Lökosit-trombosit Zengin Fibrin, Yeni Bir Biyomateryalinin Karakterizasyonu

1Department of General Practice, School of Dentistry, Virginia Commonwealth University, 2Department of Biomedical Engineering, Virginia Commonwealth University, 3Department of Periodontics, School of Dentistry, Virginia Commonwealth University
Bioengineering

Your institution must subscribe to JoVE's Bioengineering section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Madurantakam, P., Yoganarasimha, S., Hasan, F. K. Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial. J. Vis. Exp. (103), e53221, doi:10.3791/53221 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Protocol

Tüm kan-çizim prosedürleri lisanslı ve sertifikalı uzmanları tarafından yapılmalıdır. Araştırma için insan deneklerin Kullanımı Kurumsal Değerlendirme Kurulu veya diğer uygun otorite onayı gerektirir. Bilgilendirilmiş onam ile ilgili ve katılımcı kimlik koruyan özel tedbirler takip edilmesi gerekir. Bu protokolde yer alan tüm deneyler insan kanı ve / veya kan ürünleri ve uygun kişisel koruyucu ekipmanın kullanımı her zaman giyilen gerekir içerir. Atık biohazard olarak kabul ve yönetmeliklere uygun olarak bertaraf edilmelidir.

1. Damara Girme

  1. Hasta / katılımcıyı belirlemek ve mevcut kayıtları ile onaylayın. Detaylı çalışma açıklar ve bir bilgilendirilmiş onam olsun.
  2. Düz sabit bir yüzeye işaretli tüplere hasta için kurulmuş bir tepsi var.
  3. Prosedürü açıklar ve desteklenen kol ile rahatça hasta koltuğu yapmak. Hastayı o ya da sh bilgilendirine küçük bir tutam hissedecek ve prosedür boyunca hareketsiz kalmalıdır.
  4. Adaptöre iğne takın.
  5. Ellerinizi yıkayın ve eldiven giyin.
  6. Dışa merkezine konsantrik daireler% 70 izopropil alkol ile temizleyerek venipunktür için antekübital fossa hazırlayın. 30 saniye süreyle kurumaya siteyi bırakın.
  7. Palpasyonla uygun ven tanımlayın.
  8. (Hala radyal nabız duygu ise) çok sıkı olmadığından emin yapma delinme sitesinde Yukarıdaki turnike 3-4 uygulayın.
  9. Tek bir hareketle cilde iğne 15-30 derece eğimi sokarak Damara gerçekleştirin. Iğne ile kan toplama tüpü itin ve tam kan 9 ml toplamak.
  10. Turnikeyi çıkarın. Iğneden borusunu sökün.
  11. İğneyi geri çek ve iğne çıkarılması öncesinde ponksiyon yerinde gazlı bez kare uygulayın. Uygun bir biyolojik tehlikeli atık kabına iğne bertaraf edin.
  12. Pr korumak için hasta isteyinPonksiyon yerinde essure.
  13. Tüpler Etiket
  14. Kanama durduktan emin olmak için lastik sitesini kontrol edin.
  15. Hasta (ağrı yok, şişlik veya hafif sersemlik) iyi hissediyor olmadığını sormak, gazlı kare üzerinde yapışkan bandaj veya bandı uygulayın
  16. Taburcu öncesi hasta / katılımcıyı ederiz.

2. L-PRF hazırlanması

  1. Hemen kırmızı tepesinde kuru cam tüp içinde venöz kan alımından sonra, Santrifüj yerleştirin.
  2. Uygun bir sayaç dengesi yerleştirdikten sonra oda sıcaklığında 12 dakika boyunca 400 x g'de santrifüj.
  3. Döngü sonunda borusunu sökün. Platle açısından zayıf plazmanın (PPP), trombosit bakımından zengin bir fibrin (L-PRF) ve RBC bazı (Şekil 1): üç kat dikkat edin.
  4. Bir pipet kullanarak PPP aspire. Kullanımı cımbız hafifçe L-PRF çekin ve steril, delikli metal örgü yerleştirin.
  5. Cerrahi neşter kullanılarak, dikkatli bir devetüyü bırakarak RBC tabakasının toplu kazımaky kat sağlam.
  6. Yavaşça 30 sn (steril metal plaka, yaklaşık ağırlığı 225 gr kullanarak) L-PRF pıhtı sıkıştırmak. Trombosit fakir plazma dışarı sıkılmış olacak.
  7. Plaka çıkarın ve yavaşça L-PRF zarı kaldırın. L-PRF membran deneyler 12 kullanıma hazır hale gelir.

3. Tek Eksenli Çekme Testi

  1. Kullanım kolaylığı için bir filtre kağıdı üzerine yerleştirin L-PRF zarları (n = 6) ve (7,5 mm'lik bir ölçü uzunluğu ile dar noktası 2,75 mm) ölçüye metal kalıpların kullanılması "köpek kemiği" olarak punch.
  2. Üç noktalar her numunenin kalınlığını ölçün ve ortalamasını alır.
  3. Dikkatle tek eksenli test sisteminin çene kulpları merkezinde L-PRF zarı meşgul.
  4. Dikkatle L-PRF zarı maruz filer kağıt desteğini gözyaşı.
  5. Program enstrüman hareketli kafa sabit bir oranda (10.0 mm / dak) faaliyet böylece ve ne zaman L denemeyi başlatmakPRF hala ıslak.
  6. Tek eksenli test sistemi eşlik yazılım kopma, kırmak için enerji ve gerginlik elastik modülü kaydedin. Bu değerler otomatik olarak hesaplanır ve hiçbir kullanıcı tanımlı girdi gereklidir. Şekil 3 bakınız.

4. Dikiş Tutma Gücü

  1. Talep L-PRF kullanım kolaylığı için, bir filtre kağıdı üzerinde zarları (n = 3) ve cerrahi bir neşter kullanılarak ölçüm dikdörtgen örneği (10 mm x 25 mm) halinde kesilir.
  2. Her numune (3 ortalama) kalınlığı ölçülür.
  3. Paslanmaz çelik ortodontik ligatür tel (çapı 220 mm) kullanılarak numunenin merkezinde bir iğne deliğine yapın.
  4. Bir döngü oluşturmak ve çekme test makinesine bunu düzeltmek için iğne deliğinden ligature tel geçirin. Alt çene kavrama 13 L-PRF membran kenarını yerleştirin.
  5. Hareketli kafa sabit bir oranda (10 mm / dak) ve başlangıcında operasyon böylece aleti Programdeney.
  6. Tek eksenli test sistemi eşlik yazılım kopma, kırmak için enerji ve gerginlik elastik modülü kaydedin. Bu değerler otomatik olarak hesaplanır ve hiçbir kullanıcı tanımlı girdi gereklidir. Şekil 3 bakınız.

5. Morfolojik Sınavı

  1. 10 mm dermal biyopsi yumruk kullanarak SEM muayene için L-PRF örnekleri hazırlayın ve 24 plaka koyun.
  2. PBS ile yıkayın örnekleri ve 20 dakika boyunca (PBS içinde)% 2.5 glutaraldehid ile tespit edin.
  3. Ardışık olarak 5 dakika her biri için etanol konsantrasyonunun (% 50,% 70,% 80,% 90 ve% 100) artan içine daldırma ile örnekleri kurutmak.
  4. 5 dakika boyunca% 100 HMDS'nin (Heksametildisilazan) 0.5 ml tedavi edin. HMDS 14 fazla kaldırmak için O / N havalandırınız.
  5. Bir çift taraflı bant kullanarak koçanları Mount örnekleri, 70 saniye boyunca platin-ceket sputter ve Hızlanma çalışan bir taramalı elektron mikroskobu altında incelenmesieration 20 kV gerilim (veya uygun ayar).

L-PRF, tripsin Duyarlılıkları ve Ninhydrin Testi 6. Genipin Çapraz

  1. Genipin çapraz bağlanmış L-PRF hazırlanması için, PBS ile yıkayın ve membranlar 48 saat boyunca (% 70 etanol içinde)% 1 genipin çözeltisi 4 ml ile ıslatın. Aşırı genipin 15, 16 kaldırmak için deneylerden önce PBS ile durulayın.
  2. Tripsin tarafından degradasyona direnci ile L-PRF bölgesinin genipin çapraz bağlanma kararlılığını değerlendirmek. Talep L-PRF membran (n = 3) ve% 0.01 tripsin 500 ul çapraz bağlanmış L-PRF genipin ve tripsin günlük değişikliği ile 3 gün süre ile 37 ° C'de inkübe edildi.
    1. Başından pozlama ve 3. günde de fark enzim ve kilo enzimatik bozulmaya 17 temsil sonuna kadar günde 1 önce de örnekleri tartın.
  3. Tahlili ninhidrin ile genipin muamele edilmiş L-PRF (G-PRF) 'de çapraz bağlanma miktarını ölçmek. İlk standart bükecektir hazırlamake glisin kullanılarak (1 mM-0.031 mM) eğrisi serbest amino asit konsantrasyonu (FAA) ve absorbans arasındaki ilişkiyi kurmak.
    1. 2,% 1 ml ısı PRF örnekleri (a / h), 100 ° C 'de 15 dakika boyunca ninhidrin.
    2. Çözelti oda sıcaklığına soğumaya bırakın ve% 50 etanol içinde 1.5 ml ekleyin izin verin.
    3. Uygun bir spektrofotometre kullanılarak 570 nm'de absorbans analiz edin.
    4. 15 aşağıdaki formül kullanılarak çapraz bağlama yüzdesini belirlemek

Denklem 1

7. MTS Hücre Proliferasyon Deneyi

  1. % 80 birleşen tek tabakalı elde edilinceye kadar, T-75 şişelerinde Minimum Essential Medium alfa modifikasyonu (αMEM) 'de MC3T3 (fare kalvaryal preosteoblasts) büyütün.
  2. Taze, steril L-PRF membran (hücre kültürü kaput içinde L-PRF tüp açın) hazırlayın ve yeni bir hücre kültürü çanak üzerine membran aktarın.
  3. Aspire şişeye ortam ve PBS ile yıkayın tek tabaka 5 mi% 0.05 tripsin ilave et ve 5 dakika boyunca 37 o C inkübatör içine yerleştirilir, 5 için 400 x g'de bir santrifüj tüpüne ve santrifüj içine şişenin içeriğini pipet Min.
  4. Yavaşça, süpernatant boşaltacaktır hücre pelletini kırmak için tüp dokunun ve taze α MEM 4 ml ile yeniden askıya hemasitometre hücre süspansiyonu (50 ul) ve tripan mavisi (50 ul) oluşan bir karışım, dağıtır ve sayısını Hücreler
  5. Tohum zarlar içinde hücreleri korumak için, L-PRF membran üzerine yerleştirilen 10 mm cam klonlama halkalar içinde 4x10 5 hücreleri (halkaları 24 saat sonra çıkarılabilir).
  6. 4. günde, 10 dakika boyunca PBS ile üç kez yapıları yıkayın.
  7. Her bir oyuğa, serumsuz ortam ve 200 ul MTS reaktifi 1 ml ilave edilir ve 37 ° C 'de 2 saat süre ile inkübe edilir.
  8. 490 nm'de 200 ul alikotları absorbansı ölçülür.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

(Üst, orta ve alt) tabakası Şekil 2'de gösterilmiş olup, farklı bölümler L-PRF pıhtı tarama elektron mikroskop görüntüsü. Tabloda görüldüğü üzere, üst kısım içerisinde hücre bulunmayan ağırlıklı olarak fibrin ağı oluşmaktadır. Orta tabaka, aktivasyonu ve degranülasyonunun kanıtı olan trombosit ile zenginleştirilmiştir. Alt tabaka, lökositler ve bir fibrin matrisi içinde sıkışan kırmızı kan hücrelerinin bir karışımı yer alır.

Tek eksenli çekme testi ve dikiş tutma gücü testi: mekanik özellikler iki modda değerlendirildi. Sonuçlar L-PRF viskoelastik davranış gösterilmektedir. Elastik modülü (0,47 MPa) düşük olsa da, membran sert (5 N · mm kırmak için enerji) ve önemli deformasyon (% 217, Şekil 3) maruz kalabilir. Dikiş tutma testleri elde edilen veriler, membran yeteneği bir göstergesi dokulara dikilir edilecek önemli ölçüde zor a önerdind deforme olabilen malzeme (modül-0,2 Mpa, gerilme-% 140 ve enerji kırılma 3.2 N.mm) L-PRF içinde (Şekil 4).

Rejeneratif tıp fibrin ürünlerinin sınırlamaları biri de kısa biyolojik hayattır. Endojen fibrin yapılmış, L-PRF bozunmasını enzim ye karşı duyarlıdır ve fibrinolizi maruz kalır. L-PRF direncini değerlendirmek üzere bozunmaya aracılı enzime taze L-PRF 37 o C'de tripsin tedavisi (% 0.01) tabi tutulur ve inkübe edildi Biz üç gün içinde L-PRF tam bozulması görülmektedir. L-PRF membran Genipin çapraz bağlama yaklaşık 60% (Şekil 5) tarafından bozulmasını azalmıştır.

Hücre büyümesini desteklemek için L-PRF membran yeteneği çapraz bağlanmış ve çapraz bağlanmamış membranlarda fare kalvaryal osteoblast kültürlenmesi suretiyle değerlendirildi. Genipin çapraz bağlı zarlar yapılarını muhafaza ve c desteklerken çapraz bağlanmamış pıhtıları çeşitli düzeylerde bozulmasına yapıldıell büyümesi (Şekil 6).

figür 1
L-PRF üretimi Şekil 1. Adım. (A) bir cam tüp içinde tam kan santrifüje edilmesinden sonra, üç kat, görünür olacaktır. (B) PPP Süzülür, L-PRF steril cımbız kullanarak çıkartılırken . (C), kırmızı kan hücresi tabanı neşter kullanılarak kazınmıştır ve delikli metal tepsi (D) koydu ediliyor. Nazik sıkıştırıldıktan sonra, PPP sıkılarak ve sağlam bir L-PRF zar oluşur. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 2,
SEM taze L-PRF farklı katmanlarının görüntüsü (A) fibrin zengin tabakasını temsil 2.,. (B) aktivasyonu çeşitli derecede zenginleştirilmiş trombosit bir bölge olduğu; (C) sayısız lökositler ile buffy ceket ve (D), kırmızı kan hücresi temelidir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 3,
Şekil tek eksenli çekme test modunda (A) ve Sütür tutma kuvveti (B) L-PRF mekanik yüklenme aşağıdaki 3. Gerilme-deformasyon eğrileri. Her numune yükleme modeli farklı renkte gösterilir. Tek eksenli çekme test verileri (A), bir düşük modülüs göstermektedir, büyük, elastik deformasyon ve hızlı bir başarısızlık. Bir ameliyat dikiş ipliği (B) gerilmesine üzerine, L-PRF zor olan membran (eğri altındaki alan) ve gerilebilir temsil eder. Verilerin İyi kümelenme örnekleri arasındaki minimum varyasyon göstermektedir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 4,
Şekil dikiş tutma kuvveti test gerçek yetmezliği 4. fotoğrafları. Bir 220 um kalınlığında bir paslanmaz çelik ortodontik ligatür tel L-PRF ortasından geçirilir ve gerilme testi makinesinin üst çene elemanı bağlıydı. Diğer ucu alt kavrama bağlanmış ve bir sabit bir oranda gerilir. L-PRF mükemmel esneklik düşündüren, membran ve gözyaşı onun direnci uzama dikkat edin.om / files / ftp_upload / 53221 / 53221fig4large.jpg "target =" _ blank "> bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 5,
Genipin çapraz bağlı L-PRF 60% daha stabil iken% 0.01 tripsin, inkübasyonu takiben, L-PRF membran Şekil 5. bozulması. Tüm L-PRF membranlar 3 gün içinde tripsin tamamen parçalandı. Bu, in vivo yerleştirildiğinde, kimyasal çapraz bağlama L-PRF membran ömrünü artırmak için uygun bir strateji olabileceğini göstermektedir.

Şekil 6,
Hücre canlılığı ile ilgili L-PRF çapraz bağlanma Şekil 6. etkisi. Çapraz bağlanmamış L-PRF (A) ile ilgili MC3T3 hücreleri genipin-çapraz bağlanmış L-PRF (B) a 4 günlük kültür Örnek görüntülerind doku kültürü plastik (C). Çapraz-bağlanmamış, L-PRF değişken ölçüde kültür içinde parçalanır ve plastik benzeri hücre faaliyeti göstermiştir. Genipin çapraz L-PRF yapılarını muhafaza ve sağlam hücre sağkalım destekledi. Sağ, üç tekrarlı bağımsız deneyler sayısal verileri (+ SD) 'dir belirleyin. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Otolog trombosit konsantreleri nedeniyle büyüme faktörlerinin bolluğu rejeneratif tıp 18. alanındaki umut vericidir. Ancak, bu preparatlar genellikle cerrahi manipülasyon zor hale getiren bir tayin edilmiş bir yapıya sahip değildi. Birçok kez, süspansiyonlar ve jeller öngörülemeyen sonuçlara neden teslim yerinde etkin bir şekilde korunmaz. L-PRF trombosit evriminde büyük bir ilerleme aslında yakalanmış trombositler ile sağlam bir fibrin membran olmasıdır yoğunlaşmaktadır eder. Bu katı zarlar mükemmel kullanım özelliklerine sahip ve güvenli açık ameliyatlar sırasında anatomik istenen konumda sütüre edilebilir. Ancak, fiziksel ve biyolojik özellikleri, nispeten bilinmemektedir.

Yukarıda anlatılan basamaklar katı (Şekil 1) yapıştırılır olduğunda L-PRF sürekli olarak oluşturacaktır. İyi L-PRF zarı üreten önemli hususlar biri ti olanBana kan beraberlik ve santrifüj arasında gecikme. L-PRF tekniğinin başarısı, tamamen, genellikle bir dakika içinde, santrifüj 19 kan toplanması ve hemen sevk hızına bağlıdır. Kan toplama uzun ve homojen değilse, (kendine özgü hücre içeriğini, matriks mimarisi ve büyüme faktörü salınım profili ile) iyi yapılandırılmış L-PRF pıhtı oluşturmak olanaksızdır; bilinmeyen içeriği ile fibrin küçük tutarsız, gevrek kitle yerine oluşturulur.

Bu hücreler ve hücre dışı matriks (ECM) arasındaki etkileşimler mechanobiological göç, çoğalması ve farklılaşması 20,21 dahil olmak üzere hücre davranışının tüm yönleriyle kritik bir etkiye sahip olduğu kabul edilmiştir. L-PRF, kan pıhtısının benzersiz bir türü, belirli koşullar altında oluşturulur ve fibrin karmaşık dallanmış bir ağ oluşur. Iyileşme sırasında fonksiyonel dokuya ters çevrilir geçici ECM olarak L-PRF fonksiyonları. M tabi olmakechanical kuvvetler, başarılı şifa sonuçları L-PRF ve dolayısıyla onların fiziksel özelliklerini aydınlatılmasına yapısal bütünlüğü bağlıdır önemlidir. Biz tek eksenli çekme testi (içsel malzeme özelliklerini belirlemek için) ve taze L-PRF üzerinde dikiş tutma testi (arıza özelliklerini belirlemek için) uygulandı. PRP jel veya tanımlanmış bir yapıya sahip değildir pıhtılaşmış kanı aksine, L-PRF üstün kullanım özellikleri ile yoğun bağ dokusu andırıyor. Biz L-PRF membranlar için 0.470 Mpa (SD = 0.107), bir elastik modülü rapor ve başarısızlık (% 215 suşu) önce iki kez, ilk uzunluğu streç. Kırılmadan önce düşük sertlik (1-10 MPa) ve (% 150 kadar) yüksek zorlanma bildirdi yayınlanmış literatürde 22,23 ile Bu veriler maç. Değerlerindeki fark yukarıda belirtilen çalışmalarda bir fibrin elyaf AFM analizi kullanımı ile karşılaştırıldığında fibrin ağı kullanımı nedeniyle olabilir.

Dikiş tutma gücü ameliyatla olduğunuÖnemli greft materyallerinin parametre ve greft bir sütür çekin veya greft duvarı başarısız olmasına neden gerekli kuvvet olarak tanımlanır. Deneylerimiz düz boyunca prosedüre göre (ANSI 24 ile tanımlandığı gibi) kullanılabilir. Için gereken kuvvet 3.23 N.mm (SD = 0.329) L-PRF aracılığıyla ligature teli çekin. Genel olarak, L-PRF yükler ve gerginlik üzerine iki katı kadar streç yeteneği destekleyebilen, mekanik zor bulundu ve oldukça iyi dikişlerle korur (yırtılma önce önemli ölçüde deforme).

Istikrar ve biyolojik ortamlarda L-PRF yapısal bütünlüğünün olmaması doku mühendisliğinde kullanımı önemli bir kısıtlamadır. Biz kimyasal genipin kullanılarak L-PRF çapraz bağlanması ile bu sorunu gidermek için çalıştı. Toksisite ile ilişkili olan gluteraldehid farklı olarak, genipin düşük sitotoksisiteye sahip, doğal olarak oluşan biyolojik olarak parçalanabilir bir moleküldür. Genipin tedaviden sonra, zarlar, tripsin ve Suppo önemli ölçüde stabil4 gün boyunca hücre çoğalmasını rted. Bununla birlikte, L-PRF sadece% 20 genipin ile çapraz bağlanmış olan (ninhidrin testi ile belirlendi). Bu veriler, bir kimyasal çapraz bağlama uygun bir strateji iken, diğer alternatifler aranması gerekir göstermektedir.

Otolog kan tahmin edilebilir preparasyon, protokol basitlik tanımlandığı mimari etkileyici mekanik özellikler ve aktive olmuş trombositlerden büyüme faktörlerinin çokluğu Bu bulgulara dayalı olarak, L-PRF eşsiz özelliklere sahip yeni bir biyo materyal olduğu açıktır. Kan pıhtılaşma önleyici, eksojen trombin ve kalsiyum klorür maruz bırakılmadan fizyolojik koşullar altında pıhtılaşmaya bırakılır. Bu özelliklerin tümü L-PRF rejeneratif tıp uygulamaları için biyo materyal vaat olun.

L-PRF uygulaması ile başa çıkmak için klinik konulardan biri trombosit ve kan bileşenlerinin kalitesi heterojen olduğunu. Şu anda çok az ilgili anlaşılmaktadırL-PRF kan pıhtılaşması (heparin, warfarin veya trombosit inhibitörleri) etkileyen ilaçlar pıhtılaşma bozuklukları ya da hasta olan hastalardan üretti. Bu sorulara verilen yanıtlar kuşkusuz şifa anlayışımızı geliştirmek yanı sıra kişiselleştirilmiş tıp alanını ilerletmek için katkıda bulunacaktır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok ve bu yayın ile ilgili herhangi bir çıkar çatışması yoktur bilinen olduğunu onaylayın.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Needle 19G BD 305186
Needle Disposal Container Fisherbrand 14-827-122
Red-Topped Glass Collection Tube BD 8020129
Gauze Pads Tyco 5750
Bandage Johnson & Johnson 5005989
Surshield Terumo SV*S19BL Safety winged infusion set
Blood Collection Assembly BD 303380
Tourniquets BD 367203
Brand Luer Adapter Vacutainer L42179
Intra-Spin System  Intra-Lock International ISS110 Centrifuge and Xpression L-PRF FabricationKit 
Pipettes (Serological & Micro) Corning
Scalpel Exelint 29552
MTS Bionix 200 MTS Systems Corporation Material testing systems
MTS Test Works 4 MTS Systems Corporation
Whatman Filter Paper Whatman 1004 070
SS Orthodontic ligature wire Patterson Dental 628-4228
200 Proof Ethanol Koptec V1001
Hexamethyldisilazane (HMDS) Aldrich 440191
Aluminium Mounting Stubs Ted Pella 16324
Double Sided Carbon Tape PELCO Tabs 16084-1
Scanning Electron Microscope JEOL LV 5610
Trypsin HyClone SH30042.01
Cell Culture Incubator Thermo Fisher Scientific Inc 51026282
Antibiotic-Antimicotic Gibco 15240-062
Genipin Wako 078-03021
Cell Culture Media Gibco 12000-022 Minimum Essential Medium-Alpha
MTS Reagent Promega G1118
PMS Reagent Sigma P9625
Spectrophotometer BioTek Epoch Spectrophotometer
10mm Glass Cloning Rings Corning 3166-10
T-75 Flask Corning 430641
DPBS Corning 55-031-PB
Ninhydrin 98% Aldrich 454044
24 Well Plate Corning 3987
Biopsy Punch Acu Punch P1025
Digital Micrometer Pittsburgh 68305
Glutaraldehyde Sigma G6257
12 Well Plate Corning 3336
96 Well Plate Corning 3596

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Marx, R. E., et al. Platelet-rich plasma Growth factor enhancement for bone grafts. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 85, (6), 638-646 (1998).
  2. Rodriguez, I. A., Growney Kalaf, E. A., Bowlin, G. L., Sell, S. A. Platelet-rich plasma in bone regeneration: Engineering the delivery for improved clinical efficacy. BioMed Res In. 2014, (2014).
  3. Del Corso, M., et al. Current Knowledge and Perspectives for the Use of Platelet-Rich Plasma (PRP) and Platelet-Rich Fibrin (PRF). in Oral and Maxillofacial Surgery Part 1: Periodontal and Dentoalveolar Surgery. Curr Pharm Biotechno. 13, (7), 1207-1230 (2012).
  4. Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. Not every PRP-gel is born equal Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure. Vox San. 97, (2), 110-118 (2009).
  5. Fernández-Barbero, J. E., et al. Flow cytometric and morphological characterization of platelet-rich plasma gel. Clin Oral Implants Re. 17, (6), 687-693 (2006).
  6. Li, Z., Guan, J. Hydrogels for cardiac tissue engineering. Polymer. 3, (2), 740-761 (2011).
  7. Zhu, J., Cai, B., Ma, Q., Chen, F., Wu, W. Cell bricks-enriched platelet-rich plasma gel for injectable cartilage engineering – an in vivo experiment in nude mice. J Tissue Eng Regen Med. 7, (10), 819-830 (2013).
  8. Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part I: technological concepts and evolution. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), e37-e44 (2006).
  9. Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part II: platelet-related biologic features. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), e45-e50 (2006).
  10. Choukroun, J., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part V: histologic evaluations of PRF effects on bone allograft maturation in sinus lift. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), 299-303 (2006).
  11. Dohan Ehrenfest, D. M., Bielecki, T., et al. Do the Fibrin Architecture and Leukocyte Content Influence the Growth Factor Release of Platelet Concentrates? An Evidence-based Answer Comparing a Pure Platelet-Rich Plasma (P-PRP) Gel and a Leukocyte- and Platelet-Rich Fibrin (L-PRF). Curr Pharma Biotechno. 13, (7), 1145-1152 (2012).
  12. Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF). Trends Biotechno. 27, (3), 158-167 (2009).
  13. Mine, Y., et al. Suture Retention Strength of Expanded Polytetrafluoroethylene (ePTFE) Graft. Acta Med Okayam. 64, (2), 121-128 (2010).
  14. Braet, F., De Zanger, R., Wisse, E. Drying cells for SEM , AFM and TEM by hexamethyldisilazane: a study on hepatic endothelial cells. J Micros. 186, (1), 84-87 (1997).
  15. Yuan, Y., et al. The effect of cross-linking of chitosan microspheres with genipin on protein release. Carbohydr Poly. 68, (3), 561-567 (2007).
  16. Sell, S. A., et al. Cross-linking methods of electrospun fibrinogen scaffolds for tissue engineering applications. Biomed Mater. 3, (4), (2008).
  17. Gorczyca, G., et al. Preparation and characterization of genipin cross-linked porous chitosan-collagen-gelatin scaffolds using chitosan-CO2 solution. Carbohydr Poly. 102, 901-911 (2014).
  18. Rozman, P., Semenic, D. Chapter 15. The Role of Platelet Gel in Regenerative Medicine. Advances In Regenerative Medicine. Wislet-Gendebien, S. abine In Tech. 319-349 (2011).
  19. Dohan Ehrenfest,, Lemo, D. M., Jimbo, N. Selecting a relevant animal model for testing the in vivo effects of Choukroun’s platelet-rich fibrin (PRF): Rabbit tricks and traps. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 110, (4), 413-416 (2010).
  20. Guilak, F., Baaijens, F. P. Functional tissue engineering: Ten more years of progress. J Biomec. 47, (9), 1931-1932 (2014).
  21. Guilak, F., Butler, D. L., Goldstein, S. A., Baaijens, F. P. Biomechanics and mechanobiology in functional tissue engineering. J Biomec. 47, (9), 1933-1940 (2014).
  22. Collet, J. P., Shuman, H., Ledger, R. E., Lee, S. The elasticity of an individual fibrin fiber in a clot. Proc Natl Acad Sci. 102, (26), 9133-9137 (2005).
  23. Liu, W., et al. Fibrin fibers have extraordinary extensibility and elasticity. Science. 313, (5787), 634 (2006).
  24. American National Standard. Chapter 8: Test methods for vascular prostheses. Association for the Advancement of Medica lnstrumentation Guidance document: Cardiovascular Implants - Tubular vascular prostheses. ANSI/AAMI/ISO. 33-34 (2001).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics