Tidlig Virale Adgangskrav Analyser for identifikation og evaluering af antivirale forbindelser

Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Tai, C. J., Li, C. L., Tai, C. J., Wang, C. K., Lin, L. T. Early Viral Entry Assays for the Identification and Evaluation of Antiviral Compounds. J. Vis. Exp. (104), e53124, doi:10.3791/53124 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Protocol

Bemærk: Sørg for, at alle procedurer, der involverer cellekultur og virusinfektion foregår på certificerede biosikkerhed emhætter, der er passende for biosikkerhed niveau af prøverne, der håndteres. Med henblik på at beskrive de protokoller, der er Gaussia luciferase reporter-mærket HCV bruges som model virus 32. I forbindelse med de repræsentative resultater, er forbindelserne chebulagic syre (chlA) og punicalagin (PUG), der anvendes som kandidat antivirale, der er målrettet virale glycoprotein interaktioner med celleoverflade glycosaminoglykaner under den tidlige virale post trin 31. Heparin, der vides at interferere med optagelse af mange vira 30,31,33,34, anvendes som en positiv kontrol behandling denne sammenhæng. For grundlæggende baggrund på virologiske teknikker, spredning af virus, bestemmelse af virustiter og ekspression af infektiøs dosis i plakdannende enheder (PFU), fokus-dannende enheder (FFU) eller infektionsmultiplicitet (MOI), læseren er reudskudt til at henvise 35. For tidligere eksempler og optimerede betingelser anvendt til virus vist i de repræsentative resultater, henvises læseren til referencer 30-32,36-39 samt oplysninger, der er anført i tabel 1, figur 1A og 2A.

1. Cell Culture, Compound Forberedelse og forbindelse cytotoksicitet

  1. Grow den respektive cellelinje for virusinfektion, der skal analyseres (tabel 1). For HCV, dyrke Huh-7,5-celler i Dulbeccos modificerede Eagles medium (DMEM) suppleret med 10% føtalt bovint serum (FBS), 200 U / ml penicillin G, 200 ug / ml streptomycin, og 0,5 ug / ml amphotericin B.
  2. Forbered testforbindelserne og kontrol ved hjælp af deres respektive opløsningsmidler: f.eks opløses chlA og PUG i dimethylsulfoxid (DMSO); forberede heparin i sterilt dobbeltdestilleret vand. For alle efterfølgende fortyndinger, brug kulturmedier.
    Bemærk: Den sidste concentration af DMSO i test sammensatte behandlinger er mindre end 1% i forsøgene; 1% DMSO er inkluderet som en negativ kontrol behandling i de assays til sammenligning.
  3. Bestem cytotoksicitet af testforbindelserne (f.eks chlA og Mops) på cellerne for virusinfektion ved hjælp af en bestemmelse af cellelevedygtighed reagens, såsom XTT (2,3-bis [2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl] -5-phenylamino) carbonyl] -2H-tetrazolium hydroxide):
    1. For HCV, frø Huh-7,5-celler i en 96-brønds plade (1 x 10 4 celler pr brønd) og inkuberes ved 37 ° C i en 5% CO2-inkubator O / N for at opnå et monolag.
    2. Anvend DMSO kontrol (1%) eller stigende koncentrationer af testforbindelserne Chla og PUG (ex. 0, 10, 50, 100 og 500 uM) til dyrkningsbrøndene i tre eksemplarer.
    3. Der inkuberes ved 37 ° C i 72 timer, derefter kasseres mediet i pladen og vaske cellerne med 200 pi phosphatpufret saltvand (PBS) to gange.
    4. Tilføj 100 ul assaying opløsning fra XTT-baserede in vitro toksikologi analysekit til hver brønd og inkuberes pladerne ved 37 ° C i yderligere 3 timer for at tillade XTT formazanproduktion.
    5. Bestem absorbansen med en mikropladelæser ved en test på 492 nm og en referencebølgelængde på 690 nm.
    6. Beregn procentdelen af ​​overlevende celler ved hjælp af følgende formel: cellernes levedygtighed (%) = På / Som × 100%, hvor 'På "og" As' refererer til absorbansen af ​​forsøgsforbindelserne og opløsningsmidlet kontrol (tidl 1% DMSO. ) behandlinger, henholdsvis. Bestemme koncentrationen af 50% cellulær cytotoksicitet (CC 50) af testforbindelserne fra en analytisk software som GraphPad Prism ifølge producentens protokol.

2. Udlæsning af viral infektion

Bemærk: udlæsning af virusinfektion afhænger af virusset, der anvendes, og kan involvere metoder såsom plakanalyser eller measuring reporter signaler fra reporter-mærkede virus. Metoden til påvisning af reporter-HCV-infektion baseret på luciferasereporteren aktivitet er beskrevet nedenfor.

  1. Saml supernatanterne fra de inficerede brønde og præcisere ved 17.000 xg i en mikrocentrifuge i 5 minutter ved 4 ° C.
  2. Bland 20 pi test supernatant til 50 pi luciferasesubstratet fra Gaussia luciferaseassaykit og gælder måle med et luminometer i overensstemmelse med producentens anvisninger.
  3. Hurtig HCV infektivitet som log 10 i relative lysenheder (RLU) for at bestemme viral inhibering (%) og beregne den 50% effektive koncentration (EC50) af testforbindelserne mod HCV-infektion ved hjælp af algoritmer fra GraphPad Prism software i overensstemmelse med producentens protokol.

3. virusinaktivering Assay

Bemærk: Eksempler på inkubationstiden og viral dosis for forskellige vira enre angivet i figur 1A. Højere koncentrationer af virus kan også testes ved at øge MOI / PFU.

  1. Seed Huh-7,5-celler i en 96-brønds plade (1 x 10 4 celler pr brønd) og inkuberes ved 37 ° C i en 5% CO2-inkubator O / N for at opnå et monolag.
  2. Inkubér testforbindelserne eller kontroller (endelige koncentrationer er: Chla = 50 uM, PUG = 50 uM, heparin = 1.000 pg / ml; DMSO = 1%) med HCV-partikler ved 37 ° C (figur 1A, 'langsigtede' ) i en 1: 1-forhold. For eksempel kan en 100 pi virusinokulum indeholdende 1 x 10 4 FFU, tilsættes 100 pi af en 100 uM chlA brugsfortynding; dette giver Chla behandling ved en slutkoncentration på 50 uM.
  3. Fortynd virus-medikamentblandingen til "sub-terapeutisk" (ineffektive) koncentration af testforbindelserne. For eksempel den ineffektive koncentration af Chla og PUG mod HCV er 1 uM 31; derfordette kræver en 50-ganges fortynding af virus-drug blanding, som kan opnås med 9,8 ml basalt medium (celledyrkning medium med 2% FBS).
    Bemærk: Den fortynding til sub-terapeutisk koncentration forhindrer signifikant interaktion mellem testforbindelserne og værtscellen overflade og tillader undersøgelse af behandlingseffekt på cellefri virioner. Bemærk, at denne fortynding er afhængig af antivirale dosisrespons af testforbindelserne mod den særlige virusinfektion, og bestemmes før udførelse af denne særlige assay 31.
  4. Til sammenligning, bland virus med testforbindelserne og straks fortyndes (ingen inkubationstiden) til sub-terapeutisk koncentration forud for infektion (figur 1A, "Short-Term").
  5. Tilsættes 100 pi af fortyndet HCV-drug blandingen på Huh-7,5 cellemonolaget (mængden af virus er nu på 1 x 10 2 FFU, endelige MOI = 0,01) og inkuberes i 3 timer ved 37 ° C for at tillade viraladsorption.
  6. Efter infektion fjernes den fortyndede podestoffer og forsigtigt vaske brøndene med 200 pi PBS to gange.
    Bemærk: Udfør vasker forsigtigt for at undgå at løfte cellerne.
  7. Påfør 100 pi basalt medium til hver brønd og inkuberes ved 37 ° C i 72 timer.
  8. Analyser af den resulterende infektion ved at analysere supernatanten for luciferaseaktivitet som beskrevet i "2. Udlæsning af viral infektion.

4. Viral Attachment Assay

Bemærk: Eksempler på inkubationstid og viral dosis for forskellige vira er anført i figur 2A, "Attachment '. Højere koncentrationer af virus kan også testes ved at øge MOI / PFU.

  1. Seed Huh-7,5-celler i en 96-brønds plade (1 x 10 4 celler pr brønd) og inkuberes ved 37 ° C i en 5% CO2-inkubator O / N for at opnå et monolag.
  2. Pre-chill cellemonolagene i pladerne ved 4 ° C foR 1 time.
  3. Co-behandling af cellerne med HCV inoculum (MOI = 0,01) og testforbindelser eller kontrol (slutkoncentrationer er: chlA = 50 uM; PUG = 50 uM; heparin = 1.000 pg / ml; DMSO = 1%) ved 4 ° C for 3 timer. For eksempel kan en 90 pi virusinokulum indeholdende 1 x 10 2 FFU tilsættes 10 pi af en 500 uM chlA brugsfortynding; dette giver Chla behandling ved en slutkoncentration på 50 uM og en infektion med HCV ved MOI = 0,01 på cellemonolaget.
    Bemærk: Det er vigtigt at udføre forsøget ved 4 ° C, da det giver mulighed for virusbinding men hinder post, som mest effektivt finder sted ved 37 ° C. Udfør tilsætning af virus og testforbindelser på is og efterfølgende inkubation i en 4 ° C køleskab for at sikre, at temperaturen holdes på 4 ° C.
  4. Fjern supernatanten og forsigtigt vaske cellemonolaget med 200 pi iskold PBS to gange.
    Bemærk: Udfør vasker forsigtigt for at undgå at løfte cellerne <./ li>
  5. Påfør 100 pi basalt medium til hver brønd og inkuberes ved 37 ° C i 72 timer.
  6. Analyser af den resulterende infektion ved at analysere supernatanten for luciferaseaktivitet som beskrevet i "2. Udlæsning af viral infektion.

5. Viral opslag / Fusion Assay

Bemærk: Eksempel på inkubationsperioder og viral dosis for forskellige vira er anført i figur 2A "adgangsbillet / Fusion". Højere koncentrationer af virus kan også testes ved at øge MOI / PFU.

  1. Seed Huh-7,5-celler i en 96-brønds plade (1 x 10 4 celler pr brønd) og inkuberes ved 37 ° C i en 5% CO2-inkubator O / N for at opnå et monolag.
  2. Pre-chill cellemonolagene i pladerne ved 4 ° C i 1 time.
  3. Inficere cellerne med HCV (MOI = 0,01) ved 4 ° C i 3 timer. For eksempel bruger en 100 pi virusinokulum indeholdende 1 x 10 2 FFU.
    Bemærk: Udfør suppletion af det virale inokulum på is og efterfølgende inkubation i en 4 ° C køleskab for at holde temperaturen ved 4 ° C, hvilket tillader viral binding, men ikke post.
  4. Fjern supernatanten og forsigtigt vaske cellemonolagene med 200 pi iskold PBS to gange.
    Bemærk: Udfør vasker forsigtigt for at undgå at løfte cellerne.
  5. Behandl brøndene med testforbindelserne eller kontroller (slutkoncentrationer er: chlA = 50 uM; PUG = 50 uM; heparin = 1.000 pg / ml; DMSO = 1%) og inkuberes ved 37 ° C i 3 timer. For eksempel, tilsættes 10 pi af en 500 uM Chla arbejder fortynding til 90 pi medier, mix, og behandle brøndene; dette giver Chla behandling ved en slutkoncentration på 50 uM.
    Bemærk: Skiftet fra 4 ° C til 37 ° C letter nu virusindtrængen / fusion begivenhed og derfor muligt at vurdere testforbindelser effekt på dette særlige trin.
  6. Aspirer lægemiddelholdige supernatant og fjerne ikke-internaliseresekstracellulære virus ved enten vask med 200 pi citratbuffer (50 mM natriumcitrat, 4 mM kaliumchlorid, pH 3,0) eller PBS. Påfør 100 pi det basale medium, før inkubering ved 37 ° C i 72 timer.
  7. Analyser af den resulterende infektion ved at analysere supernatanten for luciferaseaktivitet som beskrevet i "2. Udlæsning af viral infektion.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

I figur 1 blev 'viral inaktivering assay' udført for at undersøge, om to specifikke naturlige forbindelser Chla og PUG kunne inaktivere de forskellige kappeklædte vira i celle-fri tilstand og forhindre efterfølgende infektion. Cytotoksicitet og antiviral dosis-respons af disse forbindelser er blevet bestemt før udførelse af mekanistisk forsøg 31. De vira blev forbehandlet med testforbindelserne og derefter virus-stofblandinger blev fortyndet til sub-terapeutiske koncentrationer før podning på respektive cellemonolaget for hver virus system. Som vist i figur 1, både Chla og PUG syntes at interagere med cellefrie virioner, hvilket resulterer i irreversible virkninger, beskyttede cellemonolaget fra efterfølgende infektion. De to testforbindelser opnåede en næsten 100% hæmning mod HCMV, HCV, og DENV-2, mens en 60-80% blok blev observeret mod MV og RSV. Disse resultater Suggest at Chla og PUG har direkte indflydelse på disse frie viruspartikler ved at inaktivere dem og neutralisere deres infektivitet.

I figur 2, blev den vedhæftede fil og indrejse / fusion analyser udført for at udforske effekten af Chla og PUG mod disse tidlige virale entry-relaterede hændelser fra HCMV, HCV, DENV-2, MV, og RSV. Både Chla og PUG effektivt forhindret binding af de undersøgte vira onto respektive værtscelle som vist ved inhibering på den resulterende virusinfektion (figur 2, 'Attachment': lys grå søjler). Den inhiberende virkning på virus fastgørelse af begge forbindelser var ens over for HCMV (figur 2B), HCV (figur 2C), DENV-2 (figur 2D), og RSV (figur 2F), der spænder fra 90 - 100%. På den anden side, PUG syntes at være mere effektiv end Chla mod MV-binding (figur 2E), med inhiberingshastigheden fra two forbindelser varierer mellem 50 - 80%. Kontrolbehandlingen heparin, som er kendt for at blokere optagelse af mange vira, også hæmmede binding af HCMV, DENV-2, RSV, ad MV, men var mindre effektiv mod HCV. Den efterfølgende 'viral indgang / fusion assay' undersøgt, om Chla og PUG bevaret deres aktivitet under virus entry / fusion fase (Figur 2, "adgangsbillet / Fusion«: mørk grå søjler). Igen blev både Chla og PUG observeret for effektivt at forringe den virale trin af de undersøgte vira (figur 2B - F) post / fusion, hvilket gav en 50 - 90% beskyttende virkning på den respektive cellemonolaget. Heparin desuden effektivt inhiberede post / fusion i DENV-2 og RSV-infektioner, men var mindre effektivt over for HCMV, HCV og MV (<40% inhibering i gennemsnit).

<td> HEL
Virus Celletype
HCMV
HCV Huh-7.5
DENV-2 Vero
MV CHO-SLAM
RSV HEp-2

Tabel 1:. Host celletype for virusinfektion Den anvendte celletype for hver virusinfektion, der er beskrevet i de repræsentative resultater er angivet. Yderligere detaljer vedrørende de celler kan findes i reference 31.

Figur 1
Figur 1. Inaktivering af virusinfektioner ved testforbindelserne Chla og PUG Forskellige vira blev behandlet med prøveforbindelserne i en lang periode. (Inkuberet i 1,5-3 timer før titrering, lys grå søjler) eller kort periode (umiddelbart fortyndet; mørkegrå søjler) ved 37 ° C før en fortynding til sub-terapeutisk koncention og efterfølgende analyse af infektion på de respektive værtsceller. (A) Skematisk af forsøget (vist til venstre) med den endelige koncentration af virus (PFU / brønd eller MOI), langsigtede virus-drug inkubationsperioden (i), og efterfølgende inkubationstid (ii) er angivet for hvert virus i tabellen til højre. Analyser for (B) HCMV, (C) HCV, (D) DENV-2, (E) MV, og (F) RSV er indikeret på hver yderligere panel. Resultaterne er afbildet mod DMSO negativ behandling kontrol for virusinfektion og de viste data er middelværdier ± standardfejl af middelværdien (SEM) fra tre uafhængige forsøg. Dette tal har været ændret siden henvisning 31. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 2
Figur 2. Evaluering af antivirale aktiviteter af testforbindelserne Chla og PUG mod virus fastgørelse og indgang / fusion. (A) Den eksperimentelle procedure, viruskoncentration (PFU / brønd eller MOI), og tidspunktet for tilsætning og behandling med testforbindelserne (i, ii, iii) er præsenteret for hvert virus i Skema og de tilknyttede tabeller. I virus fastgørelse analyse (lys grå søjler), monolag af forskellige celletyper blev præ-kølet ved 4 ° C i 1 time, derefter co-behandlet med de respektive vira og testforbindelser ved 4 ° C (1,5 - 3 timer; i) før vask off Inokulater og testforbindelser til efterfølgende inkubation (37 ° C ii) og undersøgelse af virusinfektion. I virus entry / fusion analyse (mørkegrå søjler), podede cellemonolag blev præ-afkølet ved 4 ° C i 1 time og derefter udfordret med de respektive vira ved 4 ° C i 1,5 - 3 timer (i). Celler blev dereftervasket og behandlet med testforbindelserne i en yderligere inkubationsperiode (ii), hvorunder temperaturen blev overført til 37 ° C for at fremme virusindtrængen / fusion begivenhed. Ved slutningen af ​​inkubationen blev ekstracellulære vira fjernes ved enten citratbuffer (pH 3,0) eller PBS vaske og cellerne blev yderligere inkuberet (iii) til analyse af virusinfektion. Resultater for (B) HCMV, (C) HCV, (D) DENV-2, (E) MV, og (F) RSV er indikeret på hver yderligere panel. Data er afbildet mod DMSO negativ kontrol behandling af virusinfektion og præsenteres som middelværdi ± SEM fra tre uafhængige eksperimenter. Dette tal har været ændret siden henvisning 31. Klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM GIBCO 11995-040
FBS GIBCO 26140-079
Penicillin-Streptomycin GIBCO 15070-063
Amphotericin B GIBCO 15290-018
DMSO Sigma D5879
In vitro toxicology assay kit, XTT-based Sigma TOX2
PBS pH 7.4  GIBCO 10010023
Microplate reader Thermo Scientific 89087-320
Microcentrifuge Thermo Scientific 75002420
BioLux Gaussia luciferase assay kit New England Biolabs E3300L   
Luminometer Promega GloMax-20/20
Sodium citrate, dihydrate Sigma 71402
Potassium chloride Sigma P5405

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Munier, C. M., Andersen, C. R., Kelleher, A. D. HIV vaccines: progress to date. Drugs. 71, 387-414 (2011).
  2. Rothman, A. L. Immunity to dengue virus: a tale of original antigenic sin and tropical cytokine storms. Nat Rev Immunol. 11, 532-543 (2011).
  3. Sung, H., Schleiss, M. R. Update on the current status of cytomegalovirus vaccines. Expert Rev Vaccines. 9, 1303-1314 (2010).
  4. Torresi, J., Johnson, D., Wedemeyer, H. Progress in the development of preventive and therapeutic vaccines for hepatitis C virus. J Hepatol. 54, 1273-1285 (2011).
  5. Wright, M., Piedimonte, G. Respiratory syncytial virus prevention and therapy: past, present, and future. Pediatr Pulmonol. 46, 324-347 (2011).
  6. Christou, L. The global burden of bacterial and viral zoonotic infections. Clin Microbiol Infect. 17, 326-330 (2011).
  7. Cascio, A., Bosilkovski, M., Rodriguez-Morales, A. J., Pappas, G. The socio-ecology of zoonotic infections. Clin Microbiol Infect. 17, 336-342 (2011).
  8. Grais, R. F. Measles vaccination in humanitarian emergencies: a review of recent practice. Confl Health. 5, 21 (2011).
  9. Gautret, P. Emerging viral respiratory tract infections-environmental risk factors and transmission. Lancet Infect Dis. 14, 1113-1122 (2014).
  10. Sampathkumar, P. Middle East respiratory syndrome: what clinicians need to know. Mayo Clin Proc. 89, 1153-1158 (2014).
  11. Burd, E. M. Ebola Virus: a Clear and Present Danger. J Clin Microbiol. 53, 4-8 (2015).
  12. Bishop, B. M. Potential and Emerging Treatment Options for Ebola Virus Disease. Ann Pharmacother. (2014).
  13. Arduino, P. G., Porter, S. R. Oral and perioral herpes simplex virus type 1 (HSV-1) infection: review of its management. Oral Dis. 12, 254-270 (2006).
  14. Mitrasinovic, P. M. Advances in the structure-based design of the influenza A neuraminidase inhibitors. Curr Drug Targets. 11, 315-326 (2010).
  15. Soriano, V. Directly acting antivirals against hepatitis C virus. J Antimicrob Chemother. 66, 1673-1686 (2011).
  16. Haqqani, A. A., Tilton, J. C. Entry inhibitors and their use in the treatment of HIV-1 infection. Antiviral Res. 98, 158-170 (2013).
  17. Melby, T., Westby, M. Inhibitors of viral entry. Handb Exp Pharmacol. 177-202 (2009).
  18. Vanderlinden, E., Naesens, L. Emerging antiviral strategies to interfere with influenza virus entry. Med Res Rev. 34, 301-339 (2014).
  19. Antoine, T. E., Park, P. J., Shukla, D. Glycoprotein targeted therapeutics: a new era of anti-herpes simplex virus-1 therapeutics. Rev Med Virol. 23, 194-208 (2013).
  20. Pawlotsky, J. M., Chevaliez, S., McHutchison, J. G. The hepatitis C virus life cycle as a target for new antiviral therapies. Gastroenterology. 132, 1979-1998 (2007).
  21. Beyleveld, G., White, K. M., Ayllon, J., Shaw, M. L. New-generation screening assays for the detection of anti-influenza compounds targeting viral and host functions. Antiviral Res. 100, 120-132 (2013).
  22. Kilianski, A., Baker, S. C. Cell-based antiviral screening against coronaviruses: developing virus-specific and broad-spectrum inhibitors. Antiviral Res. 101, 105-112 (2014).
  23. Caillet-Saguy, C., Lim, S. P., Shi, P. Y., Lescar, J., Bressanelli, S. Polymerases of hepatitis C viruses and flaviviruses: structural and mechanistic insights and drug development. Antiviral Res. 105, 8-16 (2014).
  24. Frey, S. Temperature dependence of cell-cell fusion induced by the envelope glycoprotein of human immunodeficiency virus type 1. J Virol. 69, 1462-1472 (1995).
  25. Tscherne, D. M. Time- and temperature-dependent activation of hepatitis C virus for low-pH-triggered entry. J Virol. 80, 1734-1741 (2006).
  26. Madan, R. P. Molecular umbrellas: a novel class of candidate topical microbicides to prevent human immunodeficiency virus and herpes simplex virus infections. J Virol. 81, 7636-7646 (2007).
  27. Haywood, A. M., Boyer, B. P. Time and temperature dependence of influenza virus membrane fusion at neutral pH. J Gen Virol. 67, (Pt 12), 2813-2817 (1986).
  28. Haywood, A. M., Boyer, B. P. Sendai virus membrane fusion: time course and effect of temperature, pH, calcium, and receptor concentration). Biochemistry. 21, 6041-6046 (1982).
  29. Wang, G., Hernandez, R., Weninger, K., Brown, D. T. Infection of cells by Sindbis virus at low temperature. Virology. 362, 461-467 (2007).
  30. Lin, L. T. Hydrolyzable tannins (chebulagic acid and punicalagin) target viral glycoprotein-glycosaminoglycan interactions to inhibit herpes simplex virus 1 entry and cell-to-cell spread. J Virol. 85, 4386-4398 (2011).
  31. Lin, L. T. Broad-spectrum antiviral activity of chebulagic acid and punicalagin against viruses that use glycosaminoglycans for entry. BMC Microbiol. 13, 187 (2013).
  32. Marukian, S. Cell culture-produced hepatitis C virus does not infect peripheral blood mononuclear cells. Hepatology. 48, 1843-1850 (2008).
  33. Baba, M., Snoeck, R., Pauwels, R., de Clercq, E. Sulfated polysaccharides are potent and selective inhibitors of various enveloped viruses, including herpes simplex virus, cytomegalovirus, vesicular stomatitis virus, and human immunodeficiency virus. Antimicrob Agents ChemotheR. 32, 1742-1745 (1988).
  34. Barth, H. Cellular binding of hepatitis C virus envelope glycoprotein E2 requires cell surface heparan sulfate. J Biol CheM. 278, 41003-41012 (2003).
  35. Flint, S. J., Enquist, L. W., Racaniello, V. R., Skalka, A. M. Principles of Virology. 3rd edn, ASM Press. (2008).
  36. Brown, M. G. Dramatic caspase-dependent apoptosis in antibody-enhanced dengue virus infection of human mast cells. J Leukoc Biol. 85, 71-80 (2009).
  37. Huang, Y., Cyr, S. L., Burt, D. S., Anderson, R. Murine host responses to respiratory syncytial virus (RSV) following intranasal administration of a Protollin-adjuvanted, epitope-enhanced recombinant G protein vaccine. J Clin Virol. 44, 287-291 (2009).
  38. Isaacson, M. K., Compton, T. Human cytomegalovirus glycoprotein B is required for virus entry and cell-to-cell spread but not for virion attachment, assembly, or egress. J Virol. 83, 3891-3903 (2009).
  39. Leonard, V. H., et al. Measles virus blind to its epithelial cell receptor remains virulent in rhesus monkeys but cannot cross the airway epithelium and is not shed. J Clin Invest. 118, 2448-2458 (2009).
  40. Ciesek, S. The green tea polyphenol, epigallocatechin-3-gallate, inhibits hepatitis C virus entry. Hepatology. 54, 1947-1955 (2011).
  41. Lin, L. T. Saikosaponin b2 is a naturally occurring terpenoid that efficiently inhibits hepatitis C virus entry. J Hepatol. 62, 541-548 (2015).
  42. Atkins, C., Evans, C. W., White, E. L., Noah, J. W. Screening methods for influenza antiviral drug discovery. Expert Opin Drug Discov. 7, 429-438 (2012).
  43. Zhang, J. Identification of novel virus inhibitors by influenza A virus specific reporter cell based screening. Antiviral Res. 93, 48-54 (2012).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics