Karakterisering af leukocyt-blodpladerigt fibrin, A Novel biomateriale

Bioengineering

Your institution must subscribe to JoVE's Bioengineering section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Madurantakam, P., Yoganarasimha, S., Hasan, F. K. Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial. J. Vis. Exp. (103), e53221, doi:10.3791/53221 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Protocol

Alle blod-tegning procedurer bør gøres af autoriserede og certificerede fagfolk. Anvendelse af forsøgspersoner til forskning indebærer godkendelse fra Institutional Review Board eller anden relevant myndighed. Særlige forsigtighedsregler vedrørende informeret samtykke og beskyttelse deltager identifikation skal følges. Alle forsøg er nævnt i denne protokol, indebærer håndtering af humant blod og / eller blodprodukter og egnede personlige værnemidler skal bæres på alle tidspunkter. Affaldet bør betragtes som biohazard og bortskaffes i henhold til reglerne.

1. Venepunktur

  1. Identificer patienten / deltager og bekræft med eksisterende registreringer. Forklare undersøgelsen i detaljer og få et informeret samtykke.
  2. Har en bakke sat op til enkelte patient med rør markeret på en flad stabil overflade.
  3. Forklar proceduren og patienten sæde komfortabelt med armen understøttes. Informer patienten om, at han eller she vil føle en lille knivspids og bør forblive stadig under hele proceduren.
  4. Fastgør nålen til adapteren.
  5. Vask hænder og handsker.
  6. Forbered antecubital fossa til venepunktur ved at rense med 70% isopropylalkohol i koncentriske cirkler fra midten udad. Således at grunden lufttørre i 30 sek.
  7. Identificer den passende vene ved palpering.
  8. Påfør årepressen 3-4 ovenfor punkturstedet at sikre, at det ikke er for stram (mens stadig føler den radiale puls).
  9. Udfør venepunktur ved at indsætte den skrå kant af nålen 15-30 grader i forhold til huden i en jævn bevægelse. Skub blodopsamlingsrøret gennem nålen og indsamle 9 ml fuldblod.
  10. Fjern årepresse. Fjern røret fra nålen.
  11. Træk nål og anvende gaze firkant i indstiksstedet før nålen fjernes. Bortskaf nålen i en egnet biologisk farligt beholder.
  12. Spørg patienten at opretholde prEssure på indstiksstedet.
  13. Mærk rørene
  14. Kontroller indstiksstedet for at være sikker blødningen er stoppet.
  15. Påfør selvklæbende bandage eller tape over gaze firkantet, spørge, om patienten føler alright (ingen smerter, hævelse eller svimmelhed)
  16. Tak patienten / deltageren inden udledning.

2. L-PRF Fremstilling

  1. Umiddelbart efter veneblod kollektion i den rød-topped tør glasrør, som anbringes i centrifugen.
  2. Centrifuger ved 400 xg i 12 minutter ved stuetemperatur efter at have placeret en passende modvægt.
  3. Fjern røret ved enden af ​​cyklus. Læg mærke til tre lag: blodpladefattigt plasma (PPP), blodpladerigt fibrin (L-PRF), og RBC base (figur 1).
  4. Aspirer PPP ved anvendelse af en pipette. Brug af pincet forsigtigt trække L-PRF ud og læg den i en steril, perforeret metal mesh.
  5. Ved hjælp af kirurgisk skalpel, skrabe hovedparten af ​​RBC lag omhyggeligt forlader buffy coat intakt.
  6. Forsigtigt komprimere L-PRF koagel (under anvendelse af den sterile metalplade, omtrentlige vægt 225 g) i 30 sek. Blodpladefattigt plasma vil blive presset ud.
  7. Fjern pladen og løft forsigtigt L-PRF-membran. L-PRF membran er klar til brug i forsøg 12.

3. Uniaxial Tensile Testing

  1. Place L-PRF-membraner (n = 6) på et filterpapir til nem håndtering og punch til "hund knogler" ved hjælp skræddersyet metal dør (2,75 mm bred på deres smalleste sted med en sporvidde længde på 7,5 mm).
  2. Måle tykkelsen af ​​hver prøve på tre pletter og tage gennemsnittet.
  3. Indgreb forsigtigt L-PRF membran i midten af ​​kæben greb i enaksede testsystem.
  4. Riv forsigtigt støtten filer papir for at blotlægge L-PRF membran.
  5. Program instrumentet, således at det bevægelige hoved er i drift ved en konstant hastighed (10,0 mm / min) og starte eksperimentet når L-PRF stadig er våd.
  6. Optag elasticitetsmodul, energi til at bryde, og belastning ved brud fra software ledsager enaksede testsystem. Disse værdier beregnes automatisk og ingen brugerdefinerede input er påkrævet. Se figur 3.

4. Sutur Retention Strength

  1. Place L-PRF-membraner (n = 3) på et filterpapir til nem håndtering og skæres i rektangulære prøver måler (10 mm x 25 mm) ved hjælp af en kirurgisk skalpel.
  2. Måle tykkelsen af ​​hver prøve (gennemsnit af 3).
  3. Lav et lille hul i midten af ​​prøven ved anvendelse af rustfrit stål ortodontisk ligatur ledning (220 um i diameter).
  4. Før ligatur wire gennem pinhole at danne en løkke og fastgør den til trækprøvemaskine. Placer kanten af L-PRF-membran til underkæben greb 13.
  5. Programmere instrument, så at den bevægelige hoved er i drift ved en konstant hastighed (10 mm / min) og starteneksperimentet.
  6. Optag elasticitetsmodul, energi til at bryde, og belastning ved brud fra software ledsager enaksede testsystem. Disse værdier beregnes automatisk og ingen brugerdefinerede input er påkrævet. Se figur 3.

5. morfologisk undersøgelse

  1. Forbered L-PRF prøver til SEM-undersøgelse ved anvendelse af en 10 mm dermal biopsitang og placere dem i en 24-brønds plade.
  2. Vask prøverne med PBS og fix med 2,5% glutaraldehyd (i PBS) i 20 min.
  3. Dehydrere prøvemateriale ved nedsænkning i sekventielt stigende koncentrationer af ethanol (50%, 70%, 80%, 90% og 100%) i 5 minutter hver.
  4. Der behandles med 0,5 ml 100% HMDS (hexamethyldisilazan) i 5 minutter. Luftes O / N for at fjerne overskydende HMDS 14.
  5. Mount prøver på stubs bruger dobbeltklæbende tape, sputter-coat platin til 70 sek og undersøge et scanningselektronmikroskop opererer ved en accelbejde spænding på 20 kV (eller passende indstilling).

6. genipin Tværbinding af L-PRF, trypsin modtagelighed og Ninhydrin Assay

  1. For at forberede genipin tværbunden L-PRF, skylles membraner med PBS og lægges i blød i 4 ml 1% genipin løsning (i 70% ethanol) i 48 timer. Skyl med PBS forud for eksperimenter for at fjerne overskydende genipin 15, 16.
  2. Vurdere stabilitet genipin krydsbinding af L-PRF ved sin modstand mod nedbrydning af trypsin. Sted L-PRF membran (n = 3) og genipin tværbundet L-PRF i 500 pi 0,01% trypsin og inkuberet ved 37 ° C i 3 dage med et dagligt skift af trypsin.
    1. Prøver på dag 1 før afvejes til enzym eksponering og på dag 3. Forskellen i starten og ender vægten repræsenterer enzymatisk nedbrydning 17.
  3. Kvantificere mængden af ​​tværbinding i genipin behandlet L-PRF (G-PRF) ved ninhydrin assay. Først forberede standard Curve hjælp glycin (1 mM-0,031 mM) kurve for at etablere forholdet mellem frie aminosyre koncentration (FAA) og absorbans.
    1. Heat PRF prøver med 1 ml 2% (w / v) ninhydrin i 15 minutter ved 100 ° C.
    2. Lad opløsningen afkøle til stuetemperatur, og der tilsættes 1,5 ml 50% ethanol.
    3. Analyser absorbansen ved 570 nm under anvendelse af et egnet spektrofotometer.
    4. Bestem krydsbinding procent ved hjælp af formlen under 15

Ligning 1

7. MTS celleproliferationsassay

  1. Grow MC3T3 (mus calvariale præosteoblaster) i Minimum Essential Medium -alpha modifikation (aMEM) i T-75 kolber, indtil en 80% sammenflydende monolag er opnået.
  2. Fremstilles frisk, sterilt L-PRF membran (åbne L-PRF rør inde i cellekultur hætte) og overføre membranen på en ny celledyrkningsskål.
  3. Aspirer medier fra kolben og skyl monolaget med PBS, tilsættes 5 ml 0,05% trypsin og kolben i 37 ° C inkubator for 5 min, pipette indholdet af kolben i et centrifugerør og centrifugeres ved 400 xg i 5 min.
  4. Dekanteres, forsigtigt trykke røret for at bryde cellepelletten og re-suspendere med 4 ml frisk α MEM, dispensere en blanding af cellesuspension (50 pl), og trypanblåt (50 pl) i hemocytometer og tælle antallet af celler
  5. Seed 4x10 5 celler inden for 10 mm klonings- glas ringe placeret på toppen af L-PRF membraner til at fastholde cellerne i membranerne (ringe kan fjernes efter 24 timer).
  6. På dag 4, skylles konstruktioner med PBS tre gange i 10 min.
  7. Tilsæt 1 ml serumfri medier og 200 pi MTS-reagens til hver brønd og inkuberes i 2 timer ved 37 ° C.
  8. Mål absorbans fra 200 pi alikvoter ved 490 nm.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Scanningselektronmikroskopet billede af L-PRF størkne ved forskellige sektioner (top, midte og bund) er lag illustreret i figur 2. Som det kan ses, er den øverste del består overvejende af fibrin netværk uden celler. Det midterste lag er beriget med blodplader med dokumentation for deres aktivering og degranulering. Det nederste lag har en blanding af leukocytter og røde blodlegemer indesluttet i en fibrinmatrix.

De mekaniske egenskaber blev evalueret i to tilstande: enaksede trækprøvning og sutur fastholdelse styrke test. Resultaterne viser viskoelastiske opførsel af L-PRF. Selvom elasticitetsmodulet er lavt (0,47 MPa), membranen er hård (energi til at bryde, 5 N · mm) og er i stand til at undergå væsentlig deformation (217%, figur 3). Data fra sutur retention test, at en indikator for membranens evne sutureres til vævene, foreslog en signifikant hård ennd deformerbart materiale (modul-0,2 MPa, stamme-140% og energi til at bryde-3,2 N.mm) i L-PRF (figur 4).

En af begrænsningerne af fibrin produkter i regenerativ medicin er dens korte biologiske liv. Lavet af endogen fibrin, L-PRF er modtagelig for enzym nedbrydning og gennemgår fibrinolyse. For at vurdere modstanden af L-PRF til enzym-medieret nedbrydning blev frisk L-PRF underkastet trypsinbehandling (0,01%) og inkuberet ved 37 ° C. Vi observerede fuldstændig nedbrydning af L-PRF inden for tre dage. Genipin tværbinding af L-PRF membraner faldt nedbrydning med næsten 60% (figur 5).

Evnen af ​​L-PRF membraner til at understøtte cellevækst blev evalueret ved at dyrke muse calvariale osteoblaster på tværbundne og ikke-tværbundne membraner. Tværbundne blodpropper gennemgik nedbrydning til forskellige niveauer, mens genipin tværbundet membraner bevaret deres struktur og støttet cEll vækst (figur 6).

Figur 1
Figur 1. Trin i generation af L-PRF. (A) Efter centrifugering af fuldblod i et glasrør, vil tre lag være synlige. (B) Efter dekantering PPP, er L-PRF fjernes ved hjælp af en steril pincet . (C) Den røde blodlegemer basen bliver skrabet af med en skalpel og lagt på en perforeret metalbakke (D). Efter blid kompression, er OPP presset ud og er dannet en fast L-PRF-membran. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 2
SEM billede af forskellige lag af frisk L-PRF (A) repræsenterer fibrin-rige lag;. (B) er en zone med berigede blodplader med forskellige grad af aktivering, (C) er buffy coat med talrige leukocytter og (D) er den røde blodlegemer bund. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 3
Figur 3. Stress-strain kurver følgende mekaniske belastning af L-PRF i enaksede trækprøvning (A) og Sutur fastholdelse styrke (B). Lastning mønster af hver prøve er repræsenteret i forskellige farver. De enaksede trækprøvning data (A) viser et lavt modul, en stor elastisk deformation og en hurtig fiasko. Ved udspiling af en sutur (B), L-PRF betegner en membran, der er hård (areal under kurven) samt udspidelig. Godt gruppering af data tyder minimal variation mellem prøverne. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 4
Figur 4. Fotografier af faktiske fejl i sutur fastholdelse styrke testning. En 220 um tyk rustfrit stål ortodontiske ligatur wire blev passeret gennem midten af L-PRF og bundet til overkæben medlem af trækprøvemaskine. Den anden ende blev fastgjort til den nedre greb og strækkes ved en konstant hastighed. Læg mærke til forlængelse af membranen og dens trækstyrke, hvilket tyder på fremragende elasticitet af L-PRF.about / filer / ftp_upload / 53221 / 53221fig4large.jpg "target =" _ blank "> Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 5
Figur 5. Nedbrydning af L-PRF membraner efter inkubation i 0,01% trypsin. Alle L-PRF membraner sønderdelt fuldstændigt i trypsin inden for 3 dage, mens genipin-tværbundet L-PRF var 60% mere stabil. Dette viser, at kemisk krydsbinding kan være en levedygtig strategi til forbedring af levetiden af L-PRF-membraner, når de anbringes in vivo.

Figur 6
Figur 6. Effekt af L-PRF tværbinding på cellelevedygtighed. Repræsentative billeder af 4 dage gammel kultur af MC3T3-celler på ikke-tværbundet L-PRF (A), genipin-tværbundet L-PRF (B) enND vævsdyrkningsplastik (C). Tværbundet L-PRF nedbrydes i kultur til varierende grad og viste celle aktivitet svarende til plast. Genipin tværbunden L-PRF fastholdt deres struktur og støttet robust celle overlevelse. Til højre er kvantificerede data (+ SD) fra uafhængige forsøg med tre gentagelser. Klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Autologe blodpladekoncentrater er lovende med hensyn til regenerativ medicin 18 på grund af den overflod af vækstfaktorer. Men disse præparater manglede ofte en defineret struktur, der gør kirurgisk manipulation meget vanskeligt. Mange gange er de suspensioner og geler ikke medtaget effektivt på stedet for levering, hvilket resulterer i uforudsigelige resultater. L-PRF repræsenterer et enormt fremskridt i udviklingen af ​​blodpladekoncentrater i, at det er i det væsentlige en fast fibrin membran med indesluttede blodplader. Disse faste membraner har gode køreegenskaber, og kan sikkert sutureres på et anatomisk ønskede sted under åben kirurgi. Men dens fysiske og biologiske egenskaber er relativt ukendt.

L-PRF vil danne konsekvent når ovenfor beskrevne trin overholdes strengt (figur 1). En af de vigtige overvejelser ved at skabe en god L-PRF membranen er TImig forsinkelse mellem blod uafgjort og centrifugering. Succesen med L-PRF teknik udelukkende afhænger af hastigheden af blod indsamling og øjeblikkelig overførsel centrifugen 19, normalt inden for et minut. Det er umuligt at generere en velstruktureret L-PRF størkne (med dens specifikke celle indhold matrix arkitektur og vækstfaktor release profil), hvis blod høst er forlænget og ikke homogent; en lille usammenhængende, smuldrende masse af fibrin med ukendt indhold dannes stedet.

Det er blevet accepteret, at mechanobiological interaktioner mellem celler og ekstracellulære matrix (ECM) har en kritisk indflydelse på alle aspekter af celle adfærd, herunder migration, proliferation og differentiering 20,21. L-PRF, en unik type blodprop, der dannes under særlige omstændigheder og består af komplekse, forgrenede netværk af fibrin. L-PRF fungerer som en foreløbig ECM, der er slået over i funktionel væv under helingen. Blive udsat for mekaniske kræfter, succesfulde sårheling er afhængige af den strukturelle integritet af L-PRF og dermed belyse deres fysiske egenskaber er vigtig. Vi udførte enaksede trækprøvning (til identifikation af iboende materialeegenskaber) og sutur fastholdelse test (til identifikation af manglende egenskaber) på frisk L-PRF. I modsætning til PRP gel eller størknet blod, der ikke har en defineret struktur, L-PRF ligner tæt bindevæv med overlegne håndteringsegenskaber. Vi rapporterer et elasticitetsmodul på 0,470 MPa (SD = 0,107) for L-PRF-membraner og strække to gange dens oprindelige længde før svigt (stamme på 215%). Disse data match med publiceret litteratur 22,23 der rapporterede lav stivhed (1-10 MPa) og høj belastning (op til 150%) før de bryder. Forskellen i værdierne kan skyldes brugen af ​​fibrinnetværket sammenlignet med anvendelsen af ​​AFM-analyse af en enkelt fibrin fibre i ovennævnte undersøgelser.

Sutur fastholdelse styrke er en kirurgiskvigtig parameter af graftmaterialer, og det er defineret som den nødvendige kraft til at trække en sutur fra transplantatet eller forårsage væggen af ​​implantatet til at svigte. Vores eksperimenter bruges straight-tværs procedure (som defineret af ANSI 24). Den nødvendige kraft til at trække ligatur wire gennem L-PRF af 3,23 N.mm (SD = 0,329). Samlet set fandt vi L-PRF at være mekanisk hård, stand til at understøtte belastninger og evnen til at strække dobbelt så meget på spænding og bevarer suturer ganske godt (deformerer betydeligt før rive).

Manglen på stabilitet og strukturel integritet af L-PRF i biologiske miljøer er en væsentlig begrænsning i dens anvendelse i vævsmanipulation. Vi søgte at løse dette problem ved kemisk tværbinding L-PRF hjælp genipin. I modsætning til glutaraldehyd, som er forbundet med toksicitet, genipin er et naturligt forekommende biologisk nedbrydeligt molekyle med lav cytotoksicitet. Efter genipin behandling, membranerne var signifikant stabile i trypsin og supported celleproliferation over 4 dage. Imidlertid blev kun 20% af L-PRF tværbundet med genipin (bestemt ved ninhydrin-assay). Disse data tyder på, at mens kemisk krydsbinding er en levedygtig strategi, har brug for at blive udforsket andre alternativer.

Baseret på disse resultater, er det klart, at L-PRF er en roman biomateriale med unikke egenskaber: forudsigelig forberedelse fra autologt blod, enkelhed protokol, defineret arkitektur, imponerende mekaniske egenskaber og overflod af vækstfaktorer fra aktiverede blodplader. Blodet får lov til at størkne under fysiologiske betingelser uden eksponering for antikoagulanter, exogent thrombin og calciumchlorid. Alle disse egenskaber gør L-PRF lovende biomateriale til applikationer i regenerativ medicin.

Et af de kliniske problemer at beskæftige sig med i forbindelse med anvendelsen af ​​L-PRF er heterogenitet i kvaliteten af ​​blodplader og blodkomponenter. På nuværende tidspunkt er meget lidt forstået omL-PRF genereret fra patienter med koagulationsforstyrrelser eller patienter på medicin, der påvirker blodets evne til at størkne (heparin, warfarin eller trombocythæmmere). Svarene på disse spørgsmål vil uden tvivl forbedre vores forståelse af healing samt bidrage til at fremme inden for skræddersyet medicin.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har intet at afsløre og bekræfte, at der er ingen kendte interessekonflikter i forbindelse med denne publikation.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Needle 19G BD 305186
Needle Disposal Container Fisherbrand 14-827-122
Red-Topped Glass Collection Tube BD 8020129
Gauze Pads Tyco 5750
Bandage Johnson & Johnson 5005989
Surshield Terumo SV*S19BL Safety winged infusion set
Blood Collection Assembly BD 303380
Tourniquets BD 367203
Brand Luer Adapter Vacutainer L42179
Intra-Spin System  Intra-Lock International ISS110 Centrifuge and Xpression L-PRF FabricationKit 
Pipettes (Serological & Micro) Corning
Scalpel Exelint 29552
MTS Bionix 200 MTS Systems Corporation Material testing systems
MTS Test Works 4 MTS Systems Corporation
Whatman Filter Paper Whatman 1004 070
SS Orthodontic ligature wire Patterson Dental 628-4228
200 Proof Ethanol Koptec V1001
Hexamethyldisilazane (HMDS) Aldrich 440191
Aluminium Mounting Stubs Ted Pella 16324
Double Sided Carbon Tape PELCO Tabs 16084-1
Scanning Electron Microscope JEOL LV 5610
Trypsin HyClone SH30042.01
Cell Culture Incubator Thermo Fisher Scientific Inc 51026282
Antibiotic-Antimicotic Gibco 15240-062
Genipin Wako 078-03021
Cell Culture Media Gibco 12000-022 Minimum Essential Medium-Alpha
MTS Reagent Promega G1118
PMS Reagent Sigma P9625
Spectrophotometer BioTek Epoch Spectrophotometer
10mm Glass Cloning Rings Corning 3166-10
T-75 Flask Corning 430641
DPBS Corning 55-031-PB
Ninhydrin 98% Aldrich 454044
24 Well Plate Corning 3987
Biopsy Punch Acu Punch P1025
Digital Micrometer Pittsburgh 68305
Glutaraldehyde Sigma G6257
12 Well Plate Corning 3336
96 Well Plate Corning 3596

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Marx, R. E., et al. Platelet-rich plasma Growth factor enhancement for bone grafts. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 85, (6), 638-646 (1998).
  2. Rodriguez, I. A., Growney Kalaf, E. A., Bowlin, G. L., Sell, S. A. Platelet-rich plasma in bone regeneration: Engineering the delivery for improved clinical efficacy. BioMed Res In. 2014, (2014).
  3. Del Corso, M., et al. Current Knowledge and Perspectives for the Use of Platelet-Rich Plasma (PRP) and Platelet-Rich Fibrin (PRF). in Oral and Maxillofacial Surgery Part 1: Periodontal and Dentoalveolar Surgery. Curr Pharm Biotechno. 13, (7), 1207-1230 (2012).
  4. Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. Not every PRP-gel is born equal Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure. Vox San. 97, (2), 110-118 (2009).
  5. Fernández-Barbero, J. E., et al. Flow cytometric and morphological characterization of platelet-rich plasma gel. Clin Oral Implants Re. 17, (6), 687-693 (2006).
  6. Li, Z., Guan, J. Hydrogels for cardiac tissue engineering. Polymer. 3, (2), 740-761 (2011).
  7. Zhu, J., Cai, B., Ma, Q., Chen, F., Wu, W. Cell bricks-enriched platelet-rich plasma gel for injectable cartilage engineering – an in vivo experiment in nude mice. J Tissue Eng Regen Med. 7, (10), 819-830 (2013).
  8. Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part I: technological concepts and evolution. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), e37-e44 (2006).
  9. Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part II: platelet-related biologic features. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), e45-e50 (2006).
  10. Choukroun, J., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part V: histologic evaluations of PRF effects on bone allograft maturation in sinus lift. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), 299-303 (2006).
  11. Dohan Ehrenfest, D. M., Bielecki, T., et al. Do the Fibrin Architecture and Leukocyte Content Influence the Growth Factor Release of Platelet Concentrates? An Evidence-based Answer Comparing a Pure Platelet-Rich Plasma (P-PRP) Gel and a Leukocyte- and Platelet-Rich Fibrin (L-PRF). Curr Pharma Biotechno. 13, (7), 1145-1152 (2012).
  12. Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF). Trends Biotechno. 27, (3), 158-167 (2009).
  13. Mine, Y., et al. Suture Retention Strength of Expanded Polytetrafluoroethylene (ePTFE) Graft. Acta Med Okayam. 64, (2), 121-128 (2010).
  14. Braet, F., De Zanger, R., Wisse, E. Drying cells for SEM , AFM and TEM by hexamethyldisilazane: a study on hepatic endothelial cells. J Micros. 186, (1), 84-87 (1997).
  15. Yuan, Y., et al. The effect of cross-linking of chitosan microspheres with genipin on protein release. Carbohydr Poly. 68, (3), 561-567 (2007).
  16. Sell, S. A., et al. Cross-linking methods of electrospun fibrinogen scaffolds for tissue engineering applications. Biomed Mater. 3, (4), (2008).
  17. Gorczyca, G., et al. Preparation and characterization of genipin cross-linked porous chitosan-collagen-gelatin scaffolds using chitosan-CO2 solution. Carbohydr Poly. 102, 901-911 (2014).
  18. Rozman, P., Semenic, D. Chapter 15. The Role of Platelet Gel in Regenerative Medicine. Advances In Regenerative Medicine. Wislet-Gendebien, S. abine In Tech. 319-349 (2011).
  19. Dohan Ehrenfest,, Lemo, D. M., Jimbo, N. Selecting a relevant animal model for testing the in vivo effects of Choukroun’s platelet-rich fibrin (PRF): Rabbit tricks and traps. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 110, (4), 413-416 (2010).
  20. Guilak, F., Baaijens, F. P. Functional tissue engineering: Ten more years of progress. J Biomec. 47, (9), 1931-1932 (2014).
  21. Guilak, F., Butler, D. L., Goldstein, S. A., Baaijens, F. P. Biomechanics and mechanobiology in functional tissue engineering. J Biomec. 47, (9), 1933-1940 (2014).
  22. Collet, J. P., Shuman, H., Ledger, R. E., Lee, S. The elasticity of an individual fibrin fiber in a clot. Proc Natl Acad Sci. 102, (26), 9133-9137 (2005).
  23. Liu, W., et al. Fibrin fibers have extraordinary extensibility and elasticity. Science. 313, (5787), 634 (2006).
  24. American National Standard. Chapter 8: Test methods for vascular prostheses. Association for the Advancement of Medica lnstrumentation Guidance document: Cardiovascular Implants - Tubular vascular prostheses. ANSI/AAMI/ISO. 33-34 (2001).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics