En Orthotopic musmodell av spontan bröstcancer metastasering

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

En orthotopic bröstcancer primär tumörmodell och kirurgiskt avlägsnande av primärtumören att förlänga mus liv för att generera spontan metastas beskrivs. Den tumörtillväxt och progression övervakas och kvantifieras av luciferas fluorescens avbildning.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Paschall, A. V., Liu, K. An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis. J. Vis. Exp. (114), e54040, doi:10.3791/54040 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Metastas är den primära orsaken till dödligheten hos bröstcancerpatienter. Mekanismen bakom cancerceller metastaser, inklusive bröstcancer metastaser, är till stor del okända och är fokus inom cancerforskningen. Olika bröstcancer spontana modeller metastaser mus har fastställts. Här rapporterar vi ett förenklat förfarande för att fastställa orthotopic transplanterade bröstcancer primärtumör och resulterande spontan metastas som efterliknar human bröstcancer metastaser. Kombinerat med mareld levande tumöravbildning, tillåter denna musmodell tumörtillväxt och progressions kinetik som skall övervakas och kvantifieras. I denna modell var en låg dos (1 x 10 4 celler) av 4T1-Luc bröstcancerceller injicerades i BALB / c-mus bröstfettdynan med hjälp av en tuberkulinspruta. Möss injicerades med luciferin och avbildas vid olika tidpunkter med hjälp av en självlysande bildsystem. När de primära tumörerna växte till storleksgränsen som i IACUC-godkända protokoll (ca.oximately 30 dagar) sövdes mössen under konstant flöde av 2% isofluran och syre. Tumörområdet steriliserades med 70% etanol. Mushuden kring tumören skars ut för att exponera tumören som avlägsnades med ett par steril sax. Avlägsnande av den primära tumören förlänger överlevnaden av 4T-1 tumörbärande möss för en månad. Mössen sedan upprepade gånger avbildas för metastatisk tumör sprider sig till avlägsna organ. Terapeutiska medel kan administreras för att undertrycka tumörmetastas vid denna punkt. Denna modell är enkel och ändå känslig kvantifiera bröstcancercelltillväxt i den primära platsen och progression kinetik till avlägsna organ, och därmed är en utmärkt modell för att studera bröstcancer tillväxt och progression, och för att testa anti-metastas terapeutiska och immun medel in vivo .

Introduction

Enligt American Cancer Society, är bröstcancer den vanligaste diagnosen form av cancer hos kvinnor i USA. Tidig upptäckt i kombination med nyligen utvecklade riktade terapier har avsevärt minskat dödligheten i bröstcancer under de senaste två decennierna. Dock är bröstcancer fortfarande den näst vanligaste orsaken till cancerrelaterad död hos kvinnor i USA en. Majoriteten av dödsfallen av bröstcancerpatienter beror på tumörcellmetastaser. Tyvärr är de flesta bröstcancer invasiva och ofta sprider sig till lymfkörtlar och därefter avlägsna organ, inklusive ben, lunga, lever och hjärna. 1,2 Det finns för närvarande ingen effektiv behandling för metastaserande bröstcancer. Därför utveckling av kemoterapeutiska och immunoterapeutiska medel undertrycka metastaserad bröstcancer är av stor betydelse.

Olika bröstcancer modeller spontan metastas mus har been utvecklats för att studera de molekylära mekanismer som ligger bakom brösttumörcellprogression och metastas och användas som modeller för utveckling av terapeutiska medel. 1,3-5 emellertid de flesta av dessa musmodeller finns genetiska tumörmodeller att medan utmärkta modeller för mekanistisk studier, är inte lämpliga för att testa terapeutiska medel eftersom metastaser tar månader att utvecklas i dessa genetiska modeller, vilket kräver kostsamma långtidsbehandling av anti-cancermedel. 6,7 Övervakning tumörprogression hos levande möss är också tekniskt utmanande. I motsats härtill har en transplanterad bröstcancermetastaser modell fördelarna med korttidstumörprogression och enkel spårning av tumörprogression hos levande möss. Den 4T1 orthotopic bröstcancer spontan metastas musmodell är en sådan transplanterade tumörmodell. 8 I denna modell är brösttumörceller transplanteras in i bröstfettkudden att etablera primära tumör knölar. Den primära tumörenkan sedan avlägsnas kirurgiskt som i bröstcancerpatienter mänskliga. 4T1 tumörceller är mycket invasiva. 8,9, 3,10 Nästan all tumörbärande möss utvecklar metastaser i 30 dagar efter tumörtransplantation i bröstfettkudden. Men 4T1 tumörer växer aggressivt i de primära platserna och tumörstorlekarna ofta överskrider de gränser som är tillåtna i de flesta djurprotokoll. I detta skede av metastaser är ofta mikrometastaser. Därför är det viktigt att avlägsna primära tumörer att tillåta metastas framsteg för att testa terapeutiska medel. Här rapporterar vi att upprätta en enkel och ändå känslig förfarande av primärtumör transplantation, kirurgiskt avlägsnande av primärtumören och mareld imaging-baserad kvantifiering av 4T1 tumörtillväxt och progression in vivo.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alla förfaranden följer riktlinjer och godkända protokoll från Georgia Regents University Animal Användning och skötsel kommittén.

1. Fastställande av Orthotopic bröstcancertumör

  1. En dag före försöket, kultur approximativt 2 x 10 6 4T1-Luc tumörceller i en 10-cm odlingsskål i 10 ml RPMI-medium innehållande 10% FBS. Inkubera kulturen skålen i en CO2-inkubator vid 37 ° C och 5% CO2.
  2. På dagen för tumörcellinjektion, ta bort odlingsmedium från odlingsskålen med vakuum, tillsätt 5 ml steril fosfatbuffrad saltlösning (PBS), pH 7,4 till odlingsskålen, och försiktigt skaka skålen för att tvätta odlingsytan, ta bort PBS genom vakuum.
  3. Tillsätt 2 ml trypsin-EDTA (0,05% trypsin och 0,53 mM EDTA) till odlingsskålen, inkubera den i CO2 inkubator vid 37 ° C under ca 5 min. Ta celler på ett inverterat mikroskop för att se till att alla celler lösgörs från botten av odlingsskålen. </ Li>
  4. Släcka trypsinet genom att tillsätta 8 ml seruminnehållande medium, överföra celler till en 15-ml koniska rör och centrifugera cellerna vid ca 450 xg under 3 min vid RT.
  5. Avlägsna supernatanten genom vakuum- och återsuspendera cellerna i 10 ml PBS. Centrifugera cellerna vid ca 450 xg under 3 min. Avlägsna supernatanten genom vakuum, och återsuspendera cellerna i 10 ml PBS.
  6. Pipettera 10 | il av cellsuspension på en hemocytometer under täckglaset. Räkna cellerna för att bestämma cellkoncentrationen. Resuspendera cellerna i PBS vid en densitet av 2 x 10 5 celler / ml HBSS. Överföra celler till ett 1,5 ml sterilt mikrofugrör och hålla cellerna på is fram till användning.
  7. Använda BALB / c-möss av 6-8 vecka för tumörcellinjektion.
    1. Raka håret nära omgivande bröstvårtan # 3 med hjälp av en elektronisk hår trimmer. Injektion av 4T1 cell i bröstkörteln tre fettkudden genererar reproducerbart lungmetastaser. Rengör rakade området med hjälp av bomullstuss doppad i 70% etanol. Resuspendera celler genom att vända mikrocentrifugrör 2 - 3 gånger. Försiktigt aspirera 50 pl cellsuspension till en ½ CC 27 G 1/2 tuberkulinspruta.
    2. Injicera tumörceller i bröstfettkudden i # 3 bröstkörteln hos en BALB / c-mus. Placera musen i en ren bur och återgå buren till djurstallar anläggning. Vänta ungefär 21 - 30 dagar för tumörutveckling. Tumörtillväxt bör övervakas regelbundet enligt institutets policy för tumörstudier.

2. Live Mouse mareld avbildning av tumörtillväxt

  1. Bild möss var 3 dagar efter tumörinjektion Överför möss till bild anläggningen. Injicera 100 | il luciferin (30 mg / ml i PBS) intraperitonealt (ip) till möss före avbildning. Efter ungefär 10 minuter, söva möss i en induktionskammare med 2% isofluran / O 2 flödet. Använd pincett att röra benet på musen. Inget svar vid beröring bekräftar that musen är helt medvetslös.
    1. Placera mössen i avbildning kammare med kontinuerlig 2% isofluran och O2 vid en flödeshastighet av 2 l / min. Placera musen så att området av intresse (dvs., bröstdynan av den initiala tumörinjektion) är vänd mot kameran av avbildningssystemet. Säkerställa näsan och munnen på musen är fast inställd inom anestesi slangen. Djur ska bedövas per veterinära normer vid institutionen.
  2. Förvärva mareld avbildning med en rad olika exponeringstiden. Till exempel, ställa in exponering till 30 synfält (FOV) till 25 objekt höjd till 1,5 cm, och få självlysande fotografiska bilder med låg effekt röntgen. Ställ in måttenhet "utstrålning."
    1. Använd en automatisk linjär färgomfång med högst cirka 2,4 x 10 7 Radiance enheter. Efter förvärvet första bilderna, justera inställningar och få en optimerad-bild (Figurs 3 & 4).
  3. Återgå möss att rengöra burar och säkerställa möss återfå medvetandet med förflyttningar innan han återvände djuren till huset anläggningen.
  4. Analysera data med levande bildbehandlingsprogram samband med avbildningsinstrumentet. Med användning av en avbildningsprogram, rita en sluten linje kring regionen av intresse (ROI). Använd bildbehandlingsprogram för att bestämma strålglans intensiteten av ROI. Registrera de relativa intensiteterna hos varje ROI för varje mus.
    OBS: Högre Radiance intensitetema tyder högre nivåer av självlysande celler, och därmed större tumörtillväxt.
  5. undersöka visuellt musen var 3 dagar för biverkningar.
    OBS: Möss kommer att vägas en gång i veckan. En viktförlust av 15% kroppsvikt kommer att anses negativ effekt och de tumörbärande möss kommer att avlivas såsom beskrivs i steg 5. möss med såriga tumörer kommer att avlivas.

3. kirurgiskt avlägsnande av primära tumörer

NEJTE: Autoklav sax, pincett och såret klipp och sår klämmor (Figur 1).

  1. Utföra operationen i en steril huva för att upprätthålla ett sterilt tillstånd för att minska risken för infektion. En dag före operation, raka området kring tumörerna hos tumörbärande möss med en elektrisk hår trimmer.
  2. Ungefär 2-4 timmar före operation, mata möss tugg karprofen tabletter formulerade för möss vid en dos av 5 mg / kg kroppsvikt.
  3. Sätta mössen i en kammare innehållande 2% isofluran i syre under ca 30 sek. Kontinuerligt söva musen med hjälp av en anestesiapparat under hela kirurgiska period.
  4. Använd en steril bomullspinne att tillämpa veterinär salva för ögonen på musen för att förhindra torrhet under narkos. Använd pincett att röra benet på musen. Inget svar vid beröring bekräftar att musen är helt medvetslös.
  5. Desinficera huden området runt tumörstället med tre alternerandevåtservetter av en tvål desinfektionsmedel scrub. Torka operationsområdet med en 70% alkohol torka.
  6. Använda en steriliserad skalpell (figur 1) för att klippa ett litet snitt nära tumören.
  7. In spetsen av ett par av steriliserade sax till snittet för att skära in i huden kring tumören för att exponera tumören knuta (Figur 2A). Hålla tumören med steril pincett och använda sax för att separera tumören från huden (Figur 2B). Rädda tumörprov genom frysning i en -80 ° C frys eller genom fixering i 10% formalinlösning för framtida användning.
  8. Stänga den kirurgiska platsen med 9 mm sårklämmor med hjälp av auto klämanbringaren (Figur 1). Återgå musen till en ren bur med autoklaveras sängar. Djuren ska övervakas per institutionens riktlinjer.
    OBS: Musen återfår vanligen tillräckligt medvetande och börjar röra sig i buren ca 10-30 min efter operationen.
  9. Administrera karprofen tillmöss igen 24 timmar efter operationen. Karprofen är för efter operationen smärtlindring och förskrivning av efter operation smärtlindring bör verifieras genom direkt samråd med institutionens veterinärpersonal. Ta sårklämmor efter såret läker (vanligtvis inom 5 - 7 dagar efter operation). Ta lindade videoklipp med auto-klipp borttagningsmedel.

4. Live Mouse mareld avbildning av tumörmetastas

  1. Bild möss var 3 dagar efter operation såsom beskrivs i steg 2.

5. Validering av lungmetastaser Använda Tusch Inflation av tumörbärande Lungor

OBS: För att validera luciferas levande tumör imaging resultat, utföra tusch uppblåsning av tumörbärande möss lungorna att kvantifiera tumör knölar. 4T1-celler metastasera även till andra organ och vävnader (Figur 5) och därför bör utföras histologisk undersökning av dessa organ för att validera tumörmetastas om det behövs. Detta protokoll använder lung metastas som ett exempel.

  1. Håll möss i sina befintliga hem bur för dödshjälp. När inrymt med andra djur, flytta dessa möss inte är euthanized till en annan bur.
  2. Ta buren filtertoppen och ersätta med CO2 filtertoppen. Slå på den komprimerade CO2 gascylinder (100%) som är ansluten till den CO 2 filtertoppen. Ställa in flödeshastigheten vid 2 L / min och hålla CO 2 i minst 10 min. Om mössen fortfarande andas i slutet av 10 minuter, lämnar CO2 tills åtminstone en minut efter möss slutar andas. Stäng av CO2 cylinder kontroll och flödesmätaren. Vänta 3 minuter och ta bort filtertoppen.
  3. Placera offrade-musen på rygg på en polystyren ombord. Stift benen för att garantera obehindrad åtkomst till luftstrupen. Spraya möss med 70% etanol.
  4. Med användning av en sax, skär längs mittlinjen på mitt buken hos musen genom bröstkorgen och upp mot salivarierar körtlar. Beakta luftstrupen. Använd pincett för att ta bort vävnad som omger luftstrupen för att exponera luftstrupen.
  5. Tråd en pipettspets under luftstrupen. Håll spetsen med en hand, försiktigt lyfta luftstrupen uppåt och bort från kroppen.
  6. Rotera plattformen håller musen 180 °. Använd en ½ CC 27 G 1/2 tuberkulinspruta att injicera Tusch (10% tusch och 0,1% ammoniumhydroxid) i lungorna via luftstrupen. Helt blåsa lungorna med bläck tills ett starkt motstånd känns.
  7. Använda en sax för att klippa i luftstrupen. Använd pincett för att hålla musen och infoga en annan uppsättning av tång under lungorna och dra lunglober av musen. Skölj lungorna kort i en bägare som innehåller vatten.
  8. I en kemisk draghuv, överföra lungorna till en glas scintillationsflaska innehållande 3 ml av Fekete lösning (50% etanol, 6% formaldehyd, och 3% isättika). Förslut flaskan för att förhindra lösningen från att avdunsta.
    NOTERA: Vävnaderna kan lagras i Fekete lösning på obestämd tid.
  9. Efter några minuter, observera tumörnoduli som vita prickar på den svarta lungor (Figur 5). Den vita tumör knöl är synlig genom ögonen. Överföra lungorna till en maträtt i ett dragskåp och räkna antalet vita fläckar. Varje vit fläck representerar en enda metastatisk tumör knöl.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Fastställande av Orthotopic bröstcancer musmodell
4T1 är en aggressiv bröstkarcinom-cellinjen. Injektion av så lite som 1 x 10 4 celler i bröstfettkudden kan leda till upprättandet av en enda tumör knöl i injektionsstället (Figur 2A). Därför härmar tumören humana primära bröstkarcinom. Nästan 100% möss utvecklar orthotopic tumör. Tumörstorleken kan kvantifieras med hjälp av en digital skjutmått eller med levande tumöravbildning (Figur 3). Tumörer är detekterbara ungefär tre dagar efter tumörinjektion med hjälp av en mareld bildsystem, och luminiscens intensitet ökar när tumörstorleken ökar (Figur 3). Därför är denna modell en idealisk orthotopic bröstcancermodell för att testa effekten av kemoterapeutiska och immunoterapeutiska medel mot alla stadier av bröstcancer.

Spontan metastas
Hos bröstcancerpatienter humana, är de primära tumörerna avlägsnas kirurgiskt efter diagnos. Men ett stort antal patienter som redan har LN eller fjärrmetastaser vid tidpunkten för diagnos. I förfarandet, de flesta av mössen har utvecklat LN och fjärrmetastaser efter 30 dagars tumör transplantation. Den beskrivna kirurgiska proceduren helt avlägsnar den primära tumören (Figur 2B). Inga kvarvarande primära tumörer detekteras vid de primära tumörställen 10 - 30 dagar efter operationen (Figur 2B). Kirurgiskt avlägsnande av den primära tumören förlänger livslängden hos tumörbärande möss men hindrar inte tumörmetastas till olika delar av mössen. Dessa metastaser kan detekteras av levande avbildningsmetod (Figur 4). Denna modell är alltså en spontan metastas bröstcancermodell som härmar bröstcancerpatienter mänskliga. Denna modell är användbar för: 1) att studera spontan breast cancermetastas (t.ex. 4T1-celler kan transfekteras med en gen av intresse för att testa funktionerna för dessa gener vid bröstcancer spontan metastas); och 2) att testa effekten av kemoterapeutiska och immunoterapeutiska medel mot spontan bröst metastaser i en immunkompetent värd. Platserna för och graden av metastaser kan detekteras genom levande avbildning (Figur 4) och bekräfta med en andra metod (Figur 5). Luminiscens avbildning kan kvantifiera tumörbörda hela lungan. Bläck uppblåsning av tumörbärande lungor möjliggör exakt räkning av de faktiska tumör knutor i varje lunga (figur 5), varigenom, som representerar en kostnadsfri kvantifiering metod för tumörmetastas.

Figur 1
Figur 1. Kirurgi Verktyg. 1.Stainless skalpell, 2. pincett. 3. Rostfria sax. 4. Autocläpp sår klämmor. 5. Autoclip sår klipp borttagningsmedel. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 2
Figur 2. Orthotopic 4T1 tumörmodell. A. 4T1-tumörceller (1 x 10 4 celler i 100 | il PBS) celler injicerades i bröstfettkudden. Trettio dagar efter tumörinjektion, hade musen avlivades och undersöktes för tumörtillväxt. Visas är tumörbärande möss med en enda tumör knuta vid injektionsstället (gul pil). B. Tumören som visas i A avlägsnas kirurgiskt. Visas är 4T1 tumörbärande möss 10 dagar efter kirurgiskt avlägsnande av primärtumören. Klicka här för att se en störreversion av denna siffra.

Figur 3
Figur 3. Levande tumöravbildning av Luciferas-baserade Live Tumör Imaging. 4T1-tumörceller (1 x 10 4 celler i 100 pl PBS) celler injicerades i bröstfettkudden. Musen avbildades på dag 7, 14 och 28. Visas luminiscens intensiteten hos primärtumören. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 4
Figur 4. Visualisering av Tumör Progression av Luciferas-baserade Live Tumör Imaging. 4T1-tumörceller (1 x 10 4 celler i 100 pl PBS) celler injicerades i bröstfettkudden. Den primära tumören opereras bort som shegen i figur 3. Musen fick sedan avbildas 17 dagar efter kirurgiskt avlägsnande av den primära tumören. Visas är bilden av metastaser. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 5
Figur 5. Visualisering av lungtumör Knölar av Tusch Inflation. Lungan av tumörbärande mus uppblåst med tusch och fixerades i Fekete lösning. De vita prickarna är lungmetastaser. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Många typer av transgena musmodeller av bröstcancer metastaser har utvecklats. 1 Dessa transgena möss har höga förekomsten tumör sträcker sig från 60 till 100%. Emellertid är metastas incidensen av dessa transgena möss är mycket lägre än den tumörincidensen (14-100%). Tumörceller metastasera till LN och lungor i de flesta av dessa transgena musmodeller av bröstcancer metastaser. Metastasen latens varierar från modell till modell och varierar från två till åtta månader. 6,11-16 Dessa transgena musmodeller av bröstcancer metastaser är utmärkta system för att studera de genetiska och molekylära mekanismerna bakom bröstcancer metastaser. Men den låga metastaser förekomsten och lång metastaser latens begränsar användbarheten av dessa modeller i testet av anti-cancermedel.

Den orthotopic implantation av 4T1-celler i bröstfettkudden, med bildning av primära tumörer och efterföljande metastatisk tillväxt, resembles flera steg från elakartad bröstcancer, inklusive primärtumörbildning, lymfkörtel metastas och avlägsna organ metastaser. Dessutom undviker syngen transplantation immunologisk värd-mot-transplantatreaktion möjliggör studiet av bidraget av tumörmikroomgivningen, inklusive immunsystemet, till malign tumörprogression. Denna modell är även användbar för att studera värdantitumörimmunsvar. Därför injektion av 4T1-celler i bröstfettkudden representerar en snabb och kvantitativ metod för att studera bröstcancer metastaser.

Den orthotopic 4T1 transplantation tumörmodell har en tumörincidensen i mindre än 30 dagar och 100% metastaser incidens på mindre än 60 dagar (Figur 2-4) 100%. Dessutom, till skillnad från de flesta av de transgena musmodeller av bröstcancer metastas, 4T1-tumörceller metastaserar även till benet (Figur 4), varigenom, som liknar human bröstcancermetastaser.

stabil expressipå av luciferas-kodande cDNA i 4T1 tumörceller möjliggör övervakning av tumörtillväxt och progression i levande möss över tid (Figur 3). Tumörbördan och metastasering kinetik kan kvantifieras baserat på luminiscens intensitet. Vidare kan metastaser platser också identifieras genom luciferas avbildning (Figur 4) och valideras med en kompletterande strategi (Figur 5). Därför är denna bröstcancer spontan metastas modell en utmärkt modell för bestämning av effektiviteten av anti-metastas medel in vivo.

De flesta av operationen innebär nedläggning av snitt med suturer. Här, observerade vi att rost sårklämmor fungerar bra (Figur 1). Såret klipp kan lätt steriliseras och lätt appliceras med autoclip tilldelare (Figur 1). De sårklämmor lätt kan tas bort med klämman remover (figur 1) efter det att såret har läkt. Vi har obtjänade inga infektioner med denna kirurgisk teknik i över 20 operationer.

En begränsning av denna modell är den snabba tumörtillväxthastighet. Majoriteten av metastaser bärande möss dör i 1 - 2 månader efter operationen på grund av omfattande metastaser börda. En annan begränsning är att 4T1 är en mus-cellinje och dess svar på experimentella läkemedel kan skilja sig med svaret från humana celler. Detta bör beaktas i studiedesign för experimentell drogtestning.

Sammanfattningsvis har vi optimerat en enkel och ändå känslig förfarande av orthotopic bröstcancer spontan metastas modell. Denna modell efterliknar human bröstcancer metastaser. De tumörprogressions kinetiken kan övervakas och kvantifieras med tiden. Denna modell är en idealisk en, inte bara för att studera bröstcancer tillväxt och metastas, men också för att testa effektiviteten av kemoterapeutiska och immunoterapeutiska medel 17 i suppression av spontan bröstcancer metastaser.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Ami-X Imaging System  Spectral Instruments Imaging Inc. Tucson, AZ
IsoTec SurgiVet Anesthesia Service & Equipment , Inc., Atlanta, GA
AutoClip Physicians Kit Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD 427638
9 mm AutoClip Applier  Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD 427630
9 mm AutoClip Remover Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD 427637
9 mm AutoClip Wound Clip Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD 427631
Sharp-Pointed Dissecting Scissors Fisher 8940
Dissecting Fine-Pointed Forceps Fisher 8875
1/2 CC 27 G 1/2 tuberculin syringe Becton Dickinson and Co. NJ  305620
RPMI 1640 medium Mediatech Inc 10-040-CV
PBS Mediatech Inc 21-040-CV
70% Ethanol Ultrapure-usa.com
Trypsin-EDTA Mediatech Inc 25-040-CI

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Fantozzi, A., Christofori, G. Mouse models of breast cancer metastasis. Breast Cancer Res. 8, 212 (2006).
  2. Weigelt, B., Peterse, J. L., van 't Veer, L. J. Breast cancer metastasis: markers and models. Nat Rev Cancer. 5, 591-602 (2005).
  3. Kocaturk, B., Versteeg, H. H. Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth. J Vis Exp. (2015).
  4. Stewart, T. J., Abrams, S. I. How tumours escape mass destruction. Oncogene. 27, 5894-5903 (2008).
  5. Lopez, J. I., et al. CD44 attenuates metastatic invasion during breast cancer progression. Cancer Res. 65, 6755-6763 (2005).
  6. Khanna, C., Hunter, K. Modeling metastasis in vivo. Carcinogenesis. 26, 513-523 (2005).
  7. Cuevas, B. D., Winter-Vann, A. M., Johnson, N. L., Johnson, G. L. MEKK1 controls matrix degradation and tumor cell dissemination during metastasis of polyoma middle-T driven mammary cancer. Oncogene. 25, 4998-5010 (2006).
  8. Danna, E. A., et al. Surgical removal of primary tumor reverses tumor-induced immunosuppression despite the presence of metastatic disease. Cancer Res. 64, 2205-2211 (2004).
  9. Tao, K., Fang, M., Alroy, J., Sahagian, G. G. Imagable 4T1 model for the study of late stage breast cancer. BMC Cancer. 8, 228 (2008).
  10. Hu, X., et al. Deregulation of apoptotic factors Bcl-xL and Bax confers apoptotic resistance to myeloid-derived suppressor cells and contributes to their persistence in cancer. J Biol Chem. 288, 19103-19115 (2013).
  11. Kwan, H., et al. Transgenes expressing the Wnt-1 and int-2 proto-oncogenes cooperate during mammary carcinogenesis in doubly transgenic mice. Mol Cell Biol. 12, 147-154 (1992).
  12. Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease. Mol Cell Biol. 12, 954-961 (1992).
  13. Almholt, K., et al. Reduced metastasis of transgenic mammary cancer in urokinase-deficient mice. Int J Cancer. 113, 525-532 (2005).
  14. Gallego, M. I., Bierie, B., Hennighausen, L. Targeted expression of HGF/SF in mouse mammary epithelium leads to metastatic adenosquamous carcinomas through the activation of multiple signal transduction pathways. Oncogene. 22, 8498-8508 (2003).
  15. Lin, S. C., et al. Somatic mutation of p53 leads to estrogen receptor alpha-positive and -negative mouse mammary tumors with high frequency of metastasis. Cancer Res. 64, 3525-3532 (2004).
  16. Ridgeway, A. G., McMenamin, J., Leder, P. P53 levels determine outcome during beta-catenin tumor initiation and metastasis in the mammary gland and male germ cells. Oncogene. 25, 3518-3527 (2006).
  17. Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model. J Vis Exp. (2010).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics