Моделирование резистентностью к химиотерапии лейкоз * These authors contributed equally

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Slone, W. L., Moses, B. S., Evans, R., Piktel, D., Martin, K. H., Petros, W., Craig, M., Gibson, L. F. Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro. J. Vis. Exp. (108), e53645, doi:10.3791/53645 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Protocol

1. Расширенный Получение

  1. Подготовка декстран частицы G10.
    1. Подготовьте G10 суспензии путем добавления 50 мл 1x PBS 10 частиц г G10. Смешайте инверсией и позволяют G10 оседать из фосфатно (PBS) при 4 ° CO / N.
    2. День разделения колонок G10, аспирата PBS из осажденных частиц G10 и добавить 50 мл свежего PBS. Смешайте обращением. Повторите дважды, добавляя 50 мл свежего PBS в осажденных частиц G10 и хранить при температуре 4 ° С до готовности к использованию.
  2. Культивирование СККМ и OB.
    1. Поддержание как BMSC или OB при 37 ° С в 6% CO 2 и выращенной на 10 см культуральных планшетах до 90% слияния пока не будет достигнута.
    2. Trypsinize СККМ или OB клетки и разделить 1: 2 на новые 10 см пластинах. Клетки выращивают до этих стандартов пока нет необходимости для лейкозных совместного культивирования.

2. Установление и поддержание совместно культуры

  1. Добавить 5-20 × 10 6 лейкозных клеток яп 10 мл опухоли конкретного питательных сред на 80% -90% сливной СККМ или OB пластины.
    Примечание: В нашей лаборатории поддерживает совместное культивирование при 37 ° С в 5% O 2, чтобы лучше перепросматривать микросреду костного мозга, которые, как было показано в диапазоне от 1% до 7% 16-18. Однако поддержание совместное культивирование при этом напряжения кислорода не является критическим для создания трех лейкозных субпопуляций и по усмотрению лаборатории.
  2. Каждый 4-й день удалить все, кроме 1 мл СМИ (в том числе лейкозных клеток в суспензии) и заменить 9 мл свежего лейкозных культуральной среде. При удалении 9 мл среды из пластины, будьте осторожны, чтобы не нарушить клейкий слой СККМ или OB.
    1. Удалить СМИ, наклоняя тарелку в сторону и аспирации СМИ в углу пластины. Кроме того, при добавлении свежей среды, обязательно добавьте по каплям в углу пластины против боковине, чтобы обеспечить минимальное нарушение липкий слой СККМ или OB.
  3. После 12-й день совместного культивирования, промыть лейкозных клеток из СККМ или OB слоя с помощью пипетки культуральной среды от блюдо вверх и вниз мягко по блюду приблизительно от 5 до 10 раз, а затем собрать в 15 мл коническую трубку. Reseed на новом 80% -90% сливной СККМ или OB пластины, как описано в шаге 2.1.
    Примечание: нежный полоскание совместного культивирования, как описано в шаге 2.3 снимет S и PB лейкозных клеток, не нарушая СККМ или OB монослой. Это позволяет только опухолевые клетки должны быть переданы к следующему совместно культурального планшета. Это 12-дневный цикл можно повторять столько раз, сколько необходимо на основе потребностей пользователей.

3. Подготовка Колонны G10 бисера

Примечание: Если стерильной анализ ниже или культивирование требуется после G10 разделения колонок следующие шаги должны быть выполнены с использованием стерильной техники и G10 колонки должны быть установлены в стерильной биологической капотом.

  1. Предварительно ваRM среды для культивирования клеток до 37 ° С в водяной бане (~ 30 мл на колонке). Использование 10 мл одноразовый шприц, снимите и выбросьте поршень. Добавить стекловату для шприца.
  2. С помощью пинцета растащить стекловату на тонкие оголенные жилы. Добавить несколько слоев слегка упакованном стекловаты со шприцем до 2/3 шприца наполнен стекловатой.
    Примечание: Стекловолокно имеет решающее значение для предотвращения свободные G10 частицы от загрязняющих коллекцию лейкозных клеток. Убедитесь стекловата упакован достаточно, чтобы поддержать частицы G10, но не слишком плотно упакованы, чтобы блокировать поток носителя через колонку.
  3. Приложить 1-ходовой кран с наконечником шприца в закрытом положении.
  4. Зажим Шприц столбец кольца стоят достаточно высоко так 50 мл коническую трубку (сбор трубки) могут быть размещены под краном. Поместите пробирку в колонке шприца.
  5. Использование 10 мл пипетки добавить по каплям, частицы G10 ресуспендировали в PBS в колонну сверхустекловата. Продолжайте добавлять частицы G10 пока мл гранул ~ 2 (как измерено градаций на шприце) из G10 частиц форм на верхней части стекловаты.
  6. Равновесие колонку G10 с подогретого СМИ.
    1. Добавить 2 мл подогретого СМИ в колонну. Открыть кран клапан медленно, так что среда проходит из колонны по каплям.
    2. Повторите шаг 3.6.1 до в общей сложности 10 мл подогретого СМИ были натыкался колонны.
      Примечание: Если частицы G10 видны в потоке через в пробирку, либо 1) добавить больше частиц G10 для поддержания ~ 2 мл гранул убедившись никаких дополнительных частицы G10 не выйдут из колонки или 2) заменить колонну с неиспользуемом одном и повторение шаги 3.4-3.6.1.
    3. После канализацию подогретого СМИ из колонны, закрыть водопроводный кран и выбросить пробирку для сбора с потоком через. Добавить новую коллекцию трубку под колонку. Колонка готова к загрузке с носителя + клеток смеси.
      Примечание: Столбцыследует использовать немедленно и не дают высохнуть.

4. Разделение 3 субпопуляции в совместной культуре

  1. Коллекция подвеска (S) опухоли субпопуляции.
    1. Аспирируйте средств массовой информации из со-планшет для культивирования с пипеткой и осторожно повторно применить те же средства массовой информации, чтобы ополоснуть тарелку и собирать носители, содержащие лейкозных клеток в 15 мл коническую трубку. В лейкозных клеток, собранных являются S субпопуляции.
  2. Коллекция Фаза Bright (PB) субпопуляции опухоли.
    1. Добавить 10 мл свежей среды обратно на совместное культурального планшета. Промыть энергично с помощью пипетки сообщили СМИ вверх и вниз примерно в 5 раз, чтобы удалить прилипшие лейкозных клеток, но не достаточно сильно, чтобы выбить клейкий СККМ / OB компонент.
    2. Аспирируйте с пипеткой и собирать СМИ в 15 мл коническую трубку. Собранные клетки ПБ субпопуляции.
  3. Коллекция Фаза Dim (PD) субпопуляции опухоли.
    1. Промыть пластины с 1 мл PBS в бэрOve остальные СМИ. Trypsinize совместное культивирование пластина с 3 мл трипсина и место в 37 ° C инкубаторе в течение 5 мин.
    2. Удалить пластину из инкубатора и слегка постучите сторон пластины, чтобы сместить клейкий СККМ / OB.
    3. Добавить 1 мл эмбриональной телячьей сыворотки (FBS) и пипетки вверх и вниз 3-5 раз, чтобы разбивайте большие клеточные агрегаты.
    4. Собирают носитель с клетками в конической трубе 15 мл. Эти клетки неочищенную PD субпопуляции с СККМ / OB, а также.
  4. Центрифуга 3 изолированные субпопуляции при 400 мкг в течение 7 мин. Аспирируйте и отбросить супернатант затем по отдельности ресуспендируют гранул в 1 мл подогретого СМИ. Клетки готовы быть загружали на колонку G10.

5. Загрузка Сотрудничество культуры клеток на G10 колонке

Примечание: Убедитесь, кран полностью закрыт перед добавлением среды, содержащей клетки в колонну G10. Кроме того, каждый субпопуляции должны быть подбежал отдельной колонке G10, чтобы не Вве каких-либо предубеждений между населением в прямом анализа.

  1. Использование 1000 мкл пипетки внести 1 мл каждой клеточной субпопуляции в подогретого СМИ в отдельную колонку G10 каплям. Убедитесь, что носитель, содержащий клетки остается на вершине или в G10 гранул. Разрешить клетки инкубировать на G10 гранулы в течение 20 мин при комнатной температуре.
    Примечание: Запорный остается закрытым для продолжительности инкубации.

6. Сбор лейкозных клеток из G10 колонке

  1. Добавить 1-3 мл подогретого СМИ, чтобы каждый столбец G10. Открыть кран клапан и позволяют СМИ медленно выйти каплям колонна.
    Примечание: Очень важно, чтобы поддерживать скорость медленного потока из колонки или G10 осадок, содержащий СККМ / OB можно мыть из колонки и загрязнять изолированные лейкозных клеток.
  2. Продолжайте добавлять подогретого СМИ небольшими порциями (1-2 мл) на колонке G10 пока в общей сложности от 15 до 20 мл пробежала колонку и была собрана. Закрыть кран ваLVE и колпачок коллекция трубки.
    Примечание: Если осадок G10 частиц видно на дне пробирку, осторожно удалить носитель из трубки, оставляя G10 осадок частиц в покое и передача новую пробирку.
  3. Центрифуга собраны носители при 400 мкг в течение 7 минут при комнатной температуре. Удалить супернатант и ресуспендируют осадок клеток в буфере соответствующей для нисходящего применения.
  4. Клетки теперь чистый население лейкозных клеток, свободных от СККМ или загрязнения OB и готовы быть применены для последующих применений при усмотрению пользователя.
    Примечание: лейкозных жизнеспособность клеток должна оставаться неизменной при прохождении клетки через G10 столбцов.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Успешное настройка и культура этой совместным культивированием модели приведет к созданию 3 субпопуляции лейкозных клеток по отношению к клейкой СККМ или OB монослоя. Рис 1 показано, как все клетки высевали в монослой СККМ изначально появляются как только один население приостановлено лейкозных клеток. В течение 4-х дней лейкозных клеток взаимодействуют с BMSC с образованием 3 пространственные субпопуляций лейкозных клеток (приостановлено (S), фаза яркий (ПБ), и фазовые тусклый (PD)). В то время как 3 субпопуляции опухолевых клеток обычно можно увидеть после 24 часов совместного культивирования с СККМ или OB мы совместно культуры клеток в течение 4 дней, чтобы позволить полные динамики и взаимодействия между лейкозных клеток и BMSC / OB клеток пройдет Перед любой манипуляции или экспериментов имеет место (Рисунок 1). Кроме того, обратите внимание, что мы поддерживаем совместное культивирование при давлении кислорода 5% резюмировать физиологию костного мозга, которая имеет пчелуп отмечается в диапазоне от 1% -7% 16-18.

Подавляющее большинство потоку анализа требует разделения лейкозных клеток из BMSC или OB. Для достижения этой цели мы используем столбцы G10 собрать чистой популяции лейкозных клеток (рис 2А). После трипсинизации BMSC и PD REH клеток смешанное население рассматривается две отдельные вперед / боковых популяций с помощью проточной цитометрии (рис 2B, верхняя панель). После G10 сепарации чистый население всего REH всех клеток восстанавливается, что было подтверждено вперед / боковое рассеивание проточной цитометрии (2В, нижняя панель).

Использование этой модели с совместным культивированием и способность изолировать лейкозных клеток от 3 субпопуляции, когда в совместной культуре с СККМ или OB позволяет допроса лейкозных клеток фенотипа с связи с его пространственного расположения по отношению к клейкой СККМ или OBмонослой. Особый интерес, в том, что все клетки, выделенные из PD популяции СККМ или OB совместного культивирования практически не имеют клеточной гибели после воздействия на химиотерапии (рис 3а, б).

Рисунок 1
Рисунок 1. Все ячейки в совместной культуре с СККМ или OB форма трех пространственных популяций. Наша лаборатория использует систему совместного культивирования в пробирке для моделирования лейкозных взаимодействия клеток с микроокружения костного мозга стромальных клеток (BMSC или OB). Для установления совместного культивирования, лейкозных клеток (красный) высевают на 80% -90% сливной монослоя СККМ или OB (синий), которая обозначается как "Time 0". Со-культуры поддерживали при 37 ° С в 5% кислорода, чтобы приблизить условия микросреды костного мозга. Лейкозных клеток начнет формироваться 3 субпопуляции еще 24 ч, но для обеспечения полных взаимодействий с FORM мы допускаем совместном культивировании 4 дня, чтобы установить перед использованием лейкозных клеток для экспериментов. Днем 4 (правая панели), три субпопуляции лейкозных клеток образуют по отношению к клейкой монослоя. Схема (вверху справа) и фазовый контраст микроскопии (внизу справа) показывают приостановлено (S) лейкозных клеток свободно плавающие в средствах массовой информации; фаза яркий (ПБ) лейкозных клеток, которые присоединились к поверхности монослоя СККМ или OB; и фазовые тусклый (PD) лейкозных клеток, которые мигрировали под монослой СККМ или OB. Масштабная линейка соответствует 10 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуре.

фигура 2
Рисунок 2. Использование столбцов G10 позволяет отделить все клетки из СККМ / OB. (А) Демонстрация процесса с использованием G10 седловиныУМН, чтобы отделить все клетки из СККМ / OB совместного культивирования для достижения чистой популяции опухолевых клеток для нисходящего анализа. Слева направо, смесь всех клеток и BMSC / OB клеток добавляют в верхней части колонны G10; (Центр) смесь клеток будет оседать в суспензии G10 и должен быть инкубировали при комнатной температуре в течение 20 мин (Примечание: Запорный находится в закрытом положении на протяжении первых двух стадий); (справа) лейкозных клеток выделяют путем открывания запорного крана и промывки колонки с подогретого СМИ. (Б) Верхняя панель показывает перед разделением G10, что существует смешанная популяция клеток, содержащих BMSC (синий затвор) и REH всех клеток (красные ворота ) путем оценки вперед (FSC) и боковое рассеивание (SSC) анализ. Нижняя панель, следуя G10 разделения только чистой популяции REH всех клеток (красные ворота) остаются с загрязнением менее 1% стромальных клеток (синий ворот). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию Тхи s фигура.

Рисунок 3
Фигура 3. PD лейкозных клеток обладают повышенной устойчивостью к воздействию химиотерапии. Sd-1 лейкозных клеток восстановленные из PD популяции СККМ сокультивирования (A) не отображают снижению жизнеспособности следующий день 4 воздействием Ara-C в [1 мкМ] МТХ [50 мкМ], или видеомагнитофон [25 мкМ], подобно необработанными контрольными (обратите внимание, что вторая доза Ara-C добавляют при 48 ч для учета каких-либо потерь препарата обусловлено стабильностью). Лейкозных клеток из одних средах, популяции S, и PB значительно уменьшили жизнеспособность как определено трипанового синего exclusion.SD-1 лейкозных клеток совместно культивируемых с OB клеток отображать аналогичные тенденции в жизнеспособности (B). Результаты выражены в виде среднего ± SEM. (*) Обозначает р <0,05, непарный т-тест по отношению к необработанным контролем.5fig3large.jpg "целевых =" _blank "> Нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуре.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Минимальной остаточной болезни (МОБ), который способствует рецидиву заболевания продолжает оставаться основной клинической проблемой при лечении агрессивной огнеупоров ALL, а также, множество других гематологических опухолей. Микросреда костного мозга является наиболее частой локализацией рецидива во всех 3,8. Таким образом, модели, моделирующие микросреду костного мозга являются жизненно важными инструментами для проверки гипотез, связанных с выживанием лейкозных клеток опухоли и поддержания МОБ при воздействии химиотерапии. Хотя мышиные модели определяют золотой стандарт для тестирования вопросы, связанные с лекарственной эффективности, 2D совместное культивирование продолжает оставаться рентабельным методология проверки гипотез и стратегий борьбы с наркотиками, связанных с костной завтра микроокружения поддержки выживания лейкозных клеток. Многие группы показали, что совместное культивирование лейкозных клеток с СККМ или OB обеспечивает преимущество в выживании при введении химиотерапевтических агентов 9,10,12-14,19-21. моделирование работы нормально незрелые CD34 + Хемаtopoietic клетки в совместной культуре с мезенхимальных стволовых клеток (МСК) показал, что гемопоэтические клетки взаимодействуют с клейкой монослоя МСК с образованием трех различных пространственных популяций гемопоэтических клеток 22,23. Пролиферации и дифференцировки CD34 + клеток было осуществлено по отношению к их местоположения в пределах совместного культивирования 22. Мы расширили на этом наблюдении, чтобы проверить вопросы, связанные с поддержкой микросреда стромальных клеток костного мозга стойкого населения опухолевых клеток в пределах 2D сокультивирования и его изоляции для нисходящего анализа.

В отличие от стандартных моделей 2D совместное культивирование, который обычно отведать лейкозных клеток от удаления взвешенных опухоли, наша модель показывает, что совместное культивирование представляет собой более динамичного взаимодействия, в котором лейкозных клеток в совместной культуре с BMSC или форме OB три субпопуляции относительную к BMSC или OB монослой (рис 1). Опухолевые субпопуляции, которые формируют подвешены (S) опухоли, бееч свободно плавающие в средствах массовой информации; фаза яркий (PB), который приклеен к поверхности BMSC или OB; и фазовые тусклый (PD), которые погребены под СККМ или OB монослоя (рис.1). В этой модели, мы обнаружили, что строгая кормления и пересев график важно добиться согласованных результатов в модели совместного культивирования и поэтому мы кормить совместное культивирование с интервалом 4 дня и передать опухоль новых BMSC или ОВ монослоев каждые 12 дней. Это может потребовать модификации для альтернативных типов опухолей по мере необходимости. Количество опухолевых клеток, которые будут мигрировать под BMSC или OB, чтобы сформировать население PD может варьироваться от различных лейкозных клеток. Это может быть ограничение модели, когда число опухолевых клеток ПД низки, что делает его трудно собирать достаточно клеток для нисходящего анализа. В некоторых случаях эта проблема может быть преодолена путем установления репликации совместное культивирование для обеспечения объединения трех отдельных субпопуляций.

Поскольку эта модель повторноголежит на взаимодействии опухолевых клеток с BMSC или OB важно иметь эффективный метод удаления загрязнения стромальных клеток для решения конкретных биологию лейкозных клеток. Чтобы выполнить эту разделение опухолевых клеток от стромы, которые мы используем G10 столбцов. Правильное размещение и использование этих колонок имеет решающее значение для выделения чистых популяций опухолевых для нисходящего анализа. Как было подчеркнуто на фигуре 2В, надлежащего оформления результатов разделения колонок G10 в восстановлении опухолевых клеток при чистотой более 99%. Это позволяет потоку анализа лейкозных клеток без усложнения интерпретации результатов, возникающих в результате загрязнения стромальных клеток. Важно отметить, что все лейкозных типы клеток ли клеточные линии или первичные образцы пациентов будет слегка отличаться в их способности пропускать через G10 столбцов. Перед использованием в крупномасштабных экспериментов пользователи должны определить количество лейкозных клеток они должны вход с целью выделения нужного количества, необходимого пили их конкретные потребности вниз по течению. Кроме того, количество промывочной сред провел над G10 колонке пост инкубации может быть увеличено, чтобы попытаться увеличить число клеток, выделенных. Следует проявлять осторожность, чтобы гарантировать, что дополнительные моет не вызвать загрязнение стромальных клеток, которые могут быть определены после мытья от кровяных клеток или проточной цитометрии анализа потока через.

При установлении этой модели, мы наблюдали, что лейкозные клетки, выделенные из популяции PD увеличили жизнеспособность по сравнению с лейкозных клеток, выращенных в средах покое, а также тем, извлекают из популяций S или PB в то же сокультивирования при воздействии цитотоксической химиотерапии (Рисунок 3 AB). Это важно, поскольку она представляет собой популяцию лейкозных клеток в пробирке, которые вытекают выраженный защиту от химиотерапии. Это обеспечивает полезный инструмент для тестирования стратегии лечения, направленные на таргетинг наиболее стойкий население опухоли, которая поддерживаетсякостный мозг микросреда. Кроме того, поскольку эти лейкозных клеток настолько хорошо защищена СККМ или OB сокультивирования она поддается пробирке стратегий комбинированного лечения в, что в средствах массовой информации в одиночку или стандартные модели совместного культивирования, как представляется, или будет полностью убить опухоль, которая не является всегда представитель последствий в их устойчивых микроокружения поддерживается лейкозных населения.

Наконец, мы считаем, что использование этой модели может обеспечить ценную информацию взаимодействий между СККМ / OB, и лейкозных клеток, которые отвечают за устойчивость к химиотерапии, приведет к МОБ, а затем рецидив. Эта модель обеспечивает платформу в пробирке для разработки экспериментов, которые будут лучше информировать вниз по течению доклинических моделях. Хотя мы показываем использование этой модели для проверки взаимодействия между стромальных клеток костного мозга и всех производных лейкозных клеток, мы надеемся, что будущие направления и применения этой модели будет намeful в различных злокачественных в которой микросреда костного мозга обеспечивает участок святилища для опухолей во вмешательстве химиотерапевтического.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
G10 sephadex beads Sigma G10120 Referred to in manuscript as gel type 10 cross-linked dextran particles
10 ml sterile syringe BD 309604
Glass wool Pyrex 3950
1-way stopcocks World Precision Instruments, Inc. 14054-10
50 ml conical centrifuge tubes World Wide Medical Products 41021039 Used as collection tubes
15 ml conical centrifuge tubes World Wide Medical Products 41021037 Used for cell collection
Fetal Bovine Serum Sigma F6178
0.05% Trypsin  Mediatech, Inc. 25-053-CI
100 x 20 mm Cell Culture Dishes Greiner Bio-One 664160
Culture media
Osteoblast culture media  PromoCell C-27001 For human osteoblast media 
RPMI 1640 media Mediatech, Inc. 15-040 For tumor media prepation 
Cell lines
Adherent Cells:
Human Osteoblasts PromoCell C-12720 Human osteoblast were cultured according to the supplier’s recommendations. 
Human Bone Morrow Stromal Cells WVU Biospecimen Core De-identified primary human leukemia and bone marrow stromal cells (BMSC) were provided by the Mary Babb Randolph Cancer Center (MBRCC) Biospecimen Processing Core and the West Virginia University Department of Pathology Tissue Bank. BMSC cultures were established as previously described (*)
Leukemic Cells:
REH ATCC ATCC-CRL-8286 REH cells were cultured according to the supplier’s recommendations and recommended media. 
SD-1 DSMZ ACC 366 SD-1 were cultured according to the supplier’s recommendations and recommended media. 
(*) Gibson LF, Fortney J, Landreth KS, Piktel D, Ericson SG, Lynch JP. Disruption of bone marrow stromal cell function by etoposide. Biol Blood Marrow Transplant J Am Soc Blood Marrow Transplant. 1997 Aug;3(3):122–32.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ayala, F., Dewar, R., Kieran, M., Kalluri, R. Contribution of bone microenvironment to leukemogenesis and leukemia progression. Leukemia. 23, (12), 2233-2241 (2009).
  2. Coustan-Smith, E., Sancho, J., et al. Clinical importance of minimal residual disease in childhood acute lymphoblastic leukemia. Blood. 96, (8), 2691-2696 (2000).
  3. Gaynon, P. S., Qu, R. P., et al. Survival after relapse in childhood acute lymphoblastic leukemia. Cancer. 82, (7), 1387-1395 (1998).
  4. Kikuchi, M., Tanaka, J., et al. Clinical significance of minimal residual disease in adult acute lymphoblastic leukemia. Int. J. Hematol. 92, (3), 481-489 (2010).
  5. Krause, D. S., Scadden, D. T., Preffer, F. I. The hematopoietic stem cell niche-home for friend and foe? Cytometry B Clin. Cytom. 84, (1), 7-20 (2013).
  6. Meads, M. B., Hazlehurst, L. A., Dalton, W. S. The Bone Marrow Microenvironment as a Tumor Sanctuary and Contributor to Drug Resistance. Clin. Cancer Res. 14, (9), 2519-2526 (2008).
  7. Nguyen, K., Devidas, M., et al. Factors Influencing Survival After Relapse From Acute Lymphoblastic Leukemia: A Children's Oncology Group Study. Leuk. Off. J. Leuk. Soc. Am. Leuk. Res. Fund UK. 22, (12), 2142-2150 (2008).
  8. Szczepanek, J., Styczyński, J., Haus, O., Tretyn, A., Wysocki, M. Relapse of Acute Lymphoblastic Leukemia in Children in the Context of Microarray Analyses. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz.). 59, (1), 61-68 (2011).
  9. Boyerinas, B., Zafrir, M., Yesilkanal, A. E., Price, T. T., Hyjek, E. M., Sipkins, D. A. Adhesion to osteopontin in the bone marrow niche regulates lymphoblastic leukemia cell dormancy. Blood. 121, (24), 4821-4831 (2013).
  10. Bradstock, K., Bianchi, A., Makrynikola, V., Filshie, R., Gottlieb, D. Long-term survival and proliferation of precursor-B acute lymphoblastic leukemia cells on human bone marrow stroma. Leukemia. 10, (5), 813-820 (1996).
  11. Clutter, S. D., Fortney, J., Gibson, L. F. MMP-2 is required for bone marrow stromal cell support of pro-B-cell chemotaxis. Exp. Hematol. 33, (10), 1192-1200 (2005).
  12. Manabe, A., Murti, K. G., et al. Adhesion-dependent survival of normal and leukemic human B lymphoblasts on bone marrow stromal cells. Blood. 83, (3), 758-766 (1994).
  13. Mudry, R. E., Fortney, J. E., York, T., Hall, B. M., Gibson, L. F. Stromal cells regulate survival of B-lineage leukemic cells during chemotherapy. Blood. 96, (5), 1926-1932 (2000).
  14. Tesfai, Y., Ford, J., et al. Interactions between acute lymphoblastic leukemia and bone marrow stromal cells influence response to therapy. Leuk. Res. 36, (3), 299-306 (2012).
  15. Hathcock, K. S. Depletion of Accessory Cells by Adherence to Sephadex G-10. Curr. Protoc. (2001).
  16. Berniakovich, I., Giorgio, M. Low oxygen tension maintains multipotency, whereas normoxia increases differentiation of mouse bone marrow stromal cells. Int. J. Mol. Sci. 14, (1), 2119-2134 (2013).
  17. Chow, D. C., Wenning, L. A., Miller, W. M., Papoutsakis, E. T. Modeling pO(2) distributions in the bone marrow hematopoietic compartment. II. Modified Kroghian models. Biophys. J. 81, (2), 685-696 (2001).
  18. Holzwarth, C., Vaegler, M., et al. Low physiologic oxygen tensions reduce proliferation and differentiation of human multipotent mesenchymal stromal cells. BMC Cell Biol. 11, (2010).
  19. O'Leary, H., Akers, S. M., et al. VE-cadherin Regulates Philadelphia Chromosome Positive Acute Lymphoblastic Leukemia Sensitivity to Apoptosis. Cancer Microenviron. Off. J. Int. Cancer Microenviron. Soc. 3, (1), 67-81 (2010).
  20. Wang, L., Chen, L., Benincosa, J., Fortney, J., Gibson, L. F. VEGF-induced phosphorylation of Bcl-2 influences B lineage leukemic cell response to apoptotic stimuli. Leukemia. 19, (3), 344-353 (2005).
  21. Wang, L., Coad, J. E., Fortney, J. M., Gibson, L. F. VEGF-induced survival of chronic lymphocytic leukemia is independent of Bcl-2 phosphorylation. Leukemia. 19, (8), 1486-1487 (2005).
  22. Jing, D., Fonseca, A. V., et al. Hematopoietic stem cells in co-culture with mesenchymal stromal cells--modeling the niche compartments in vitro. Haematologica. 95, (4), 542-550 (2010).
  23. Jing, D., Wobus, M., Poitz, D. M., Bornhäuser, M., Ehninger, G., Ordemann, R. Oxygen tension plays a critical role in the hematopoietic microenvironment in vitro. Haematologica. 97, (3), 331-339 (2012).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics