Opptak Muse Ultralyd lyder for å evaluere sosial kommunikasjon

1Human Genetics and Cognitive Functions, University Paris Diderot, CNRS UMR 3571, Institut Pasteur, 2Neurophysiology and Behavior, University Pierre et Marie Curie Paris 6, CNRS UMR 7102, 3Bio Image Analysis, CNRS URA 2582, Institut Pasteur
Published 6/05/2016
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Behavior
 

Summary

Cite this Article

Copy Citation

Ferhat, A. T., Torquet, N., Le Sourd, A. M., de Chaumont, F., Olivo-Marin, J. C., Faure, P., et al. Recording Mouse Ultrasonic Vocalizations to Evaluate Social Communication. J. Vis. Exp. (112), e53871, doi:10.3791/53871 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Introduction

Pasienter med nevropsykiatriske lidelser vanligvis vise underskudd i sosial kommunikasjon (for eksempel pasienter med autismespekterforstyrrelser, schizofreni, eller Alzheimers sykdom) 1. Genmodifisert mus mer og mer hyppig brukt til å modellere genetiske årsaker til disse lidelsene 2. Studerer sosial kommunikasjon i disse musemodeller er av stor interesse for å forstå mekanismene for genetiske mutasjoner som fører til atypiske sosiale dysfunksjoner og for utprøving av nye behandlingsformer. Siden mus er sosiale dyr og kommunisere med hverandre ved hjelp av lukte, taktile, visuelle og akustiske signaler, de er egnede modeller for å evaluere sosial kommunikasjon.

Muse ultralyd vocalizations er nå i dag brukt som en proxy for å modellere de genetiske grunnlaget for stemmekommunikasjons underskudd 3,4 (men eksistensen av vokal læring i denne arten er fortsatt debattert 5,6, selv om de fleste nyere studier argue for fraværet av vokal læring 7). Laboratoriet mus har blitt funnet å avgi ultralydvokaliseringer i mor-spedbarn relasjoner, i mann-kvinne sosio-seksuelle interaksjoner, i samme kjønn sosiale interaksjoner (anmeldt i referanse 8) og i ungdoms-ungdoms sosiale interaksjoner 9. Muse valper avgir isolasjon samtaler i løpet av sine to første ukene av livet da isolert fra demningen og kullsøsken 10. Hanner avgir ultralyd lyder når du er i nærvær av en estrus kvinnelig (eller urin signaler fra henne) 11,12. Menn og kvinner avgir ultralyd vokalisering når vi samhandler med en ukjent conspecific av samme kjønn 13,14. Organisasjonen og funksjonene til disse lyder er ikke helt klare, og trenger nærmere undersøkelser. Nåværende kunnskap om det funksjonelle aspektet er begrenset til utløsning av henting atferd hos mødre høre valpen isolasjon samtaler, tilrettelegging av nærhet til voksne kvinner mot voksen hann vocalizationer 15 og den økte utforskende oppførsel av voksne menn hørsels voksne kvinnelige vokaliseringer 16.

Karakterisere unormalt i vokal kommunikasjon i musemodeller av nevropsykiatriske lidelser bør gjennomføres i standardiserte forhold for å utelukke stort bidrag av forsøksbetingelsene. Slike karakteristikker, kombinert med evalueringen av samtidige sosiale interaksjoner og nevrobiologiske studier, i ulike genetiske modeller bør forbedre vår kunnskap om den genetiske bidrag til de forskjellige aspektene av mus ultralyd kommunikasjon. Over en lang sikt, bør det gi ytterligere lys over noen nevrobiologiske grunnlaget for sosial kommunikasjon hos mennesker. Vi i dag tar sikte på å gi enkle protokoller for pålitelig lokke fram ultralyd lyder under utvikling og i voksen alder for både mannlige og kvinnelige mus i laboratoriet. Slike protokoller bør lette standardisering av opptakene for å sammenligne mer pålitelig UltrAsonic vokaliseringskommandoer utslipp mellom stammer og laboratorier. Det bør også legge til rette for etablering av slike opptak i laboratorier har ingen tidligere erfaring med muse ultralyd lyder opptak. Vi markerer også gjeldende muligheten til å kombinere ultralyd lyder data med detaljerte atferds data samlet inn samtidig i løpet av sosiale interaksjoner i voksen mus, for å få viktig informasjon om sosiale vansker så vel som på sammenheng med utslipp av ultralyd lyder. Slike analyser vil kaste nytt lys over organisering og funksjoner av muse ultralyd lyder. Til slutt, vi annonserer også muligheten til å dele ultralyd vokaliseringskommandoer opptak med hele forskningsmiljøet på mouseTube database (http://mousetube.pasteur.fr). Åpen tilgang til lydopptak data skal øke kunnskapen om mus ultralyd kommunikasjon ved å tillate forskere å sammenligne sine egne data med ultralyd lyder tatt opp i andre Laborier (med tilsvarende eller forskjellige stammer / protokoller), og / eller for å utfordre sine analysemetoder med filer tatt opp under forskjellige forhold.

Protocol

Etikk uttalelse: Prosedyrer som involverer dyr fag har blitt godkjent av Comité d'Ethique en eksperimentering animale (CETEA) n ° 89 ved Institut Pasteur, Paris.

1. Animal Forberedelse

  1. For å ta opp valpen isolasjon samtaler, få gravide kvinner fra musen stamme av interesse. Merk: Rase heterozygote menn og kvinner til å få minst 10 kull inkludert vill-type, heterozygot og knock-out valpene å oppnå robuste kontrolldyrene.
  2. Skaff to kategorier av voksne mus for å spille inn lyder i løpet av samme kjønn interaksjoner.
    1. Få minst 12 hanner eller 12 hunner av hver genotype som test mus fra belastningen av interesse (for å ta hensyn til individuelle variasjoner). Merk: Denne protokollen er godt tilpasset for voksne, men den kan justeres til yngel, med redusert isolasjon før forsøket 9. Denne testen fungerer for menn eller kvinner. Men unngå testing mannligs fra musestammer som viser en tydelig aggressiv fenotype i manns mannlig sosial interaksjon test.
    2. For å maksimere mengden affiliative interaksjoner, isolere forsøksdyr før forsøkene. Hus hanner individuelt for 3 uker (for å redusere aggressive interaksjoner til et minimum 14,17) og hunner for 3 dager (E. Ey, upubliserte data) for å øke deres sosiale motivasjon.
    3. Skaff menn eller kvinner fra stammer representant for genetisk bakgrunn av teststammen å bruke dem som nykommere (f.eks, som i samspill mus, se 3.1.3). For eksempel, hvis mutantstammen blir studert er generert på C57BL / 6J bakgrunn, bruk C57BL / 6J mus som nykommere. Beregn antall dyr som trengs, slik at hver av disse musene ikke brukes mer enn 2 ganger om dagen som ny-comer. Huse dem i grupper.
  3. Skaff to kategorier av voksne mus for å spille mannlige vokaliseringer i nærvær av en estrus kvinnelig.
    1. Skaffe på løst 12 kjønnsmodne hanner fra hver genotype av belastningen av interesse (for å ta hensyn til individuelle variasjoner). Merk: Hvis menn aldri har hatt erfaring med kvinner før, legg dem i individuelle bur og la dem tilbringe en natt med en kvinnelig to dager før testen for å øke deres motivasjon til å slippe ut ultrasoniske lyder 6.
    2. Skaff kjønnsmodne hunner fra bakgrunnen stamme av de registrerte hanner. For eksempel, hvis de mutante hannene som blir studert er blitt generert på den C57BL / 6J bakgrunn, bruk C57BL / 6J-hunner. Beregn antall kvinner som trengs, slik at hver av disse musene ikke brukes mer enn 3 ganger om dagen. Huse dem i grupper.

2. Pup Isolation Calls

  1. pup Identification
    1. Tre dager før spådd dagen du ble født, isolere gravide kvinner.
    2. Sjekk hunnene for fødsel hver morgen og hver kveld. Legg merke til den dagen du ble født som P0.
    3. Identifisere valpene på P1 hjelp langvarig pote tatoveringer (subkutan injeksjon av grønn tatovering lim med en 0,3 mm x 13 mm [30 G ½ "] p). Lag en kode med en, to, tre eller fire poter merket. Vær så raskt som mulig, for å minimalt forstyrre valpene, og legg dem tilbake i reiret så snart som mulig.
  2. Sett opp Cage til Record Pup Isolation samtaler.
    1. Bruk enten en self-made lydtett kammer (figur 1A) eller en enkel Styrofoam boks. Plasser et termometer inne i boksen for å overvåke temperaturen for hvert opptak. Sørg for at temperaturen holder seg mellom 18 ° C og 22 ° C.
    2. Plasser en mikrofon ved toppen (gjennom et hull i toppen av boksen). Juster høyden på mikrofonen slik at membranen i mikrofonen er 12-15 cm over bunnen av boksen der valpen vil ligge ned. Koble mikrofonen til lydkortet, og lydkortet til datamaskinen.
    3. For å justere forsterkningen til sound kort, foreta et opptak forsøk med en pup som ikke vil bli benyttet i forsøket. Sett valpen i samme forhold som i forsøket (se 2.3.1). Lukk døren. Juster forsterkningen på lydkortet, slik at det er på maksimal verdi (for å ha høyest amplitude mulig for lyder), men uten å overbelaste (sjekk på live spectrogram displayet på innspillingen programvare).
      Merk: Noen samtaler kan bli overbelastet hvis amplituden til flertallet av samtalene holdes på høyeste nivå mulig.
    4. Registrer forsterkningsnivået for hvert opptak, og ikke endre det mellom unger / kull / økter. Variasjoner i forsterkningen vil føre til unøyaktig samtale deteksjon og akustiske variabler tiltak med samme tersklene i analysene ved hjelp av automatisk gjenkjenning og målinger (se 05.01 til 05.04).

Figur 1
(A) Eksempel på en selvlaget lydisolert kammer for å registrere valp isolasjon samtaler.. (B) spektrogram av de ulike samtaletypene som brukes i dagens samtaletype klassifisering; se beskrivelse i tabell 1. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

  1. Gjennomføre opptak av valpen isolasjon kaller annenhver dag. Gjennomføre opptak i morgen for unger født i natt, og på ettermiddagen for valper født i løpet av dagen for å unngå kategorisering i samme aldersklasse valper med en halv dag av aldersforskjellen. Dette er mest merkbart for de helt unge stadier P2 og P4.
    1. Ta en valp i kullet. Plasser det så raskt og skånsomt som mulig i en plast mottaker vasket med etanol 10% og tørket (diameter: 9cm; høyde: 10 cm for å forhindre at eldre unger fra rømmer fra området som dekkes av mikrofonen). Sett mottakeren i underkant av mikrofonen.
    2. Lukke boksen så raskt og lydløst som mulig. Start innspillingen av pup ultralyd lyder i innspillingen programvare (16-bit format, 300 kHz samplingsfrekvens å fange opp lyd amplitude opp til 150 kHz med en høy kvalitet).
    3. Etter den nødvendige tiden på opptaket har gått (opp til 5 min), stoppe opptaket. Ta valpen ut av boksen. Skriv ned labb tatoveringer av valpen.
    4. Ta aksillær temperatur på valpen med en sonde-termometer. Mark valpen på ryggen med et lite punkt med en lukt-mindre penn (vann blekk), for å gjenkjenne lettere allerede registrert valpene i reiret når den neste blir valgt, og for å unngå å manipulere alle valpene hver gang en ny en er valgt. Sett valpen tilbake i reiret.
    5. Vask plast mottakeren og plasten som dekker bunnen med 10% etanol og tørk den godtfør du setter den neste valp inne.
    6. Velg neste valp i kullet og gjenta 2,3.
  2. Sjekk kroppsvekt, motorisk koordinasjon, negative geotaxis og utviklingstegn (for detaljer om redusert testbatteri kan du se metodedelene i Schmeisser et al. 18 og i Ey et al. 19) etter en periode med hvile av en time for å tillate valpene å komme seg etter den utmattende utslipp av ultralyd lyder. Bruke en annen kohort av dyr når hele utviklingsmessige testbatteri, for eksempel i Chadman et al. 20 og Scattoni et al. 21 er gjennomført.
  3. Gjenta disse innspillingene hver dag mellom P2 og P12 å karakterisere valpen vokal atferd og utvikling gjennom sine to første ukene av livet.

3. Ultralyd lyder i løpet av samme kjønn sosiale interaksjoner

  1. vokalisering Recordings
    1. Forbered en test bur (50 x 25 cm x 30 cm 3; Pleksiglass, 100 lux [lav intensitet hvitt lys]) rengjøres med såpevann, tørket og fylt med 2 cm friskt sengetøy i lydtett kammer.
      1. Plasser mikrofonen slik at lyder slippes ut fra alle hjørner av buret kan registreres. Fest mikrofonen i et hjørne av test bur (enten på buret eller på stativ) og justere vinkelen mikrofon-bur bunnen for å dekke buret hele overflaten.
        Merk: Ultrasounds er svært retningsbestemt.
      2. Plassere et videokamera på toppen av lydtett kammer for å fange opp hele overflaten av testburet.
        Merk: Kontroller at mikrofonen ikke gjemmer seg i et hjørne av test bur på video.
      3. Før testing, justere gevinst på lydkortet med en ekstra mann og en ekstra kvinne som ikke vil bli brukt i forsøket senere. Sette disse dyrene i testburet i opptakskammeret. Juster gain nivå på lydkortet for å maksimere amplitude av de registrerte lyder but for å minimere overbelastning sett i live spectrogram displayet på innspillingen programvare.
        Merk: Gevinsten er avhengig av avstanden mellom mikrofonen og vocalizing dyrene.
    2. Introduser dyret som skal testes (mann eller kvinne, det vil bli kalt "beboer") i testen bur på friskt sengetøy. La den tilvenne på prøve bur i lydtett kammer i 20 min for å maksimere sin interesse for det ukjente conspecific introdusert i 3.1.3.
    3. Etter dette tilvenning tid, introdusere 2. dyret for interaksjon (mann eller kvinne, samme kjønn som beboer, men ulike øret merker / labben tatovering for å identifisere dem senere, det vil bli kalt "ny-comer").
      1. Start opptak ultrasoniske lyder (16-bit format, 300 kHz samplingsfrekvens å fange opp lyd amplitude opp til 150 kHz med en høy kvalitet) og video for å fange innføringen av ny-comer i testen buret. Start opptak ultrasonic vocalizations under tilvenning (beboer alene) om en sammenligning mellom baseline nivå av vokalisering utslipp under bur leting og sosial interaksjon er nødvendig.
      2. Synkroniser manuelt / visuelt lyd- og bildeopptak ved å trykke på den tiden klokke ( "bip" lyd nær mikrofonen) nøyaktig når bakpotene av den nye comer mus berører bakken.
      3. La de to dyrene samhandle for ønsket tid (for eksempel 4 min, en varighet tilstrekkelig til å samle nok ultralyd lyder).
    4. Sett beboer og den nye comer tilbake i sine respektive hjemme bur. Tøm brukt sengetøy fra testen bur, vaske det med såpe vann og tørk den med tørkepapir. Sett friskt sengetøy og legg den tilbake i lydtett kammer for neste test.

4. Mann lyder Under Interaksjon med en Estrus Kvinne

  1. Tidlig om morgenen den dagen testehanner, ta vaginalutstryk fra hver hunn å bestemme sin seksuelle status i brunst.
    1. Hold kvinnelige i halen og vedlikeholde henne på bur rutenett. Bruk en pipette til å skylle vagina flere ganger med 20 mL PBS (dvs. injisere og minnes de samme 20 mL PBS flere ganger). Minnes den 20 mL PBS med samme pipettespissen. Bruke sterilt PBS, for å unngå enhver infeksjon hvis hunner som skal testes i flere påfølgende dager.
    2. Spre PBS som inneholder suspensjon av vaginale celler på et lysbilde. Sett fire prøver på ett lysbilde (identifisere enkeltpersoner ved siden av raset med en blyant). La lysbilder tørke før du utfører farging.
    3. Arbeid under laboratorium avtrekkshette.
      1. Forbered ett bad av ren May-Grünwald, ett bad fosfatbufferløsning (0,1 M) og ett bad av Giemsa R (1/20 i fosfatbufferløsning).
      2. Sett lysbildene i badekaret av ren May-Grünwald i 3 min, deretterskylle dem i badet av fosfatbufferløsning i 1 minutt og endelig overføre dem i 10 minutter i badet med Giemsa R (1/20 i fosfatbufferoppløsning).
      3. Etter at skylle skinnene igjen i badet av fosfatbufferløsning i 10 sekunder og la dem tørke.
    4. Undersøk de fargede lysbilder under mikroskopet. Kvinner som kan brukes i løpet av dagen er de som prøver stede bare store forhornede epitelceller (uten kjerne, farget i blått, full brunst).
  2. Sett hanner på testrommet i minst 30 minutter før testing dem.
  3. vokalisering Recordings
    1. Gjenta 3,1 om nødvendig.
    2. Introduser hannen som skal testes (på friskt sengetøy). La ham tilvenning til testburet i den lydtett kammer i 10 min.
    3. Etter dette tilvenning tid, innføre en kvinne i estrus (blant de utvalgte fra farging seg).
      1. Start opptak ultrasoniske lyder og videofor å fange innføring av den kvinnelige i testburet. Start opptak ultrasoniske lyder under tilvenning (mann alene) om en sammenligning mellom baseline nivå av vokalisering utslipp under bur leting og sosial interaksjon er nødvendig.
      2. Synkroniser manuelt / visuelt lyd- og bildeopptak ved å trykke på den tiden klokke ( "bip" lyd nær mikrofonen) nøyaktig når bakpotene i hunnmus berører bakken.
      3. La de to dyrene samhandle for ønsket tid (for eksempel 4 min, en varighet tilstrekkelig til å samle nok ultralyd lyder).
    4. Sett den mannlige og den kvinnelige tilbake i sine respektive hjemme bur. Tøm brukt sengetøy fra testen bur, vaske det med såpe vann og tørk den med tørkepapir. Sett friskt sengetøy og legg den tilbake i lydtett kammer for neste test.
      Merk: Det er optimalt å bruke hver estrus kvinnelig bare én gang hver dag (men om nødvendig kan detbrukes opp til 3 ganger på den samme dag, men ikke i en rad).

5. Variabler som skal trekkes ut

  1. Forbered lydfiler for analysene. Merk: Fremgangsmåten nedenfor er spesifikk for A visoft SASLab Pro, og kan endres i henhold til programvaren som brukes.
    1. Skjær filene slik at de starter nøyaktig på den "bip" av tiden se, og ender etter ønsket varighet (5 min for valpen innspillinger, 4 min for voksne opptak).
    2. Filtrere ut amplitude under 30 kHz ved hjelp av et high-pass filter (Edit> Filter> FIR Time Domain Filter; High Pass med 30 kHz frekvens avskåret). Bruk gruppebehandling for å filtrere alle filer av interesse (Handlinger> Batch Processing> FIR filter).
    3. Identifiser hver ultralyd vokalisering ved å merke dem med programvaren.
      1. Bruk automatisk gjenkjenning for pup opptak (Verktøy> Etiketter> Opprett deletikettene fra kurve hendelser). Juster terskelen, holdetid og margin feller den mest nøyaktige deteksjon. sjekke manuelt påvisning og juster etiketter om nødvendig (anbefales).
      2. Bruk visuell deteksjon (manuell innsetting av etiketter) for voksne innspillinger med bakgrunnsstøy (velg de lyder, høyreklikk, og sett deletiketten fra markeringen).
    4. Lag spektrogram. Aktiver parametermålinger automatisk (Verktøy> Automatiske parametermålinger> Automatiske parametermålinger Sett opp).
    5. Sjekk "Aktiver automatiske målinger", den "Compute parametere fra hele spektrogram", og "Automatisk oppdatering" bokser. Velg "Element separasjon": interaktivt (deletikettene).
    6. Kryss av for å beregne de ønskede tidsmessige parametere (varighet element, Intervall, start / slutt tid) og spektrum baserte parametre (Peak frekvens), og plasseringen av målinger (Start av element, End of element, Mean, Max, Min) .
    7. Kopier målingene og lime innm i et regneark.
      Merk: For opptak utført med voksne, kan målinger av spektrum-baserte parametre være umulig på grunn av bakgrunnsstøy. Bruke manuelle målinger av peak frekvens ved å klikke på de forskjellige frekvensverdiene direkte på spektrogram og lime verdiene manuelt i en tabell.
  2. Bestem takst, dvs. antall samtaler per minutt ved først å bestemme antall lyder som slippes ut (totalt antall etiketter). Deretter beregne takst ved å dividere totalt antall lyder registrert av varighet (i minutter) av filen.
  3. Bestem tidsmessig organisering, dvs. fordeling av tidsintervaller mellom samtaler for å bestemme rekkefølgen organisasjon.
    1. Beregn tidsintervallene mellom slutten av vokalisering n og starten av vokalisering n + 1 med start / sluttid for hver etikett.
    2. Etablere fordelingstetthet av tidsintervallene mellom Ultralydic lyder.
  4. Bestem samtale repertoar, dvs. definere anropstypene som finnes i opptaket. Bruk eksempel på klassifisering presentert i tabell 1 og figur 1B.
    1. Ved merking hver vokalisering i 5.1.3, skrive navnet på ringetypen i etiketten.
    2. Beregne det eksakte antallet og andelen av hver samtaletype for å bygge vokal repertoar.
  5. Bestemme akustiske egenskaper for hver stemmebruk, dvs. varighet, peak frekvens (dvs. frekvens med den høyeste amplitude) ved begynnelsen og slutten av samtalen, maksimum og minimum topp frekvens, og at frekvens hvis automatisk måling er mulig (figur 1B) .
    1. Bruk den automatiske parametermålinger funksjon i programvaren for å måle automatisk varighet, peak frekvens egenskaper (f.eks, start, slutt, gjennomsnittlig, maksimum, minimum) i pup innspillinger. Bruk varigheten av etiketten som varigheten av den vocalization for voksne opptak. Mål manuelt på spectrogram vinduet peak frekvens egenskaper (f.eks, start, slutt, maksimum, minimum).
  6. Par ultralyd vokalisering data og sosiale interaksjonsdata (MiceProfiler plugin fra ICY plattform 22).
    1. Sørg for å synkronisere så nøyaktig som mulig lyd og video-opptak som beskrevet i protokollen.
    2. Kode video av den sosiale interaksjonen med Mus Profiler Tracker plugin av det iskalde plattform som beskrevet i de Chaumont et al. 22. Start sporing nøyaktig når bakpotene av introduserte dyret berører bakken.
    3. Last den kodede videofilen og den tilsvarende xml fil (generert av Mice Profiler Tracker) i Mus Profiler Video Label Maker plugin av det iskalde plattform som beskrevet i de Chaumont etal. 22.
      Merk: Mus Profiler Video Label Maker programtillegget vil automatisk koble videofilen og tekstfilen som genereres fra analysen av lydfilen hvis de har samme navn (se: http://icy.bioimageanalysis.org/plugin/Mice_Profiler_Video_Label_Maker) .
    4. Etter å ha sjekket at musen skalaen er riktig, klikker du på "Create USV statistikk" for hver fil for å få antallet og andelen av lyder som slippes i løpet av hver sosial begivenhet i en separert fil.

6. Laster opp filer på mouseTube Database

  1. Sørg for at filene er på en lagringsserver som kan nås fra utenfor institusjon.
    Merk: Servere vert i enkelte institusjoner med høyt sikkerhetsnivå vil trenge en bestemt konfigurasjon for å være tilgjengelig for folk kobler fra utenfor institusjon.
  2. Gå til mouseTube nettsted (http://mousetube.pasteur.fr). Logg inn (logg etnd passord er knyttet til hver bruker av administratorer).
  3. Sjekk om musestamme registrert allerede finnes i mouseTube databasen ved å klikke på "Stammer" -knappen. Hvis ikke, spør administratorer å lage den.
  4. Lag fag ved hjelp av "Fag> Create" -knappen. Angi identifikasjonskoder av dyrene registrert. Samle dem i grupper for å lette senere gjenfinning av data.
  5. Skriv inn beskrivelsen av protokollen som brukes til å registrere ultralyd lyder ved hjelp av "Protokoller> Create" -knappen.
  6. Opprett et eksperiment for hvert opptak søkt ved hjelp av "Eksperimenter> Create" -knappen. Angi protokollen, den gruppen av personer som har blitt registrert, maskinvare og programvare som brukes og deres særegenheter.
    Merk: Eksperimentet samler alle metadataene som tilsvarer de vokaliseringskommandoer filer.
  7. Lag link til vokaliseringskommandoer filer ved hjelp av "Vocalisations> Opprett & #34; knapp. Velge eksperimentet i listen. Kopier og lim inn nettadressen til vokalisering fil (denne koblingen begynner med http: // ...) i det tilsvarende feltet i "Files for å koble" kolonnen. Validere oppføringer ved å klikke på knappen "Opprett en kobling mellom mouseTube og filer".
    Merk: Det er ikke nødvendig å fylle hver boks for hver fil samtidig.
  8. Om nødvendig, endre linkene angitt når som helst, og legge til detaljer i "Merknader" -delen. Ikke nøl med å skrive ned notater for å gi flere detaljer. For eksempel, hvis en kobling mot en videofil som ble spilt inn samtidig med lydfilen er inngått, kan dette spesifiseres i "Notes".

Representative Results

Med dagens protokoller, preget vi vokal oppførselen til mus mangler ProSAP1 / Shank2, et gen assosiert med autismespekterforstyrrelser (ASD) 23-25. ASD er preget av underskudd i sosial kommunikasjon og stereotyp atferd 1. Våre Shank2 - / - mus viste hyperaktivitet, økt angst og atypisk vokal kommunikasjon 18,26. Ja, vi bemerket at Shank2 - / - mus viste en atypisk utviklingsprofil i sine utslipp rate av valp isolasjon samtaler i sammenligning med den typiske omvendt U-formet kurve i sine villtype kullsøsken Shank2 -. / - Mus viste en økt takst på P4 og redusert takst på P6 i sammenligning med sine villtype kullsøsken (figur 2). Vi har også observert en redusert takst i kvinnelige interaksjoner som involverer en Shank2 - / - kvinne i denne sammenlikningenn med interaksjoner som involverer en vill-type kull (figur 2). Vi undersøkte repertoar av de 5 ulike samtale kategorier. Det viste seg å være forskjellig mellom unger (for eksempel her P2, P6 og P10) og voksne (figur 3). Genotype relaterte forskjeller er signifikante for det meste i voksen alder. Under sosiale interaksjoner som involverer voksne Shank2 - / - menn eller kvinner med en C57BL / 6N kvinne, ble flere korte samtaler og ustrukturerte samtaler registreres i sammenligning med interaksjoner som involverer sine villtype kullsøsken (Figur 3D og E). Mindre kompliserte samtaler og frekvens hopper samtaler ble også tatt opp under samhandling med en C57BL / 6N kvinnelig involverer voksen Shank2 - / - kvinner sammenlignet med interaksjoner som involverer Shank2 + / + kvinner (Figur 3E). Til slutt, vi også målt manuelt akustiske variabler. Det var ingen signifikant genotype relatert forskjell during utvikling. I kontrast, varigheten av samtaler som er tatt under interaksjoner med voksen Shank2 - / - kvinner var kortere enn de som er registrert i løpet av interaksjoner som involverer sine villtype kullsøsken (Figur 4A). Vi fremhevet også at peak frekvens av ultralyd lyder økte i løpet valp utvikling uten betydelig genotype relatert forskjell 26. Under interaksjoner som involverer Shank2 - / - menn eller kvinner med C57BL / 6N kvinnelig, ultralyd lyder hadde en lavere topp frekvens i forhold til samtaler som er tatt under interaksjoner som involverer sine villtype kullsøsken (figur 4B).

I tillegg protokoll også lov til å studere sammenheng med utslipp av ultrasoniske lyder ved å kombinere data fra lydopptak til atferdsdata hentet fra MiceProfiler (ICY programvare, Institut Pasteur, Paris). For eksempel, i kvinne kvinnelig interaksjoner, ble de fleste ultralyd lyder slippes ut når dyrene var i kontakt og mer spesifikt beboer sniffing den nye comer er ano-genital regionen, eller i det minste å være beboer bak den nye comer. Mus også slippes mange ultralyd lyder når beboer nærmet ny-comer (Figur 5, øvre panel). Mindre vocalizations ble registrert når beboer Shank2 - / - mus var i fysisk kontakt med den nye comer (f.eks snuse i ano-genital regionen den nye comer) enn når beboer var en villtype mus. Mindre vocalizations ble utløst når beboer bak den nye comer var en Shank2 - / - mus enn når det var en villtype mus. Flere lyder ble også registrert når den nye comer var i synsfeltet av beboer mus, og mer så i villtyper enn i mutantene (figur 5, nedre panel).

s = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1"> Figur 2
Figur 2:. Utslipp rate av ultralyd lyder under utvikling og i voksen hann og hunn Shank2 - / - mus og villtype kullsøsken Ring frekvensen av valpene (annenhver dag fra P2 til P12, n = 18-19 Shank2 + / +, n = 15-16 Shank2 - / -) og voksne under manns estrus kvinnelige interaksjoner (n = 15 Shank2 + / +, n = 16 Shank2 - / -) og kvinne-kvinne interaksjoner (n = 15 Shank2 + / +, n = 13 Shank2 - / -) på villtype mus (venstre panel) og Shank2 - / - mus (høyre panel). Data er presentert som gjennomsnitt +/- SEM og individuelle punkter (ikke-sammenkoblet Wilcoxon tester: * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001).ge.jpg "target =" _ blank "> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 3
Figur 3:. Vocal repertoar av Shank2 - / - mus og villtype kullsøsken proporsjoner av de fem ulike samtaletypene som sendes ut av P2 unger (A, n = 20 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / -), P6 valper (B; n = 19 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / -), P10 unger (C; n = 20 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / -), voksne menn med en løpetid kvinnelig (D ; n = 16 Shank2 + / +, n = 16 Shank2 - / -) og voksne kvinner med en annen kvinne (E; n = 15 Shank2 + / +, n = 13 Shank2 - / -) på villtype mus (venstre panel) og Shank2 - / - mus (høyre panel). Data er presentert som gjennomsnitt +/- SEM og individuelle poeng (chi-kvadrat testene: * p <0,05, ** p <0.01, *** p <0,001). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 4
Figur 4:. Akustiske variabler hentet fra ultralyd lyder i Shank2 - / - mus og villtype kullsøsken (A) Varighet av alle anropstyper skamme slippes ut av P2 unger (n = 20 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / - ), P6 unger (n = 19 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / -), P10 unger (n = 20 Shank2 + / + Shank2 - / -), voksne menn med en løpetid kvinnelige (n = 16 Shank2 + / +, n = 16 Shank2 - / -) og voksne kvinner med en annen kvinne (n = 15 Shank2 + / +, n = 13 Shank2 - / -) på villtype mus (venstre panel) og Shank2 - / - mus (høyre panel). (B) Maksimal toppfrekvens målt på alle anropstyper vist i P2 unger, P6 unger, P10 unger, voksne menn med en estrus kvinnelig og voksen kvinne med en annen kvinne (samme Ns som ovenfor). Data er presentert som gjennomsnitt +/- SEM og enkelte punkter (ikke-paret Wilcoxon-tester: * p <0,05, ** p <0.01, *** p <0,001). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 5
Figur 5: Sammenheng. s av utslipp av mus ultralyd lyder i kvinnedominerte kvinnelig voksen sosiale interaksjoner Andel av ultrasoniske lyder slippes ut av parene som involverer en Shank2 + / + med en C57BL / 6N mus (n = 16, A) og parene som involverer en Shank2 - / - med en C57BL / 6N mus (n = 13, B) i løpet av de følgende typer atferds hendelser (red: beboer, grønn: ny-comer): sosiale kontakter, oro-oral kontakt, ano-genital sniffing fra beboer mus, anodisering genital sniffing fra den nye comer mus, beboer bak ny-comer, ny-comer bak beboer, immobilitet av beboer, immobilitet av ny-comer, tilnærming fra beboer og flykte fra den nye comer, tilnærming fra den nye comer & flykte fra beboer, tilnærming og flykte fra beboer, tilnærming og flykte fra den nye comer, beboer etter ny-comer, ny-comer i synsfeltet av beboer, beboer i synsfeltet av ny-comer. Dataene er pmislikt fordi gjennomsnitt +/- SEM og individuelle punkter (ikke-sammenkoblet Wilcoxon tester: * p <0,05, ** p <0,01). Upubliserte data. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

anropstyper Beskrivelse
kort varighet ≤5 msek og frekvensområdet ≤6.25 kHz
enkel Varigheten> 5 msek og frekvensområdet ≤6.25 kHz (flat), eller frekvensmodulasjon i bare en retning (oppover eller nedover) med frekvensområdet> 6,25 kHz
komplekse frekvens modulasjoner i mer enn en retning, og frekvensområde> 6,25 kHz (modulert), eller inkludering av en eller flere ytterligere frekvens component (harmoniske eller ikke-lineære fenomener, men ingen metning), men ingen begrensning i frekvensområdet (kompleks)
frekvenshopp inkludering av ett hopp (en frekvens hopp) eller flere hopp (frekvens hopp, andre) i frekvens uten tidsgap mellom de påfølgende frekvenskomponenter, med (blandet) eller uten støyende del i ren tone samtale
ustrukturert ingen ren tone komponent identifiserbare; "støyende" samtaler

Tabell 1:. Kjennetegn på fem typer mus ultralyd lyder Eksempler på kriterier for varighet, frekvensområde, frekvens modulasjoner og frekvens hopp brukt til å bestemme 5 forskjellige samtaletyper innenfor mus ultralyd lyder.

Discussion

Protokollen presenteres her gir standardiserte og pålitelige måter å samle muse ultralyd lyder i laboratoriet. Disse meget begrensede situasjoner presentere fordelen av standardisering. De brukes med hell til å sammenligne stammer eller genotyper innen stammer 18,19,26,27. Som presentert i de representative resultater, disse metodene tillater identifisering av atypisk sosial kommunikasjon i mus muterte for Shank2, et gen assosiert med autismespekterforstyrrelser. Sammenligninger mellom musestammer, mellom ulike kontekster eller mellom laboratorier vil bli utløst av tilgjengeligheten av større datasett på mouseTube database. Dette verktøyet bør øke studier på mus med ultralyd lyder ved at multivariate analyser.

Protokollen beskrevet her, er optimalisert for å teste mus av forskjellige genotyper i en stamme, som det er gjort i de fleste studier modellere den genetiske contribution til nevropsykiatriske lidelser. Det anbefales å eksperimentelt designe hver undersøkelse å ha de beste kontrollene mulig. Faktisk kan søppel effekter maskere eller kunstig blåse genetiske effekter 28,29. Det er derfor tilrådelig å inkludere kull kontroller for hver genotype. Avl heterozygote foreldre bør derfor foretrekkes, fordi det vil tillate riktig matching av muterte og kontroll mus i et kull. Dette begrunner pote tatovering merking av alle valpene (blindet for genotype) for å spore individer gjennom opptakene hver dag. Genotyping utføres ved avvenning, ved å ta haleprøver. Når du tar opp valpen isolasjon samtaler fra P2 på, vil vi ikke anbefale å ta halen prøver allerede i unger, siden denne operasjonen omfatter supplerende manipulasjon og stress svært nær i tid til et opptak.

Protokollene som foreslås her å lokke fram ultralydvokaliseringer hos voksne tillater ikke entydig identifisering av emitter av lyder. Dette forklarer hvorfor vi manipulere motivasjon av forsøksdyr. Faktisk er testmusene isolert og ikke den ny-comer og testdyrene tilvenne for en lang tid på prøve buret i løpet av samme kjønn interaksjoner. I mann-kvinne interaksjoner, er det innført kvinnelig ikke isolert og testen mannlige habituates for kortere tid siden motivasjon kan være høyere i denne seksuell sammenheng. Disse manipulasjoner av motivasjon bør maksimere sannsynligheten for test musen emitting de lyder og ikke innført ett. For å ta opp mannlige ultralyd lyder i en seksuell sammenheng, kan en enkel bomullsdott med fersk (dvs. ikke frosne) urin fra en estrus kvinnelig også bli innført i buret 30. Denne metoden gjør at tildeling av ultrasoniske lyder på prøve hannhund med 100% sikkerhet, men det hindrer innsamling av noen spesifikk informasjon om den faktiske sosiale sammenheng med utslipp av disse lyder. Derfor foretrekker vi den protokollen,l beskrevet her (med et fritt bevegelige brunst kvinne). Vi anbefaler også å alltid bruke innført mus fra samme stamme når du tester mus fra en mutant belastning og for å analysere dataene som et par mus vocalizing. En fersk studie fremmer bruk av triangulering å lokalisere emitter 31. I denne studien ble kvinner funnet å også avgir ultralyd lyder under møter med en mannlig. Dette kan forklares ved det faktum at de ble isolert i minst to uker før innspillingen. Generalisering av bruken av triangulering foreslått i denne studien bør likevel tillate identifikasjon av emitteren av de lyder i de fleste tilfeller om video-opptak er riktig synkronisert.

Isolasjons samtaler fra valpene er tatt under utvikling blir ikke forstyrret av bakgrunnsstøy fra sengetøy. Vanligvis en automatisk analyse fungerer veldig bra for å trekke ut de viktigste variablene. I kontrast, lyder spilt inn fra voksne er disturbed av bakgrunnsstøy fra dyrene beveger seg i sengetøy. Automatisk analyse kan mislykkes, og derfor bør brukes manuell analyse. Likevel legger sengetøy i testen bur bør gi forhold som er mindre stressende for dyrene enn nakne jord (som mus ikke liker). Ytterligere innsats i samfunnet er konsentrert på å forbedre automatisk registrering av ultrasoniske lyder under ulike forhold, selv de som innebærer bakgrunnsstøy. For eksempel lar stemmen programvare for å analysere lyder som hadde blitt valgt for fravær av bakgrunnsstøy 32 manuelt. I denne programvaren, er utvinning av de akustiske variablene automatisk, men trenger den innledende manuelt valg.

Det skal bemerkes at den interindividuell variasjon er meget viktig i den vokale oppførselen til mus. For eksempel er det takst av voksne menn i nærvær av en estrus kvinnelig svært fordelt (Figur 1). Vi suggest disse standardiserte protokoller for å frembringe ultrasoniske vokaliseringer allerede å begrense variasjonen i forbindelse med den eksperimentelle sammenheng. Likevel ønsker vi å påpeke viktigheten av å presentere ikke bare gjennomsnitt og SEM for data, men viktigst de enkelte punktene i prøver av liten størrelse 33. Det er også svært relevant - om ikke nødvendig - for å spille minst 12 personer i hver gruppe / genotype å samle representative data. I mange tilfeller bør den inter-individuelle variabiliteten ikke skjules (vanligvis det ikke kan være), og det kan være av stor betydning for å identifisere enkeltpersoner som bærer genetisk mutasjon studert, men ikke viser noe atypisk fenotype. Slike personer kan gi hint om kompensasjon, som kan åpne nye veier for behandling av genetiske sykdommer.

I de fleste atferds karakterisering av musemodeller for nevropsykiatriske lidelser, vokal atferd og sosiale kontakter er vurdereed hverandre (for eksempel 19,27,34,35). Nye analysemetoder nå gi en halvautomatisk detaljert karakterisering av de sosiale arrangementer og sekvenser av hendelser i løpet av en interaksjon (ved hjelp MiceProfiler for eksempel) 36, samt muligheten til å kombinere denne analysen med data fra lydopptak. Den største fordelen med denne metoden er å gi et helhetlig syn på sosial kommunikasjon i musemodeller av ASD, mer presist identifisere hvilke aspekter av sosial kommunikasjon er berørt. I den foreliggende protokoll synkroniseringen er fortsatt manuell, men dette kan forbedres ved å utløse videoopptak gjennom lydopptak programvare. Denne typen analyser bør bli standard for å gi et mer helhetlig syn på sosial kommunikasjon underskudd i musemodeller av nevropsykiatriske lidelser. I tillegg har opp til nå, stemmesignaler blir stort sett analysert fra emitter side (dvs. testene er bygget for å favorisere utslipp av vocal signaler ved testet mus, som i dagens protokoller). Fokuset skal nå også settes på mottakeren av disse signalene, for å bedre identifisere funksjonene til disse akustiske signaler. Dette bør gjøres ved å evaluere også atferden til ny-comer mus i dagens protokoller hos voksne (med MiceProfiler for eksempel) 36, ved hjelp av avspillings eksperimenter 16, eller ved å sette opp nye protokoller. Faktisk dagens protokoller gir svært begrenset situasjoner som kanskje ikke reflekterer den nøyaktige etologiske forhold vokalisering utslipp i mus. Den spontane utslipp av ultralyd lyder må bedre karakterisert ved hjelp av kontinuerlig lyd- og videoopptak for å kaste mer lys over den spontane vokale atferd mus.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
needles 0.3mm x 13 mm [30 G 1/2"] BD Microlance 304000 -
green tattoo paste Ketchum Manufacturing Inc., Ottawa, Canada 329AA -
thermometer Fisherbrand, Waltham, USA 4126 (W255NA) -
self-made soundproof chamber (pups) Institut Pasteur, Paris - acoustic foam + plexiglas; inside dimensions (W x H x D): 32 cm x 33 cm x 32 cm
small surface thermister + single probe thermocouple Harvard Apparatus 599814 + 601956 -
smell-less pen for instance: Giotto - ink made with water, washable: these pens are designed for babies
Ethanol absolute (100%) Sigma Aldrich,  Saint-Quentin Fallavier, France 24103 diluted 1/10
Condenser ultrasound microphone Avisoft-Bioacoustics CM16/CMPA Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany #40011 furnished with extension cables by the Avisoft company
Ultrasound Gate 416H Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany #34163 sound card
Avisoft Recorder USGH Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany #10301; #10302 recording software for Windows Vista, 7 and 8
Avisoft SASLab Pro Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany #10101, 10111; #10102, 10112;  Windows 10, 8.1, 8, 7 or Vista including Intel-based Apple Macintosh running Boot Camp, Parallels or similar virtualization software.
Laptop or Apple Macintosh running Boot Camp - - running Windows 10, 8.1, 8, 7 or Vista; for the Apple Macintosh, Boot Camp is preferred to virtualizations softwares such as Parallels due to memory constraints
plastic recipient (pup recordings) Lock & Lock, Chatswood, USA HPL932D Lock & Lock Stackable Airtight Container Round 700 ml; use without the cover; dimensions: 9 cm diameter, 10 cm height
PBS 1x (pH = 7.4) Gibco (Life Technologies) 10010-023 -
slides Menzel-Gläser, Thermo Scientific J1800AMNZ Superfrost Plus
May-Grünwald solution 500 ml RAL Réactifs, Martillac, France 320070-0500 -
Giemsa R 500 ml RAL Réactifs, Martillac, France 720-1107 diluted 1/20 in phosphate buffer solution
phosphate buffer solution (self-made) - - pH = 7, 0.1 M: 39 ml NaH2PO4 0.2 M + 61 ml Na2HPO4 0.2 M + 100 ml H2O (final volume: 200 ml)
test cage Institut Pasteur, Paris - 50 x 25 cm, 30 cm height; Plexiglas
self-made soundproof chamber (adult recordings) Institut Pasteur, Paris - acoustic foam + PVC; inside dimensions (W x H x D): 66 cm x 90 cm x 46 cm
video camera From Noldus Information Technologies, Wageningen, The Netherlands - high-resolution CamTech Super-Hi-Res video camera; 25 fps 
EthoVision XT Noldus Information Technology, Wageningen, The Netherlands http://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt video acquisition software
Mice Profiler Tracker plugin from the ICY platform Bio Image Analysis, Institut Pasteur, Paris http://icy.bioimageanalysis.org/plugin/Mice_Profiler_Tracker tracking software to analyse behavioral events during social interactions

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. American Psychiatric Association. Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, Fifth Edition (DSM-V). (2013).
  2. Ey, E., Leblond, C. S., Bourgeron, T. Behavioral Profiles of Mouse Models for Autism Spectrum Disorders. Autism Res. 4, (1), 5-16 (2011).
  3. Bourgeron, T., Jamain, S., Granon, S. Animal Models of Autism - Proposed Behavioral Paradigms and Biological Studies. Contemporary Clinical Neuroscience: Transgenic and Knockout Models of Neuropsychiatric Disorders. 151-174 (2006).
  4. Scattoni, M. L., Crawley, J., Ricceri, L. Ultrasonic vocalizations: A tool for behavioural phenotyping of mouse models of neurodevelopmental disorders. Neurosci. Biobehav. Rev. 33, (4), 508-515 (2009).
  5. Portfors, C. V., Perkel, D. J. The role of ultrasonic vocalizations in mouse communication. Cur. Opin. Neurobiol. 28, 115-120 (2014).
  6. Arriaga, G., Zhou, E. P., Jarvis, E. D. Of mice, birds, and men: the mouse ultrasonic song system has some features similar to humans and song-learning birds. PLOS ONE. 7, e46610 (2012).
  7. Hammerschmidt, K., Schreiweis, C., Minge, C., Pääbo, S., Fischer, J., Enard, W. A humanized version of Foxp2 does not affect ultrasonic vocalization in adult mice: Ultrasonic vocalization of "humanized" FoxP2 mice. Genes Brain Behav. (2015).
  8. Portfors, C. V. Types and functions of ultrasonic vocalizations in laboratory rats and mice. J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 46, 28-34 (2007).
  9. Panksepp, J. B., et al. Affiliative Behavior, Ultrasonic Communication and Social Reward Are Influenced by Genetic Variation in Adolescent Mice. PLOS ONE. 2, (2007).
  10. Zippelius, H. -M., Schleidt, W. M. Ultraschall-Laute bei jungen Mäusen. Naturwissenschaften. 43, 502 (1956).
  11. Whitney, G., Coble, J. R., Stockton, M. D., Tilson, E. F. Ultrasonic emissions: do they facilitate courtship of mice. J. Comp. Physiol. Psychol. 84, 445-452 (1973).
  12. Holy, T. E., Guo, Z. S. Ultrasonic songs of male mice. PLOS Biol. 3, 2177-2186 (2005).
  13. Maggio, J. C., Whitney, G. Ultrasonic vocalizing by adult female mice (Mus musculus). J. Comp. Psychol. 99, 420-436 (1985).
  14. Chabout, J., et al. Adult Male Mice Emit Context-Specific Ultrasonic Vocalizations That Are Modulated by Prior Isolation or Group Rearing Environment. PLOS ONE. 7, (1), e29401 (2012).
  15. Hammerschmidt, K., Radyushkin, K., Ehrenreich, H., Fischer, J. Female mice respond to male ultrasonic "songs" with approach behaviour. Biol. Lett. 5, 589-592 (2009).
  16. Wöhr, M., Moles, A., Schwarting, R. K. W., D'Amato, F. R. Lack of social exploratory activation in male -opioid receptor KO mice in response to playback of female ultrasonic vocalizations. Soc. Neurosci. 6, 76-87 (2011).
  17. Granon, S., Faure, P., Changeux, J. -P. Executive and social behaviors under nicotinic receptor regulation. Proc. Nat. Acad. Sci. 100, (16), 9596-9601 (2003).
  18. Schmeisser, M. J., et al. Autistic-like behaviours and hyperactivity in mice lacking ProSAP1/Shank2. Nature. 486, (7402), 256-260 (2012).
  19. Ey, E., et al. Absence of Deficits in Social Behaviors and Ultrasonic Vocalizations in Later Generations of Mice Lacking Neuroligin4. Genes Brain Behav. 11, 928-941 (2012).
  20. Chadman, K. K., et al. Minimal Aberrant Behavioral Phenotypes of Neuroligin-3 R451C Knockin Mice. Autism Res. 1, 147-158 (2008).
  21. Scattoni, M. L., Gandhy, S. U., Ricceri, L., Crawley, J. N. Unusual Repertoire of Vocalizations in the BTBR T plus tf/J Mouse Model of Autism. PLOS ONE. 3, (2008).
  22. De Chaumont, F., Coura, R. D. -S., et al. Computerized video analysis of social interactions in mice. Nat. Methods. 9, 410-417 (2012).
  23. Leblond, C. S., et al. Genetic and Functional Analyses of SHANK2 Mutations Suggest a Multiple Hit Model of Autism Spectrum Disorders. PLOS Genet. 8, (2), e1002521 (2012).
  24. Berkel, S., et al. Mutations in the SHANK2 synaptic scaffolding gene in autism spectrum disorder and mental retardation. Nat. Genet. 42, 489-491 (2010).
  25. Pinto, D., et al. Functional impact of global rare copy number variation in autism spectrum disorders. Nature. 466, 368-372 (2010).
  26. Ey, E., et al. The autism ProSAP1/Shank2 mouse model displays quantitative and structural abnormalities in ultrasonic vocalisations. Behav. Brain Res. 256, 677-689 (2013).
  27. Scattoni, M. L., Ricceri, L., Crawley, J. N. Unusual repertoire of vocalizations in adult BTBR T plus tf/J mice during three types of social encounters. Genes Brain Behav. 10, 44-56 (2010).
  28. Zorrilla, E. P. Multiparous species present problems (and possibilities) to developmentalists. Dev. Psychobiol. 30, (2), 141-150 (1997).
  29. Lazic, S. E., Essioux, L. Improving basic and translational science by accounting for litter-to-litter variation in animal models. BMC Neurosci. 14, (1), 37 (2013).
  30. Hoffmann, F., Musolf, K., Penn, D. J. Freezing urine reduces its efficacy for eliciting ultrasonic vocalizations from male mice. Physiol. Behav. 96, 602-605 (2009).
  31. Neunuebel, J. P., Taylor, A. L., Arthur, B. J., Egnor, S. R. Female mice ultrasonically interact with males during courtship displays. eLife. 4, (2015).
  32. Burkett, Z. D., Day, N. F., Peñagarikano, O., Geschwind, D. H., White, S. A. VoICE: A semi-automated pipeline for standardizing vocal analysis across models. Sci. Rep. 5, 10237 (2015).
  33. Weissgerber, T. L., Milic, N. M., Winham, S. J., Garovic, V. D. Beyond Bar and Line Graphs: Time for a New Data Presentation Paradigm. PLOS Biol. 13, (4), e1002128 (2015).
  34. Jamain, S., et al. Reduced social interaction and ultrasonic communication in a mouse model of monogenic heritable autism. Proc. Nat. Acad. Sci. U. S. A. 105, 1710-1715 (2008).
  35. Won, H., et al. Autistic-like social behaviour in Shank2-mutant mice improved by restoring NMDA receptor function. Nature. 486, 261-265 (2012).
  36. Ferhat, A. -T., Le Sourd, A. -M., de Chaumont, F., Olivo-Marin, J. -C., Bourgeron, T., Ey, E. Social Communication in Mice - Are There Optimal Cage Conditions? PLOS ONE. 10, (3), e0121802 (2015).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats