En ortotopisk Mouse Model af Spontan Breast Cancer Metastase

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

En orthotopisk brystcancer primær tumor model og kirurgisk fjernelse af den primære tumor for at forlænge muse liv til at generere spontan metastase er beskrevet. Den tumorvækst og progression overvåges og kvantificeres ved luciferase fluorescensafbildning.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Paschall, A. V., Liu, K. An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis. J. Vis. Exp. (114), e54040, doi:10.3791/54040 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Metastase er den primære årsag til dødelighed blandt brystkræftpatienter. Mekanismen bag cancercelle metastase, herunder brystcancer metastase, er stort set ukendt, og er fokus i cancerforskning. Forskellige brystkræft spontane metastaser musemodeller er blevet etableret. Her rapporterer vi en forenklet procedure for at etablere ortotopisk transplanteret brystkræft primær tumor og deraf spontan metastase, der efterligner menneskelig brystkræft metastaser. Kombineret med bioluminescens levende tumorafbildning, denne musemodel tillader tumorvækst og progression kinetik, der skal overvåges og kvantificeres. I denne model blev en lav dosis (1 x 10 4 celler) af 4T1-Luc brystcancerceller injiceret i BALB / c-mus brystfedtpude anvendelse af en tuberculinsprøjte. Mus blev injiceret med luciferin og afbildes på forskellige tidspunkter under anvendelse af et bioluminescerende billeddannende system. Når de primære tumorer voksede til størrelsen grænse i IACUC-godkendte protokol (ca.oximately 30 dage) blev musene bedøvet under konstant flow på 2% isofluran og oxygen. Tumorområdet blev steriliseret med 70% ethanol. Musen huden omkring tumoren blev udskåret for at blotlægge tumor, som blev fjernet med et par steril saks. Fjernelse af den primære tumor strækker overlevelse 4T-1 tumorbærende mus i en måned. Musene blev derefter gentagne gange afbildet for metastatisk tumor spredning til fjerne organer. Terapeutiske midler kan administreres for at undertrykke tumormetastase på dette punkt. Denne model er enkel og dog følsom kvantificere brystkræft cellevækst i det primære site og progression kinetik til fjerne organer, og dermed er en fremragende model til undersøgelse af brystkræft vækst og progression, og til afprøvning anti-metastase terapeutiske og immunterapeutiske midler in vivo .

Introduction

Ifølge American Cancer Society, brystkræft er den hyppigst diagnosticerede form for kræft hos kvinder i USA. Tidlig detektion kombineret med nyligt udviklede målrettede behandlinger har reduceret dødeligheden af ​​brystkræft i de sidste to årtier. Men brystkræft er stadig den næststørste årsag til kræft dødsfald hos kvinder i USA en. Størstedelen af ​​dødsfald blandt brystkræftpatienter skyldes tumorcellemetastase. Desværre er de fleste brystcancer er invasiv og ofte metastaserer til lymfeknuderne og efterfølgende til fjerne organer, herunder knogle, lunge, lever og hjerne. 1,2 Der er i øjeblikket ingen effektiv behandling for metastatisk brystcancer. Derfor udvikling af kemoterapeutiske og immunterapeutiske midler til at undertrykke metastatisk brystkræft er af stor betydning.

Forskellige brystkræft spontan metastase musemodeller har bEen udviklet for at undersøge de molekylære mekanismer, der ligger brysttumor celle udvikling og metastaser og som skal anvendes som modeller til udvikling af terapeutiske midler. 1,3-5 Men de fleste af disse musemodeller er genetiske tumormodeller, at selv gode modeller for mekanistisk undersøgelser, er ikke egnede til testning terapeutiske midler eftersom metastase tager måneder at udvikle sig i disse genetiske modeller, hvilket kræver dyrt langvarig administration af anti-cancermidler. 6,7 Overvågning tumorprogression i levende mus er også teknisk udfordrende. Derimod kan et transplanteret brystkræft metastase-model har fordelene ved kortvarig tumorprogression og nem sporing af tumorprogression i levende mus. Den 4T1 ortotopisk brystcancer spontan metastase musemodel er sådan en transplanteret tumormodel. 8 I denne model er de brysttumorceller transplanteres ind i brystfedtpuden at etablere primære tumornoduler. Den primære tumorkan derefter fjernes kirurgisk som hos patienter human brystcancer. 4T1-tumorceller er yderst invasiv. 8,9, 3,10 Næsten alle tumorbærende mus udvikler metastase i 30 dage efter tumor transplantation ind i brystfedtpuden. Men 4T1 tumorer vokser aggressivt i de primære steder og tumor størrelser ofte overskrider de grænser, der er tilladt i de fleste dyr protokoller. På dette stadium, metastaserne er ofte mikrometastaser. Derfor er det vigtigt at fjerne primære tumorer for at tillade metastase fremskridt til afprøvning terapeutiske midler. Her rapporterer vi etableringen af en enkel og alligevel følsom procedure af primær tumor transplantation, kirurgisk fjernelse af primær tumor og bioluminescens imaging-baserede kvantificering af 4T1 tumorvækst og progression in vivo.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle procedurer følger retningslinjer og godkendte protokoller af Georgia Regents University Animal brug og Omsorgsudvalget.

1. Etablering af ortotopisk Breast Cancer Tumor

  1. En dag før forsøget, kultur ca. 2 x 10 6 4T1-Luc tumorceller i 10 cm dyrkningsskål i 10 ml RPMI-medium indeholdende 10% FBS. Inkubér dyrkningsskålen i en CO2-inkubator ved 37 ° C og 5% CO2.
  2. På dagen for tumorcelleinjektion, fjerne dyrkningsmediet fra dyrkningsskålen med vakuum, tilsættes 5 ml steril phosphatbufret saltvand (PBS), pH 7,4 til dyrkningsskålen, og ryst forsigtigt skålen at vaske kultur overflade, fjern PBS ved hjælp af vakuum.
  3. Tilsæt 2 ml trypsin-EDTA (0,05% trypsin og 0,53 mM EDTA) til dyrkningsskålen, inkuberes den i CO2-inkubator ved 37 ° C i ca. 5 min. Check celler på et inverteret mikroskop for at sikre, at alle celler frigøres fra bunden af ​​dyrkningsskålen. </ Li>
  4. Stands trypsin ved at tilsætte 8 ml serumholdigt medium, overføre cellerne til et 15 ml konisk rør og centrifugeres cellerne ved ca. 450 x g i 3 minutter ved stuetemperatur.
  5. Fjern supernatanten ved vakuum- og resuspender cellerne i 10 ml PBS. Centrifuger cellerne ved ca. 450 x g i 3 min. Fjern supernatanten ved vakuum, og resuspender celler i 10 ml PBS.
  6. Afpipetteres 10 pi af cellesuspensionen onto et hæmocytometer under dækglasset. Tæl cellerne for at bestemme koncentrationen celle. Resuspender celler i PBS ved en densitet på 2 x 10 5 celler / ml HBSS. Overfør celler til en 1,5 ml sterilt mikrofugerør og holde celler på is indtil brug.
  7. Brug BALB / c-mus på 6 - 8 uger til tumorcelleinjektion.
    1. Barbering hår nær omgivende brystvorten # 3 ved hjælp af en elektronisk hår trimmer. Injektion af 4T1 celle, i brystkirtlen 3 fedtpude reproducerbart genererer lunge metastase. Rengør barberede område ved hjælp af vatpind dyppet i 70% ethanol. Resuspender celler ved at vende mikrocentrifugerør 2 - 3 gange. Forsigtigt aspirer 50 ul cellesuspension i en ½ CC 27 G 1/2 tuberkulin sprøjte.
    2. Injicere tumorcellerne i det brystfedtpuden under nr.3 brystkirtel hos en BALB / c-mus. Placer musen i en ren bur og returnere buret til stalde facilitet. Vent cirka 21 - 30 dage for tumor udvikling. bør overvåges tumorvækst regelmæssigt som pr institutionens politikker for tumor undersøgelser.

2. Levende Mouse Bioluminescens Imaging af tumorvækst

  1. Billede mus hver 3 dage efter tumor injektion Overfør mus til billedbehandling facilitet. Injicer 100 pi luciferin (30 mg / ml i PBS) intraperitonealt (ip) til mus før billeddannelse. Efter cirka 10 minutter, bedøver mus i en induktion kammer med 2% isofluran / O 2 flow. Brug pincet til at røre benet af musen. Ingen reaktion at røre bekræfter that musen er fuldt bevidstløs.
    1. Placer mus i afbildningskammeret med kontinuerlig 2% isofluran og O 2 ved en strømningshastighed på 2 l / min. Placer musen, således at arealet af interesse (dvs. den bryst-pude af den oprindelige tumor injektion) vender kameraet af billeddannende system. Sikre næse og mund af musen er fast indstillet inden bedøvelsesmidlet slange. Dyr bør bedøves pr veterinære standarder på institutionen.
  2. Anskaf bioluminescens billeddannelse med en vifte af forskellige eksponeringstid. For eksempel indstille eksponering til 30, synsfelt (FOV) til 25, objekt højden til 1,5 cm, og opnå luminescerende fotografiske billeder med lavt røntgen. Indstil måleenheder til "udstråling."
    1. Brug en automatisk lineær farveskala med et maksimum på ca. 2,4 x 10 7 udstråling enheder. Efter at have erhvervet de første billeder, justere indstillinger og få en optimeret-billede (figurs 3 & 4).
  3. Retur mus til at rense bure og sikre mus kommer til bevidsthed med ambulation før tilbagesendelse af dyrene til huset facilitet.
  4. Analysere data med den levende imaging software forbundet med den billeddannende instrument. Ved hjælp af en billedbehandlingsprogram, tegne en lukket linje omkring området af interesse (ROI). Brug imaging software til at bestemme udstråling intensiteten af ​​ROI. Optag de relative intensiteter af hver ROI for hver mus.
    BEMÆRK: Højere intensiteter udstråling angiver højere grad af selvlysende celler og dermed større tumorvækst.
  5. Undersøg visuelt musen hver 3 dage for bivirkninger.
    BEMÆRK: Mus vejes en gang om ugen. Et vægttab på 15% legemsvægt vil blive betragtet ugunstig virkning, og de tumorbærende mus vil blive aflivet som beskrevet i trin 5. mus med ulcererede tumorer vil også blive aflivet.

3. kirurgisk fjernelse af primære tumorer

INGENTE: Autoklave saks, pincet og såret klip og viklet klemmeapplikator (figur 1).

  1. Udføre operationen i en steril hætte for at opretholde en steril tilstand for at reducere risikoen for infektion. En dag før operation, barbere området omkring tumorer i tumor-bærende mus med en elektrisk hår trimmer.
  2. Ca. 2 - 4 timer før operation, fodre mus tygbare carprofen tabletter formuleret til mus i en dosis på 5 mg / kg legemsvægt.
  3. Sætte musene i et kammer indeholdende 2% isofluran i oxygen i ca. 30 sek. Kontinuerligt bedøver musen med en anæstesi apparat under hele kirurgiske periode.
  4. Brug en steril bomuld pind til at anvende dyrlæge salve til øjnene af musen til at forebygge tørhed, mens under anæstesi. Brug pincet til at røre benet af musen. Ingen reaktion ved berøring bekræfter, at musen er fuldt bevidstløs.
  5. Desinficer huden området omkring tumor site med tre skiftevisklude af en sæbe desinfektionsmiddel krat. Tør kirurgiske område med en 70% spritserviet.
  6. Brug en steriliseret skalpel (figur 1) til at skære et lille snit nær tumoren.
  7. Sæt spidsen af et par af steriliserede saks til indsnittet at skære huden omkring tumoren at blotlægge tumor knude (figur 2A). Hold tumoren med steril pincet og bruge saks til at adskille svulsten fra huden (figur 2B). Gemme tumorprøven ved frysning i en -80 ° C fryser eller ved fastsættelse i 10% formalinopløsning til fremtidig brug.
  8. Luk operationsstedet med 9 mm sårklemmer med Auto-klemmeapplikator (figur 1). Retur musen til et rent bur med autoklaveret sengetøj. bør overvåges Dyrene pr institutionelle retningslinier.
    BEMÆRK: Musen normalt genvinder tilstrækkelig bevidsthed og begynder at bevæge sig i buret ca. 10 - 30 minutter efter operationen.
  9. Indgiv carprofen tilmus igen 24 timer efter operationen. Carprofen er til post-kirurgi analgesi og ordinering af post-kirurgi analgesi bør kontrolleres ved direkte samråd med institutionens dyrlæger. Fjern sårklemmer efter såret heler (sædvanligvis inden for 5 - 7 dage efter kirurgi). Fjern sår klip ved hjælp af auto-clip remover.

4. Levende Mouse Bioluminescens Imaging of Tumor Metastase

  1. Billed-mus hver 3 dage efter operationen som beskrevet i trin 2.

5. Validering af lungemetastaser Brug Indien Ink Inflationen af ​​Tumor-bærende Lunger

BEMÆRK: For at validere de luciferase levende tumor imaging resultater, udføre Indien blæk inflation af tumor-bærende mus lunger at kvantificere tumor knuder. 4T1 celler også metastaserer til andre organer og væv (Figur 5), og derfor bør udføres histologisk undersøgelse af disse organer at validere tumormetastaser hvis nødvendigt. Denne protokol brug lung metastase som et eksempel.

  1. Hold mus i deres eksisterende hjem bur til eutanasi. Når opstaldet med andre dyr, flytte de mus ikke bliver aflivet til en anden bur.
  2. Fjern buret filtertoppen og erstatte med den CO 2 filter top. Tænd for komprimerede CO2 gas cylinder (100%), der er forbundet med CO 2 filter top. Indstil strømningshastigheden ved 2 l / min og holde CO 2 på i mindst 10 min. Hvis musene stadig ånder i slutningen af 10 min, forlader CO 2 på indtil mindst 1 min efter mus stoppe vejrtrækningen. Slå CO 2 cylinder kontrol og gennemstrømningsmåleren. Vent 3 minutter mere, og fjern filteret øverst.
  3. Placer ofrede-musen på ryggen på en polystyren bord. Pin benene for at sikre uhindret adgang til luftrøret. Spray mus med 70% ethanol.
  4. Ved hjælp af en saks, klippe langs midterlinjen af ​​midt-abdomen af ​​musen gennem brystkassen og op mod salivarierer kirtler. Overhold luftrøret. Brug pincet til at fjerne væv, som omgiver luftrøret for at blotlægge trachea.
  5. Tråd en pipettespids nedenunder luftrøret. Hold spidsen med den ene hånd, forsigtigt løfte luftrøret op og væk fra kroppen.
  6. Rotere platformen holde musen 180 °. Brug en ½ CC 27 G 1/2 tuberculinsprøjte at injicere tusch (10% tusch og 0,1% ammoniumhydroxid) i lungerne via luftrøret. Helt puste lungerne med blæk, indtil der mærkes en stærk modstand.
  7. Brug en saks til at klippe luftrøret. Brug pincet til at holde musen og indsætte et andet sæt af pincet under lungerne og træk lungelapperne ud af musen. Skyl lungerne kortvarigt i et bægerglas indeholdende vand.
  8. I stinkskab, overføre lungerne til et glasscintillationshætteglas indeholdende 3 ml Fekete opløsning (50% ethanol, 6% formaldehyd, og 3% iseddike). Luk hætteglasset for at forhindre opløsningen i at fordampe.
    NOTE: Vævene kan opbevares i Fekete opløsning på ubestemt tid.
  9. Efter et par minutter, observere tumorknuder som hvide prikker på de sorte lunger (figur 5). Den hvide tumor nodule er synlige ved øjnene. Overfør lungerne til en skål i et stinkskab og tælle antallet af hvide pletter. Hver hvide plet repræsenterer en enkelt metastatisk tumor knude.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Etablering af ortotopisk Breast Cancer Mouse Model
4T1 er en aggressiv brystcarcinoma-cellelinie. Injektion af så lidt som 1 x 10 4 celler i brystfedtpuden kan føre til etablering af en enkelt tumor knude i injektionsstedet (figur 2A). Derfor tumoren efterligner humane primære brystcarcinom. Næsten 100% mus udvikler den ortotopisk tumor. Tumorstørrelsen kan kvantificeres ved anvendelse af en digital skydelære eller ved udtag tumorafbildning (figur 3). Tumorer er påviselige ca. 3 dage efter tumor injektion under anvendelse af en bioluminescens billedbehandlingssystem og de ​​luminescensintensitet stiger som tumor størrelse stiger (figur 3). Derfor er denne model er en ideel ortotopisk brystkræft model til testning af effektiviteten af ​​kemoterapeutiske og immunterapeutiske midler mod alle stadier af brystcarcinom.

Spontan Metastase
Hos patienter human brystcancer er de primære tumorer fjernes kirurgisk efter diagnosen. Men et stort antal patienter, der allerede har LN eller fjernmetastaser på tidspunktet for diagnosen. I proceduren, har de fleste af musene udviklede LN og fjernmetastaser efter 30 dages tumor transplantation. Den beskrevne kirurgiske procedure helt fjerner den primære tumor (figur 2B). Intet tilbageblivende primære tumorer opdages på den primære tumor sites 10 - 30 dage efter operationen (Figur 2B). Kirurgisk fjernelse af den primære tumor forlænger levetiden for tumor-bærende mus, men hindrer ikke tumormetastase til forskellige dele af musene. Disse metastaser kan detekteres ved direkte billedvisning fremgangsmåden (figur 4). Denne model er således en spontan metastase brystkræft model, der efterligner humane brystkræftpatienter. Denne model er nyttig til: 1) at studere spontan breast cancermetastase (fx 4T1-celler kan transficeres med et gen af ​​interesse til at teste funktionen af ​​disse gener i brystkræft spontan metastase); og 2) test af effektiviteten af ​​kemoterapeutiske og immunterapeutiske midler mod spontan bryst metastase i en immun-kompetent vært. Kan påvises de steder, og grader af metastaser af levende imaging (figur 4), og godkend med en anden tilgang (figur 5). Luminescens imaging kan kvantificere tumor byrde af hele lungen. Ink oppustning af tumorbærende lunger tillader nøjagtig optælling af de faktiske tumorknuder af hver lunge (figur 5), hvorved, der repræsenterer en gratis kvantificering fremgangsmåde til tumormetastase.

figur 1
Figur 1. Kirurgi Tools. 1.Rustfrit skalpel, 2. pincet. 3. Rustfrit saks. 4. AutoClæbe sår klip applier. 5. Autoclip sår klip remover. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 2
Figur 2. ortotopisk 4T1 Tumor Model. A. 4T1-tumorceller (1 x 10 4 celler i 100 pi PBS) celler blev injiceret i brystfedtpuden. Tredive dage efter tumor injektion blev musen aflivet og undersøgt for tumorvækst. Vist er de tumorbærende mus med en enkelt tumor knude på injektionsstedet (gul pil). B. Tumoren som vist i A blev fjernet kirurgisk. Vist er de 4T1 tumor-bærende mus 10 dage efter kirurgisk fjernelse af den primære tumor. Klik her for at se et størreversion af denne figur.

Figur 3
Figur 3. Levende tumorbilleddannelse ved Luciferase-baserede Live Tumor Imaging. 4T1-tumorceller (1 x 10 4 celler i 100 pi PBS) celler blev injiceret i brystfedtpuden. Musen blev afbildet på dage 7, 14 og 28. Vist er luminescens intensitet af den primære tumor. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 4
Figur 4. Visualisering af tumorudvikling af Luciferase-baserede Live Tumor Imaging. 4T1-tumorceller (1 x 10 4 celler i 100 pi PBS) celler blev injiceret i brystfedtpuden. Den primære tumor blev kirurgisk fjernet som shegen i figur 3. Musen blev derefter afbildes 17 dage efter kirurgisk fjernelse af den primære tumor. Vist er billedet af metastaser. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 5
Figur 5. Visualisering af Lung Tumor Knuder af Indien Ink Inflation. Lungen af tumor-bærende mus blev oppustet med tusch og fikseret i Fekete løsning. De hvide prikker er lungemetastaser. Klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Der er blevet udviklet mange typer af transgene musemodeller for brystkræft metastase. 1 Disse transgene mus har høj tumorincidensen i området fra 60 til 100%. Imidlertid metastase incidens af disse transgene mus er meget lavere end den tumorincidensen (14 - 100%). Tumorceller metastaserer til LN og lunger i de fleste af disse transgene musemodeller for brystkræft metastase. Metastaser latenstid varierer fra model til model og varierer fra 2 til 8 måneder. 6,11-16 Disse transgene musemodeller for brystkræft metastase er fremragende systemer til at studere de genetiske og molekylære mekanismer bag brystkræft metastase. Men den lave metastaser forekomst og lang metastaser latenstid begrænser nytten af ​​disse modeller i testen af ​​anticancer-midler.

Den orthotopisk implantation af 4T1-celler i brystfedtpuden, med dannelsen af ​​primære tumorer og efterfølgende metastatisk vækst, resembles flere trin fra ondartet brystcancer, herunder primær tumordannelse lymfeknudemetastase og fjernt organ metastase. Desuden syngene transplantation undgår immunologisk host-versus-graft reaktion muliggør studiet af bidraget fra tumor mikromiljø, herunder immunsystem, til malign tumor progression. Denne model er også egnet til undersøgelse vært anti-tumor immunrespons. Derfor injektion af 4T1-celler i brystfedtpuden repræsenterer en hurtig og kvantitativ metode til at studere brystkræft metastase.

Den ortotopisk 4T1 transplantation tumor model har en 100% tumorincidensen på mindre end 30 dage og 100% metastaser forekomst på mindre end 60 dage (Figur 2-4). Endvidere modsætning til de fleste af de transgene musemodeller for brystkræft metastase, 4T1 tumorceller også metastaserer til knogle (figur 4), derved, ligner human brystcancer metastase.

stabil Express godtpå af luciferase-kodende cDNA i 4T1-tumorceller tillader overvågning af tumorvækst og progression i levende mus over tid (figur 3). Tumorbyrden og metastase kinetik kan kvantificeres baseret på luminescens intensitet. Endvidere kan metastase sites også identificeres ved luciferase imaging (figur 4) og valideret med en komplementær tilgang (figur 5). Derfor er denne brystcancer spontan metastase-model er en fremragende model til bestemmelse af effektiviteten af anti-metastase midler in vivo.

Det meste af kirurgi indebærer lukning af udskæringerne med suturer. Her, observerede vi, at rustfrie sårklemmer fungerer godt (figur 1). Såret klips kan let steriliseres og let påføres med Autoclip påsætningsindretningen (figur 1). Såret klip kan let fjernes med klemmen fjerner (figur 1), efter at såret er blevet helbredt. Vi har obtjente ingen infektioner med denne kirurgiske teknik i over 20 operationer.

En begrænsning ved denne model er den hurtige tumorvæksthastighed. Flertal af metastaser-bærende mus dør i 1 - 2 måneder efter operationen på grund af omfattende metastaser byrde. En anden begrænsning er, at 4T1 er en musecellelinie og dens reaktion på eksperimentelle lægemidler kan afvige til svaret fra humane celler. Dette bør overvejes i studie design for eksperimentel narkotika testning.

Sammenfattende har vi optimeret en enkel og alligevel følsom procedure for ortotopisk brystcancer spontan metastase-model. Denne model efterligner human brystcancer metastase. Tumoren progression kinetik kan overvåges og kvantificeres over tid. Denne model er en ideel man ikke kun for at studere brystkræft vækst og metastase, men også til undersøgelse af effektiviteten af kemoterapeutiske og immunterapeutiske midler 17 i suppression af spontan brystkræft metastase.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Ami-X Imaging System  Spectral Instruments Imaging Inc. Tucson, AZ
IsoTec SurgiVet Anesthesia Service & Equipment , Inc., Atlanta, GA
AutoClip Physicians Kit Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD 427638
9 mm AutoClip Applier  Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD 427630
9 mm AutoClip Remover Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD 427637
9 mm AutoClip Wound Clip Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD 427631
Sharp-Pointed Dissecting Scissors Fisher 8940
Dissecting Fine-Pointed Forceps Fisher 8875
1/2 CC 27 G 1/2 tuberculin syringe Becton Dickinson and Co. NJ  305620
RPMI 1640 medium Mediatech Inc 10-040-CV
PBS Mediatech Inc 21-040-CV
70% Ethanol Ultrapure-usa.com
Trypsin-EDTA Mediatech Inc 25-040-CI

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Fantozzi, A., Christofori, G. Mouse models of breast cancer metastasis. Breast Cancer Res. 8, 212 (2006).
  2. Weigelt, B., Peterse, J. L., van 't Veer, L. J. Breast cancer metastasis: markers and models. Nat Rev Cancer. 5, 591-602 (2005).
  3. Kocaturk, B., Versteeg, H. H. Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth. J Vis Exp. (2015).
  4. Stewart, T. J., Abrams, S. I. How tumours escape mass destruction. Oncogene. 27, 5894-5903 (2008).
  5. Lopez, J. I., et al. CD44 attenuates metastatic invasion during breast cancer progression. Cancer Res. 65, 6755-6763 (2005).
  6. Khanna, C., Hunter, K. Modeling metastasis in vivo. Carcinogenesis. 26, 513-523 (2005).
  7. Cuevas, B. D., Winter-Vann, A. M., Johnson, N. L., Johnson, G. L. MEKK1 controls matrix degradation and tumor cell dissemination during metastasis of polyoma middle-T driven mammary cancer. Oncogene. 25, 4998-5010 (2006).
  8. Danna, E. A., et al. Surgical removal of primary tumor reverses tumor-induced immunosuppression despite the presence of metastatic disease. Cancer Res. 64, 2205-2211 (2004).
  9. Tao, K., Fang, M., Alroy, J., Sahagian, G. G. Imagable 4T1 model for the study of late stage breast cancer. BMC Cancer. 8, 228 (2008).
  10. Hu, X., et al. Deregulation of apoptotic factors Bcl-xL and Bax confers apoptotic resistance to myeloid-derived suppressor cells and contributes to their persistence in cancer. J Biol Chem. 288, 19103-19115 (2013).
  11. Kwan, H., et al. Transgenes expressing the Wnt-1 and int-2 proto-oncogenes cooperate during mammary carcinogenesis in doubly transgenic mice. Mol Cell Biol. 12, 147-154 (1992).
  12. Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease. Mol Cell Biol. 12, 954-961 (1992).
  13. Almholt, K., et al. Reduced metastasis of transgenic mammary cancer in urokinase-deficient mice. Int J Cancer. 113, 525-532 (2005).
  14. Gallego, M. I., Bierie, B., Hennighausen, L. Targeted expression of HGF/SF in mouse mammary epithelium leads to metastatic adenosquamous carcinomas through the activation of multiple signal transduction pathways. Oncogene. 22, 8498-8508 (2003).
  15. Lin, S. C., et al. Somatic mutation of p53 leads to estrogen receptor alpha-positive and -negative mouse mammary tumors with high frequency of metastasis. Cancer Res. 64, 3525-3532 (2004).
  16. Ridgeway, A. G., McMenamin, J., Leder, P. P53 levels determine outcome during beta-catenin tumor initiation and metastasis in the mammary gland and male germ cells. Oncogene. 25, 3518-3527 (2006).
  17. Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model. J Vis Exp. (2010).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics