Karakterisering av Leukocytt-plate Rich fibrin, A Novel Biomateriale

Bioengineering

Your institution must subscribe to JoVE's Bioengineering section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Madurantakam, P., Yoganarasimha, S., Hasan, F. K. Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial. J. Vis. Exp. (103), e53221, doi:10.3791/53221 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Protocol

Alle blod-tegne prosedyrer bør gjøres av lisensierte og sertifiserte fagfolk. Bruk av mennesker for forskning innebærer godkjennelse fra Institutional Review Board eller annen egnet myndighet. Særlige forholdsregler informert samtykke og beskytter deltaker identifikasjon må følges. Alle forsøkene nevnt i denne protokollen innebærer håndtering av humant blod og / eller blodprodukter og egnet personlig verneutstyr må brukes til enhver tid. Avfallet skal betraktes som smittefarlig og kastes i henhold til regelverket.

1. venepunksjon

  1. Identifisere pasienten / deltaker og bekreft med eksisterende poster. Forklar studien i detalj og få et informert samtykke.
  2. Ha en skuff satt opp for enkelte pasient med rør som er merket på en flat stabil overflate.
  3. Forklare prosedyren og gjøre pasienten sete komfortabelt med armen støttes. Informere pasienten om at han eller she vil føle en liten klype og bør forbli stille under hele prosedyren.
  4. Fest nålen til adapteren.
  5. Vask hender og bruke hansker.
  6. Forbered antecubital fossa for venepunksjon ved å rense med 70% isopropanol i konsentriske sirkler fra midten og utover. Gjør at webområdet lufttørke i 30 sek.
  7. Identifisere den aktuelle venen ved palpasjon.
  8. Påfør tourniquet 3-4 i over stikkstedet og pass på at det ikke er for stramt (mens du fremdeles følelsen radial puls).
  9. Utfør venepunksjon ved å sette skråkant av nålen 15-30 grader på huden i en jevn bevegelse. Skyv blodoppsamlingsrøret gjennom nålen og samle 9 ml fullblod.
  10. Fjern tourniquet. Fjern røret fra nålen.
  11. Trekk nålen og bruke gasbind torget på stikkstedet før nålen fjernes. Kast nålen på en hensiktsmessig biohazard container.
  12. Spør pasienten å opprettholde prEssure på stikkstedet.
  13. Merke rørene
  14. Sjekk stikkstedet for å være sikker på at blødningen har stoppet.
  15. Påfør plaster eller tape over gasbind torget, spør om pasienten føler seg ok (ingen smerte, hevelse eller ørhet)
  16. Takk pasient / deltaker før tømming.

2. L-PRF Forberedelse

  1. Umiddelbart etter venøs blodprøvetaking i den rød-toppet tørr glassrør, plasser den i sentrifugen.
  2. Sentrifuger ved 400 xg i 12 min ved RT etter å plassere en passende motvekt.
  3. Fjerne røret ved slutten av syklusen. Legg merke til tre lag: blodplatefattig plasma (PPP), platerikt fibrin (L-PRF) og RBC base (figur 1).
  4. Aspirer PPP ved hjelp av en pipette. Bruke pinsett å dra forsiktig i L-PRF ut og plassere den i et sterilt, perforert metall mesh.
  5. Ved hjelp av kirurgisk skalpell, skrape mesteparten av RBC lag nøye forlater buffy pelsen intakt.
  6. Forsiktig komprimere L-PRF koagel (ved hjelp av sterile metallplaten, vekt på ca. 225 g) i 30 sek. Blodplatefattig plasma vil bli presset ut.
  7. Ta av platen og løft forsiktig L-PRF membran. Den L-PRF membranen er klar til bruk i forsøkene 12.

3. Enakset Strekk Testing

  1. Plasser L-PRF membraner (n = 6) på et filter papir for enkel håndtering og slå inn "hunden bein" ved hjelp av skreddersydde metall dør (2,75 mm bred på sitt smaleste punkt med en målelengde på 7,5 mm).
  2. Måle tykkelsen av hver prøve ved tre flekker og ta gjennomsnittet.
  3. Engasjere nøye L-PRF membran i midten av kjeve fatt i uniaxial testing system.
  4. Rive Filer papirstøtten forsiktig for å eksponere L-PRF membran.
  5. Program instrumentet slik at den bevegelige hode er i drift ved en konstant hastighet (10,0 mm / min) og starte forsøket når L-PRF er fortsatt vått.
  6. Spill elastisk modulus, energi å bryte, og belastningen ved pause fra programvaren som følger med uniaxial testing system. Disse verdiene blir automatisk beregnet, og ingen brukerdefinert inngang er nødvendig. Vennligst se figur 3.

4. Sutur Retention Strength

  1. Plasser L-PRF membraner (n = 3) på et filterpapir for å lette håndtering og skåret i rektangulære prøvene som måler (10 mm x 25 mm) ved anvendelse av en kirurgisk skalpell.
  2. Måle tykkelsen av hver prøve (gjennomsnitt av 3).
  3. Foreta en pinhole i midten av prøven ved bruk av rustfritt stål ortodontiske ligatur tråd (220 mikrometer i diameter).
  4. Bestå ligatur tråd gjennom hullet for å danne en sløyfe, og feste den til strekkprøvemaskin. Plasser kanten av den L-PRF membranen til den nedre kjeve 13 grep.
  5. Programmere instrumentet slik at den bevegelige hode er i drift ved en konstant hastighet (10 mm / min), og startforsøket.
  6. Spill elastisk modulus, energi å bryte, og belastningen ved pause fra programvaren som følger med uniaxial testing system. Disse verdiene blir automatisk beregnet, og ingen brukerdefinert inngang er nødvendig. Vennligst se figur 3.

5. morfologisk undersøkelse

  1. Forbered L-PRF prøver for SEM undersøkelse ved hjelp av en 10 mm dermal biopsipunch og plassere dem i en 24-brønns plate.
  2. Vask prøvene med PBS og fest med 2,5% glutaraldehyd (i PBS) i 20 min.
  3. Dehydrere prøvene ved neddykking i sekvensielt økende konsentrasjoner av etanol (50%, 70%, 80%, 90% og 100%) i 5 min hver.
  4. Behandl med 0,5 ml 100% HMDS (heksametyldisilazan) i 5 min. Luft O / N for å fjerne overflødig HMDS 14.
  5. Mount prøver på stubber med en dobbeltsidig tape, frese-coat platina for 70 sek og undersøke i en scanning elektronmikroskop opererer på en Accelbeid spenning på 20 kV (eller riktig innstilling).

6. Genipin Fornetting av L-PRF, Trypsin Følsomhet og Ninhydrin analysen

  1. For å fremstille genipin tverrbundet L-PRF, skyll membraner med PBS og suge i 4 ml 1% genipin oppløsning (i 70% etanol) i 48 timer. Skyll med PBS før eksperimenter for å fjerne overskudd av genipin 15, 16.
  2. Vurdere stabiliteten av genipin tverrbinding av L-PRF ved sin motstand mot nedbrytning av trypsin. Place L-PRF membran (n = 3) og genipin tverrbundne L-PRF i 500 ul av 0,01% trypsin og inkubert ved 37 ° C i 3 dager med en daglig endring av trypsin.
    1. Vei prøver på dag 1 før enzym eksponering og på dag 3. Forskjellen i starten og slutten vekt representerer enzymatisk nedbrytning 17.
  3. Kvantifisere mengden av tverrbindingen in genipin behandlet L-PRF (G-PRF) ved ninhydrin-analyse. Først forberede standard curve ved hjelp av glycin (1 mM-0,031 mM) kurve for å etablere forholdet mellom fri aminosyre-konsentrasjon (FAA) og absorbans.
    1. Varme PRF prøver med 1 ml 2% (w / v) ninhydrin i 15 minutter ved 100 ° C.
    2. Tillat løsningen å avkjøles til romtemperatur og tilsett 1,5 ml 50% etanol.
    3. Analyser absorbansen ved 570 nm ved anvendelse av en egnet spektrofotometer.
    4. Bestem kryssbinding prosent hjelp av formelen under 15

Ligning 1

7. MTS celleproliferasjonsmetoden

  1. Grow MC3T3 (mus calvarial preosteoblasts) i Minimum Essential Medium -alfa modifikasjon (aMEM) i T-75 kolber til en 80% sammenflytende enkeltlag oppnås.
  2. Forbered friskt, sterilt L-PRF membran (åpne L-PRF rør inne i hetten cellekultur), og overfører til membranen på en ny cellekulturskål.
  3. Aspirer media fra kolben og skyll monolaget med PBS, tilsett 5 ml 0,05% trypsin og plassere kolben i 37 ° C inkubator i 5 min, pipette innholdet i kolben til et sentrifugerør og sentrifuger ved 400 xg i 5 min.
  4. Dekanter supernatanten, banke forsiktig på røret for å bryte cellepelleten og re-suspen med 4 ml friskt α MEM, dispensere en blanding av cellesuspensjon (50 pl) og trypanblått (50 ul) i hemocytometer, og telle antall celler
  5. Seed 4x10 5 celler i løpet av 10 mm glass kloningsringer plassert på toppen av L-PRF membraner for å holde celler i membraner (ringene kan fjernes etter 24 timer).
  6. På dag 4, skyll konstruksjoner med PBS tre ganger i 10 min.
  7. Tilsett 1 ml av serumfritt medium og 200 ul MTS-reagens til hver brønn og inkuberes i to timer ved 37 ° C.
  8. Måle absorbans fra 200 ul porsjoner på 490 nm.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Scanning elektronmikroskop bilde av den L-PRF koagulere ved forskjellige seksjoner (øverste, midterste og nederste) lag er illustrert i figur 2. Som det fremgår er den øvre delen består hovedsakelig av fibrin-nettverket uten celler. Det midterste laget er beriket med blodplater med bevis på deres aktivisering og degranulation. Det nedre laget har en blanding av leukocytter og røde blodceller innesluttet i en fibrin-matrise.

De mekaniske egenskaper ble evaluert i to modi: enaksede strekkprøving og sutur retensjon styrketest. Resultatene viser viskoelastisk oppførsel av L-PRF. Selv om elastisitetsmodul er lav (0,47 MPa), er membranen tøff (energi for å bryte, 5 nm mm) og er i stand til å undergå betydelig deformasjon (217%, figur 3). Data fra sutur retensjon testing, en indikator på evnen av membranen som skal sys til vev, foreslo en betydelig tøffnd deformerbare materiale (modulus-0,2 MPa, strekk 140% og energi for å bryte-3.2 N.mm) i L-PRF (figur 4).

En av begrensningene av fibrin produkter i regenerativ medisin er dens korte biologisk liv. Laget fra endogent fibrin, er L-PRF utsatt for enzymet degradering og gjennomgår fibrinolyse. For å bedømme motstanden av L-PRF til enzym-mediert degradering, ble frisk L-PRF kastet trypsin-behandling (0,01%) og inkubert ved 37 o C Vi observerte fullstendige nedbrytning av L-PRF i løpet av tre dager. Genipin kryssbinding av L-PRF membraner redusert nedbrytning med nesten 60% (figur 5).

Evnen til L-PRF membraner for å støtte cellevekst ble evaluert ved å dyrke mus calvarial osteoblaster på tverrbundne og ikke-tverrbundne membraner. Tverrbundne propper gikk degradering til forskjellige nivåer mens genipin fornettes membraner beholdt sin struktur og støttet cell vekst (figur 6).

Figur 1
Figur 1. Trinn i genereringen av L-PRF. (A) Etter sentrifugering av helblod i et glassrør, blir tre lag være synlig. (B) Etter dekantering av PPP, blir den L-PRF blir fjernet ved hjelp av en steril pinsett . (C) Det røde blodlegeme basen blir skrapet av ved hjelp av en skalpell og lagt på en perforert metallbrett (D). Etter forsiktig kompresjon, er PPP presset ut og en fast L-PRF membran dannes. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 2
SEM-bilde av forskjellige lag av frisk L-PRF (A) representerer den fibrin-rike lag,. (B) er en sone av anrikede blodplater med forskjellig grad av aktivering, (C) er buffy coat leukocytter med en rekke og (D) er de røde blodcellene basen. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 3
Figur 3. stress-belastningskurver etter mekanisk belastning av L-PRF i enaksede strekkprøvemodus (A) og søm retensjon styrke (B). Laste mønster av hver prøve er representert i forskjellig farge. Den enaksede strekktestdata (A) indikerer en lav modul, en stor elastisk deformasjon og en rask svikt. Ved utspiling av en sutur (B), L-PRF representerer en membran som er vanskelig (areal under kurven), så vel som distensible. God gruppering av data antyder minimal variasjon mellom prøvene. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 4
Figur 4. Fotografier av selve svikt i Sutur retensjon styrketesting. Et 220 nm tykt rustfritt stål ortodontisk ligatur tråd ble ført gjennom midten av L-PRF og knyttet til den øvre kjeve medlem av strekkprøvemaskin. Den andre ende ble festet til den nedre grep og strukket ved en konstant hastighet. Legg merke til forlengelse av membranen og dens motstand mot å briste, noe som tyder på utmerket elastisitet av L-PRF.om / filer / ftp_upload / 53221 / 53221fig4large.jpg "target =" _ blank "> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 5
Figur 5. Nedbrytning av L-PRF membraner etter inkubasjon i 0,01% trypsin. Alle L-PRF membraner smuldret helt i trypsin innen 3 dager mens genipin-kryssbundet L-PRF var 60% mer stabil. Dette viser at kjemisk kryssbinding kan være en levedyktig strategi for å forbedre levetiden på L-PRF membraner når den plasseres in vivo.

Figur 6
Figur 6. Effekt av L-PRF tverrbinding på cellenes levedyktighet. Representative bilder av 4 dagers kultur av MC3T3 cellene på ikke-tverrbundne L-PRF (A), genipin-tverrbundet L-PRF (B) ennd vevskultur plast (C). Ikke-kryssbundet L-PRF nedbrutt i kultur i varierende grad og viste celle-aktivitet tilsvarende plast. Genipin tverrbundede L-PRF opprettholdt sin struktur og støttet robust celle overlevelse. Til høyre er tallfestede data (+ SD) fra uavhengige eksperimenter med tre gjentak. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Autolog blodplatekonsentratene er lovende innen regenerativ medisin 18 på grunn av overflod av vekstfaktorer. Men disse preparatene manglet ofte en definert struktur som gjør kirurgisk manipulasjon svært vanskelig. Mange ganger, er suspensjoner og geleer beholdes ikke effektivt på stedet av levering, som resulterer i uforutsigbare resultater. L-PRF representerer et stort fremskritt i utviklingen av blodplatekonsentrater i at det er i det vesentlige en fast fibrin membran med oppfangede blodplater. Disse solide membraner har gode kjøreegenskaper, og kan sikkert sys på en anatomisk ønsket sted under åpen kirurgi. Men dens fysiske og biologiske egenskaper er relativt ukjent.

L-PRF vil danne konsekvent når trinnene som er beskrevet ovenfor er strengt overholdt (figur 1). En av de viktige hensyn i generere en god L-PRF membran er timeg forsinkelse mellom blodprøvetaking og sentrifugering. Suksessen med L-PRF teknikk er helt avhengig av hastigheten på blodprøvetaking og umiddelbar overføring til sentrifugen 19, vanligvis i løpet av et minutt. Det er umulig å skape et godt strukturert L-PRF blodpropp (med sin spesielle profil celleinnhold, matrix arkitektur og vekstfaktor release), hvis blod høsting er forlenget og ikke homogen; en liten usammenhengende, sprøtt masse av fibrin med ukjent innhold er dannet i stedet.

Det har blitt akseptert at mechanobiological interaksjoner mellom celler og ekstracellulære matrix (ECM) ha en kritisk innflytelse i alle aspekter av celle atferd inkludert migrasjon, spredning og differensiering 20,21. L-PRF, en unik type av blodpropp, dannes under bestemte omstendigheter, og består av komplekse, forgrenet nettverk av fibrin. L-PRF fungerer som en provisorisk ECM som er slått over til funksjonell vev under helbredelsen. Å bli utsatt for mechanical krefter, vellykket healing utfall er avhengige av den strukturelle integriteten til L-PRF og dermed belyse deres fysiske egenskaper er viktig. Vi utførte uniaxial strekkprøving (for å identifisere de reelle materialegenskaper) og sutur oppbevaring testing (for å identifisere feil egenskaper) på fersk L-PRF. I motsetning til PRP gel eller levret blod som ikke har en definert strukturer, ligner L-PRF tett bindevev med overlegne kjøreegenskaper. Vi rapporterer en elastisitetsmodul på 0,470 MPa (SD = 0,107) for L-PRF membraner og strekke to ganger dens opprinnelige lengde før svikt (stamme av 215%). Disse data kamp med publisert litteratur 22,23 som rapporterte lav stivhet (1-10 MPa) og høy belastning (opp til 150%) før bryte. Forskjellen i de verdier som kan være på grunn av bruken av fibrin-nettverket i forhold til bruk av AFM analyse av fibrin enkelt fiber i de ovennevnte studier.

Sutur oppbevaring styrke er et kirurgiskviktig parameter av pode-materialer, og den er definert som den kraft som er nødvendig for å trekke en sutur fra transplantatet eller føre til at veggen av transplantatet for å svikte. Våre eksperimenter brukte rett tvers prosedyre (som definert av ANSI 24). Kraften som kreves for å trekke ligaturen ledning gjennom L-PRF av 3,23 N.mm (SD = 0,329). Total, vi fant den L-PRF å være mekanisk tøff, tåler belastninger og evnen til å strekke dobbelt så mye på spenning og beholder sting ganske godt (deformeres betydelig før rive).

Mangelen på stabilitet og strukturell integritet av L-PRF i biologiske miljøer er en stor begrensning i bruk i tissue engineering. Vi søkte å løse dette problemet ved kjemisk kryssbinding L-PRF hjelp genipin. I motsetning til glutaraldehyd som er forbundet med toksisitet, er genipin en naturlig forekommende biologisk nedbrytbar molekyl med lav cytotoksisitet. Etter genipin behandling, membraner var vesentlig stabile i trypsin og supported celleproliferasjon i løpet av 4 dager. Det ble imidlertid bare 20% av L-PRF tverrbundet med genipin (bestemt ved ninhydrin-analyse). Disse dataene antyder at mens kjemisk kryssbinding er en levedyktig strategi, må andre alternativer for å bli utforsket.

Basert på disse funnene, er det klart at L-PRF er en ny biomateriale med unike egenskaper: forutsigbar preparat fra autologt blod, enkelhet i protokollen, er definert arkitektur, imponerende mekaniske egenskaper og overflod av vekstfaktorer fra aktiverte blodplater. Blodet fikk levre seg under fysiologiske betingelser med ingen eksponering mot anti-koagulanter, eksogent trombin og kalsiumklorid. Alle disse egenskapene gjør L-PRF lovende biomateriale for applikasjoner i regenerativ medisin.

En av de kliniske problemer å håndtere ved anvendelsen av L-PRF er heterogeniteten i kvaliteten av blodplater og blodkomponenter. I dag er svært lite forstått omL-PRF generert fra pasienter med koagulasjonsforstyrrelser eller pasienter på medisiner som påvirker blodlevring (heparin, warfarin eller platehemmere). Svarene på disse spørsmålene vil utvilsomt forbedre vår forståelse av healing samt bidra til å fremme innen personlig medisin.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ingenting å avsløre, og bekrefter at det er ingen kjente interessekonflikter knyttet til denne publikasjonen.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Needle 19G BD 305186
Needle Disposal Container Fisherbrand 14-827-122
Red-Topped Glass Collection Tube BD 8020129
Gauze Pads Tyco 5750
Bandage Johnson & Johnson 5005989
Surshield Terumo SV*S19BL Safety winged infusion set
Blood Collection Assembly BD 303380
Tourniquets BD 367203
Brand Luer Adapter Vacutainer L42179
Intra-Spin System  Intra-Lock International ISS110 Centrifuge and Xpression L-PRF FabricationKit 
Pipettes (Serological & Micro) Corning
Scalpel Exelint 29552
MTS Bionix 200 MTS Systems Corporation Material testing systems
MTS Test Works 4 MTS Systems Corporation
Whatman Filter Paper Whatman 1004 070
SS Orthodontic ligature wire Patterson Dental 628-4228
200 Proof Ethanol Koptec V1001
Hexamethyldisilazane (HMDS) Aldrich 440191
Aluminium Mounting Stubs Ted Pella 16324
Double Sided Carbon Tape PELCO Tabs 16084-1
Scanning Electron Microscope JEOL LV 5610
Trypsin HyClone SH30042.01
Cell Culture Incubator Thermo Fisher Scientific Inc 51026282
Antibiotic-Antimicotic Gibco 15240-062
Genipin Wako 078-03021
Cell Culture Media Gibco 12000-022 Minimum Essential Medium-Alpha
MTS Reagent Promega G1118
PMS Reagent Sigma P9625
Spectrophotometer BioTek Epoch Spectrophotometer
10mm Glass Cloning Rings Corning 3166-10
T-75 Flask Corning 430641
DPBS Corning 55-031-PB
Ninhydrin 98% Aldrich 454044
24 Well Plate Corning 3987
Biopsy Punch Acu Punch P1025
Digital Micrometer Pittsburgh 68305
Glutaraldehyde Sigma G6257
12 Well Plate Corning 3336
96 Well Plate Corning 3596

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Marx, R. E., et al. Platelet-rich plasma Growth factor enhancement for bone grafts. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 85, (6), 638-646 (1998).
  2. Rodriguez, I. A., Growney Kalaf, E. A., Bowlin, G. L., Sell, S. A. Platelet-rich plasma in bone regeneration: Engineering the delivery for improved clinical efficacy. BioMed Res In. 2014, (2014).
  3. Del Corso, M., et al. Current Knowledge and Perspectives for the Use of Platelet-Rich Plasma (PRP) and Platelet-Rich Fibrin (PRF). in Oral and Maxillofacial Surgery Part 1: Periodontal and Dentoalveolar Surgery. Curr Pharm Biotechno. 13, (7), 1207-1230 (2012).
  4. Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. Not every PRP-gel is born equal Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure. Vox San. 97, (2), 110-118 (2009).
  5. Fernández-Barbero, J. E., et al. Flow cytometric and morphological characterization of platelet-rich plasma gel. Clin Oral Implants Re. 17, (6), 687-693 (2006).
  6. Li, Z., Guan, J. Hydrogels for cardiac tissue engineering. Polymer. 3, (2), 740-761 (2011).
  7. Zhu, J., Cai, B., Ma, Q., Chen, F., Wu, W. Cell bricks-enriched platelet-rich plasma gel for injectable cartilage engineering – an in vivo experiment in nude mice. J Tissue Eng Regen Med. 7, (10), 819-830 (2013).
  8. Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part I: technological concepts and evolution. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), e37-e44 (2006).
  9. Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part II: platelet-related biologic features. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), e45-e50 (2006).
  10. Choukroun, J., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part V: histologic evaluations of PRF effects on bone allograft maturation in sinus lift. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), 299-303 (2006).
  11. Dohan Ehrenfest, D. M., Bielecki, T., et al. Do the Fibrin Architecture and Leukocyte Content Influence the Growth Factor Release of Platelet Concentrates? An Evidence-based Answer Comparing a Pure Platelet-Rich Plasma (P-PRP) Gel and a Leukocyte- and Platelet-Rich Fibrin (L-PRF). Curr Pharma Biotechno. 13, (7), 1145-1152 (2012).
  12. Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF). Trends Biotechno. 27, (3), 158-167 (2009).
  13. Mine, Y., et al. Suture Retention Strength of Expanded Polytetrafluoroethylene (ePTFE) Graft. Acta Med Okayam. 64, (2), 121-128 (2010).
  14. Braet, F., De Zanger, R., Wisse, E. Drying cells for SEM , AFM and TEM by hexamethyldisilazane: a study on hepatic endothelial cells. J Micros. 186, (1), 84-87 (1997).
  15. Yuan, Y., et al. The effect of cross-linking of chitosan microspheres with genipin on protein release. Carbohydr Poly. 68, (3), 561-567 (2007).
  16. Sell, S. A., et al. Cross-linking methods of electrospun fibrinogen scaffolds for tissue engineering applications. Biomed Mater. 3, (4), (2008).
  17. Gorczyca, G., et al. Preparation and characterization of genipin cross-linked porous chitosan-collagen-gelatin scaffolds using chitosan-CO2 solution. Carbohydr Poly. 102, 901-911 (2014).
  18. Rozman, P., Semenic, D. Chapter 15. The Role of Platelet Gel in Regenerative Medicine. Advances In Regenerative Medicine. Wislet-Gendebien, S. abine In Tech. 319-349 (2011).
  19. Dohan Ehrenfest,, Lemo, D. M., Jimbo, N. Selecting a relevant animal model for testing the in vivo effects of Choukroun’s platelet-rich fibrin (PRF): Rabbit tricks and traps. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 110, (4), 413-416 (2010).
  20. Guilak, F., Baaijens, F. P. Functional tissue engineering: Ten more years of progress. J Biomec. 47, (9), 1931-1932 (2014).
  21. Guilak, F., Butler, D. L., Goldstein, S. A., Baaijens, F. P. Biomechanics and mechanobiology in functional tissue engineering. J Biomec. 47, (9), 1933-1940 (2014).
  22. Collet, J. P., Shuman, H., Ledger, R. E., Lee, S. The elasticity of an individual fibrin fiber in a clot. Proc Natl Acad Sci. 102, (26), 9133-9137 (2005).
  23. Liu, W., et al. Fibrin fibers have extraordinary extensibility and elasticity. Science. 313, (5787), 634 (2006).
  24. American National Standard. Chapter 8: Test methods for vascular prostheses. Association for the Advancement of Medica lnstrumentation Guidance document: Cardiovascular Implants - Tubular vascular prostheses. ANSI/AAMI/ISO. 33-34 (2001).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics