İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Shahryari, V., Nip, H., Saini, S., Dar, A. A., Yamamura, S., Mitsui, Y., Colden, M., Bucay, N., Tabatabai, L. Z., Greene, K., Deng, G., Tanaka, Y., Dahiya, R., Majid, S. Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer. J. Vis. Exp. (114), e54125, doi:10.3791/54125 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Introduction

Prostat kanseri sonraki akciğer ve bronşların (% 28) 1 kanseri, ABD'de erkekler arasında kanser ölümlerinin (% 9) ikinci en yaygın nedenidir. Son verilere göre, 220, 800 yeni teşhis prostat kanseri vakası ve 27 540 ölüm 2015 1 oluşacak tahmin edilmektedir. Ilerlemiş metastatik hastalık olduğunu iken, erken evre prostat kanseri beş yıllık sağkalım oranı göreceli>% 99 sadece% 28 1. metastatik hastalığın tedavisi için önemli bir zorluk, özellikle prostat kanseri için sık ortaya çıktığı yerdir kemik için, diğer organlara metastaz için, bu hastalığın eğilimini altında yatan moleküler mekanizmaların anlaşılması eksikliğidir. Bu nedenle, gelişmiş metastatik hastalık 2,3 ilerleme karşı etkili tedavi rejimleri geliştirmek için bu prostat tümörlerinin moleküler makyaj incelemek için açık bir ihtiyaç vardır.

Prostat sergi HIG tümörleriilerlemesi için iyi tanımlanmış bir yolun olmadan h biyolojik heterojenlik. Metastaz sıklıkla tümör invazivlik 4 önceden hiçbir göstergesi ile meydana gelir. Bu klinik heterojenite prostat kanserinin moleküler çeşitlilik atfedilir. Bu ölümcül tümörlerin moleküler makyaj anlamak bu hastalık için daha iyi teşhis ve tedavi stratejilerinin tasarımı anahtarıdır. Sonuç olarak, prostat kanseri araştırması şu anda anlaşılması ve metastaz engelleyen odaklanmıştır.

Preklinik in vivo fare modelleri ilerlemiş metastatik hastalık prostat kanseri ilerlemesinde moleküler mekanizmalarını anlamak için çeşitli seçenekler sunuyoruz. Buna ek olarak, bu modeller, bu hastalığa karşı yeni tedavi stratejileri klinik öncesi değerlendirmeleri için önemlidir. En yaygın olarak kullanılan hayvan modelleri, transjenik fare modelleri, kuyruk damarından, intra-kalp implantasyonu ve insan ortotopik fare modelleri bulunmaktadır. Transgenik çalışmalar zaman consumi vardırng ve insanların bu farelerde prostat kanseri gelişme korelasyon değişkenliğini 11 göstermiştir. Spontan metastatik fare modellerinde, hücreler dolaşıma doğrudan enjekte edilir ve onlar hızlı gerçekleştirme süresi olsa, bunlar primer tümör veya metastatik kaskad 5 ilk adımlarını incelemek için kullanılamaz. Ortotopik ksenograft modelleri kemik metastatik lezyonlar, prostat kanseri metastaz ortak sitesi geliştirme sınırlama var. Bununla birlikte, insan ortotopik prostat kanseri ksenograft fare modeli iyi karakterize ve yaygın primer tümör gelişimi, tümör ve organ mikroçevresinin, terapötik müdahale 6 metastatik hastalık ve deneysel ilaçların kullanımı başlangıç ​​aşamasında arasındaki çapraz konuşma moleküler olayları incelemek için kullanılır , 7,8-11.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

hayvanları ile ilgili tüm prosedürler için protokoller gözden geçirilmiş ve bir Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış olması gerekir. bakım ve laboratuar hayvanlarının kullanımı için resmen onaylanmış prosedürleri izleyin. Intra-prostatik enjeksiyon açık karın cerrahisi gerektiren ve hayvanların uygun cerrahi aseptik teknikler bütün prosedür sırasında kullanılan belirli bir ameliyathane ile bir patojen içermeyen ortamda muhafaza edilmelidir.

İmplantasyon için Hücrelerin hazırlanması 1.

NOT: Araştırma ihtiyacı dayanarak, herhangi bir prostat kanseri hücre hattı kullanılabilir. Hücre çizgileri kullanılarak üreticinin talimatlarına göre kültürlenir.

  1. kararlı biçimde ateşböceği lusiferaz genini ifade PC3M-Luc-C6 hücre hattı için, en az temel ortam (MEM) kültür hücreleri,% 10 cenin sığır serumu (FBS), 1 x esansiyel olmayan amino asitler ile takviye edilmiş, 1 x fleomisin, D1 ve 1 mM sodyum piruvat . bir kuluçka w hücreleri korumaki, 37 ° C de% 95 hava ve% 5 CO2 bulunan nemli bir atmosferde. PC3M-Luc-C6 hücreleri UCSF çekirdek tesisinden temin edilmiştir.
  2. tripsinizasyon ile Hasat hücreleri. Fosfat tamponlu salin (PBS) ile bir kez kültür plakaları yıkayın. Hücreler müstakil yılına kadar 37 ° C'de% 95 hava ve% 5 CO2 bulunan nemli bir atmosfere sahip bir kuluçka makinesi içinde, 10 cm tabak 2 mi% 0.05 tripsin ilave edin ve 3-5 dakika inkübe edilir.
    1. topaklanma önlemek için, vurma veya hücrelerin ayırmak için beklerken çanak sallayarak hücreleri ajitasyon yok. tam ortam 5 ml hücreleri toplamak ve 200 x g'de 5 dakika boyunca aşağı doğru döndürün. Tripsin kaldırmak için PBS ile hücre pelet yıkayın.
  3. tripan mavisi dışlama deneyi ile canlı hücreleri numaralandırmak. % 0.4, 10 ul (ağ / hac), tripan mavisi solüsyonu ile PBS içinde hücre süspansiyonu 10 ul karıştırın. Bir hemositometre veya sayma kamara slayt içine karışımı yerleştirin ve mikroskop altında hemen hücreleri saymak ya da bir hücre cou odası slayt okumaknter.
    1. 10 ul medya 2.5 x 10 5 hücre ihtiva eden bir hücre süspansiyonu hazırlanır. 10 ul bazal membran benzeri hücre dışı matris ekstresi ile bir hücre süspansiyonu karıştırılır ve buz üzerinde hücreleri yerleştirin. Hücre süspansiyonuna luciferase ekleyin (1: 200 ul; hazır 30 mg / ml konsantrasyon) farelere enjekte edilmeden önce.
      NOT: Bu farklı deneysel gruplar arasında hücre enjeksiyonları tutarlılığını kontrol etmek için hayvanların hemen biyo-görüntüleme sağlar. hücre canlılığı ayrıldıktan sonra hızla azalır çünkü trypsinization sonra tercihen 30 dakika içinde, mümkün olduğunca çabuk hücreleri enjekte edilir.

Cerrahi Alan 2. Hazırlık

  1. asepsi teşvik derli toplu bir dezenfekte alanda ameliyat.
  2. Ameliyat öncesi çamaşır suyu karışımı ile sayaç / laboratuvar tezgah dezenfekte edin.
    NOT: alkol kullanımı nedeniyle etkisini (15 dk) almak için gerekli uzun temas süresi cesareti olduğunu.
  3. Steril örtüler kullanınemilebilir pedler ya da havlu temizleyin ve her seansta sonra bu malzemeleri değiştirin. Kullanmadan önce tüm aletleri sterilize. Tercih edilen yöntemler, bir hareketli buharlı otoklav içinde, bir cam boncuk sterilizatör etilen oksit gazı ya da hidrojen peroksit buharı sterilizasyon vardır.
  4. cerrahi prosedürü gerçekleştirmek için bir aseptik temizlenmiş diseksiyon mikroskobu kullanın ya da deneyimli araştırmacılar mikroskop olmadan gerçekleştirebilirsiniz.

Tümör Hücreleri 3. implantasyonu

  1. erkek 6-8 haftalık bağışıklığı baskılanmış Balb / c veya NOD / SCID fareleri kullanın.
    Not: Bu, tümör büyümesi ve metastaz yavaş kinetik sahip olma eğilimindedir küçük hayvanlar ve daha büyük hayvanlar üzerinde çalıştırmak için daha zordur.
  2. Hayvan Tesisin talimatlarına göre ön ameliyat ağrısı ilaç enjekte edilir. Örneğin, 0.1 mg / kg vücut ağırlığı bir dozda intra-peritonal buprenorfin kullanılabilir.
  3. oksijen ve wa% 1-3 izofluran ile bir izofluran odasına yerleştirerek hayvanların anestezisibu hayvanların tam olarak anestezi kadar. Bu noktada kas tonusu hiçbir ayak refleks olmadığından emin olun. genel anestezi sırasında kseroftalmiden nedeniyle körlüğü önlemek için uygun veteriner oftalmik merhem yağ kullanın.
    Not: pentobarbital sodyum için araştırmacının tercih edilen bir yöntem, örneğin tarafından hayvanların anestezisi gram vücut ağırlığı başına, 0.05 mg intra-peritonal ya Ketamin / Ksilazin çözeltisi tatbik edilir (konsantrasyon: 17.16 mg / ml) 65 mg / kg dozda vücut ağırlığı subkutan kullanılır. Izofluran inhalasyonu anestezisi tercih edilen bir yöntemdir. göz merhemi hafifçe kornea sürtünmemelidir uygulanmalıdır.
  4. izofluran bölme hayvan çıkarın ve hayvan devam etmeden önce, tam anestezi altında olmasını sağlamak için oksijen,% 1-2 izofluran sürekli akışı ile bir burun konisi cihazının içine koyun.
    1. Tıraş tarafından farelerden alınan saç çıkarın veya prosedürü başlamadan önce saç kremleri kullanın.
      NOT: Ameliyat sırasında steril bir ısıtma yastığı üzerinde fare yerleştirmek için tercih olacaktır.
  5. Bir yatar pozisyonda fare yerleştirin. povidon-iyot çözeltisi,% 70 etanol bezlerden, ardından 10 ağırlık / ağırlık ile% alt karın temizleyin.
  6. ince forseps bir çift, 2 mm prepusyal bezi üzerinde penis kılıf üzerinde yaklaşık 1-2 cm ve göğüs kafesinin alt bölümünün yaklaşık 2-3 cm deri bir alanı kaldırın.
  7. Ilk olarak bir bisturi ile deri yoluyla ve daha sonra bir makas (Şekil 1), kas tabakası içinden uzunluğunda bir orta hat kesimi 1cm sağlayın.
  8. vücut boşluğunda mesane bulun. Bu kesi (Şekil 1) altında doğrudan yer alan sarı-açık kahverengi küresel bir organdır.
  9. ince forseps kavrama bir çift mesane ve penis kılıf doğru vücut boşluğundan dışarı aşağı sonra yukarı kaldırın. Bu beyaz saclike organların çift ve açıkça farklı olan iki seminal veziküller gösterecektir.
  10. Birliktepamuklu çubukla her el, seminal veziküller, teker teker dışa ve vücut boşluğuna çekip çıkarın ve onları ortada mesane (Şekil 2) ile karın dış yüzeye yüzüstü yatıyordu.
  11. İki dorsal prostat lobları açıkça görülebilir şekilde pamuklu çubuklarla kullanarak, yavaşça, penis kılıf doğru mesane boynunun yakın yerleştirilmesi noktasında seminal veziküller geri yatırın. Doku hasarı (Şekil 3) önlemek için ıslak pamuk bezlerden kullanın.
  12. şırıngada yüklemeden önce bir mikropipet ile hücre süspansiyonu çalkalayın.
  13. Bir pamuklu çubukla pozisyonda seminal vezikül yerleştirirken, mikroskop altında dorsal prostat lob (Şekil 4) içine şırınga iğne takın. Bir bül oluşumu tespit edilene kadar yavaş yavaş hücre süspansiyonu 20 ul enjekte edilir. Bir dışarı vurma bül enjeksiyonu doğru olduğunu gösterir.
  14. ile enjeksiyon yerinde hafifçe iğne basın retracting ikenBirkaç saniye için bir pamuklu çubukla ve tutma sızıntısını önlemek için.
  15. Dikkatle pamuklu seminal veziküller kaldırın ve mesane ardından tek geri vücut boşluğunda birine bunları takın. Bu yordamı gerçekleştirirken 'twirling' iç organları kaçının.
  16. vücut boşluğuna geri organları yerleştirdikten sonra, emilmeyen 4-0 naylon cerrahi sütür ile cilt kapatılması ardından emilebilir 4-0 kromik katgüt sütür ile kesintiye uğramış bir desen ilk kas tabakası dikin. deri de tamamen insizyon kapatmak için bir araya çekti ve cerrahi kelepçeler ile kapatılabilir.
    NOT: Fareler de dikişler ile birlikte tavsiye edilir çizilme ve dolayısıyla yara açılması yeniden doku yapıştırıcısı kullanımı yol açabilir onların yara, ısırma bir alışkanlığı var. Görüntü hayvanlar derhal deney grupları arasındaki eşit biyolüminesans yoğunluk var olduğundan emin olmak için.
  17. kafesleri temizlemek ve ısınma lambası veya ısı altında tutmak için hayvanların dönmekped ing. tamamen anestezi kurtarmak ve sternum yatma korumak kadar sürekli hayvanları izleyin.

Hayvanların 4. İzleme

  1. kurumsal protokollere göre, deney sonuna kadar düzenli olarak hayvanların izleyin. Cerrahi metal klips kullanıyorsanız, bir iki hafta sonra kaldırın. Deney süresi belirli bir araştırma ihtiyacı bağlıdır.
    NOT: Bu deney, sıçan prostatı implante kanser hücrelerinin başarılı bir kuruluş incelemek için 21 gün boyunca uygulanmıştır.
  2. Hayvan Tesisin talimatlarına göre ağrı ilaç yönetmek. Gerektiğinde, örneğin 0.1 mg / kg vücut ağırlığı bir dozda intra-peritonal buprenorfin 6 saat ve daha fazla doz uygulandıktan sonra ikinci bir doz işlem sırasında her 8-12 saat kullanılır.
  3. Hayvan ağırlığı, gıda tüketimi, ten rengi ve dokusu, aktivite ve idrar ve dışkılama sıklığı izleyin. hayvanların immed euthanizegeçirmeden% 15 daha büyük bir vücut ağırlığı önemli bir kayıp olup olmadığını.
    1. Ötenazi için, bilinç kaybı ve tam uyuşurucu meydana böylece CO2 yavaş yavaş odasına girmek için izin, oda ya da kafes hacmi / dakika 10-30% değiştirmesi için bir akış hızında bir un-kalabalık kafesin içine basınçlı bir tanktan CO 2 teslim ölümünden önce.
    2. Solunum durması sonrasında, en az bir dakika süre ile CO2 akış korumak ve ölüm fiziksel yöntemin gerçekleştirilmesi öncesinde gerçekleştirilen, böylece yeterli bir süre için bölmeye hayvanlar bırakın.
    3. Gerçekleştirin decapitation, servikal dislokasyon veya başka herhangi bir IACUC kimyasal hayvanları euthanizing sonra fiziksel yöntemi onayladı.
      NOT: Önemli ölçüde azaltılmış vücut ağırlığı genellikle uyuşuk durumunu gösterir. Tümör taşıyan hayvanlar, deneyin sonuna kadar, tümör varlığı dışında sağlıklı olmalıdır. Ötenazi Ötanazi AVMA Yönergeleri ile uyumlu olmalıdır ve liste olmalıonaylanmış IACUC protokolü, d.

Hayvanların 5. Non-invaziv Biyo-görüntüleme

  1. haftalık, kanser hücrelerinin, tümör büyümesi ve herhangi bir uzak metastaz kolonizasyonunu izlemek için non-invaziv bir görüntüleme tekniği kullanılarak hayvanları izleyin.
    NOT: vb GFP-görüntüleme, Lusiferaz görüntüleme, X-ışınları veya 3D mikro-bilgisayarlı tomografi (UCT) gibi görüntüleme yöntemleri spesifik araştırma dayalı kullanılabilir 12-15 gerekir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Prostatik lobuna PC3M-Luc-C6 hücrelerinin ortotopik implantasyonu takiben fareler haftada deney sırasında (- B Şekil 5A) üzerinden hücrelerin kolonizasyonunun ve tümör büyümesini izlemek için canlı bir hayvan biyolüminesans görüntüleme sistemi kullanılarak görüntülendi. bioluminescent sinyal Niceleme PC3M-Luc-C6 hücreleri başarıyla prostat lobları kolonize olduğunu göstermiştir. Artan biyolüminesans deneyi (Şekil 5B) boyunca artan primer tümör büyümesi göstergesidir. Araştırma hedefe göre, fareler tümör büyümesini ve herhangi bir uzak metastatik lezyonlar izlemek için radyografi, floresan veya lüminesans görüntülemesi ile haftalık non-invazif izlenebilir. Bu model ile elde edilebilir diğer parametreler şunlardır: vücut ağırlığı ve deney boyunca besin tüketiminde değişimler; Tümör boyutu ve ağırlığına ilaç tedavisinin etkisi; miktardeneyin sonunda tümör boyutu ve ağırlığı; DNA / RNA / protein emme deney sona ermesinden sonra, birincil tümör içerisinde meydana gelen moleküler değişimleri tespit etmek.

Şekil 1
Şekil 1:., Tümör hücrelerinin içi prostat implantasyonu için karın orta hat kesimi karın orta hat kesimi yaklaşık 1-2 cm uzunluğundadır. Mesane kesi altında yer almaktadır. Nazik kesi her iki basarak mesane çıkıntı için yardımcı olur. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

şekil 2
Şekil 2: en çok seminal veziküllerin düzenlenmesitra-prostat tümör hücrelerinin implantasyonu. Seminal veziküller beyaz kese benzeri organları ve mesane doğrudan bitişik yer almaktadır. Seminal veziküller pamuklu batın ve sol düzenlenmiş ve merkezinde sağ mesane ile. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 3,
Şekil 3:. İki dorsal prostat lobları açıkça görülebilir şekilde prostat sırtı yerleştirilmesi noktasında hafifçe penis kılıf doğru seminal veziküller geri yatırın. Doku hasarı önlemek için ıslak pamuk bezlerden kullanın. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

"Şekil Şekil 4:.. Tümör hücrelerinin içi prostat implantasyon Tümör hücreleri prostat dorsal lob içine enjekte edilir , bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 5,
Şekil 5:. Içi prostat implantasyon modeli in vivo biyolüminesans görüntülemede (A) 'in vivo lusiferaz etiketli PC3M-Luc-C6 sonra hücreler deney süresi boyunca fareler biyoışıldama Fotoğraflar çıplak farelerin dorsal prostat lob implante edildi. Biyolüminesans sinyalinin (B) Niceleme PC3M-Luc-C6 hücreleri başarıyla increas ile prostat bezini kolonize olduğunu gösterirDeney boyunca ortotopik tümör büyümesini ed. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Bu el yazması bir insan ortotopik prostat kanseri ksenograft fare modeli oluşturmak için ayrıntılı bir yordam açıklanır. Bu model, bağışıklık yetersizliği olan farelerde dorsal prostat loblar, insan prostat kanseri hücre kuşağı PC3M-Luc-C6 doğrudan implantasyonu ile kurulmuştur. Tümörler deney boyunca gelişmeye bırakılmıştır. Tümör büyüme deney sırasında bir non-invaziv biyoparlaklık görüntüleme sistemi ile haftalık izlendi.

Ksenograft tümör modelleri oluşturulmasında en önemli faktör, tümör hücreleri implante boyunca tutarlılık elde etmektir. istatistiksel olarak anlamlı sonuçlar elde etmek için her bir deney grubu 5-10 fare içermelidir ve tümör boyutu değişimi ortalama tümör boyutunun% 10'undan fazlasını geçmemelidir. Bu hedefe ulaşmak için, protokolde içinde bazı kritik adımlar gibi, önemlidir: i) ameliyat sırasında asepsi teşvik alanda ameliyat yapmak; ii) hücre olmalıdır transplanteen kısa sürede kültürde ayrıldıktan sonra; iii) enjeksiyon hacmi tutarlı olmalıdır; hücrelerin nakledilmesi sırasında ve vücut boşluğunun dışında iç organların IV) dikkatli bir kaldırma; v) bütün hayvanlar aynı tekniği ve bir araştırıcı tarafından kullanılarak enjekte edilmelidir; vi) hayvanlar, tümör hücre implantasyonu sonrası deneysel gruba randomize gerekmektedir.

oluşabilecek bazı sorunlar şunlardır: i) tümör hiç gelişmez veya tümör nodülleri mezenter veya vücut boşluğunda geliştirmek; ii) düzensiz tümör boyutu aynı deney grubunda görülmektedir; iii) yüksek cerrahiye bağlı mortalite olabilir. Bu sorunlar gibi basit önlemler alarak üstesinden gelinebilir: mikoplazma, vb ile herhangi bir kirlenme hücre kültürü test) i; ii) enjeksiyon sırasında mezenter ve karın boşluğuna, tümör hücresi süspansiyonu sızmasını önlemek; iii) Her şırınga yüklemeden önce hücre süspansiyonu ajitasyon; iv) Uygun anestezi dozu fol olmalıdırizlemekte ve ısıtma pedleri işlemi sırasında vücut ısısını korumak için kullanılır.

Verilerin çeşitli fare ağırlığı, yiyecek tüketimi, tümör boyutu ve ağırlığına, bölgesel lenf düğümü metastazı 10 yanı sıra, tümör büyümesine katkı tümör hücrelerinde genetik ve moleküler değişiklikler dahil olmak üzere, belirli bir araştırma amacına bağlı olarak, bu model kullanılarak toplanabilir 16. Hoffman ve grubu cerrahi ortotopik implantasyon (SOI) tekniğini geliştirmiş ve yoğun kemirgenler 17 prostat, mesane ve böbrek kanserleri dahil olmak üzere insan kanserlerinin başlıca türleri histolojik olarak sağlam parçaları nakli için bu tekniği kullandık. Onlar doğru klinik kanser 18,19 temsil gibi bu ortotopik modeller transgenik veya deri altı fare modelleri üzerinde avantajı var. Bu modeller aynı zamanda bağışıklık yetersizliği olan rode mukabil organı hastaların doğrudan alınan tümör nakli için kullanıldıNTS. Ortotopik modelleri de iyi tümör büyümesini ve lenf nodu metastazı 10 ilaç tedavisinin etkilerini incelemek için uygundur. Ayrıca, ex vivo gen ekspresyonu değişimlerinin etkilerini inceleyen, ve tümör insidansı üzerindeki etkisini hem de içi prostat büyümesi ve metastazı 20 belirlemek için faydalıdır. Ancak, ortotopik prostat kanseri modelinde bir sınırlama böyle modeller prostat kanseri metastazı 12 en sık sitedir kemiğe spontan metastaz yol bildirilmiştir olmasıdır.

Fare mikroçevresinin, insan mikro özetlemek başarısız olduğundan kemik metastazı ulaşmak için başarısızlık nedeniyle metastatik lezyonlar gelişebilir herhangi kemik önce idrar tıkanıklığı ölen farelere olabilir veya bu nedenle kemik geliştirmek için başarısız 12 metastazları. Bununla birlikte, bu model önceden emboli ve tümör hücrelerinin giriş metastatik kademeli olarak erken olayları özetlemek yapardolaşıma ve bu nedenle primer tümör, metastatik dönüşüm ve yeni tedavi stratejileri 10,12 preklinik değerlendirmeler için erken sürecini incelemek için değerli bir araçtır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
PC3 prostate cancer cell line  ATCC CRL-1435
Minimum Essential Medium (MEM)  GIBCO,Life Technology 11095-080
PBS GIBCO,Life Technology 10010-023
FBS GIBCO,Life Technology 10437-028
Zeocin Invitrogen,Life Technology R250-01
Trypsin  GIBCO,Life Technology 25300-54
IVIS  Xenogen-Caliper
Insulin Syringes (300 µl, 28.5 g) Becton Dickinson 309300
Mice Charles River Laboratories, Inc
Alcohol Swabs MEDEquip Depot 326895 BD
PVP Iodine Prep Pad MEDEquip Depot C12400PDI
Surgical CatGut Chromic Suture Demetech CC224017F0P
Matrigel Corning 354248

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2015. CA Cancer J Clin. 65, (1), 5-29 (2015).
  2. Andrieu, C., et al. Heat shock protein 27 confers resistance to androgen ablation and chemotherapy in prostate cancer cells through eIF4E. Oncogene. 29, (13), 1883-1896 (2010).
  3. Fusi, A., et al. Treatment options in hormone-refractory metastatic prostate carcinoma. Tumori. 90, (6), 535-546 (2004).
  4. Hughes, C., Murphy, A., Martin, C., Sheils, O., O'Leary, J. Molecular pathology of prostate cancer. J Clin Pathol. 58, (7), 673-684 (2005).
  5. Pavese, J., Ogden, I. M., Bergan, R. C. An orthotopic murine model of human prostate cancer metastasis. J Vis Exp. (79), e50873 (2013).
  6. Pettaway, C. A., et al. Selection of highly metastatic variants of different human prostatic carcinomas using orthotopic implantation in nude mice. Clin Cancer Res. 2, (9), 1627-1636 (1996).
  7. Rembrink, K., Romijn, J. C., van der Kwast, T. H., Rubben, H., Schroder, F. H. Orthotopic implantation of human prostate cancer cell lines: a clinically relevant animal model for metastatic prostate cancer. Prostate. 31, (3), 168-174 (1997).
  8. Kim, S. J., et al. Blockade of epidermal growth factor receptor signaling in tumor cells and tumor-associated endothelial cells for therapy of androgen-independent human prostate cancer growing in the bone of nude mice. Clin Cancer Res. 9, (3), 1200-1210 (2003).
  9. Kim, S. J., et al. Targeting platelet-derived growth factor receptor on endothelial cells of multidrug-resistant prostate cancer. J Natl Cancer Inst. 98, (11), 783-793 (2006).
  10. Park, S. I., et al. Targeting SRC family kinases inhibits growth and lymph node metastases of prostate cancer in an orthotopic nude mouse model. Cancer Res. 68, (9), 3323-3333 (2008).
  11. Zhang, J., et al. AFAP-110 is overexpressed in prostate cancer and contributes to tumorigenic growth by regulating focal contacts. J Clin Invest. 117, (10), 2962-2973 (2007).
  12. Park, S. I., Kim, S. J., McCauley, L. K., Gallick, G. E. Pre-clinical mouse models of human prostate cancer and their utility in drug discovery. Curr Protoc Pharmacol. Chapter 14, Unit 14.15 (2010).
  13. Johnson, L. C., et al. Longitudinal live animal micro-CT allows for quantitative analysis of tumor-induced bone destruction. Bone. 48, (1), 141-151 (2011).
  14. Steinbauer, M., et al. GFP-transfected tumor cells are useful in examining early metastasis in vivo, but immune reaction precludes long-term tumor development studies in immunocompetent mice. Clin Exp Metastasis. 20, (2), 135-141 (2003).
  15. Yang, M., et al. A fluorescent orthotopic bone metastasis model of human prostate cancer. Cancer Res. 59, (4), 781-786 (1999).
  16. Stephenson, R. A., et al. Metastatic model for human prostate cancer using orthotopic implantation in nude mice. J Natl Cancer Inst. 84, (12), 951-957 (1992).
  17. Hoffman, R. M. Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic. Invest New Drugs. 17, (4), 343-359 (1999).
  18. Wang, X., An, Z., Geller, J., Hoffman, R. M. High-malignancy orthotopic nude mouse model of human prostate cancer LNCaP. Prostate. 39, (3), 182-186 (1999).
  19. An, Z., Wang, X., Geller, J., Moossa, A. R., Hoffman, R. M. Surgical orthotopic implantation allows high lung and lymph node metastatic expression of human prostate carcinoma cell line PC-3 in nude mice. Prostate. 34, (3), 169-174 (1998).
  20. Kim, S. J., et al. Reduced c-Met expression by an adenovirus expressing a c-Met ribozyme inhibits tumorigenic growth and lymph node metastases of PC3-LN4 prostate tumor cells in an orthotopic nude mouse model. Clin Cancer Res. 9, (14), 5161-5170 (2003).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics