Выделение Периваскулярный мультипотентных предшественников клеточных популяций из человеческой ткани сердца

Developmental Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Developmental Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

Человеческой сердечной ткани укрывает мультипотентных популяции клеток-предшественников периваскулярные, которые могут быть пригодны для регенерации миокарда. Техника , описанная здесь , позволяет одновременно выделения и очистки двух мультипотентных клеточных популяций стромы , связанных с носителями кровеносных сосудов, т.е. CD146 + CD34 - перицитов и CD34 + CD146 - адвентициальных клетки, из миокарда человека.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Baily, J. E., Chen, W. C., Khan, N., Murray, I. R., González Galofre, Z. N., Huard, J., Péault, B. Isolation of Perivascular Multipotent Precursor Cell Populations from Human Cardiac Tissue. J. Vis. Exp. (116), e54252, doi:10.3791/54252 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Introduction

Сердце уже давно считается постмитотическими орган. Однако недавние исследования показали наличие ограниченного оборота кардиомиоцитов у взрослых человеческих сердец 1. Родные стволовые клетки / клетки - предшественники с кардиомиоцитов дифференцировке также были определены в миокарде у взрослых грызунов и человеческие сердца, в том числе Sca-1 +, C-Kit +, cardiosphere-формирующей, и совсем недавно, периваскулярные клетки - предшественники 2,3. Эти клетки представляют привлекательными кандидатами для терапии , направленных на повышение сердечного восстановления / регенерации через трансплантации клеток или стимуляции пролиферации на месте.

Мезенхимальных стволовых / стромальных клеток (МСК) были выделены из почти каждой ткани человека 4,5 Клинические испытания терапевтических применений MSC были проведены для нескольких патологических состояний , таких как сердечно - сосудистые ремонта 6, трансплантат против хозяина заболевания 7 8. Благоприятные эффекты были приписаны способности к MSCs: дома к местам воспаления 9; дифференцироваться в различные типы клеток 10; секретируют про-репаративных молекул 11; и модулировать иммунные реакции хозяев 12. Изоляция MSCs традиционно полагались на их преимущественной соблюдения пластиковых подложках. Тем не менее, в результате популяция клеток , как правило , заметно гетерогенным 13. При использовании флуоресцентного активированной сортировки клеток (FACS) с комбинацией ключевых маркеров периваскулярных клеток, мы смогли выделить и очистить мультипотентных MSC-как население предшественника (CD146 + / CD31 - / CD34 - / CD45 - / CD56 -) от несколько человеческих тканей , включая взрослых скелетных мышц и белого жира 14.

Периваскулярные клеточные популяции в различных несердечных тканей было показано, что имеют свойства стволовых / прогениторных кювета системые исследуются для клинического применения в сердечно-сосудистой обстановке. Перициты, один из самых известных околососудистых подмножеств клеток, являются гетерогенной популяции , которые играют несколько ролей патофизиологические в том числе в разработке новых судов 15, регулирование кровяного давления 16, и поддержание целостности сосудов 17,18. Как было показано во многих тканях, специфические подмножества перицитами изначально выразить MSC антигены и поддерживать их MSC-подобные фенотипы в первичной культуре после FACS очистки 14. Кроме того, эти клетки стабильно сохраняют свои долгосрочные фенотипов внутри культуры и демонстрируют несколько клонов дифференциации потенциал, похожий на MSCs 19,20. Эти результаты свидетельствуют о том, что перицитов являются одним из истоков неуловимого MSC 14. Терапевтический потенциал перицитов было продемонстрировано с сокращением миокарда рубцевания и расширение функции сердца после трансплантации в ишемией ранениясердца 21. В последнее время мы успешно очищают перицитов из миокарда человека и продемонстрировали свои МСЦ-как фенотипы и мультипотентность (липогенез, хондрогенезе и остеогенез) при отсутствии скелетной миогенезе 3. Кроме того, инфаркты перицитов выставлены дифференциальные cardiomyogenic потенциал и развитие кровеносных сосудов потенциала по сравнению с аналогами, очищенных из других органов.

Вторая популяция мультипотентных периваскулярных стволовых клеток / клеток - предшественников, в адвентиции клетки, был выделен из подкожных вен человека на основе выражения 22 положительным CD34. Венозные адвентициальные клетки , как было показано , чтобы иметь потенциал, клоногенных мезодермального способность дифференциации и проангиогенные потенциал в пробирке. Трансплантация этих клеток в ишемией сердца травмированных мышей привело к уменьшению интерстициального фиброза, увеличение ангиогенеза и кровотока миокарда, снижение желудочковой разбавленнойвания, а также увеличение сердечного выброса фракция 23. Интересно отметить , что жировая адвентициальные клетки было показано , что теряют экспрессию CD34 и CD146 выражение апрегулируются в культуре в ответ на лечение Ангиопоэтинподобный II, что предполагает принятие перицитов фенотипа при стимуляции 24. В сердце, тем не менее, адвентиции популяция клеток еще не перспективно очищают FACS и / или хорошо охарактеризованы. Используя процедуры выделения клеток, описанных в следующих разделах, мы в настоящее время характеризующие инфаркты адвентициальных клетки и исследовать их потенциал для регенеративной приложений.

Здесь мы опишем способ выделения и очистки двух субпопуляций периваскулярными стволовых клеток / клеток-предшественников из эмбриона человека или взрослого миокарда. Этот метод выделения проспективное клеток позволит исследователям получить изогенных периваскулярные подмножества стволовых / прогениторных клеток из биопсий сердца человека для проведения сравнительных исследований и furtheR исследовать их терапевтический потенциал в различных сердечных патологических состояниях.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Обработка человеческого кардиохирургии образца

  1. Убедитесь, что все жидкости, контейнеры, инструменты, а также специализированный оперативной области являются стерильными.
  2. Поместите образец ткани сердца (закупленные банка тканей или хирургической бригады) в запоминающей среде, состоящей из модифицированной среды охлажденной Дульбекко Eagle (DMEM), содержащей 20% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS) и 1% пенициллина-стрептомицина (P / S) на льду для перевозки 3.
  3. Удалить сердечный образец из запоминающей среды и промывают промывной среды, состоящей из фосфатно-солевым буферным раствором (PBS) с добавлением 2% FBS и 1% P / S. При обработке образца, используйте точная наклоненная пинцетом захватить крупные сосуды или перикард и свести к минимуму дробление миокарда.
  4. Погрузите образец в моющей среде в чашке Петри и удалить перикарда, эндокарда и крупные кровеносные сосуды с стерилизованных ириса ножницами и остроконечного пинцета , как описано 3.
  5. Отрежьте оставшиеся myocardium на мелкие кусочки примерно 1 мм 3 с помощью одной стороне лезвия бритвы или пару острых ножниц радужной оболочки глаза. Примечание: Наиболее высокие выходы ячеек будут получены, если образцы обрабатываются немедленно. Если задержка неизбежна, хранение обработанной ткани сердца в свежей среде для хранения (> 5 мл на 1 см 3 ткани) при 4 ° С в течение 72 ч , возможно, однако , предположительно с соответствующим снижением выхода клеток.

2. Расщепление ткани и выделение клеток

  1. Свежеиспеченный составляют переваривания раствор, содержащий 1,5 мл каждого из коллагеназы I, коллагеназы II и коллагеназы IV (все по 0,5 мг / мл в DMEM) и нагревают до 37 ° С в водяной бане.
    Примечание: Объем и концентрация коллагеназы пригодны для образцов приблизительно 1 см 3.
  2. Фильтр приостановленные кусочки ткани через сито 100 мкм и дважды промывают PBS. Передача части ткани в стерильный 30 мл контейнера сплотно закрытой крышкой.
    Примечание: Короткие широкие горшки, а не высокие узкие трубки дают лучшие результаты. В качестве альтернативы, положить кусочки ткани в стерильный 50 мл пробирку и помещают горизонтально, если 30 мл баллона под недоступен.
  3. Добавьте все пищеварением растворы (4,5 мл всего) и поместите контейнер в герметичном полиэтиленовом пакете в ванне 37 ° C встряхивании воды, установленного до 120 оборотов в минуту. В качестве альтернативы, запечатать контейнер с парафиновой пленкой и поместить в нагретую орбитальном шейкере до 120 оборотов в минуту.
  4. Через 15 минут снимите и переверните горшок три раза, прежде чем заменить в течение еще 15 мин. Удалить и гасят коллагеназы с 5 мл DMEM, дополненной 20% FBS и 1% P / S.
  5. Растирают дайджеста осторожно пипеткой от десяти до двадцати раз с 10 мл серологической пипеткой, чтобы разбить комки любые ткани. Суспензию фильтруют последовательно через 100 мкм, 70 мкм и, наконец, 40 мкм клеточных сетчатые для удаления непереваренных материалов и получения суспензии отдельных клеток.
    Заметка:Не смывать между клеточными стяжек, чтобы избежать клетки debrisgenerated в процессе пищеварения фермента.
  6. Центрифуга клеточной суспензии при 200g в течение 4 мин, осторожно декантируют супернатант и повторно приостанавливать осадок в 1 мл эритроцитов лизирующего буфера в течение 2 мин при комнатной температуре перед разбавлением 4 мл промывочной среды.
  7. Повторите центрифугирования и повторно приостанавливать осадок в 1 мл промывочного раствора. Хорошо перемешать и принимать по 10 мкл клеточной суспензии для подсчета клеток.
  8. Смешать 10 мкл клеточной суспензии с 10 мкл трипанового синего красителя и помещают по 10 мкл смеси на стандартном гемоцитометра для подсчета клеток. Подсчитайте количество ярких, круглых клеток, присутствующих в четырех угловых квадратов (каждый разделен на шестнадцать маленьких квадратов) и разделить на 4, чтобы получить среднее значение за угла квадрата. Умножьте среднее значение на 2 для учета коэффициента разбавления пятно , а затем 10 4 , чтобы получить общее количество клеток на 1 мл образца.

  1. Добавляют 50 мкл мышиной сыворотки к суспензии клеток и инкубировали при 4 ° С в течение 20 мин, чтобы блокировать связывание неспецифическое антитело.
  2. Центрифуга клеточной суспензии с мышиной сывороткой при 200g в течение 4 мин, удаления надосадочной жидкости, и повторно приостанавливать в моющей среде при концентрации 1 × 10 6 клеток на 100 мкл.
  3. Аликвоты по 50 мкл каждой клеточной суспензии для изотипа и неокрашенных контролей в два полистирола с круглым дном проточной цитометрии трубки затем поместить оставшийся объем в третью пробирку для многоцветной окраски.
  4. Добавить CD34-PE, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-PerCP-Cy5.5 и CD146-AF647 антитела (всего 1: 100) в одной клеточной суспензии для многоцветного окрашивания. Для контроля изотипа, добавьте эквивалентные объемы, APC PE-Cy7--, PE-Cy7-, PerCP-Cy5.5- и AF647-сопряженными изотипных антител. Аккуратно пипетку, чтобы смешать антитела с клетками и инкубировать все пробирки при температуре 4 ° С в течение 20мин в темноте.
  5. Готовят управления корректировкой бусинки, добавив одну каплю положительных бусинок к 100 мкл промывочного раствора в пяти полистирола с круглым дном и проточной цитометрии трубок. Добавить CD34-PE, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-PerCP-Cy5.5 и CD146-AF647 антитела (всего 1: 100) по отдельности к каждому из 5 трубок. Инкубируйте все пробирки при температуре 4 ° С в течение 20 мин в темноте.
  6. Во время инкубации, готовят сбора клеток пробирки, каждая с 500 мкл роста эндотелия сосудов среднего-2 (EGM-2) культуральной среды и место при 4 ° С.
  7. После инкубации антитела, добавляют 5 мл промывочной среды, чтобы промыть клетки и бусы с целью удаления несвязанного антитела. Центрифуга все пробирки при 200 мкг в течение 4 мин. Повторите для стирки и центрифугирования шаг. Осторожно сливают супернатант и пипетку осторожно при ресуспендирования клеток.
  8. Ресуспендируйте в моющей среде в концентрации приблизительно 1 × 10 6 клеток на 250 мкл. Повторное приостановить бисером в 100 мкл промывочного мedium.
  9. Транспорт все клеточные и Шарик суспензии клеток к сортировщика на льду в темноте. Добавьте 1 каплю отрицательных бус положительных трубок контроля компенсации шарик и использовать их, чтобы установить компенсацию флуоресценции.
  10. Запуск неокрашенные клетки управления в соответствии с инструкциями изготовителя по созданию фоновой флуоресценции и установить напряжение к следующему: FSC 150V; SSC 290V; V450 / 50 350V; V710 / 50 620V; B530 / 30 400В; B710 / 50 530V; YG780 / 60 460; R670 / 30 480В; R780 / 60 460В. Запуск изотипы управления в соответствии с инструкциями изготовителя, чтобы установить фон флуоресценции пороги, связанные с неспецифическое связывание. Запуск многоцветной окрашенного образца и собирать перицитов и популяции адвентициальных клеток в приборке (рисунок 1).
    Примечание: Оптимальные выходы жизнеспособных клеток являются приблизительно 3% от общей диссоциации живых клеток для перицитов и 4% для адвентициальных клеток.

4. Культура клеток

  1. Выберите подходящий размер культуры пластины в соответствии с итогами сортировкой FACS. Добавляют 100 мкл стерильного 0,2% раствора желатина на см 2 площади роста и перемешивать вручную , чтобы покрыть всю скважины. Инкубируйте пластины при температуре 4 ° С в течение 10 мин и полностью удалить раствор желатина. Держите собранные клетки на льду во время приготовления культуры пластин.
    Примечание: отсортированный перицитов и адвентициальные клетки растут хорошо , когда высевали при плотности от 30000 до 40000 клеток / см 2 на желатин покрытием поверхности культуры.
  2. Центрифуга свежесобранных клеток при 200g в течение 4 мин и осторожно повторно приостанавливать осадок клеток в соответствующем количестве EGM-2.Seed клеток на покрытых желатином пластин.
    Примечание: Фактическое количество ячеек, которые будут посеяны на лунку, и количество EGM-2, которые будут добавлены в зависимости от выбора пластины. Например, 0,5 мл и 1 мл EGM-2 необходимы на лунку в течение 48- и 24-луночные планшеты, соответственно.
  3. Обмен EGM-2 для средних периваскулярная роста клеток (DMEM, дополненной 20% FBS и 1% P / S) для обоих перицитов и адвентициальных клеток, как только клетки осели и приклеена к пластине (после того, как по меньшей мере 72 ч). Изменение средств массовой информации каждые 72 ч с тех пор. Проведение первоначального и всех последующих инкубацию в 5% СО 2 и при 37 ° С.
  4. Диссоциируют клеток с использованием 0,05% трипсина ЭДТА при перицитов и адвентициальные клетки достигают от 80 до 90% слияния. Гасили 20% FBS в PBS, центрифугируют при 200g в течение 4 мин, повторно приостанавливать в околососудистой среде для роста клеток, а затем прохождение клеток при соотношении 1: 3 на непокрытых полистирол культуральных планшетах. От Пассаж 2 года и далее, прохождение клетки в соотношении 1: 5 (или приблизительно 7000 клеток / см 2) без покрытия пластин полистирола культуры или колб.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Отдельные клетки отличались от мусора и дублетов на основе распределений вперед и бокового рассеяния. Живые клетки были идентифицированы по их непринятие до красителя DAPI. Стратегия стробирования была выбрана на основе управления изотипическим маркировки этого живого, всего-сердечной диссоциации клеток (рисунок 1). Из живых клеток, CD45 + клетки сначала закрытого типа из, а затем CD56 + клеток. CD144 + эндотелиальные клетки затем удаляют из CD56 - фракции. Из этой конечной популяции, CD146 + / CD34 - перицитов и CD146 - / CD34 + адвентициальные клетки были отобраны и затем собирали (рисунок 2). Сразу же после сбора клеток, небольшой образец каждой субпопуляции (500-1000 клеток) повторно запустить через сортировщик, чтобы подтвердить, что распределение клеток было, как записано в первоначальном рода. FACS-очищенными Перич миокарда ytes и адвентициальные клетки оба демонстрируют шпиндель звездчатых морфологии клеток в культуре (рисунок 3).

Рисунок 1
Рисунок 1: FACS. Gating Стратегия Представительные точек графики контроля изотипа меченых диссоциированных клетки сердца человека иллюстрируют позиционирование сортировки ворот .. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

фигура 2
Рисунок 2: FACS Очистка Инфаркт Периваскулярный клеток Представитель сортировкой двух субпопуляций сердечных клеток - предшественников околососудистых из одного образца миокарда человека..эс / ftp_upload / 54252 / 54252fig2large.jpg "целевых =" _blank "> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 3
Рис . 3: Периваскулярный Морфология клеток в культуре Два сердца популяции периваскулярные клеток - предшественников, перицитов (левая панель) и адвентициальные клетки (справа) были отсортированы до гомогенного состояния путем очистки FACS и дальнейшее расширение в культуре (при прохождении 3, масштаб бар = 50 мкм ). Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Растущие доказательства поддерживает ограниченную регенеративную способность взрослого сердца человека после травмы. Идентификация и характеристика нативных клеток-предшественников, ответственных за такие регенеративных реакций в травмированных сердцах имеют решающее значение как для понимания связанных с ними механизмов и путей передачи сигналов и разработка подходов для использования этих клеток в терапевтических целях.

Предыдущие протоколы описали выделение околососудистых подмножеств клеток - предшественников из скелетных мышц человека 25. Однако непосредственное применение этих методов к сердечной ткани часто приводит к очень плохой выход клеток. Таким образом, мы внесли серьезные коррективы в протокол, чтобы обогатить два дискретных субпопуляций периваскулярных клеток-предшественников, а именно перицитов и адвентициальных клеток, от инфарктов биопсий человека и облегчить одновременное очищение обоих подмножеств. Выделение двух клеточных популяций из s-Ame образец не только оптимизирует использование драгоценных биопсий сердечной ткани, но и позволяет прямое сравнение различных околососудистых подмножеств клеток.

Для того чтобы получить максимальный выход клеток, свежесть образца ткани имеет решающее значение. Максимальные жизнеспособные выходы сотой для перицитов и адвентициальных клеток примерно 3% и 4% от общей клеточной диссоциации живого соответственно. Урожайность может значительно варьироваться от примерно 30000 до 400000 клеток на подмножестве и в значительной степени зависят от целого ряда факторов, в том числе от количества и качества исходной ткани и длительности консервации. Периваскулярные клетки относительно тонкий; Образцы, показывающие свидетельства аутолитической изменения неизменно дают низкие числа клеток после FACS. Точно так же, периваскулярные клетки чувствительны к суровым методам пищеварения, и чрезмерное пищеварения также приведет к уменьшению жизнеспособного выхода клеток. Настроенные корректировки времени пищеварения и скорости перемешивания может быть необходимым индивидамил лаборатории. И, наконец, возраст донора и размер выборки также будет иметь значительное влияние на урожайность клеток.

Мы широко охарактеризованы сердечные перицитов , полученные таким образом 3. Эти клетки продемонстрировали гомогенности в культуре, без загрязнения эндотелиальных клеток. Население времена около 60 часов между проходами 3 и 12 удваивая с последовательным экспрессии обоих общих маркеров перицитов были отмечены (щелочной фосфатазы, NG2 и α-SMA) и классические маркеры MSC (CD44, CD73, CD90 и CD105) в течение этого периода. Интересно, что было обнаружено, что после того, как деметилирование, фракция сердечных перицитах выразили cardiomyogenic факторы транскрипции Nkx2.5 и GATA4. При культивировании совместно с неонатальных кардиомиоцитов крысы, фракция деметилируется сердца перицитами выразил саркомерного белковые маркеры альфа-актинин и сердечного тропонина-Т с небольшой группой дополнительно выставляется спонтанные цитоплазматические потоки кальция. Взятые вместе, эти находки suggeго, что субпопуляции сердца перицитами обладает cardiomyogenic потенциалом и, следовательно, может играть определенную роль в собственном инфарктом процессе ремонта. По сравнению с перицитами, сердечные адвентициальные клетки остаются в значительной степени неохарактеризованных. Наши неопубликованные предварительные данные свидетельствуют о том, что сердечные адвентициальные клетки экспрессируют некоторые маркеры перицитов, такие как PDGFR-бета и NG2, хотя и на более низких уровнях, чем сердечных перицитами, в то время как потери CD34 в культуре. Эти клетки также выражают классические маркеры MSC и показать остеогенной и Adipogenic дифференциации потенциал. Дальнейшие исследования сердца адвентициальных клеток, включая развитие кровеносных сосудов и про-кардиогенных свойств продолжаются.

Протокол, описанный здесь, позволяет одновременно, предполагаемую очистку сердечных перицитов и адвентициальных клеток из одного образца сердечной ткани человека. Эти клетки представляют собой новые популяции клеток сердца предшественника с потенциальными cardiomyogenic свойствами, которые могут оказаться подходящими кандидатэс для будущих методов лечения клеток.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
AbC Anti-mouse Bead Kit Molecular Probes A-10344
Collagenase I Gibco 17100-017 Reconstitute powder as required and filter sterilise
Collagenase II Gibco 17101-015
Collagenase IV Gibco 17104-019
anti-human CD34-PE BD Pharmingen 555822 Keep sterile
anti-human CD45-APC-Cy7 BD Pharmingen 557833 Keep sterile
anti-human CD56-PE-Cy7 BD Pharmingen 557747 Keep sterile
anti-human CD144-PerCP-Cy5.5 BD Pharmingen 561566 Keep sterile
anti-human CD146-AF647 AbD Serotec MCA2141A647 Keep sterile
EGM2-BulletKit Lonza CC-3162 For collection of cells and culture until adhered
DMEM, high glucose, GlutaMAX without sodium pyruvate ThermoFischer Scientific 10566-016
Fetal Bovine Serum ThermoFischer Scientific 10500-064 Freeze in aliquots and keep sterile
Gelatin Sigma Aldrich G1393 Dilute with sterile water
IgG1k-PE BD Pharmingen 559320 Keep sterile
IgG1k-APC-Cy7 BD Pharmingen 557873 Keep sterile
IgG1k-PE-Cy7 BD Pharmingen 557872 Keep sterile
IgG1k-PerCP-Cy5.5 BD Pharmingen 561566 Keep sterile
IgG1k-647 AbD Serotec MCA1209A647 Keep sterile
Mouse serum Sigma Aldrich M5905 Keep sterile
Paraffin Film - Parafilm M Sigma Aldrich P7793
Penicillin-Streptomycin Gibco 15979-063 Freeze in aliquots and keep sterile
Phosphate buffered saline pH 7.4 ThermoFischer Scientific 10010-023 Keep sterile
Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max Sigma Aldrich R7757 Keep sterile
Trypan Blue Solution Sigma Aldrich T8154
Trypsin-EDTA 0.5%(10x) Invitrogen 15400-054
 FACSARIA FUSION BD Pharmingen Fluorescence Activated Cell Sorter

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bergmann, O., et al. Evidence for cardiomyocyte renewal in humans. Science (New York, N.Y.). 324, (5923), 98-102 (2009).
  2. Laflamme, A., Murry, C. E. Heart regeneration. Nature. 473, (7347), 326-335 (2011).
  3. Chen, W. C. W., et al. Human myocardial pericytes: multipotent mesodermal precursors exhibiting cardiac specificity. Stem cells (Dayton, Ohio). 33, (2), 557-573 (2015).
  4. Campagnoli, C., Roberts, I. A., Kumar, S., Bennett, P. R., Bellantuono, I., Fisk, N. M. Identification of mesenchymal stem/progenitor cells in human first-trimester fetal. Blood. 98, (8), 2396-2402 (2001).
  5. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Molecular biology of the cell. 13, (12), 4279-4295 (2002).
  6. Chen, S., et al. Effect on left ventricular function of intracoronary transplantation of autologous bone marrow mesenchymal stem cell in patients with acute myocardial infarction. The American journal of cardiology. 94, (1), 92-95 (2004).
  7. Ringdén, O., et al. Mesenchymal stem cells for treatment of therapy-resistant graft-versus-host disease. Transplantation. 81, (10), 1390-1397 (2006).
  8. Kharaziha, P., et al. Improvement of liver function in liver cirrhosis patients after autologous mesenchymal stem cell injection: a phase I-II clinical trial. European journal of gastroenterology & hepatology. 21, (10), 1199-1205 (2009).
  9. Spaeth, E., Klopp, A., Dembinski, J., Andreeff, M., Marini, F. Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells. Gene therapy. 15, (10), 730-738 (2008).
  10. Yan, X., et al. Injured microenvironment directly guides the differentiation of engrafted Flk-1(+) mesenchymal stem cell in lung. Experimental hematology. 35, (9), 1466-1475 (2007).
  11. Van Poll, D., et al. Mesenchymal stem cell-derived molecules directly modulate hepatocellular death and regeneration in vitro and in vivo. Hepatology (Baltimore, Md.). 47, (5), 1634-1643 (2008).
  12. Popp, F. C., et al. Mesenchymal stem cells can induce long-term acceptance of solid organ allografts in synergy with low-dose mycophenolate. Transplant immunology. 20, (1-2), 55-60 (2008).
  13. Li, Z., Zhang, C., Weiner, L. P., Zhang, Y., Zhong, J. F. Molecular characterization of heterogeneous mesenchymal stem cells with single-cell transcriptomes. Biotechnology advances. 31, (2), 312-317 (2013).
  14. Crisan, M., et al. A perivascular origin for mesenchymal stem cells in multiple human organs. Cell stem cell. 3, (3), 301-313 (2008).
  15. Ozerdem, U., Stallcup, W. B. Early contribution of pericytes to angiogenic sprouting and tube formation. Angiogenesis. 6, (3), 241-249 (2003).
  16. Rucker, H. K., Wynder, H. J., Thomas, W. E. Cellular mechanisms of CNS pericytes. Brain research bulletin. 51, (5), 363-369 (2000).
  17. Betsholtz, C. Insight into the physiological functions of PDGF through genetic studies in mice. Cytokine & Growth Factor Reviews. 15, (4), 215-228 (2004).
  18. Gerhardt, H., Betsholtz, C. Endothelial-pericyte interactions in angiogenesis. Cell and tissue research. 314, (1), 15-23 (2003).
  19. Crisan, M., Chen, C. W., Corselli, M., Andriolo, G., Lazzari, L., Péault, B. Perivascular multipotent progenitor cells in human organs. Annals of the New York Academy of Sciences. 1176, 118-123 (2009).
  20. Kang, S. G., et al. Isolation and perivascular localization of mesenchymal stem cells from mouse brain. Neurosurgery. 67, (3), 711-720 (2010).
  21. Chen, C. W., et al. Human pericytes for ischemic heart repair. Stem cells (Dayton, Ohio). 31, (2), 305-316 (2013).
  22. Campagnolo, P., et al. Human adult vena saphena contains perivascular progenitor cells endowed with clonogenic and proangiogenic potential. Circulation. 121, (15), 1735-1745 (2010).
  23. Katare, R., et al. Transplantation of human pericyte progenitor cells improves the repair of infarcted heart through activation of an angiogenic program involving micro-RNA-132. Circulation research. 109, (8), 894-906 (2011).
  24. Corselli, M., Chen, C. W., Sun, B., Yap, S., Rubin, J. P., Péault, B. The Tunica Adventitia of Human Arteries and Veins As a Source of Mesenchymal Stem Cells. Stem Cells and Development. 21, (8), 1299-1308 (2012).
  25. Crisan, M., et al. Purification and long-term culture of multipotent progenitor cells affiliated with the walls of human blood vessels: myoendothelial cells and pericytes. Methods in cell biology. 86, 295-309 (2008).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics