Podning af perler i at udvikle Chicken Embryo lemmer at identificere signaltransduktionsveje påvirker Gene Expression

1Division of Animal Sciences, School of Biosciences, University of Nottingham
Published 1/17/2016
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Developmental Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Developmental Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Cite this Article

Copy Citation

Mohammed, R. H., Sweetman, D. Grafting of Beads into Developing Chicken Embryo Limbs to Identify Signal Transduction Pathways Affecting Gene Expression. J. Vis. Exp. (107), e53342, doi:10.3791/53342 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Brug af kyllingefostre er det muligt direkte at afprøve virkningerne af enten vækstfaktorer eller specifikke inhibitorer af signalveje på genekspression og aktivering af signaltransduktionsveje. Denne teknik tillader levering af signalmolekyler på præcist definerede udviklingsstadier til bestemte tidspunkter. Herefter embryoner kan høstes og genekspression undersøges, for eksempel ved in situ hybridisering eller aktivering af signaltransduktionsveje observeret med immunfarvning.

I denne video heparin perler lægges i blød i FGF18 eller AG 1-X2 perler gennemvædet med U0126, en MEK-inhibitor, er podet ind i lem opløbet in ovo. Dette viser, at FGF18 inducerer ekspression af MyoD og ERK phosphorylering og både endogene og FGF18 induceret MyoD ekspression inhiberes af U0126. Perler gennemvædet i en retinsyre antagonist kan forstærke tidlig MyoD-induktion af FGF18.

Denne fremgangsmåde kan være osed med en lang række forskellige vækstfaktorer og inhibitorer og er let tilpasses til andre væv i udviklende embryo.

Introduction

Avian embryoner har givet et stærkt værktøj til undersøgelse af udviklingen i mange år 1. En af deres mest nyttige egenskaber er, at de er relativt let at manipulere. Ekstern udvikling gør det muligt at åbne ægget at få adgang til embryo og udføre forskellige micromanipulations herunder eksempler som den klassiske vagtel-chick kimære system til at studere celle skæbne 2,3, injektion af retrovirus til overekspression i specifikke væv under udviklingen 4,5 og eksplantation kultur at identificere udviklingsmæssige signalsystemer kilder 6. For nylig Kimærer frembringes mellem umærkede værter med transplantater fra en transgen kylling, der udtrykker GFP har vist, at kombinationen af klassisk podning og genmodificering kan give vigtig indsigt i udviklingen 7,8.

Den lethed, hvormed den fugleembryo kan manipuleres har gjort det en fremragende model til undersøgelse af lemmerudvikling 9. Anvendelse af specifikke vækstfaktorer til udviklingslandene lemmer in vivo har været medvirkende til at identificere faktorer, der ændrer lemmer mønsterdannelse 10,11 og fortsætter med at give indsigt i denne proces 12. Denne fremgangsmåde er også blevet anvendt til at undersøge de faktorer, der regulerer muskeludvikling og har afdækket roller for mange signaler, såsom Wnts 13, BMP'er 14 og HGF 15.

For nylig denne teknik er blevet anvendt til at undersøge de signaler, der styrer myogene genekspression i knopskydninger og har vist, at interaktioner mellem FGF18 og retinsyre kan styre tidspunktet for MyoD ekspression 16. Ved hjælp af en kombination af vækstfaktorer og små molekyler, der kan indlæses på perler og derefter podet direkte ind i specifikke væv på definerede udviklingsstadier giver mulighed for at gribe ind på næsten hvilket som helst tidspunkt og region under udvikling. Dette er blevet anvendt til INVEstigate mange processer, herunder somite mønsterdannelse 17,18, neurale specifikation 19, neuralkam migration 20 og aksen forlængelse 21.

Her beskriver vi en fremgangsmåde til podning perler gennemvædet i enten vækstfaktorer eller inhibitorer i at udvikle kylling lemmer. Det har været anvendt til at bestemme virkningerne af disse signaler på myogenese ved at analysere muskel specifik genekspression med in situ hybridisering. Vi beskriver transplantater enten via heparin gennemblødt perler, der anvendes til vækstfaktorer, eller AG 1-X2 perler til små hydrofobe molekyler, såsom retinsyre eller småmolekylære inhibitorer af specifikke signalveje. Men andre perler er også tilgængelige som er blevet anvendt til at levere både FGF'er 22 og Shh 23.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Etik Statement: Alle disse eksperimenter følger dyret pleje og etiske retningslinjer fra University of Nottingham.

1. Fremstilling af heparin perler til podning

  1. Vask heparin perler grundigt i PBS før brug. Bemærk: Perlerne kan opbevares ved 4 ° C som en opslæmning i PBS.
    1. Vælg perler til podning ved at fjerne dem fra bestanden med en 20 gl pipette ind i en 1 ml dråbe PBS. Derefter bruge en mikropipette sat til 2 pi at overføre perler i et 20 pi dråbe PBS i en 3 cm petriskål. Vælg perler baseret på størrelse og ved hjælp af et stereo dissektionsmikroskop, overføre udvalgte perler med en P2 pipettespids; dem omkring 100 um diameter er ideelle.
  2. Fjern PBS fra perlerne. Fjern det meste af væsken med en 20 pi pipette og restvæsken ved kapillarvirkning med fine urmagere pincet. Bemærk: Det er vigtigt at fjerne så meget som muligt, så væksten factoR ikke er fortyndet, når det tilsættes til perlerne.
  3. Pipetteres vækstfaktoren direkte på perlerne. For FGF18 Tilsæt 0,5 pi rekombinant FGF18 rekonstitueret ved 0,5 mg / ml i 0,1% BSA i PBS. Placere flere dråber vand omkring kanterne af skålen for at forhindre væsken i at fordampe.
  4. Inkubér perlerne i 1 time ved stuetemperatur. Fjern vanddråberne fra skålen med en Pasteur-pipette og placere på is klar til podning.
  5. Hvis det er nødvendigt (for gennemsigtige perler) transfer 4-5 perler til 2% phenolrødt før podning at hjælpe visualisere dem. Skyl i PBS før overførsel til fosteret.

2. Udarbejdelse af AG 1-X2 Perler til podning

  1. Før anvendelse derivatisere perler med 0,2 N myresyre.
    1. For at gøre denne anvendelse en spatel til at overføre perler til et 1,5 ml mikrocentrifugerør. Tilføj 1 ml 0,2 N myresyre og vask på et rystebord i 1 time.
    2. Fjern derefter myresyre med en P1000 pipette og erstatte med 1ml vand. Vask i 1 time og gentag seks gange for at fjerne de resterende myresyre.
    3. Fjern resterende væske med en pipette P1000 og gemme perlerne ved 4 ° C. Bemærk: Det er ikke nødvendigt at fjerne alle resterende vand på dette tidspunkt.
  2. Fjern en lille pellet af perler på ca. 5-10 pi volumen fra bestanden ved hjælp af en lille spatel i en 3 cm petriskål, og der tilsættes 1 ml DMSO (eller alt efter opløsningsmiddel lægemidlet opløses i). Bemærk: Det skulle give flere hundrede perler, hvorfra man kan vælge dem i den rigtige størrelse.
  3. Derefter bruge en P2 pipette indstillet til 2 pi at overføre perler på ca. 100 um i diameter til en 20 pi dråbe opløsningsmiddel i en anden 3 cm petriskål.
  4. Fjernelse af opløsningsmiddel med en 20 pi pipette og eventuelt resterende opløsningsmiddel med en 2 pi pipette. Erstat med 20 pi af lægemidlet, der skal anvendes.
    BEMÆRK: For at sikre overensstemmelse opløse lægemidlet i en koncentration på 100 uM i DMSO (eller som nogensinde opløsningsmiddel anvendes),portion til 20 pi og opbevares ved -80 ° C som nogle små molekyleinhibitorer er ustabile, og det er bedst at undgå gentagne fryse-optøning. Hvis det er nødvendigt fortynd derefter lægemidlet til den ønskede koncentration før neddypning perler. Kan være nødvendigt at bestemmes empirisk for hvert lægemiddel effektive koncentrationer.
  5. Der inkuberes i 1 time. Beskytte mod lys, da mange af disse molekyler er lysfølsomme.
  6. Før podning transfer 4-5 perler med en pipette p2 indstillet til 2 pi i 20 pi 2% phenolrødt opløst i vand. Udfør dette trin ved hjælp af et stereo-dissektionsmikroskop at visualisere perlerne. Fjern en enkelt perle med fine urmagere pincet eller en wire loop og skyl i PBS før overførsel til fosteret. Efterlad ikke perler i 2% phenolrødt i mere end 15 minutter før brug, da dette kan medføre tab af aktivitet.

3. Forberedelse Wolfram Needles

  1. Skær fine wolfram tråd i 3-4 cm længder. Indsæt et stykke ledning ind i enden afet glas Pasteur pipette og smelte i en bunsenbrænder til at fastsætte i stilling. Forbered op til 10 nåle for at sikre, at der er reservedele, hvis de er beskadiget under brug.
  2. Anbring enden af ​​ledningen ind i en blæselampe flamme og hold den der, indtil wolfram gløder hvidt og spidsen er skarp (omkring 2-3 min). Bemærk: Under brug nålen kan rengøres og re-skærpet i blæselampe efter behov.
    BEMÆRK: Disse nåle kan også bruges til at lave løkker til at overføre perler. Rør forsigtigt nålen til bænken og det vil bøje til at danne en løkke.

4. Forberedelse Embryoner til Bead udtagne transplantater

  1. Inkuber æg med stumpe ender, indtil de når den ønskede fase (3-5 dage for de fleste knopskydninger manipulationer). Brug stump pincet tryk på den stumpe ende at bryde skallen og derefter bruge pincet til at fjerne skallen og eksponere embryoet. Sørg æggeskallen membran også fjernet.
    BEMÆRK: 1-2 ml PBS kan tilføjes med en Pasteur-pipette til at bistå meddette hvis membranen klæber til æggeblomme. Forsigtigt pipetteres PBS på overfladen af ​​blommen, tage fat i membranen med pincet, pas på ikke at beskadige blommen, og træk det forsigtigt væk fra ægget.
  2. Fjerne op til 5 ml æggehvide fra æg med en 10 ml sprøjte og en 19 G nål. Kun tage så meget som nødvendigt for at sikre fosteret ikke komme i kontakt med tape anvendes til at forsegle ægget som fjernelse af større mængder kan reducere embryo overlevelsesrater.
  3. For at visualisere embryo tilføje en 5-6 dråber kunstnere indien blæk til 15 ml PBS indeholdende 100 E penicillin og 0,1 mg streptomycin / ml. Injicer 0,5-1 ml direkte under embryo med en 1 ml sprøjte og en 25 G nål.
  4. Tilsæt 2-3 ml PBS med 1% føtalt kalveserum og 100 U penicillin og 0,1 mg streptomycin / ml i ægget for at sikre fosteret ikke dehydrerer. Brug skærpede urmagere pincet fjerne vitellinmembranen og åbn amnion løbet udviklingslandene lemmer knopper. Sørg fosteret ikke tørrer ud, og, Hvis det er nødvendigt, tilsættes mere PBS / FCS.
    BEMÆRK: lemmer knopper kan tydeligt ses som parrede udvækster på flanke af embryoet. På disse faser fosteret vil gøre en sådan højre side er normalt øverste. Som følge heraf er det normalt lettere at pode perler ind i den højre lemmer og bruge venstre dem som kontralaterale kontrol.
  5. Brug en skærpet wolframtråd at lave et snit i knopskydninger, hvor perlen vil blive implanteret. Undgå at skære hele vejen gennem knopskydninger hvor det er muligt, selv på yngre trin er vanskelig.
    BEMÆRK: I ældre fostre (HH stadie 22 og derover) er det muligt at vælge specifikke regioner i knopskydninger til podning men på yngre stadier dette er mere vanskeligt, da knopskydninger selv er lille. Det er også vigtigt at huske, at knopskydninger vil vokse forbi den podede vulst det, især mod yngre stadier, vil vulsten forblive i den proximale lem.
  6. Pick up en perle fra enten vækstfaktoren eller narkotika ved hjælp af enten ekstra fin watchmakers pincet eller en løkke fremstillet af en wolfram nål. Hvis perlen er blevet dyppet i enten DMSO eller phenolrødt, skylles i PBS før anvendelse til fosteret. Overfør perlen til embryo med pincet / wire loop. Brug derefter den spidse wolframtråd at indsætte perlen ind i indsnittet.
  7. Tilføj 1-2 ml PBS / FCS til ægget sikre, at fosteret holdes hydreret, men undgå at anvende direkte på selve embryo, da dette kan beskadige embryoner og forårsage perlen skal løsnes. Forsegl æg med tape og vende tilbage til inkubatoren.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

På HH trin 21 MyoD ikke udtrykkes i udviklingen lemmer myoblaster selv farvning kan ses i myotome af udviklingslandene somitter (figur 1A). Figur 1B viser in situ-hybridisering for MyoD 6 timer efter en FGF18 perle graft. MyoD induceres i myoblaster tæt på perlen mens der er ingen ekspression i kontralaterale ben. Co-podning en vulst dyppet i U0126, en specifik inhibitor af MEK, blokke FGF18 induktion af MyoD (figur 1C). Tilsvarende podning en U0126 perle på HH fase 21 og leder efter MyoD ekspression efter 24 timer reducerer den endogene ekspression af MyoD sammenligning med den ubehandlede kontralaterale ben (figur 1 D, E).

I lemmer knopper på HH stadie 19 FGF18 ikke inducerer MyoD (figur 1F). Men co-podning af perler dyppet i FGF18 og retinsyre antagonisten BMS493 kan overvinde dette, og der registreres ektopisk MyoD (Figure 1G)

For at bekræfte at FGF18 handler gennem MEK embryoer blev høstet 1 time efter perle graft og immunofarvet for phosphoryleret ERK, målet for MEK. Figur 1H viser et brightfield billede af en FGF18 perle 1 time efter podning, mens figur 1I viser, at FGF18 inducerer hurtig phosphorylering af ERK omkring podet perle. Figur 1J viser en overlejring af disse billeder. Kontrol perler dyppet i 0,1% BSA undgå at fremprovokere ERK phosphorylering (figur 1K, L, M)

Figur 1
Figur 1. MyoD udtryk i lemmer reguleres af FGF18 og retinsyre gennem ERK fosforylering. Umanipulerede kontrol lemmer på HH stadie 21 udtrykker ikke MyoD (A), men for tidlig udtryk detekteres 6 timer efter podning af en FGF18 perle (B). Co-podning FGF18 og U0126 perler blokerer denne induktion (C). Endogen MyoD ekspression ses ved HH trin 21 (D), men dette blokeres ved podning perler gennemvædet med U0126 (E). I tidligere Lemanlæggene tidlig MyoD udtryk er ikke induceret af FGF 18 (F), men induceres ved co-podning perler dyppet i FGF18 og retinsyre antagonist BMS493 (G). FGF18 perler podet ind i HH21 lemmer fremkalde ERK fosforylering efter 1 time: lysfelt (H), fluorescerende (I) og fusionerede (J) billeder af en HH21 lem immunofarvedes for anti-phosphoERK. Kontrol perler gennemvædet med BSA undgå at fremprovokere ERK fosforylering: (K), fluorescerende (L) og fusionerede (M) billeder af en HH21 lem immunofarvedes for anti-phosphoERK. Dette tal er blevet ændret fra Mok et al, 2014 16. Sort asterisker: heparin perler; hvid asterisici: AG 1-X2 perler; pile viser ektopisk MyoD udtryk i lemmer knopper. Klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Brugen af ​​perle transplantater anvendes direkte til at udvikle væv in ovo er et kraftfuldt værktøj til at dissekere rolle vækstfaktor signalering under udviklingen giver uovertruffen kontrol over udviklingsstadiet, hvor de anvendes, og varigheden af ​​eksponeringen.

Valget af perle for hver type molekyle er vigtig. Små hydrofobe molekyler, såsom de her beskrevne inhibitorer og retinsyre, normalt binder godt til derivatiseret AG 1-X2 perler selv om det er nødvendigt at teste effektiviteten af ​​hver inhibitor på disse perler empirisk. Tilsvarende for vækstfaktorer kan det være nødvendigt at teste forskellige typer af perle. Nogle perler er gennemsigtige og kan være svært at visualisere under manipulationerne men en kort behandling med phenolrødt efterfulgt af en skylning i PBS vil mærke dem for længe nok til at udføre transplantatet.

Ved udarbejdelsen perler, især dem, der er blevet gennemblødt af inhibitors, er det vigtigt at beskytte dem mod lys så vidt muligt. Under deres indledende behandling og under manipulation, de bør være omfattet, og kun fjernes, når perlerne bliver overført. Det er bedst at bruge frisk optøede portioner, da nogle af disse reagenser er ustabile og kan give misvisende negative resultater, hvis ikke gemt korrekt. Det er også vigtigt ikke at lade dem neddypning i phenolrødt for længe, ​​før podning da dette kan reducere effektiviteten af ​​perlen.

Koncentrationerne anvendes til disse perle transplantater, af begge faktorer og narkotika vækst, er ofte meget høj; FGF18 perler er gennemvædet i en koncentration på 0,5 mg / ml og perler til småmolekyleinhibitorer ofte gennemblødt i en koncentration på 100 uM. Selv om dette er meget højere end de koncentrationer, der typisk anvendes til behandling af celler i opløsning det er nødvendigt, da mængderne af vækstfaktorer og lægemidler absorberes af perler og derefter frigivet er svære at måle direkte, men formentlig slægterte lavere niveauer end dette in vivo. Som et resultat en række koncentrationer skal testes for hvert molekyle anvendes til at bestemme en effektiv dosis.

Denne teknik kan også anvendes til en lang række andre væv, såsom somitter 24, under udvikling og kan anvendes på fostre in ovo eller i kulturer, såsom EF kultur 25. Det er også muligt at dyrke dyrkede celler, som udskiller specifikke vækstfaktorer som pellets, som derefter kan transplanteret ind fostre på samme måde 26.

Kombinationen af ​​tilgængelighed, nem manipulation og lave omkostninger gør kyllingeembryoner en fremragende model for udvikling. Som transgene teknologier i stigende grad anvendes på fuglearter og genetisk modificerede linjer af både kyllinger 7 og vagtler 27 bliver tilgængelige kombinationen af klassisk embryo podning teknikker med disse modificerede fugle allerede leverer nye indsigter i deling 8,28.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Heparin acrylic beads Sigma H5263 The acrylic-heparin beads used have been discontinued. However a replacement product is available, Heparin agarose beads, cat no H6508. These are transparent so harder to work with but can be stained with phenol red in the same way as AG 1-X2 beads,
AG 1-X2 beads Bio-Rad 140-1231
Affi Gel blue beads Bio-Rad 153-7301; 153-7302 These beads have been used with a range of growth factors including Shh and FGFs and can be used to replace heparin beads
FGF18 Peprotech 100-28 Resuspend in PBS with 0/1% BSA, prepare single use aliquots of 0.5-1ul and store at -80°C. Batches and suppliers can vary so different concentrations should be tested to determine an effective dose.
U0126 Cell Signalling 9903 Make to 20mM stock in DMSO and store in single use aliquots at -80°C. Protect from light.
BMS-493 Tocris Biosciences 3509 Resuspend in DMSO and store in single use aliquots at -80°C. Protect from light.
Black Indian ink Windsor and Newton 5012572003384 (30 ml) While alternatives to this product are available care should be taken as some inks are toxic to embryos
Tungsten wire, 0.1 mm dia. 99.95% Alfa Aesar 10404
Penicillin / streptomycin Sigma P0781 Dilute 100X in PBS/ink and PBS/FCS

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Davey, M. G., Tickle, C. The chicken as a model for embryonic development. Cytogenetic Genome Research. 117, 231-239 (2007).
  2. Le Douarin, N. The Nogent Institute--50 years of embryology. International Journal of Developmental Biology. 49, 85-103 (2005).
  3. Le Douarin, N. M. The avian embryo as a model to study the development of the neural crest: a long and still ongoing story. Mechanisms of Development. 121, 1089-1102 (2004).
  4. Bell, E., Brickell, P. Replication-competent retroviral vectors for expressing genes in avian cells in vitro and in vivo. Molecular Biotechnology. 7, 289-298 (1997).
  5. Abu-Elmagd, M., et al. Wnt/Lef1 signaling acts via Pitx2 to regulate somite myogenesis. Developmental Biology. 337, 211-219 (2010).
  6. Munsterberg, A. E., Lassar, A. B. Combinatorial signals from the neural tube, floor plate and notochord induce myogenic bHLH gene expression in the somite. Development. 121, 651-660 (1995).
  7. McGrew, M. J., et al. Efficient production of germline transgenic chickens using lentiviral vectors. EMBO Reports. 5, 728-733 (2004).
  8. Valasek, P., et al. Cellular and molecular investigations into the development of the pectoral girdle. Developmental Biology. 357, 108-116 (2011).
  9. Tickle, C. The contribution of chicken embryology to the understanding of vertebrate limb development. Mechanisms of Development. 121, 1019-1029 (2004).
  10. Riddle, R. D., Johnson, R. L., Laufer, E., Tabin, C. Sonic hedgehog mediates the polarizing activity of the ZPA. Cell. 75, 1401-1416 (1993).
  11. Tickle, C., Alberts, B., Wolpert, L., Lee, J. Local application of retinoic acid to the limb bond mimics the action of the polarizing region. Nature. 296, 564-566 (1982).
  12. Rosello-Diez, A., Torres, M. Regulative patterning in limb bud transplants is induced by distalizing activity of apical ectodermal ridge signals on host limb cells. Developmental Dynamics. 240, 1203-1211 (2011).
  13. Anakwe, K., et al. Wnt signalling regulates myogenic differentiation in the developing avian wing. Development. 130, 3503-3514 (2003).
  14. Amthor, H., Christ, B., Weil, M., Patel, K. The importance of timing differentiation during limb muscle development. Current Biology. 8, 642-652 (1998).
  15. Brand-Saberi, B., Muller, T. S., Wilting, J., Christ, B., Birchmeier, C. Scatter factor/hepatocyte growth factor (SF/HGF) induces emigration of myogenic cells at interlimb level in vivo. Developmental Biology. 179, 303-308 (1996).
  16. Mok, G. F., Cardenas, R., Anderton, H., Campbell, K. H. S., Sweetman, D. Interactions between FGF18 and retinoic acid regulate differentiation of chick embryo limb myoblasts. Developmental Biology. 396, 214-223 (2014).
  17. Abou-Elhamd, A., Cooper, O., Münsterberg, A. Klhl31 is associated with skeletal myogenesis and its expression is regulated by myogenic signals and Myf-5. Mechanisms of Development. 126-852 (2009).
  18. Schmidt, M., Tanaka, M., Munsterberg, A. Expression of (beta)-catenin in the developing chick myotome is regulated by myogenic signals. Development. 127, 4105-4113 (2000).
  19. Stavridis, M. P., Lunn, J. S., Collins, B. J., Storey, K. G. A discrete period of FGF-induced Erk1/2 signalling is required for vertebrate neural specification. Development. 134, 2889-2894 (2007).
  20. Martinez-Morales, P. L., et al. FGF and retinoic acid activity gradients control the timing of neural crest cell emigration in the trunk. Journal of Cell Biology. 194, 489-503 (2011).
  21. Olivera-Martinez, I., Storey, K. G. Wnt signals provide a timing mechanism for the FGF-retinoid differentiation switch during vertebrate body axis extension. Development. 134, 2125-2135 (2007).
  22. Logan, M., Simon, H. G., Tabin, C. Differential regulation of T-box and homeobox transcription factors suggests roles in controlling chick limb-type identity. Development. 125, 2825-2835 (1998).
  23. Borycki, A. G., Mendham, L., Emerson, C. P. Jr Control of somite patterning by Sonic hedgehog and its downstream signal response genes. Development. 125, 777-790 (1998).
  24. Sweetman, D., et al. FGF-4 signaling is involved in mir-206 expression in developing somites of chicken embryos. Developmental Dynamics. 235, 2185-2191 (2006).
  25. Chapman, S. C., Collignon, J., Schoenwolf, G. C., Lumsden, A. Improved method for chick whole-embryo culture using a filter paper carrier. Developmental Dynamics. 220, 284-289 (2001).
  26. Sweetman, D., Wagstaff, L., Cooper, O., Weijer, C., Münsterberg, A. The migration of paraxial and lateral plate mesoderm cells emerging from the late primitive streak is controlled by different Wnt signals. BMC Developmental Biology. 8, 63 (2008).
  27. Scott, B. B., Lois, C. Generation of tissue-specific transgenic birds with lentiviral vectors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the U.S.A. 102, 16443-16447 (2005).
  28. Seidl, A. H., et al. Transgenic quail as a model for research in the avian nervous system: a comparative study of the auditory brainstem. Journal of Comparative Neurology. 521, 5-23 (2013).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats