अलगाव, लक्षण और मसूड़ों का प्रतिरक्षा सेल नेटवर्क के कार्यात्मक परीक्षा

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Immunology and Infection

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Summary

हम अलगाव, प्ररूपी लक्षण वर्णन और murine मसूड़े से प्रतिरक्षा कोशिकाओं के कार्यात्मक विश्लेषण के लिए एक तकनीक की स्थापना की है।

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Dutzan, N., Abusleme, L., Konkel, J. E., Moutsopoulos, N. M. Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network. J. Vis. Exp. (108), e53736, doi:10.3791/53736 (2016).

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Abstract

Introduction

मसूड़ों के ऊतकों मानव और murine दांत निकलना चारों ओर और लगातार दांत 1 के जटिल biofilm के संपर्क में हैं। प्रतिरक्षा सेल मसूड़ों बाधा पुलिस नेटवर्क, ऊतक अखंडता को बनाए रखने के लिए स्थानीय खानेवाला रोगाणुओं के साथ homeostasis सुनिश्चित करने और एक ही समय में, रोगजनक चैलेंज 2 के खिलाफ प्रभावी प्रतिरोधक क्षमता प्रदान करने के लिए महत्वपूर्ण है। Homeostasis को प्राप्त करने के लिए, प्रतिरक्षा प्रणाली को ध्यान से एक उच्च विशेष प्रतिरक्षा सेल नेटवर्क है, फिर भी थोड़ा विस्तार से मसूड़ों प्रतिरक्षा सेल आबादी और ऊतक प्रतिरोधक क्षमता को बनाए रखने में उनकी भूमिका के लिए जाना जाता है 2 बनाने मसूड़ों के माहौल के अनुरूप है।

प्रतिरक्षा homeostasis मसूड़े में खलल डाल दिया जाता है, या तो वृद्धि हुई मेजबान संवेदनशीलता और / या dysbiotic माइक्रोबियल समुदायों, एक सूजन हालत की उपस्थिति के माध्यम से, periodontitis 3 4 उठता है। Periodontitis, एक आम सूजन की बीमारी है दांत एस के नुकसान के लिए अग्रणीupporting संरचनाओं। इसके गंभीर रूपों में यह सामान्य जनसंख्या 5 का लगभग 10% में देखा जाता है। कुंजी periodontitis संवेदनशीलता और प्रगति में शामिल घटकों विदारक मुश्किल 6 साबित कर दी है। हालांकि, पशु मॉडल periodontitis दीक्षा और प्रगति 7 के तंत्र को समझने में बेहद उपयोगी है। मॉडल कुंजी सेल आबादी और आणविक मध्यस्थों कि प्रतिरक्षा homeostasis और periodontitis की ड्राइव विकास को बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण हैं परिभाषित करने के लिए नियोजित किया जा सकता है। इस तरह की अंतर्दृष्टि प्रतिरक्षा homeostasis के मसूड़े विशेष नियंत्रण के बारे में हमारी समझ को बदलने और रोग रोगजनन की हमारी वर्तमान समझ को आगे होगा।

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Protocol

सभी प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं इस प्रोटोकॉल में वर्णित आवश्यक दिशा निर्देशों का पालन किया और संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति, NIDCR / एनआईएच द्वारा अनुमोदित किया गया।

1. पहले से तैयार

  1. पूरा मीडिया तैयार: RPMI 2 मिमी एल glutamine, 100 इकाइयों / एमएल पेनिसिलिन, 100 यूजी / एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन और 10% FBS के साथ पूरक।
  2. 7.5 माइक्रोग्राम DNase के साथ पूरक RPMI मीडिया के 50 मिलीलीटर (ताजा बनाओ, सभी समय पर बर्फ पर रखने के लिए): DNase मीडिया तैयार करें।
  3. DNase मीडिया प्लस 3.2 मिलीग्राम / कोलेजिनेस प्रकार चतुर्थ मिलीलीटर की 5 मिलीलीटर (ताजा बनाओ, सभी समय पर बर्फ पर रखने के लिए): कोलेजिनेस-DNase मीडिया तैयार करें।
  4. पूर्व शांत FACS बफर: 0.5% FBS पीबीएस में पतला।
  5. पूर्व शांत 4 डिग्री सेल्सियस के लिए अपकेंद्रित्र।
  6. 37 डिग्री सेल्सियस तक गर्म प्रकार के बरतन इनक्यूबेटर।

2. अलगाव, विच्छेदन, और मसूड़ों ब्लॉक से सेल अलगाव

  1. उन्हें उजागर एक उपयुक्त कक्ष में 2 सीओ द्वारा चूहों euthanize, ARAC दिशा-निर्देशों के अनुसार।
  2. <li> दिल और आंतरिक अंगों को बेनकाब करने के वक्ष और उदर गुहा खोलें। छिड़कना, अवर रग Cava में एक चीरा बनाने के लिए और एक 27 जी सुई के साथ एक 3 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग बाएं वेंट्रिकल के माध्यम से पीबीएस के 3 मिलीलीटर छिड़कना।
  3. का सामना करना पड़ पेट के साथ एक पैड पर शरीर और माउस के सिर स्थिर।
  4. कैंची के साथ गर्दन की ओर होंठ के प्रत्येक संयोजिका कट, त्वचा कि जबड़ा और गर्दन क्षेत्र शामिल हैं, अंतर्निहित ऊतकों और मांसपेशियों को प्रकाश में लाने के अलग। जबड़ा उजागर करने के लिए निचले होंठ काटना।
  5. जबड़ा के दोनों पक्षों को अलग किया और मौखिक गुहा का उपयोग करने के लिए प्रत्येक पक्ष स्थिर करने के लिए कम कृन्तक के बीच में कटौती।
  6. कल्पना और तालू नाक गुहा से दूर काटना।
  7. एक 10 ब्लेड का उपयोग क्षेत्रों काटना और मसूड़े (चित्रा 1) के साथ आसपास के दाढ़ की हड्डी और जबड़े दाढ़ क्षेत्रों में शामिल हैं। ऊर्ध्वाधर चीरों सिर्फ पहली दाढ़ और तीसरे दाढ़ के पीछे और एक क्षैतिज चीरा के लिए पूर्वकाल बनाओमसूड़े की सीमा (ऊतक आसपास के दांत के सफेद कॉलर)।
  8. दाढ़ की हड्डी और 5 मिलीलीटर कोलेजिनेस / DNase (बर्फ पर रखने के लिए) के साथ एक 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में जबड़े ब्लॉक जगह।
  9. 1 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक प्रकार के बरतन इनक्यूबेटर में सेते हैं और ऊष्मायन के अंतिम 5 मिनट के दौरान 0.5 एम EDTA के 50 μl जोड़ें।
  10. ऊतकों के साथ 50 मिलीलीटर ट्यूब को ठंड DNase मीडिया के 5 मिलीलीटर जोड़ें और धीरे मिश्रण करने के लिए ज़ुल्फ़।
  11. एक पेट्री डिश पर ऊतक के 4 ब्लॉक स्थानांतरण और DNase मीडिया के 500 μl के साथ कवर। ऊतक के प्रत्येक ब्लॉक से मसूड़े निकालें, एक छुरी और मसूड़ों और दांतों के बीच ब्लेड का उपयोग क्षेत्रों में ब्लेड ओर इशारा करते।
  12. सेल झरनी (70 माइक्रोन आकार) के माध्यम से पेट्री डिश के रूप में भी इस्तेमाल किया विच्छेदन के दौरान पिछले DNase मीडिया से ऊतकों और मीडिया हस्तांतरण, एक नया 50 मिलीलीटर ट्यूब। DNase मीडिया (3-5 एमएल) के इस्तेमाल उपकरणों और फिल्टर के सभी के साथ धोएं।
  13. एक बाँझ 3 मिलीलीटर सिरिंज के सवार का उपयोग करना, झरनी के खिलाफ ऊतक सानीठंड DNase मीडिया (30 से 35 एमएल) के साथ छानने।
  14. ठंड DNase मीडिया के साथ सेल झरनी धो लें।
  15. 4 डिग्री सेल्सियस पर अपकेंद्रित्र, 6 मिनट के लिए 314 XG।
  16. सतह पर तैरनेवाला त्यागें, पूरा मीडिया के 1 मिलीलीटर में फिर से निलंबित।
  17. कोशिकाओं की गणना (उम्मीद की राशि 6 से 8 के बीच x 10 x 10 5 1.2> 80% की व्यवहार्यता के साथ कोशिकाओं का चाहिए) एक स्वचालित सेल काउंटर का उपयोग कर।

3. उत्तेजना और FACS मसूड़ों कोशिकाओं का धुंधला

  1. Brefeldin ए के 1 μl / एमएल की उपस्थिति में पीएमए (50 एनजी / एमएल) और Ionomycin (2.5 माइक्रोग्राम / एमएल) के साथ एकल कक्ष निलंबन को उत्तेजित
  2. 37 डिग्री सेल्सियस पर 3.5 घंटा और 5% सीओ 2 के लिए सेते हैं।
  3. स्पिन और 4 डिग्री सेल्सियस पर पीबीएस और सेंट्रीफ्यूज से धो लें; 6 मिनट के लिए 314 XG।
  4. निर्माता के निर्देशों के बाद एक व्यवहार्यता दाग का उपयोग कोशिकाओं दाग।
  5. बाह्य मार्कर (CD45, TCRγδ, TCRβ, सीडी 4, सीडी 8, TCRγδ या चींटी के लिए दागपसंद का ibodies) निर्माता के निर्देशों का पालन।
  6. 4 डिग्री सेल्सियस, 5 मिनट के लिए 314 XG पर ठंड FACS बफर और सेंट्रीफ्यूज के साथ कोशिकाओं को धो लें।
  7. धीरे सेल गोली को बाधित करने के भंवर।
  8. कमरे के तापमान पर 20 मिनट के लिए 2% paraformaldehyde के साथ कोशिकाओं को ठीक करें।
  9. 4 डिग्री सेल्सियस, intracellular साइटोकिन्स के लिए 5 मिनट और दाग के लिए 314 XG पर ठंड FACS बफर, सेंट्रीफ्यूज के साथ कोशिकाओं को धो लें।
    1. 4 डिग्री सेल्सियस, 5 मिनट के लिए 314 XG पर ठंड 0.5% सैपोनिन FACS बफर और अपकेंद्रित्र में पतला का एक समाधान के साथ FACS ट्यूबों भरें।
    2. FACS ट्यूबों के लिए 0.5% सैपोनिन समाधान के 300 μl जोड़ें, 4 डिग्री सेल्सियस पर अंधेरे में 15 मिनट के लिए सेते हैं और फिर 4 डिग्री सेल्सियस, 5 मिनट के लिए 314 XG पर अपकेंद्रित्र।
    3. intracellular मार्कर (आईएल 17A और IFNγ या अपनी पसंद के साइटोकिन्स) निर्माता के निर्देशों का पालन करने के लिए कोशिकाओं दाग। 0.5% सैपोनिन समाधान और सेंट्रीफ्यूज के साथ कोशिकाओं 4 डिग्री सेल्सियस पर 5 मिनट के लिए 314 XG धो लें।
    4. FACS के साथ फिर से धोनेबफर और 4 डिग्री सेल्सियस, 5 मिनट के लिए 314 XG पर अपकेंद्रित्र।
    5. FACS बफर के 300 μl में कोशिकाओं को फिर से निलंबित।
  10. एक प्रवाह कोशिकामापी पर परिणामों का विश्लेषण।

4. फ्लो का विश्लेषण

  1. कोशिकाओं कल्पना मलबे को बाहर करने के लिए आगे (एफएससी) और पक्ष तितर बितर (एससीसी) और गेट पर विश्लेषण किया जा सके।
  2. आगे तितर बितर क्षेत्र (एफएससी-ए) बनाम ऊंचाई (एफएससी-एच) के मानकों के साथ एकल कक्षों का चयन करें।
  3. गेट कोशिकाओं है कि आगे के विश्लेषण के लिए (चित्रा 2A और 2 सी) के लिए hematopoietic मार्कर CD45 + लाइव (के रूप में व्यवहार्यता धुंधला ने संकेत दिया) और सकारात्मक रहे हैं।
  4. विशिष्ट मार्करों के विश्लेषण के रूप में जारी चित्रा 2 और 3 चित्र में दिखाया गया है।

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Representative Results

(- / -, चित्रा 2A - सी गुम्मट बनाम LFA) प्रोटोकॉल के आवेदन को वर्णन करने के लिए, हम प्रतिनिधि परिणामों के साथ और periodontitis बिना चूहों के मसूड़े में प्रतिरक्षा सेल नेटवर्क की जांच दिखा। प्रतिनिधि FACS भूखंडों मसूड़े (चित्रा 2A, 2 सी) में रहते CD45 + hematopoietic कोशिकाओं दिखा। अलगाव और इस प्रोटोकॉल के साथ प्रतिरक्षा कोशिकाओं के प्रसंस्करण के लिए पर्याप्त कोशिकाओं पैदावार पूर्व vivo उत्तेजना और साइटोकाइन स्राव पैटर्न के लक्षण वर्णन करने के लिए। यहाँ हम कुल CD45 + स्थिर राज्य (डब्ल्यूटी) में कोशिकाओं में आईएल -17 और IFN-γ धुंधला दिखाने के लिए और चूहों में periodontitis प्रदर्शन (चित्रा 2 बी - डी) (LFA की कमी के कारण)। ये आंकड़े इस तकनीक की क्षमता का पता चलता है ऊतक स्थिर राज्य (डब्ल्यूटी) के दौरान और स्थानीय periodontitis के संदर्भ में साइटोकाइन प्रोफाइल पर कब्जा करने के लिए (LFA - / -)। mic मेंई periodontitis के लिए अतिसंवेदनशील हम आगे विशेष रूप से टी सेल और जन्मजात Lymphoid सेल (आईएलसी) के डिब्बों (- बी चित्रा 3 ए) के मसूड़ा प्रतिरक्षा सेल रचना होती है। हम TCRβ + सीडी 4+ टी कोशिका के भीतर आईएल -17 और IFN-γ के उत्पादन को परिभाषित करने में सक्षम थे, TCRβ + सीडी 8 + टी सेल, TCRγδ + टी सेल, एन.के. और आईएलसी डिब्बों (चित्रा 3 सी)।

आकृति 1
चित्रा 1:। Murine मसूड़ों के अलगाव चित्रण जबडा और पृथक मसूड़ों खंड में विच्छेदन के संदेश लेखक का प्रदर्शन मसूड़ों के ऊतकों विच्छेदन के लिए इस्तेमाल किया जाएगा। (बी) ब्लॉक विच्छेदन और पृथक ब्लॉक के लिए रूपरेखा के साथ murine जबडा (दाढ़ क्षेत्र) के खंड। Hematoxylin और eosin दाग मसूड़े के साथ एक दाढ़ की दाढ़ खंड की (एच एंड ई) एल ऊतकों उल्लिखित कम (सी) में दिखाया गया है और (घ) उच्च बढ़ाई। मूल आवर्धन संकेत दिया। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2: मसूड़ों कोशिकाओं से साइटोकाइन उत्पादन के लिए प्रतिनिधि FACS डेटा। (ए - सी) FACS साजिश लाइव CD45 + पीएमए के साथ पूर्व vivo फिर से उत्तेजना के बाद माउस मसूड़ों सेल की तैयारी में कोशिकाओं के लिए गेट दिखा रहा है और गुम्मट और LFA में ionomycin - / -। (बी - डी) प्रतिनिधि FACS / साथ चूहों के मसूड़े से कुल CD45 + कोशिकाओं माउस में IFN-γ और आईएल -17 धुंधला दिखा (LFA की कमी के कारण) periodontitis बिना भूखंडों।Iles / ftp_upload / 53,736 / 53736fig2large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3:। मसूड़े में सूजन में प्रतिरक्षा आबादी द्वारा साइटोकाइन उत्पादन (ए) प्रतिनिधि FACS साजिश TCRβ के लिए धुंधला दिखा बनाम TCRγδ CD45 + कोशिकाओं पर gated। TCRβ + कोशिकाओं पर gating, मध्य साजिश से पता चलता सीडी 4 बनाम TCRβ धुंधला (TCRβ + सीडी 4+ टी कोशिकाओं, TCRβ + सीडी 8 + टी कोशिकाओं और TCRγδ + टी कोशिकाओं के विश्लेषण के लिए अनुमति देता है)। TCRγδ - - TCRβ पर gating कोशिकाओं, सही साजिश बनाम NK1.1 धुंधला (एन.के. कोशिकाओं के विश्लेषण के लिए अनुमति देता है) CD45 पता चलता है। (बी) CD90.2 के लिए धुंधला दिखा प्रतिनिधि FACS साजिश CD45 + वंश नकारात्मक कोशिकाओं पर gated (CD3- CD19 - NK1.1 - CD11c - CD11b - Ly6G - Ly6C - TCRγδ - TCRβ -) जो जन्मजात लसीकावत् कोशिकाओं को पहचानती है। (सी) प्रतिनिधि FACS दिखा पहचान सेल आबादी में IFN-γ और आईएल -17 धुंधला भूखंडों। मसूड़े की तैयारी 20 सप्ताह पुरानी LFA से कर रहे हैं - / - चूहों कि periodontitis विकसित करना; डेटा तीन स्वतंत्र प्रयोगों के प्रतिनिधि हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

मौजूदा तकनीक को सफलतापूर्वक (एक माउस से) प्रतिरक्षा कोशिकाओं की एक बड़ी संख्या उपयुक्त पैदावार, न केवल प्ररूपी लक्षण वर्णन के लिए, लेकिन यह भी कार्यात्मक अध्ययन के लिए पूर्व vivo। एक अन्य समूह पहले से अलग और murine मसूड़ों प्रतिरक्षा कोशिकाओं को चिह्नित करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रकाशित और बहुरंगा का उपयोग कर पशु मॉडल 9 में periodontitis के अध्ययन में प्रवाह cytometry के मूल्य में पेश किया था। काफी समस्या निवारण इस प्रोटोकॉल में महत्वपूर्ण संशोधन निम्न क्रम दोनों मसूड़ों कॉलर क्षेत्रों और दांतों के बीच मसूड़े (चित्रा 1) में शामिल करने के लिए ऊतक के पूरे ब्लॉक के विच्छेदन शामिल करने के लिए किया गया था। अकेले मसूड़ों विच्छेदन के साथ, अक्सर पूर्ण मोटाई फ्लैप हासिल नहीं कर रहे हैं और मसूड़ों के हिस्सा विशेष रूप से दांतों के क्षेत्रों में याद किया जाता है। इस दृष्टिकोण का प्रयोग, काटा प्रतिरक्षा कोशिकाओं की संख्या में काफी वृद्धि हुई है। इस तकनीक को भी मसूड़ों के ऊतकों से दोनों जबडा एक का इष्टतम अलगाव के लिए अनुमति देता हैडी जबड़ा।

इस प्रोटोकॉल के लिए महत्वपूर्ण कदम मसूड़ों क्षेत्रों में से एक रूढ़िवादी विच्छेदन और विच्छेदन के एक कुशल दर शामिल हैं। विशेष रूप से, ऊतक के ब्लॉक के आसपास के दांत (मसूड़े) केवल न्यूनतम ऊतक और न मुख ऊतकों को शामिल करने के विच्छेदित किया जाना चाहिए। ब्लॉक जल्दी से विच्छेदित किया जाना चाहिए और ऊतकों और कोशिकाओं इष्टतम सेल व्यवहार्यता सुनिश्चित करने के लिए बर्फ पर रहना चाहिए।

समस्या निवारण के प्रयोजनों के लिए यह ध्यान दें कि कोशिकाओं की कम उपज कोलेजिनेस, कोलैजिनेज़ और / या ऊतक ब्लॉक से मसूड़े की अपर्याप्त विच्छेदन के अनुचित सांद्रता के साथ ऊष्मायन के अपर्याप्त समय से संबंधित हो सकता है महत्वपूर्ण है। उस पर ध्यान दें, मसूड़े का उपयोग कर शीशा loupes (2 एक्स-6X) के विच्छेदन के लिए सहायक हो सकता है। कोशिकाओं के कम व्यवहार्यता प्रक्रिया में और मीडिया, buffers और बर्फ पर लगातार शेष नहीं कोशिकाओं को शिथिलता से संबंधित हो सकता है।

इस प्रोटोकॉल की सीमाएं, ऊतक जिले के प्रकार के लिए निहितsected मसूड़ों के ऊतकों के आकार, अन्य शारीरिक बाधा साइटों का अध्ययन (उदा। त्वचा या जठरांत्र संबंधी मार्ग) में जो बड़ा ऊतकों उपलब्ध हैं की तुलना में।

/ - - मॉडल है जो अनायास periodontitis विकसित बहरहाल, यहाँ प्रस्तुत तकनीक हमें LFA में प्रमुख सेल आबादी को चिह्नित करने के लिए अनुमति दी गई है। LFA में - / - चूहों हम periodontitis 10 के विकास के दौरान एक प्रमुख आईएल -17 साइटोकाइन हस्ताक्षर की पहचान की। बहुरंगा प्रवाह cytometric विश्लेषण का प्रयोग हम आईएल 17 11 के सेलुलर स्रोतों को परिभाषित करने में सक्षम थे। इस रोग के आईएल -17 की स्थापना में TCRγδ टी कोशिकाओं, सीडी 4+ टी कोशिकाओं और सहज लसीकावत् कोशिकाओं (आईएलसी) स्थानीय स्तर पर मसूड़े 10 के भीतर से उत्पादन किया गया था।

इस पद्धति और यहां तक ​​कि छोटे उप-जनसंख्या की पहचान करने की क्षमता के साथ अलग कक्षों की पर्याप्त संख्या के साथ, यह अब एक व्यापक समझ में विकसित करने के लिए संभव हो जाएगामसूड़ों बाधा अखंडता की सुरक्षा के विशेष प्रतिरक्षा सेल नेटवर्क के आईएनजी। यह महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि हमें मसूड़ों वातावरण में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करने की अनुमति देगा। इस तकनीक को रोजगार से अब हम प्रवाह cytometric सेल छँटाई द्वारा मसूड़े प्रतिरक्षा सेल नेटवर्क के विशिष्ट घटकों को अलग करने के लिए आगे बढ़ सकते हैं, की अनुमति अतिरिक्त विश्लेषण और अभिलक्षण शुरू किया जाना है।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Fine Scissors Fine science tools 14058-11
Scalpel Handle #3 Fine science tools 10003-12
Scalpel Blades #10 Fine science tools 10010-00 Sterile
Splinter Forceps Integra Miltex 6-304
Needles with regular bevel  BD Medical 305109 27 G, 12.7 mm length
Monoject syringes Covidien 8881513934 Luer-lock tip, 3 ml
PBS, pH 7.4 Life Technologies 10010-049 Without Calcium and Magnesium
RPMI 1640 Lonza 12-167F Without L-glutamine
DNase I from bovine pancreas Sigma-Aldrich DN25-1G
Collagenase type IV Gibco (by Life technologies) 17104-019
Fetal Bovine Serum Gemini Bio-products 100-106
Gentamicin 50 mg/ml Quality biological 120-098-661EA
Pen Strep Gibco (by Life technologies) 15140-122
L-Glutamine Gibco (by Life technologies) 25030-081
0.5 M EDTA pH 8.0 Quality biological 351-027-721EA
50 ml tubes Corning 352070 Polypropylene, sterile
70 μM Cell Strainers Corning 352350
Petri dishes Corning 351029 Sterile
5 ml FACS tubes Corning 352052 Sterile
BD GolgiPlug BD Biosciences 555029 Contains brefeldin A solution
Phorbol 12-Myristate 13-Acetate (PMA) Sigma-Aldrich P8139
Ionomycin Calcium Salt Sigma-Aldrich 13909
Saponin from quillaja bark Sigma-Aldrich S4521
LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit Life Technologies L34957
Anti-Mouse CD45 Alexa Fluor 700 eBioscience 56-0451-82
Anti-Mouse CD4 eFluor 450 eBioscience 48-0042-82
Anti-Mouse TCR beta APC eFluor 780 eBioscience 47-5961-82
Anti-Mouse gamma delta TCR FITC eBioscience 11-5711-82
Anti-Mouse IL-17A APC eBioscience 12-7311-82
Anti-Mouse IFN-γ PE eBioscience 11-5931-82
Anti-Mouse NK1.1 PE-Cy7 eBioscience 25-5941-82
Anti-Mouse CD90.2 APC eFluor 780 eBioscience 47-0902-82
Anti-Mouse CD3e FITC eBioscience 11-0031-82
Anti-Mouse CD19 FITC eBioscience 11-0193-82
Anti-Mouse CD11b FITC eBioscience 11-0112-82
Anti-Mouse CD11c FITC eBioscience 11-0114-82
Anti-Mouse TCR beta FITC eBioscience 11-5961-82
Anti-Mouse Ly-6G FITC eBioscience 11-5931-82
Anti-Mouse Ly-6C FITC BD Pharmingen 553104

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References

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