Modellering Kjemoterapi Resistant Leukemi * These authors contributed equally

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Slone, W. L., Moses, B. S., Evans, R., Piktel, D., Martin, K. H., Petros, W., Craig, M., Gibson, L. F. Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro. J. Vis. Exp. (108), e53645, doi:10.3791/53645 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Protocol

1. Advanced Forberedelse

  1. Forbereder dekstran G10 partikler.
    1. Forbered G10 oppslemming ved å tilsette 50 ml 1 x PBS til 10 g G10 partikler. Bland ved å snu opp og tillate G10 til å felles ut av fosfatbufret saltvann (PBS) ved 4 ° CO / N.
    2. Dagen for G10 kolonne separasjon, aspirer PBS fra avgjort G10 partikler og tilsett 50 ml fersk PBS. Bland ved inversjon. Gjenta to ganger, og legger til 50 ml fersk PBS til avgjort G10 partikler og oppbevar ved 4 ° C til den er klar til bruk.
  2. Dyrking BMSC og OB.
    1. Opprettholde både BMSC eller OB ved 37 ° C i 6% CO2 og dyrket på 10 cm vevskulturplater inntil 90% konfluens er nådd.
    2. Trypsineres BMSC eller OB celler og delt 1: 2 på nye 10 cm plater. Cellene dyrkes til disse standardene inntil nødvendig for leukemi co-dyrking.

2. Etablere og vedlikeholde Co-kultur

  1. Legg 5-20 x 10 6 leukemiceller in 10 ml tumor bestemt kultur media på en 80% -90% konfluent BMSC eller OB plate.
    MERK: Vår lab opprett co-kulturer ved 37 ° C i 5% O 2 til bedre rekapitulere mikromiljøet i benmargen som har vist seg å variere fra 1% til 7% 16-18. Imidlertid opprettholde co-kulturer på oksygen spenningen er ikke kritisk for etablering av de tre leukemiske subpopulasjoner og er på skjønn av laboratoriet.
  2. Hver 4. dag fjerne alle unntatt 1 ml av media (inkludert leukemiceller i suspensjon) og erstatte med 9 ml frisk leukemikulturmedier. Når du fjerner 9 ml media fra plate, være forsiktig for ikke å forstyrre BMSC eller OB tilhenger lag.
    1. Fjern media ved å vippe plate til siden og aspirer media i hjørnet av platen. I tillegg, når du legger frisk media, sørg for å legge dråpevis i hjørnet av platen mot sideveggen for å sikre minimal forstyrrelse av BMSC eller OB tilhenger lag.
  3. Etter den 12. dagen av co-kultur, skyll leukemiceller fra BMSC eller OB laget ved å pipettere kultur media fra fatet opp og ned forsiktig over parabolen ca 5 til 10 ganger og deretter samle inn 15 ml konisk tube. Reseed på ny 80% -90% sammenflytende BMSC eller OB plate som beskrevet i trinn 2.1.
    NB: Den milde skylling av ko-kulturen som beskrevet i trinn 2.3, fjernes S og PB leukemiceller uten å forstyrre BMSC eller OB monolag. Dette gjør at bare tumorceller som skal overføres til den neste ko-kulturplate. Denne 12 dagers syklus kan gjentas så mange ganger som nødvendig basert på brukernes behov.

3. Forbereder G10 Perler kolonner

MERK: Hvis det kreves sterile nedstrøms analyse eller dyrking følgende G10 kolonne separasjon følgende trinn bør utføres ved hjelp av steril teknikk og G10 kolonnene skal settes opp i et sterilt biologisk hette.

  1. Pre-warm cellekulturmedier til 37 ° C i vannbad (~ 30 ml per kolonne). Ved hjelp av en 10 ml engangssprøyte og ta bort stempelet. Legg glassull til sprøyten.
  2. Ved hjelp av pinsett, trekke fra hverandre glassull i tynne løse tråder. Legg flere lag av lett pakket glassull til sprøyten inntil 2/3 av sprøyten er fylt med glassull.
    MERK: glassull er avgjørende for å hindre at løse G10 partikler forurenser leukemicelle samlingen. Sørge for at glassullen er pakket nok til å støtte G10-partiklene, men ikke så tett pakket for å blokkere mediumstrøm gjennom kolonnen.
  3. Feste en-veis stoppekran til spissen av sprøyten i den lukkede stilling.
  4. Klemme sprøyte kolonne til ringen stå høy nok slik at et 50 ml konisk rør (oppsamlingsrør) kan plasseres under stoppekran. Plasser samling rør under sprøyte kolonne.
  5. Ved hjelp av en 10 ml pipette legge, drop-messig, G10 partikler resuspendert i PBS til kolonnen på toppen avglassullen. Fortsett å legge G10 partikler inntil en ~ 2 ml pellet (som målt ved graderinger på sprøyte) av G10-partikler danner på toppen av glassull.
  6. Stabilisere G10 kolonne med forvarmet medier.
    1. Tilsett 2 ml forvarmet media til kolonnen. Åpne stoppekran ventilen sakte slik at media strømmer ut av kolonnen drop-klok.
    2. Gjenta trinn 3.6.1 til totalt 10 ml forvarmet medier har blitt kjørte over kolonnen.
      MERK: Hvis G10 partikler er sett i strømnings seg gjennom oppsamlingsrøret, enten 1) til flere G10 partikler for å opprettholde ~ 2 ml pellet gjør at ingen flere G10 partikler unnslippe fra kolonnen eller 2) erstatte kolonne med en ubrukt en og gjenta trinn 3.4-3.6.1.
    3. Etter forvarmet medie renner fra kolonnen, lukk stoppekranen og kast samling rør med flyt gjennom. Legg til ny samling rør under kolonnen. Kolonne er klar til å bli lastet med media + celleblanding.
      MERK: Kolonnerskal brukes umiddelbart og ikke lov til å tørke.

4. Skille 3 subpopulasjoner innenfor Co-kultur

  1. Innsamling av suspensjon (S) svulst undergruppe.
    1. Sug media fra co-kultur plate med pipette og forsiktig gjen bruke de samme mediene å skylle tallerkenen og samle medier som inneholder leukemiceller i en 15 ml konisk tube. De leukemiske celler som er samlet inn i S undergruppe.
  2. Innsamling av Fase Bright (PB) svulst undergruppe.
    1. Tilsett 10 ml friskt medium tilbake på ko-kulturplate. Skyll kraftig ved pipettering lagt media opp og ned ca 5 ganger for å fjerne heft leukemiske celler, men ikke hardt nok til å løsne tilhenger BMSC / OB komponent.
    2. Aspirer med pipette og samle media i en 15 ml konisk tube. De oppsamlede cellene er PB subpopulasjon.
  3. Innsamling av Fase Dim (PD) svulst undergruppe.
    1. Skyll plate med 1 ml PBS til remove øvrige medier. Trypsineres ko-kulturplate med 3 ml trypsin og plass til 37 ° C inkubator i 5 min.
    2. Fjern platen ut av inkubatoren og banke forsiktig på sidene av platen for å løsne tilhenger BMSC / OB.
    3. Tilsett 1 ml føtalt bovint serum (FBS) og pipette opp og ned 3-5 ganger for å bryte opp store celle aggregater.
    4. Samle media med celler i et 15 ml konisk rør. Disse cellene er det urensede PD subpopulasjon med BMSC / OB også.
  4. Sentrifuger tre isolert subpopulasjoner ved 400 xg for 7 min. Aspirer og kast supernatanten deretter individuelt resuspender pellets i 1 ml forvarmet medier. Celler som er klar til å bli fylt på en G10 kolonne.

5. Legge Co-kultur Cells ut mot G10 kolonne

MERK: Kontroller at vannkranen er helt lukket før du legger medier som inneholder celler til G10 kolonne. Dessuten må hver undergruppe være løp over en egen G10 kolonne så ikke å introduksjonere skjevheter mellom populasjoner i nedstrøms analyse.

  1. Ved hjelp av en 1000 mL pipette, tilsett 1 ml av hver celle subpopulasjon i forvarmet media til et eget G10 kolonne drop-klok. Pass på at medier som inneholder cellene forblir på toppen eller i G10 pellet. Tillate cellene inkuberes på G10 pellet i 20 minutter ved RT.
    MERK: Hane forblir stengt for varigheten av inkubasjon.

6. Samle leukemiceller fra G10 kolonne

  1. Legg 1-3 ml forvarmet media til hver G10 kolonne. Åpne stoppekran ventilen og la media å sakte gå ut av kolonnen drop-klok.
    MERK: Det er viktig å opprettholde en langsom strømningshastighet fra kolonnen eller G10 pellet inneholder BMSC / OB kan vaske ut av kolonnen og forurense de isolerte leukemiceller.
  2. Fortsett å legge forvarmet media i små trinn (1-2 ml) til G10 kolonne inntil et total på 15 til 20 ml har kjørt gjennom kolonnen og har blitt oppsamlet. Lukk stoppekranen valve og lue samling rør.
    MERK: Hvis en G10 partikkel pellet blir sett på bunnen av samlingen tube, forsiktig fjerne media fra røret forlate G10 partikkel pellet uforstyrret og overføring til nytt rør.
  3. Sentrifuger samlet media på 400 xg for 7 min ved RT. Fjern supernatant og resuspender cellepelleten i buffer egnet for anvendelse nedstrøms.
  4. Cellene er nå en ren populasjon av leukemiceller uten BMSC eller OB forurensning og er klar til å bli brukt til nedstrøms applikasjoner på brukerens skjønn.
    MERK: leukemicelle levedyktighet bør forbli uendret når passerer cellene gjennom G10 kolonner.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Vellykket oppsett og kultur i denne ko-kulturmodell vil resultere i etableringen av 3 subpopulasjoner av leukemiceller i forhold til heft BMSC eller OB-monolag. Figur 1 viser hvordan alle celler sådd inn i en BMSC monolag i utgangspunktet se ut som bare en enkelt populasjon av suspen leukemiceller. I løpet av 4 dager leukemiske celler som vekselvirker med den BMSC for å danne 3 romlige subpopulasjoner av leukemiceller (suspendert (S), fase lys (PB), og fase dim (PD)). Mens de 3 subpopulasjoner av tumorceller kan vanligvis sees etter 24 timer fra ko-kultur med BMSC eller OB ko-kulturen vi cellene i 4 dager for å tillate den fulle dynamikk og interaksjoner mellom de leukemiske cellene og BMSC / OB-celler til å foregå før noen manipulering eller eksperimentering foregår (figur 1). Vær også oppmerksom på at vi opprettholder co-kulturer ved en oksygenspenning på 5% til rekapitulere benmarg fysiologi, som har been rapportert å variere fra 1% -7% 16-18.

Et stort flertall av nedstrøms analyse krever separering av de leukemiske celler fra BMSC eller OB. For å oppnå dette bruker vi G10 kolonner for å høste en ren populasjon av leukemiceller (Figur 2A). Etter trypsinering av BMSC og PD Reh celler en blandet befolkning er sett av to forskjellige forover / side populasjoner av flowcytometri (figur 2B, topp panel). Etter G10 separasjon en ren befolkning på bare Reh ALLE celler gjenvinnes, som ble bekreftet av forover / side scatter flowcytometri (figur 2B, nedre panel).

Ved å bruke dette ko-kulturmodell og evnen til å isolere leukemiceller fra 3-subpopulasjoner når i ko-kultur med BMSC eller OB muliggjør utspørring av leukemicelle fenotype med hensyn til sin romlige plassering i forhold til heft BMSC eller OBenkeltlag. Av spesiell interesse, er at alle cellene utvinnes fra PD befolkningen i en BMSC eller OB co-kultur har liten eller ingen celledød etter eksponering for cytostatika (figur 3A, B).

Figur 1
Figur 1. Alle celler i co-kultur med BMSC eller OB skjema tre romlige populasjoner. Laboratoriet benytter en in vitro co-kultur system for å modellere leukemiske cellereaksjoner med mikromiljøet i benmargen avledet stromale celler (BMSC eller OB). For å etablere ko-kultur, leukemiceller (rød) sådd ut på en 80% -90% sammenflytende monolag av BMSC eller OB (blå), som er betegnet som 'Tid 0'. Ko-kulturer blir holdt ved 37 ° C ved 5% oksygen for å tilnærme betingelser mikromiljøet i benmargen. Leukemiske celler vil begynne å danne 3 subpopulasjoner så tidlig som 24 timer, men for å gi komplette interaksjoner å form vi tillater co-kulturer 4 dager å etablere før bruk leukemiceller for eksperimenter. Ved dag 4 (høyre panel), vil tre subpopulasjoner av leukemiceller dannes i forhold til den heftende monolaget. Skjematisk (øverst til høyre) og fasekontrastmikroskop (nederst til høyre) viser suspendert (S) leukemiceller fritt flytende i media; fase lys (PB) leukemiske celler som er festet til overflaten av BMSC eller OB monolag; og fase dim (PD) leukemiske celler som har migrert under BMSC eller OB monolag. Scale bar representerer 10 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 2
Figur 2. Anvendelse av G10 kolonner tillater separasjon av alle celler fra BMSC / OB. (A) Demonstrasjon av prosessen med å bruke en G10 colUMN å skille alle celler fra BMSC / OB co-kultur for å oppnå en ren populasjon av kreftceller for nedstrøms analyse. Fra venstre til høyre, er en blanding av alle celler og BMSC / ob-celler tilsatt til toppen av G10 kolonne; (Senter) celleblanding vil avgjøre i G10 oppslemmingen og skal inkuberes ved romtemperatur i 20 min (Merk: vannkranen er i den lukkede stilling i løpet første to trinn); (høyre) leukemiceller gjenvinnes ved å åpne vannkranen og skylling kolonne med forvarmet media. (B) Top panelet viser før G10 separasjon at det er en blandet befolkning av celler som inneholder BMSC (blå port) og REH ALLE celler (rød gate ) ved å evaluere fremover (FSC) og side scatter (SSC) analyse. Nedre panel, etter G10 separasjon bare ren populasjon av REH ALLE celler (rød gate) er fortsatt med mindre enn 1% stromal celle forurensning (blå port). Klikk her for å se en større versjon av thi s figuren.

Figur 3
Figur 3. PD leukemiceller har økt resistens mot kjemoterapi eksponering. SD-1 leukemiceller utvinnes fra PD befolkningen i et BMSC co-kultur (A) vises ikke redusert levedyktighet etter en fire dagers eksponering for Ara-C [1 mikrometer] , MTX [50 M] eller videospiller [25 mikrometer], lik ubehandlede kontroller (merk at en andre dose av Ara-C lagt til 48 timer for å ta høyde for eventuelle narkotika tap på grunn av stabilitet). Leukemiske celler fra media alene, er S, og PB populasjoner betydelig redusert levedyktighet bestemt ved trypanblått exclusion.SD-1-leukemiceller ko-dyrket med OB-celler viser lignende tendenser i levedyktighet (B). Resultatene er uttrykt som gjennomsnitt ± SEM. (*) Angir p <0,05, uparet t-test i forhold til ubehandlede kontroller.5fig3large.jpg "target =" _ blank "> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Minimal restsykdom (MRD) som bidrar til tilbakefall av sykdommen fortsetter å være en stor utfordring klinisk i behandling av aggressive ildfast det hele tatt, så vel som en rekke andre hematologiske maligniteter. Mikromiljøet i benmargen er den vanligste stedet for tilbakefall i ALL 3,8. Som sådan, modeller som modellerer mikromiljøet i benmargen er viktige verktøy for å teste hypoteser knyttet til leukemi svulst celle overlevelse og vedlikehold av MRD under kjemoterapi eksponering. Mens musemodeller definere gullstandarden for testing spørsmål relatert til legemidlets effekt, fortsetter 2D co-kultur for å være en kostnadseffektiv metode for testing hypoteser og narkotikastrategier knyttet til bein imorgen mikromiljøet støtte av leukemicelle overlevelse. Mange grupper har vist at co-kultur av leukemiceller med BMSC eller OB gir en overlevelsesfordel ved utfordret med kjemoterapi 9,10,12-14,19-21. Arbeid modellering normal umoden CD34 + Hematopoietic celler i co-kultur med mesenchymale stamceller (MSC) viste at hematopoetiske celler vil samhandle med tilhenger monolag av MSC å danne tre forskjellige romlige populasjoner av hematopoetiske celler 22,23. Proliferasjon og differensiering av CD34 + celler ble utført i forhold til deres plassering innenfor ko-kulturen 22. Vi har utvidet på denne observasjonen for å teste spørsmål knyttet til mikromiljøet i benmargen stromal celle støtte fra en resistent populasjon av kreftceller i et 2D co-kultur og sin isolasjon for nedstrøms analyse.

I motsetning til vanlige 2D ko-kulturmodeller som typisk prøve leukemiske celler ved fjerning av suspenderte tumor, viser vår modell som ko-kulturen representerer en mer dynamisk interaksjon i hvilke leukemiceller i ko-kultur med BMSC eller OB skjema tre subpopulasjoner i forhold til BMSC eller OB monolag (figur 1). Tumor subpopulasjoner som danner er suspendert (S) svulst, WHIch er fritt flytende i media; fase lys (PB) som er klebet til overflaten av BMSC eller OB; og fase dim (PD) som har begravd under BMSC eller OB enkeltlag (figur 1). I denne modellen har vi funnet at en streng fôring og reseeding planen er viktig for å oppnå konsistente resultater i en co-kultur modell, og derfor vi mate co-kulturer på 4 dagers intervaller og overføre svulsten til nye BMSC eller OB monolagene hver 12 dager. Dette kan kreve modifikasjon for alternative tumortyper etter behov. Antallet tumorceller som vil migrere under BMSC eller OB for å danne PD populasjonen kan variere mellom forskjellige leukemiceller. Dette kan være en begrensning av modellen, når antall PD-tumorceller er lav, noe som gjør det vanskelig å samle nok celler for genetisk analyse. I enkelte tilfeller kan dette problemet overvinnes ved å etablere replikere ko-kulturer for å tillate for samkjøring av de tre individuelle subpopulasjoner.

Som denne modellen religger på tumorcelleinteraksjon med BMSC eller OB det er viktig å ha en effektiv metode for å fjerne forurensninger stromal celle for å løse spesifikke biologi av leukemiceller. For å oppnå dette separering av tumorceller fra stroma vi bruker G10 kolonner. Riktig oppsett og bruk av disse kolonnene er avgjørende for isolering av rene svulstpopulasjonene for nedstrøms analyse. Som fremhevet i figur 2B, riktig utførelse av G10-kolonne separasjon resulterer i utvinning av tumorceller på mer enn 99% renhet. Dette gjør det mulig for nedstrøms analyse av leukemiceller uten komplikasjoner av tolkning av resultater som ville følge av stromal celle forurensning. Det er viktig å merke seg at alle leukemicelletyper hvorvidt cellelinjer eller primære pasientprøver vil variere litt i deres evne til å passere gjennom G10-kolonne. Før bruk i storskalaforsøk brukere bør bestemme antall leukemiceller må de innspill for å gjenopprette den ønskede beløpet som trengs feller deres spesifikke nedstrøms behov. I tillegg er mengden av vaskemedier kjørte over G10 kolonne stolpen inkubering kan økes for å forsøke og øke antall celler gjenvunnet. Forsiktighet bør tas for å sikre at de ekstra vasker ikke forårsaker stromal celle forurensning som kan bestemmes etter vask av celler eller flowcytometri analyse av strømning gjennom.

Ved å etablere denne modellen, observerte vi at leukemiceller gjenvunnet fra PD befolkning har økt levedyktighet sammenlignet med leukemiske celler dyrket i media alene, så vel som til de som er utvunnet fra S- eller PB populasjoner i den samme ko-kultur når de utsettes for cytotoksisk kjemoterapi (figur 3 AB). Dette er viktig fordi den representerer en populasjon av leukemiske celler in vitro som stammer markert beskyttelse mot kjemoterapi. Dette tilveiebringer et nyttig verktøy for å teste behandlingsstrategier som tar sikte på å målrette de mest motstandsdyktige tumor befolkning, som er støttet avmikromiljøet i benmargen. Videre, fordi disse leukemiske celler er så godt beskyttet av BMSC eller OB ko-kultur er det mottagelig for in vitro-kombinasjonsbehandlingsstrategier, som i media alene eller vanlige ko-kulturmodeller ville synes å eller vil fullstendig drepe tumoren som ikke er alltid representativ for effekter sett i resistente mikromiljøet støttet leukemiske populasjoner.

Til slutt tror vi at bruk av denne modellen kan gi verdifull innsikt i samspillet mellom BMSC / OB, og leukemiceller som er ansvarlig for resistens mot kjemoterapi behandling, føre til MRD, og ​​deretter tilbakefall. Denne modellen gir en in vitro plattform for å designe eksperimenter som bedre vil informere nedstrøms prekliniske modeller. Selv om vi viser bruk av denne modellen for å teste samspillet mellom stromale benmargsceller og ALLE avledet leukemiceller, er vi positive til at fremtidige retninger og anvendelser av denne modellen vil være osseful i en rekke kreftformer der mikromiljøet i benmargen gir et område for fristed for svulster i løpet kjemoterapeutisk intervensjon.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
G10 sephadex beads Sigma G10120 Referred to in manuscript as gel type 10 cross-linked dextran particles
10 ml sterile syringe BD 309604
Glass wool Pyrex 3950
1-way stopcocks World Precision Instruments, Inc. 14054-10
50 ml conical centrifuge tubes World Wide Medical Products 41021039 Used as collection tubes
15 ml conical centrifuge tubes World Wide Medical Products 41021037 Used for cell collection
Fetal Bovine Serum Sigma F6178
0.05% Trypsin  Mediatech, Inc. 25-053-CI
100 x 20 mm Cell Culture Dishes Greiner Bio-One 664160
Culture media
Osteoblast culture media  PromoCell C-27001 For human osteoblast media 
RPMI 1640 media Mediatech, Inc. 15-040 For tumor media prepation 
Cell lines
Adherent Cells:
Human Osteoblasts PromoCell C-12720 Human osteoblast were cultured according to the supplier’s recommendations. 
Human Bone Morrow Stromal Cells WVU Biospecimen Core De-identified primary human leukemia and bone marrow stromal cells (BMSC) were provided by the Mary Babb Randolph Cancer Center (MBRCC) Biospecimen Processing Core and the West Virginia University Department of Pathology Tissue Bank. BMSC cultures were established as previously described (*)
Leukemic Cells:
REH ATCC ATCC-CRL-8286 REH cells were cultured according to the supplier’s recommendations and recommended media. 
SD-1 DSMZ ACC 366 SD-1 were cultured according to the supplier’s recommendations and recommended media. 
(*) Gibson LF, Fortney J, Landreth KS, Piktel D, Ericson SG, Lynch JP. Disruption of bone marrow stromal cell function by etoposide. Biol Blood Marrow Transplant J Am Soc Blood Marrow Transplant. 1997 Aug;3(3):122–32.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ayala, F., Dewar, R., Kieran, M., Kalluri, R. Contribution of bone microenvironment to leukemogenesis and leukemia progression. Leukemia. 23, (12), 2233-2241 (2009).
  2. Coustan-Smith, E., Sancho, J., et al. Clinical importance of minimal residual disease in childhood acute lymphoblastic leukemia. Blood. 96, (8), 2691-2696 (2000).
  3. Gaynon, P. S., Qu, R. P., et al. Survival after relapse in childhood acute lymphoblastic leukemia. Cancer. 82, (7), 1387-1395 (1998).
  4. Kikuchi, M., Tanaka, J., et al. Clinical significance of minimal residual disease in adult acute lymphoblastic leukemia. Int. J. Hematol. 92, (3), 481-489 (2010).
  5. Krause, D. S., Scadden, D. T., Preffer, F. I. The hematopoietic stem cell niche-home for friend and foe? Cytometry B Clin. Cytom. 84, (1), 7-20 (2013).
  6. Meads, M. B., Hazlehurst, L. A., Dalton, W. S. The Bone Marrow Microenvironment as a Tumor Sanctuary and Contributor to Drug Resistance. Clin. Cancer Res. 14, (9), 2519-2526 (2008).
  7. Nguyen, K., Devidas, M., et al. Factors Influencing Survival After Relapse From Acute Lymphoblastic Leukemia: A Children's Oncology Group Study. Leuk. Off. J. Leuk. Soc. Am. Leuk. Res. Fund UK. 22, (12), 2142-2150 (2008).
  8. Szczepanek, J., Styczyński, J., Haus, O., Tretyn, A., Wysocki, M. Relapse of Acute Lymphoblastic Leukemia in Children in the Context of Microarray Analyses. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz.). 59, (1), 61-68 (2011).
  9. Boyerinas, B., Zafrir, M., Yesilkanal, A. E., Price, T. T., Hyjek, E. M., Sipkins, D. A. Adhesion to osteopontin in the bone marrow niche regulates lymphoblastic leukemia cell dormancy. Blood. 121, (24), 4821-4831 (2013).
  10. Bradstock, K., Bianchi, A., Makrynikola, V., Filshie, R., Gottlieb, D. Long-term survival and proliferation of precursor-B acute lymphoblastic leukemia cells on human bone marrow stroma. Leukemia. 10, (5), 813-820 (1996).
  11. Clutter, S. D., Fortney, J., Gibson, L. F. MMP-2 is required for bone marrow stromal cell support of pro-B-cell chemotaxis. Exp. Hematol. 33, (10), 1192-1200 (2005).
  12. Manabe, A., Murti, K. G., et al. Adhesion-dependent survival of normal and leukemic human B lymphoblasts on bone marrow stromal cells. Blood. 83, (3), 758-766 (1994).
  13. Mudry, R. E., Fortney, J. E., York, T., Hall, B. M., Gibson, L. F. Stromal cells regulate survival of B-lineage leukemic cells during chemotherapy. Blood. 96, (5), 1926-1932 (2000).
  14. Tesfai, Y., Ford, J., et al. Interactions between acute lymphoblastic leukemia and bone marrow stromal cells influence response to therapy. Leuk. Res. 36, (3), 299-306 (2012).
  15. Hathcock, K. S. Depletion of Accessory Cells by Adherence to Sephadex G-10. Curr. Protoc. (2001).
  16. Berniakovich, I., Giorgio, M. Low oxygen tension maintains multipotency, whereas normoxia increases differentiation of mouse bone marrow stromal cells. Int. J. Mol. Sci. 14, (1), 2119-2134 (2013).
  17. Chow, D. C., Wenning, L. A., Miller, W. M., Papoutsakis, E. T. Modeling pO(2) distributions in the bone marrow hematopoietic compartment. II. Modified Kroghian models. Biophys. J. 81, (2), 685-696 (2001).
  18. Holzwarth, C., Vaegler, M., et al. Low physiologic oxygen tensions reduce proliferation and differentiation of human multipotent mesenchymal stromal cells. BMC Cell Biol. 11, (2010).
  19. O'Leary, H., Akers, S. M., et al. VE-cadherin Regulates Philadelphia Chromosome Positive Acute Lymphoblastic Leukemia Sensitivity to Apoptosis. Cancer Microenviron. Off. J. Int. Cancer Microenviron. Soc. 3, (1), 67-81 (2010).
  20. Wang, L., Chen, L., Benincosa, J., Fortney, J., Gibson, L. F. VEGF-induced phosphorylation of Bcl-2 influences B lineage leukemic cell response to apoptotic stimuli. Leukemia. 19, (3), 344-353 (2005).
  21. Wang, L., Coad, J. E., Fortney, J. M., Gibson, L. F. VEGF-induced survival of chronic lymphocytic leukemia is independent of Bcl-2 phosphorylation. Leukemia. 19, (8), 1486-1487 (2005).
  22. Jing, D., Fonseca, A. V., et al. Hematopoietic stem cells in co-culture with mesenchymal stromal cells--modeling the niche compartments in vitro. Haematologica. 95, (4), 542-550 (2010).
  23. Jing, D., Wobus, M., Poitz, D. M., Bornhäuser, M., Ehninger, G., Ordemann, R. Oxygen tension plays a critical role in the hematopoietic microenvironment in vitro. Haematologica. 97, (3), 331-339 (2012).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics