodium Chloride 0.9%) Fresenius Kabi Pl 08828/0178
    cotton buds Johnson and Johnson 5000207582502 sterilize before use
    gauze sterilize before use
    Medical Imaging Package (Jim) Xinapse Free software
    Statistical Parametric Mapping Software (SPM8) UCL Free software
    Power Analysis Software (G*Power) Universität Düsseldorf Free software

    References

    1. Pendlebury, S. T., et al. Underfunding of stroke research: a Europe-wide problem. Stroke. 35, 2368-2371 (2004).
    2. Doyle, S., Bennett, S., Fasoli, S. E., McKenna, K. T. Interventions for sensory impairment in the upper limb after stroke. Cochrane Database Syst Rev. 6, CD006331 (2010).
    3. Reep, R. L., et al. A rodent model for investigating the neurobiology of contralateral neglect. Cogn Behav Neurol. 17, 191-194 (2004).
    4. Carey, L. M., et al. Relationship between touch impairment and brain activation after lesions of subcortical and cortical somatosensory regions. Neurorehabil Neural Repair. 25, 443-457 (2011).
    5. Mohr, J. P., Lazar, R. M., Marshall, R. S., et al. Ch. 24. Stroke: Pathophysiology, Diagnosis and Management. Mohr, J. P., et al. Elsevier. 384-424 (2011).
    6. Sacco, R. L., et al. Subarachnoid and intracerebral hemorrhage: Natural history, prognosis, and precursive factors in the Framingham Study. Neurology. 34, 847-847 (1984).
    7. Hossmann, K. A., Heiss, W. D. Ch. 1. Textbook of Stroke Medicine. Brainin, M., Heiss, W. D. Cambridge University Press. 1-27 (2009).
    8. The National Institute of Neurological Disorders and Stroke rt-PA Stroke Study Group. Tissue Plasminogen Activator for Acute Ischemic Stroke. N Engl J Med. 333, 1581-1587 (1995).
    9. Brott, T., et al. Measurements of Acute Cerebral Infarction: Lesion Size by Computed Tomography. Stroke. 20, 871-875 (1989).
    10. Lövblad, K. O., et al. Ischemic Lesion Volumes in Acute Stroke by Diffusion-Weighted Magnetic Resonance Imaging Correlate with Clinical Outcome. Ann Neurol. 42, 164-170 (1997).
    11. Norrving, B. Ch. 2. Textbook of Stroke Medicine. Brainin, M., Heiss, W. D. Cambridge University Press. 28-39 (2009).
    12. Truelsen, T., et al. Stroke incidence and prevalence in Europe: a review of available data. Eur J Neurol. 13, 581-598 (2006).
    13. Ord, E. N., et al. Positive impact of pre-stroke surgery on survival following transient focal ischemia in hypertensive rats. J Neurosci Methods. 211, 305-308 (2012).
    14. Chen, S. T., Hsu, C. Y., Hogan, E. L., Maricq, H., Balentine, J. D. A model of focal ischemic stroke in the rat: reproducible extensive cortical infarction. Stroke. 17, 738-743 (1986).
    15. Montoya, C. P., Campbell-Hope, L. J., Pemberton, K. D., Dunnett, S. B. The 'staircase test': a measure of independent forelimb reaching and grasping abilities in rats. J Neurosci Methods. 36, 219-228 (1991).
    16. Adams, F. S., Schwarting, R. K., Huston, J. P. Behavioral and neurochemical asymmetries following unilateral trephination of the rat skull: is this control operation always appropriate? Physiol Behav. 55, 947-952 (1994).
    17. Macrae, I. M. Ch. 5. Rodent Models of Stroke, Neuromethods. U, D. irnagl 47, Humana Press, Springer. 41-53 (2010).
    18. Gerriets, T., et al. Noninvasive Quantification of Brain Edema and the Space-Occupying Effect in Rat Stroke Models Using Magnetic Resonance Imaging. Stroke. 35, 566-571 (2004).
    19. Paxinos, G., Watson, C. R., Emson, P. C. AChE-stained horizontal sections of the rat brain in stereotaxic coordinates. J Neurosci Methods. 3, 129-149 (1980).
    20. Faul, F., Erdfelder, E., Buchner, A., Lang, A. G. Statistical power analyses using G*Power 3.1: tests for correlation and regression analyses. Behav Res Methods. 41, 1149-1160 (2009).
    21. Button, K. S., et al. Power failure: why small sample size undermines the reliability of neuroscience. Nature Reviews Neuroscience. 14, 365-376 (2013).
    22. Fox, G., Gallacher, D., Shevde, S., Loftus, J., Swayne, G. Anatomic variation of the middle cerebral artery in the Sprague-Dawley rat. Stroke. 24, 2087-2093 (1993).
    23. Tamura, A., Graham, D. I., McColloch, J., Teasdale, G. M. Focal cerebral ischemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion. J. Cereb. Blood Flow Metab. 1, 53-60 (1981).

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