Исследования по Ga (III) комплекса EOB-DTPA и ее

Chemistry

Your institution must subscribe to JoVE's Chemistry section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Процедура выделения EOB-DTPA и последующего комплексообразования с природным Ga (III) и 68 Ga представлено в настоящем документе, а также тщательного анализа всех соединений и исследований по эффективности мечения, стабильность ин витро и н - октанол / вода коэффициент распределения радиоактивно меченого комплекса.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Greiser, J., Niksch, T., Weigand, W., Freesmeyer, M. Investigations on the Ga(III) Complex of EOB-DTPA and Its 68Ga Radiolabeled Analogue. J. Vis. Exp. (114), e54334, doi:10.3791/54334 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Демонстрируется способ выделения EOB-DTPA (3,6,9-триаза-3,6,9-трис (карбоксиметил) -4- (этоксибензил) -undecanedioic кислоты) от своего Б-га (III) комплекса и протоколы подготовка его нового нерадиоактивного, то есть природный Ga (III) , а также радиоактивный 68 комплекса Ga. В качестве лиганда, а также Ga (III) , комплекс характеризовались ядерного магнитного резонанса (ЯМР), масс - спектрометрии и элементного анализа. 68 Ga был получен стандартным методом элюции из / 68 генератора 68 Ge Ga. Эксперименты по оценке эффективности 68 Ga-маркировка EOB-DTPA при рН 3,8-4,0 были выполнены. Установлено методы анализа радио ТСХ (тонкослойная хроматография) и радио-ВЭЖХ (высокоэффективной жидкостной хроматографии), были использованы для определения радиохимической чистоты индикаторного. В первом исследовании липофильности 68 Ga трассеры 'п- октанол / вода distributioп коэффициент 68 видов Ga , присутствующих в растворе , рН 7,4 определяли методом экстракции. В пробирке измерения устойчивости трейсера в различных средах при физиологических рН были выполнены, выявляя различные скорости разложения.

Introduction

Gadoxetic кислота, общее название для комплекса Gd (III) лиганда EOB-DTPA 1, является часто используемым контрастное вещество в гепатобилиарной магнитно - резонансной томографии (МРТ). 2,3 Из - за его специфического поглощения гепатоцитами печени и высокий процент гепатобилиарной экскреции она позволяет локализацию очаговых поражений и опухолей печени. 2-5 Однако, некоторые ограничения метода МРТ (например, токсичность контрастных агентов, ограниченная применимость у пациентов с клаустрофобии или металлическими имплантатами) требуют альтернативного диагностического прибора ,

Позитронно - эмиссионной томографии (ПЭТ) является методом молекулярной визуализации, в котором небольшое количество радиоактивного вещества (индикаторного) администрирована, при котором его распределение в организме записывается с помощью сканера ПЭТ. 6 ПЭТ представляет собой динамический метод , который позволяет для высокого пространственное и временное разрешение изображений, а также количественная оценка результатов, без необходимостииметь дело с побочными эффектами МРТ контрастных агентов. Информативность полученной метаболической информации может быть дополнительно увеличена путем комбинации с анатомическими данными, полученными от дополнительных методов визуализации, так как чаще всего достигается за счет гибридной визуализации с компьютерной томографии (КТ) в сканерах ПЭТ / КТ.

Химическая структура трассера подходящей для ПЭТ должен включать радиоактивный изотоп, служащий в качестве позитронного эмиттера. Позитроны имеют короткий срок службы, так как они почти сразу аннигилируют с электронами атома оболочек окружающих тканей. При аннигиляции двух гамма - фотонов 511 кэВ , с противоположным направлением движения излучаются, которые записаны с помощью сканера ПЭТ. 7,8 Сформировать Tracer, ПЭТ нуклиды может быть ковалентно связана с молекулой, как это происходит в 2-дезокси 2- [18 F] fluoroglucose (ФДГ), наиболее широко используется ПЭТ трассирующими. 7 Тем не менее, нуклид может также образовывать координирующие связями с одним или несколькими лигандами (например ,, [68 Ga] -DOTATOC 9,10) или применяться в качестве растворенных неорганических солей (например, [18 F] фторид натрия 11). В целом, структура трейсера имеет решающее значение, поскольку он определяет его биораспределении, метаболизм и экскрецию поведение.

Подходящий ПЭТ нуклид должен сочетать в себе благоприятные характеристики, как удобный энергии позитронов и доступности, а также период полураспада адекватной для предполагаемого исследования. 68 Ga нуклидов стала важной силой в области ПЭТ в течение последних двух десятилетий. 12,13 Это происходит главным образом из - за своей доступности через систему генератора, что позволяет на месте маркировки независимо от близости от циклотрона. В генераторе, мать нуклида 68 Ge поглощается на колонке , из которой дочерний нуклид 68 Ga элюируют , а затем меченым к соответствующему хелатор. 6,14 Поскольку 68 Ga нуклид существует как тривиальныйлор катион, как и Gd (III) 10,13, хелатирующие EOB-DTPA с 68 Ga , а не даст комплекс с тем же самым общим отрицательным зарядом как gadoxetic кислоты. Соответственно, что 68 Ga трейсер может сочетать подобную характерную специфичность печени с пригодности для ПЭТ - визуализации. Хотя gadoxetic кислота покупается и вводят в виде динатриевой соли, в следующем контексте мы будем называть его Б - га [EOB-DTPA] и к комплексу нерадиоактивного Ga (III) в качестве Ga [EOB-DTPA], или 68 Ga [ EOB-DTPA] в случае радиоактивно меченого компонента для удобства.

Для того, чтобы оценить их применимость в качестве индикаторов для ПЭТ, радиоактивные металлические комплексы должны быть рассмотрены широко в в пробирке, в естественных условиях или экспериментов бывших естественных условиях в первую очередь. Для того, чтобы определить пригодность для соответствующей медицинской проблемы, различные индикаторные характеристики, такие как поведение биораспределения и профиль зазора, стабильности, органной специфичности и клетки или Tissuе поглощение должны быть исследованы. Из - за их неинвазивный характер, определения в пробирке часто выполняются до экспериментов в естественных условиях. Общепризнанно , что ДТПА и его производные имеют ограниченную пригодность как энтеросорбенты 68 Ga из - за этих комплексов , не имеющих кинетическую инертность, что приводит к сравнительно быстрому разложению при введении в естественных условиях. 14-20 Это в первую очередь вызвано апо- трансферрина , действующей в качестве конкурентом 68 Ga в плазме. Тем не менее, мы исследовали этот новый трейсер относительно его возможного применения в гепатобилиарной визуализации, в котором диагностическая информация может быть предоставлена ​​в течение нескольких минут после инъекции 3,4,21-23, таким образом , не обязательно требует долгосрочной стабильности копира. Для этого мы выделили EOB-DTPA из gadoxetic кислоты и первоначально проводили комплексообразование с натуральным Ga (III), который существует в виде смеси двух стабильных изотопов, 69 Ga и 71 68 Ga. Мы использовали установленные методы и одновременно оценивали их пригодность для определения эффективности 68 Galabeling из EOB-DTPA и исследовать липофильности нового 68 Ga трассирующими и его устойчивость в различных средах.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Получение EOB-DTPA и Ga [EOB-DTPA]

Внимание: Пожалуйста, обратитесь все соответствующие паспорта безопасности материала (MSDS) от используемых органических растворителей, кислот и щелочей перед использованием. Выполните все шаги в вытяжном шкафу и использовать средства индивидуальной защиты (защитные очки, перчатки, лабораторный халат).

  1. Выделение EOB-DTPA из gadoxetic кислоты
    1. Поместите 3 мл 0,25 М раствора для инъекций gadoxetic кислоты в колбу. Добавить 500 мг (5,6 ммоль) щавелевой кислоты к раствору при перемешивании.
    2. После перемешивания в течение 1 ч, Суспензию фильтруют через пористый фильтр с использованием пониженного давления. Промыть остатков трижды с 3 мл воды, соответственно.
    3. Объединяют водные фильтраты и оснащать раствора с рН электрода. Добавьте 12 М соляной кислоты к фильтрату до тех пор пока рН не достигнет примерно -0,1.
    4. Растворитель удаляют в вакууме с получением бесцветного осадка. Хранить в атмосфере инертного газа.
    5. Промывают остаток тщательно (по крайней мере, трираз) с этилацетатом, чтобы удалить избыток щавелевой кислоты. Высушивают остаток в вакууме.
    6. Повторно растворить остаток в 2 мл воды при комнатной температуре, а затем охлаждают с получением раствора на бане со льдом. Без снятия ванны со льдом, добавьте 0,5 по каплям водный раствор гидроксида натрия М до образования бесцветного твердого вещества клейкий наблюдается.
    7. Удалите воду с помощью декантации. Промывать твердый еще два раза с 1 мл холодной воды. Сушат твердое вещество в вакууме с получением указанного в первую фракцию продукта.
    8. Изолировать вторую фракцию продукта из объединенных фракций сливают воды методом колоночной хроматографии (силикагель, метанол / вода 4/1). 24 Растворитель удаляют в вакууме.
    9. Если полученный таким образом твердый не чисто белый, растворяться его в 1 мл воды, добавляют 10 мл этанола и затем 10 мл диэтилового эфира, чтобы осадить продукт. Смесь фильтруют через пористый фильтр с использованием пониженного давления и сушат в вакууме.
    10. скомбинироватьоба твердые фракции EOB-DTPA и проводить ЯМР - спектроскопические, 25 масс - спектрометрического 26 и элементный 27 анализов.
  2. Синтез Ga [EOB-DTPA]
    ВНИМАНИЕ: твердый Ga (III) хлорид Хранить в сухом инертной атмосфере, так как при контакте с воздухом, влагой или разложения смазки происходит, в результате чего в агрессивных паров и образование желтого, коричневого или черного цвета примесей.
    1. Приготовьте 0,11 М маточного раствора путем растворения 1,94 г (11,0 ммоль) Ga (III) хлорида в 100 мл воды. Развести 1 мл 25% -ного водного раствора аммиака с 4 мл воды.
    2. Растворите 80 мг (0,15 ммоль) EOB-DTPA в колбу в 10 мл воды. При необходимости нагреть растворитель, чтобы достичь полного растворения.
    3. Добавить 1,4 мл (0,15 ммоль) Ga (III) хлорида раствор. Оборудуйте колбу с мешалкой и рН-электродом. Добавьте по каплям водный раствор разбавленного нашатырного спирта до тех пор пока рН раствора не составляет приблизительно 4,1. Перемешивают при ротемпература О.М. в течение 30 мин.
    4. Растворитель удаляют в вакууме. Поместите остаток в колбе, снабженный stillhead с центральным и параллельной боковой шеи. Оборудуйте центральную шею с охлаждающим пальцем и боковой шеи с выходом вакуумного насоса
    5. Нагреть остатка при пониженном давлении (125 & deg; С, 0,6 мбар). Периодически удалять сублимированный хлорид аммония (видимый в виде белого покрытия поверхности стекла) от охлаждающего пальца и до сих пор головы, а также из верхних частей колбы со слегка влажной тканью. Продолжайте процесс до тех пор, пока не видно формирование нового возгона.
    6. Для удаления последних следов хлористого аммония моют Остаток трижды с 0,5 мл гор чего метанола, соответственно. Сушат бесцветный остаток в вакууме. Выполнение ЯМР - спектроскопические, 25 масс - спектрометрического 26 и 27 элементарного анализа.

2. Общая процедура маркировки

ВНИМАНИЕ: Все ехрименты в том числе прямой или косвенный контакт с радиоактивными веществами должны проводиться только квалифицированным персоналом. Пожалуйста, используйте соответствующее оборудование экранирования. Собрать любые радиоактивные отходы отдельно и хранить и утилизировать в соответствии с действующими правилами.

  1. Вымывание генератора
    Использовали 40 мКи 68 Ge / 68 Ga генератор с матерью нуклида связаны как оксид на додецил-3,4,5-trihydroxybenzoate кремнезема: Примечание. После элюирования и очистка может быть выполнена вручную или, как это имело место в этой процедуре, в качестве комбинированного автоматизированного процесса с использованием перистальтического насоса и блок дозатора.
    1. Готовят растворы 5,5 М, 1,0 М и 0,05 М соляной кислоты. Готовят раствор 5,0 М хлорида натрия, содержащего 25 мкл 5,5 М соляной кислоты на мл. Приготовьте буферный раствор с рН 4,6, комбинируя 4,1 г ацетата натрия, 1 мл HCl (30%) и 2,5 мл ледяной уксусной кислоты и разбавление смеси с водой до объема 50 мл.
    2. Precondition PS-H + картридж смыв медленно с 1 мл 1,0 М соляной кислоты и затем 5 мл воды.
    3. Элюируют колонку диоксида кремния генератора с 4 мл 0,05 М HCl. 12 Нагрузка 68 Ga элюата на PS-H + картридж.
    4. Промыть картридж с 5 мл воды, а затем высушить его с помощью 5 мл воздуха. Элюируют 68 Ga из картриджа с 1 мл 5,0 М подкисленный раствор хлорида натрия. 28
  2. Маркировку EOB-DTPA с 68 Ga
    1. Растворите 1 мг (1,9 мкмоль) EOB-DTPA в 1 мл воды. Из этого раствора принимают по 100 мкл (0,19 мкмоль) и разбавить их с 9,9 мл воды для приготовления 19 мкМ (10 мкг / мл) исходного раствора EOB-DTPA.
    2. Удалить 50 мкл ( что эквивалентно 22-29 МБк) раствора , содержащего 68 Ga и помещают в пробирку. Добавляют 50 мкл (0,5 мкг) в 19 мМ исходного раствора EOB-DTPA и 300 мкл Oе буфера для повышения рН до 4,0. Кратко взболтать и инкубировать раствор при комнатной температуре в течение 5 мин. Удалить аликвоту 1-5 мкл и положить ВЭЖХ или ТСХ-анализа.
    3. Выполнить анализ радио ВЭЖХ на обращенной фазе (RP) С18 колонка 29 Используйте следующую подвижная фаза:. А - вода / трифторуксусна кислота (99,9% / 0,1%), B - ацетонитрил / трифторуксусна кислота (99,9% / 0,1%), градиент : 06 мин 80% А → 0% А (0,5 мл / мин), 610 мин 0% A (0,5 мл / мин).
    4. Определение интенсивностей пиков ВЭЖХ радио сигналов, как площадь под кривой. Рассчитывают выход маркировке радиохимической чистоты (RCP) индикаторного следующим образом:
      RCP = A Ga-EOB-DTPA / (A + A Ga Ga-EOB-DTPA) ∙ 100%
      ОЛ-EOB-DTPA: площадь под кривой 68 Ga [EOB-DTPA]
      ОЛ: площадь под кривой свободного 68 Ga

3. Этикетировочное Эффективность

  1. Выполните процедуры маркировки, как описаноd в разделе 2. Используйте последовательный диапазон начиная активности 68 Ga элюата, например, 22-29 МБк (40-140 мкл, в зависимости от свежести элюата).
  2. Добавьте необходимое количество буферного раствора для доведения рН до 3,8-4,0 (40-190 мкл, в зависимости от объема 68 Ga элюата). Добавьте необходимое количество лиганда исходного раствора (10-70 мкл 19 мМ раствора).
  3. Добавьте необходимое количество воды, чтобы регулировать общую громкость каждой маркировки зонда до 1,75 мл. Тщательно перемешать и дать образец постоять в течение 5 мин при комнатной температуре. Выполнить анализ ВЭЖХ, как описано в разделе 2, чтобы определить выход маркировки.
  4. Выполните процедуры маркировки с количествами лиганда от 0,1 мкг до 0,7 мкг с шагом 0,1 мкг. Выполнение экспериментов в трех экземплярах для каждой концентрации лиганда. Вычислить среднее доходность и стандартное отклонение.

4. В Vitro стабильности

  1. Общие рrocedure и препараты
    1. Растворите таблетку фосфатно-буферного раствора (PBS) в 200 мл деионизированной воды, чтобы приготовить исходный раствор, PBS с концентрацией фосфата 10 мМ.
    2. Выполните маркировку 22-29 МБк 68 Ga с 0,5 мкл EOB-DTPA маточного раствора, как описано в разделе 2. В зависимости от объема 68 Ga элюата, регулировать количество буфера, как это описано в разделе 3. Вывод образцы этикетирование раствор, содержащий 6-12 МБк трассера для выполнения измерений стабильности.
    3. Выполните радио ТСХ - анализ на 80 мм силикагеля покрытием алюминиевых пластин с использованием 0,1 М водного раствора цитрата натрия в качестве элюента и анализируют пластины с радиоактивной сканера TLC. 30 Определение интенсивности сигналов ТСХ , как площадь под кривой. Вычислить RCP индикаторного следующим образом:
      RCP = A Ga-EOB-DTPA / (A Ga-Free + A Ga-EOB-DTPA + A Ga-коллоидный) ∙ 100%
      ОЛ-EOB-DTPA: площадь под кривой 68 Ga [EOB-DTPA]
      ОЛ-бесплатно: площадь под кривой свободного 68 Ga
      ОЛ-коллоидного: площадь под кривой коллоидного 68 Ga
    4. Вычислить RCP т / RCP 0 для каждой временной точки. Постройте таким образом стандартизированный RCP против разницы во времени с момента начальной точки Т = 0 мин.
      RCP т = RCP 68 Ga [EOB-DTPA] в момент времени т.
      RCP 0 = RCP 68 Ga [EOB-DTPA] при Т = 0 мин.
  2. Стабильность в фосфатно - солевом буфере (А)
    1. К 65 мкл раствора мечения добавляют 150 мкл PBS раствора и 60 мкл раствора гидроксида натрия (0,1 М) для повышения рН до 7,4. Тщательно перемешать.
    2. Аликвоту 1-5 мкл для проведения анализа ТСХ ( «начальная точка»). Сразу же хранить раствор в термостате при температуре 37 ° С и удалить аликвот для проведения анализа тонкослойной хроматографии при представлятьтельной моменты времени в течение 3 часов.
  3. Устойчивость по отношению к сверх апо -transferrin в PBS (В)
    1. К 120 мкл раствора мечения добавляют 50 мкл PBS раствора и 430 мкл раствора гидроксида натрия (0,1 М) для повышения рН до 7,4. Добавьте 40 мкл раствора апо -transferrin (25 мг / мл). Тщательно перемешать.
    2. Аликвоту 1-5 мкл для проведения анализа ТСХ ( «начальная точка»). Сразу же хранить раствор в термостате при температуре 37 ° С и удалить аликвот для проведения анализа тонкослойной хроматографии при репрезентативных точках времени, в течение 3 ч.
  4. Стабильность в сыворотке крови человека (С)
    1. К 500 мкл сыворотки крови человека добавляют 25 мкл раствора мечения и 45 мкл раствора гидроксида натрия (0,1 М) для повышения рН до 7,4. Тщательно перемешать.
    2. Аликвоту 1-5 мкл для проведения анализа ТСХ ( «начальная точка»). Немедленно хранить раствор в INCUBator при температуре 37 ° C и удалить аликвот для проведения анализа тонкослойной хроматографии при репрезентативных точках времени, в течение 3 ч.

5. Определение коэффициента распределения LogD

  1. Выполните процедуры маркировки, как описано в разделе 2. К 50 мкл раствора мечения добавляют 20 мкл PBS раствора и 170 мкл раствора гидроксида натрия (0,1 М) для повышения рН до 7,4.
  2. Вывод 200 мкл из этого раствора и поместить его в пластиковый V-флакон. Добавьте 200 мкл н - октанол. Закройте флакон и вихрь в течение 2 мин. Затем центрифугирование образца при 1600 х г в течение 5 мин.
  3. Удалить утраивает из 40 мкл из фазы н октанол и водную фазу каждого и поместить их в отдельные V-флаконах. Будьте осторожны, чтобы не перепутать слои.
  4. Измерьте активность каждого образца в счетчике гамма также в течение 30 сек. Для каждого образца немедленно повторите измерение дважды и его вычислить среднюю активность альфа т т а, W1, а т, W2 и а т, W3 (деятельность в водных пробах) и а т, O1, а т, O2, а т, O3 (деятельность в п - октанола) вместе с соответствующими момент времени т их определения.
  5. Определить момент времени измерения последнего образца при T 0. Определить и перечислить & Delta ; t в мин путем вычисления DT = TT 0. Выполнить коррекцию затухания Л Т, с использованием следующей формулы:
    0 = Ᾱ т · 2 (t / 68 мин).
  6. Вычислить 0, а W как среднее Ᾱ 0, W1,0, W2 и Ᾱ 0, W3 , а также Ᾱ 0, О как среднее Ᾱ 0, О1,0, O2 и Ᾱ 0, О3. Вычислить logD по следующей формуле:
    logD = журнал [(Ᾱ 0, Вт · 33 мкг)].
  7. Выполнить весь эксперимент в трех экземплярах и вычислить среднее logD вместе со своим стандартным отклонением.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

В качестве лиганда используют EOB-DTPA и нерадиоактивных Ga (III) , комплекс анализировали с помощью 1 Н и 13 С {1 Н} ЯМР - спектроскопии, масс - спектрометрии и элементного анализа. Результаты , приведенные в таблице 1 и показанные на фиг.1-6 проверить чистоту веществ.

Вымывание генератора 68 Ge / 68 Ga получали решения 400-600 МБк 68 Ga. Описанные результаты процедуры маркировки в образовании желаемого Tracer 68 Ga [EOB-DTPA], указывается как пик радио ВЭЖХ , проявляющего время удерживания 2,8 мин (рисунок 7). Сравнение с временем удерживания стандарта Ga [EOB-DTPA] в детекторе UV-VIS при длине волны 220 нм (2,7 мин, рис 8) подтверждает успешную маркировку. Нескоординированное 68 Ga определяется как пик радио на 2,1 мин (рис7). Эффективность 68 Ga-мечение ЭО-BDTPA исследовали путем определения выхода этикетированию в зависимости от концентрации лиганда с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (рисунок 9). Выходы были определены в трех экземплярах и были рассчитаны стандартные отклонения.

В зависимости от величины рН и концентрации анионов , присутствующих в растворе, несогласованных или немеченого 68 Ga , могут существовать в различных видах, например, галлатах или нерастворимые гидроокиси. 31 Обобщенный термин "свободный 68 Ga" 32 используется для всех не меченных частиц в растворе , за исключением гидроксида, который обычно называют "коллоидный 68 Ga". При описанных условиях анализа, свободный 68 Ga движется с фронтом растворителя (R F = 1,0) на пластине ТСХ. Коллоидный 68 Ga не может быть обнаружен с помощью ВЭЖХ, в то время как на ТСХ - пластинку представляется как активностьв начале координат (R F = 0). Представитель хроматограмма пластины анализировали при помощи ТСХ с радиоактивной сканера TLC показано на рисунке 10. Трассирующими демонстрирует различное поведение удержания, в зависимости от того , образец раствора маркировки (рН 3,8-4,0, R F = 0,3) или образец физиологического рН (R F = 0,5) анализировалась.

Для исследования устойчивости индикаторного, свеже меченого 68 Ga [EOB-DTPA] был добавлен в образцах физиологического рН, содержащий разведенный PBS (фосфатный концентрации 5,5 мМ, А), избыток апо- трансферрина (1,6 мг / мл в разбавленной PBS с концентрацией фосфата 0,8 мМ, в) и сыворотки человека (с) соответственно. Со временем, радиохимической чистоты (RCP т) трассера в образцах определяли с помощью ТСХ. Процентное содержание интактного трассера рассчитывалось как отношение RCP т всоответствующие моменты времени и RCP 0 в начальной точке (таблица 2). Это было необходимо из - за маркировки растворов , содержащих меченых отличаясь RCP 0 (93-96%). Таким образом стандартизированный процент неповрежденной трассера изображается как функция времени на рисунке 11.

Для определения logD водных образцов трассера в разбавленном растворе PBS были готовы. Образцы смешивали с н - октанол, центрифугировали и впоследствии аликвоты для определения концентрации активности в обеих фазах. Значения активности и последующее вычисление logD их приведены в таблице 3. Среднее значение logD составляет 3,54 ± 0,08.

Рисунок 1
Рисунок 1. 1 Н-ЯМР - спектр EOB-DTPA. < / сильный> Спектр был записан в D 2 O на 400,1 МГц. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

фигура 2
Рисунок 2. 13 С {1} H ЯМР спектр EOB-DTPA. Спектр был записан в D 2 O на 100,6 МГц. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 3
Рисунок 3. МС EOB-DTPA (ионизация электрораспылением (ESI), метанол, отрицательный режим).54334fig3large.jpg "целевых =" _blank "> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 4
Рисунок 4. 1 H-ЯМР - спектр Ga [EOB-DTPA]. Спектр был записан в D 2 O на 400,1 МГц. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 5
Рисунок 5. 13 С {1} H ЯМР спектр Ga [EOB-DTPA]. Спектр был записан в D 2 O на 100,6 МГц. Пожалуйста , нажмите ее е, чтобы просмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 6
Рисунок 6. МС Ga [EOB-DTPA] (ESI, метанол, отрицательный режим), наряду с детальным изображением изотопного рисунка молекулярного пика. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 7
Рисунок 7. Представитель ВЭЖХ хроматограмма образца 68 Ga [EOB-DTPA] , содержащий в части несогласованных 68 Ga, зафиксированный с помощью детектора радиоактивности. Нескоординированное 68 Ga имеет среднее время удерживания 2,1 мин, в то время как Tracer обнаруживается на уровне 2,8 мин ,целевых = "_blank"> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 8
Рисунок 8. Представитель ВЭЖХ хроматограмма стандартного вещества Ga [EOB-DTPA], а обнаруженный в UV-VIS канала при 220 нм. Время удерживания холодного стандарта составляет 2,7 мин. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы просмотреть увеличенное цифра.

Рисунок 9
Рисунок 9. Изображение 68 эффективности Ga-мечение EOB-DTPA. Выход маркировки , как определено с помощью ВЭЖХ на графике как функцию от концентрации EOB-DTPA (22-29 МБк начальной активности, рН 3,8-40,0, 5 мин, RT). Стандартное отклонение изображается погрешностями. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 10
Рисунок 10. Представитель ТСХ хроматограмма выявления различных 68 видов Ga. Образец 68 Ga [EOB-DTPA] в разбавленной PBS (концентрации фосфата 5,5 мМ, рН 7,4) анализировали после 110 минут инкубации. Примерное распределение коллоидно 68 Ga (R F = 0), 68 Ga [EOB-DTPA] (R F = 0,5) и свободный 68 Ga (R F = 1,0) на 70 мм ТСХ пластине , как обнаружено посредством радиоактивной сканера ТСХ представил. Учеты Распад исправлены. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы увидеть увеличеннуюверсия этой фигуры.

Рисунок 11
Рисунок 11. Определения остойчивости 68 Ga [EOB-DTPA] в различных средах. Распад исправленные, стандартизированный процент неповрежденной трассирующими , как определено с помощью ТСХ, изображается как функция времени. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть большую версию этой фигуры ,

Таблица 1
Таблица 1. Результаты ЯМР спектроскопии, МС и элементный анализ , проведенный для EOB-DTPA и Ga [EOB-DTPA]. Относительные интенсивности пиков МС приведены в%, назначение пиков приведены в квадратных скобках. Elemental значения CHN были рассчиты ваютсясчитанная для C 23 H 33 N 3 O 11 · H 2 O (EOB-DTPA) и (NH 4) 0,75 H 1,25 [C 23 H 28 GaN 3 O 11] · 2H 2 O (Ga [EOB-DTPA]).

Таблица 2
Таблица 2. Определение устойчивости 68 Ga [EOB-DTPA] в различных средах. РКП 68 Ga [EOB-DTPA] в СМИ A, B и C определяли с помощью тонкослойной хроматографии при заданных временных точках. Состав образцов приведен в процентах в% от копира / свободного 68 Ga / коллоидных 68 Ga. Процент неповрежденной трассирующими стандартизирован как отношение RCP т / RCP 0. RCP 0 является соответствующая RCP меченого атома при Т = 0 мин.


. Таблица 3. Определение logD Decay скорректированного значения 0 А, Х из трех аликвот (х = 1, 2, 3) удаляют из каждой фазы (W: водный, O: N октанол) образца. Все мероприятия приведены в имп. LogD вычисляется, как описано в разделе 5 протокола. Эксперимент повторяли дважды.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

EOB-DTPA , доступен через многоступенчатого синтеза 33а , но может также быть изолированы от доступных контрастных веществ , содержащих gadoxetic кислоту. С этой целью центральный Gd (III), ион может быть осажден с избытком щавелевой кислоты. После удаления Gd (III) оксалата и щавелевой кислоты лиганд может быть выделен осаждением в холодной воде при рН 1,5. Тем не менее, в целях повышения урожайности хроматографии на колонке фильтрата может выполняться вместо или в качестве процедуры последующей деятельности. Любой метод дает аналитически чистый лиганд в общем объеме выходами 70% (цифры 1-3, Таблица 1).

Мы обнаружили , что для того , чтобы изолировать Ga [EOB-DTPA] доведением рН с раствором аммиака является предпочтительным по сравнению с использованием гидроксида натрия, так как побочный продукт хлорида аммония может быть удален из очень гидрофильной остатка через сублимации. При вышеуказанных условиях этот процесс происходит медленноеLY. Так как не-незначительное количество хлорида по-прежнему обнаруживаются через пять дней, оставшаяся соль вымывается с метанолом. Хотя эта Обогащение процедура приводит к частичной потере Ga [EOB-DTPA], продукт получали в аналитической чистоты с общим выходом 46% (фиг.4-6, Таблица 1). Для выделения обоих EOB-DTPA и его Ga (III), комплекс, использование обращенно-фазовой хроматографии следует рассматривать в качестве альтернативного способа очистки, в особенности, так как разложение силикагеля, скорее всего, при использовании сильно полярных растворителей.

Процесс маркировки EOB-DTPA требуется использование высокой чистоты растворителей, химических веществ и безметаллический оборудование , чтобы избежать присутствия конкурирующих ионов металлов, в связи с 68 Ga присутствует в наномолярными количествах (2 МБк 68 Ga в 1,75 мл образца равной концентрации нуклидов 0,14 нМ). Маркировку EOB-DTPA до 68 Ga происходит при рН 3,8-4,0 в течение пяти минутУтес при комнатной температуре. Исследования по эффективности Ga-маркировка 68 требуют определения выхода маркировки при сохранении условий проведения реакции рН, температуры и времени реакции, а также началом активности 68 Ga постоянной или в оправданных диапазоне. Для каждой точки данных (т.е. концентрация лиганда) эксперимент должен быть выполнен по крайней мере , три раза , чтобы обеспечить приемлемый уровень достоверности, так как концентрации как лиганда и 68 Ga очень низкий , а выход маркировки поэтому чувствительны даже незначительные отклонений условия реакции. Например, как 68 Ga элюата возрастов, аликвоты увеличения объема должны быть сняты , чтобы обеспечить постоянную начальную активность, таким образом , требуя возрастающих объемов буфера. Кроме того, старение элюата приводит к увеличению концентрации продукта распада 68 Zn, который сам по себе может выступать в качестве конкурента для 68 Ga, таким образом , негативно сказывается на labelinг коэффициент полезного действия . 13,34,35 Практически количественная маркировка 22-29 МБк 68 Ga достигается при вышеуказанных условиях с количеством EOB-DTPA ≥ 0,7 мкг (рисунок 9), с содержанием свободного 68 Ga ≤ 2% и около 5 % коллоидного 68 Ga , присутствующих в образцах.

В то время как ВЭЖХ при условии , превосходное базовое разделение свободного 68 Ga и 68 Ga [EOB-DTPA], он не подходит для обнаружения коллоидного 68 Ga. Поэтому мы выбрали TLC для определения RCP во время измерения стабильности, в котором 68 Ga требовалось количественное трансферрина или связанной с белком. Мы нашли базовое разделение приемлемое для этой цели (Рисунок 10); Тем не менее, использование хроматографии или фильтрации методов Вытеснительная 15,36 для удаления коллоидных фракций, с последующим анализом методом ВЭЖХ, можно было бы рассматривать в качестве альтернативы. 68 Ga комплекс демонстрирует более сильную RETention на пластинах ТСХ (R F = 0,3) , если образец извлекают непосредственно из раствора маркировки , в отличие от образцов при физиологическом значении рН (R F = 0,5). Мы полагаем, это наблюдение может быть объяснено различными протонирования состояний комплекса.

В пробирке определения устойчивости 68 Ga трассеров обычно проводят в PBS 15,17 или альтернативных буферных системах , имитирующих физиологический рН 37, а также в растворах , содержащих апо- трансферрина 37, который является основным конкурентом 68 Ga в крови, или в сыворотка крови человека 15,17. В наших опытах добавление раствора гидроксида натрия 0,1 М в PBS требовалось, чтобы отрегулировать рН образцов до 7,4. Мы не могли утверждать , что концентрация фосфата влияет на скорость деградации, так как в экспериментах на стабильность в растворах различной концентрации фосфата (0,8 мМ и 5,5 мМ (А)) давала не-reproduCible результаты. Тем не менее, мы обнаружили , что раствор В, содержащий апо -transferrin (1,6 мг / мл, которая находится в диапазоне от нормального содержания в плазме 38) и 0,8 мМ фосфата (крови человека , как правило , проявляет уровень фосфата 0,8-1,5 мМ 39,40 ), вызывает разложение со скоростью , сравнимой с наблюдаемым в сыворотке крови человека (с). В растворах переменного тока, после 185 мин содержание коллоидных 68 Ga увеличилось примерно на 24%, в то время как в растворе А содержание свободного 68 Ga увеличился на 11%, 17% в растворе В и 27% в растворе С (таблица 2 ). Тот факт , что 68 Ga образуются в результате разложения трассирующей преимущественно присутствуют в виде свободного 68 Ga в отличие от коллоидный или белком 68 Ga в В и С может быть из - за насыщения трансферрина или сравнительно низкой скоростью связывания трансферрина. (Рисунок 11) 68 Ga [EOB-DTPA] сравнима с трассеров с участием подобных DTPA , полученные энтеросорбенты. 15,16,18 Как правило, информация о ранней артериальной и венозной фазы перфузии печени получили путем проведения МРТ в течение первых 3 минут после введения 4,21 Gd [EOB-DTPA], в то время как наличие гепатоцитов обнаружена в отсроченной фазе 20 минут 3,4,23 до нескольких часов после инъекции 21,22. Через 20 минут в сыворотке крови человека 93% 68 Ga [EOB-DTPA] остаются нетронутыми. Ожидаемо, отношение сигнал-шум к тому времени будет ухудшились в связи с увеличением количества 68 Ga-трансферрин, который присутствует в плазме крови и тканей экспрессии рецепторов трансферрина, а также бесплатно 68 Ga галлат. 41,42

Для прогнозирования распределения трейсеры ткани н- октанол / вода раздела входе коэффициентыP или распределения коэффициентов logD можно определить как отношение концентрации активности в обеих фазах. По определению, параметр logD не проводит различий между несколькими веществами, присутствующими в среде, что делает его пригодным для наших экспериментов из-за возможности различных протонированных состояний трассера, а также его разложение в водной фазе. Для определения logD путем экстракции водной среды, как правило , забуференной PBS для имитации условий в крови. 17,43-45 Для выше причинам мы использовали разбавленных PBS, экспонирование концентрации фосфата и 0,8 мМ физиологическом рН. После экстракции н октанол и центрифугирования, удаление нескольких аликвот из одной фазы позволяет неточностей , вызванных пипеткой быть уменьшена. Благодаря концентрации очень низкой активности в н- октанол следует быть осторожным , чтобы избежать перекрестного загрязнения с водной фазой и обеспечить количественный перенос в отдельном флаконе. Distribкоэффициенты, определяемые социологическое загрязнение этой процедуры были воспроизводимы, и в то время как они позволяют для грубой оценки липофильности, прямое сравнение с LOGP Б-га [EOB-DTPA] не представляется возможным. Из - за специфики Gd [EOB-DTPA] в результате чего в первую очередь не от липофильности, а его гепатобилиарная поглощения дополнительные эксперименты в живых предметов или клеток будет необходимо представить более подробную информацию о биораспределении, а также стабильность в естественных условиях 68 Ga [EOB -DTPA]. В целом, применение в качестве агента визуализации для перфузии и ранней гепатобилиарной фазы можно себе представить.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
primovist Bayer - 0.25 M
gallium(III) chloride Sigma-Aldrich Co. 450898
water (deionized) - - tap water deionizing equipment by Auma-Tec GmbH
hydrochloric acid 12 M VWR 20252.29
sodium hydroxide Polskie Odczynniki Chemiczne S.A. 810925429
oxalic acid Sigma-Aldrich Co. 75688
ethyl acetate Brenntag GmbH 10010447
silica gel Merck KGaA 1.10832.9025 Geduran Si 60 0.063-0.2 mm
TLC silica gel 60 F254 Merck KGaA 1.16834.0001
methanol VWR 20903.55
ethanol Brenntag GmbH 10018366
eiethylether VWR 23807.468 stored over KOH plates
ammonia solution (25%) VWR 1133.1
pH electrode VWR 662-1657
stirring and heating unit Heidolph 505-20000-00
pump Ilmvac GmbH 322002
frit - custom design
NMR spectrometer Bruker Coorporation - Ultra Shield 400
mass spectrometer Thermo Fisher Scientific Inc. -
elemental analyser Hekatech GmbH Analysentechnik - EuroVector EA 3000 CHNS
deuterated water D2O euriso-top D214 99.90% D
Material/Equipment required for labeling procedures
68Ge/68Ga generator ITG Isotope Technologies Garching GmbH A150
pump and dispenser system Scintomics GmbH - Variosystem
hydrochloric acid 30% (suprapur) Merck KGaA 1.00318.1000
water (ultrapur) Merck KGaA 1.01262.1000
sodium chloride (suprapur) Merck KGaA 1.06406.0500
sodium acetate (suprapur) Merck KGaA 1.06264.0050
glacial acetic acid (suprapur) Merck KGaA 1.00066.0250
sodium citrate dihydrate VEB Laborchemie Apolda 10782 >98.5%
PS-H+ Cartridge (S) Macherey-Nagel 731867 Chromafix
apo-Transferrin Sigma-Aldrich Co. T2036
PBS buffer (tablets) Sigma-Aldrich Co. 79382
human serum Sigma-Aldrich Co. H4522 from human male AB plasma
flasks, columns, etc. custom design
pH electrode Knick Elektronische Messgeräte GmbH & Co. KG 765-Set
binary pump (HPLC) Hewlett-Packard G1312A (HP 1100)
UV Vis detector (HPLC) Hewlett-Packard G1315A (HP 1100)
radioactive detector (HPLC) EGRC Berthold
HPLC C-18-PFP column Advanced Chromatography Technologies Ltd. ACE-1110-1503/A100528
HPLC glass vials GTG Glastechnik Graefenroda GmbH 8004-HP-H/i3µ
pipette Eppendorf -
plastic vials Sarstedt AG & Co. 6542.007
plastic vials Greiner Bio-One International GmbH 717201
activimeter MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH - Isomed 2010
tweezers custom design
incubator Heraeus Instruments GmbH 51008815
vortex mixer Fisons - Whirlimixer
centrifuge Heraeus Instruments GmbH 75003360
gamma well counter MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH - Isomed 2100
water for chromatography Merck KGaA 1.15333.2500
acetonitrile for chromatography Merck KGaA 1.00030.2500
trifluoroacetic acid Sigma-Aldrich 91707
TLC radioactivity scanner raytest Isotopenmessgeräte GmbH B00003875 equipped with beta plastic detector

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Weinmann, H. J., et al. A new lipophilic gadolinium chelate as a tissue-specific contrast medium for MRI. Magn. Reson. Med. 22, 233-237 (1991).
  2. Stroszczynski, C., et al. Aktueller Stand der MRT-Diagnostik mit leberspezifischen Kontrastmitteln. Radiologe. 44, 1185 (2004).
  3. Van Beers, B. E., Pastor, C. M., Hussain, H. K. Primovist, Eovist - what to expect. J. Hepatol. 57, 421-429 (2012).
  4. Zech, C. J., Herrmann, K. A., Reiser, M. F., Schoenberg, S. O. MR Imaging in Patients with Suspected Liver Metastases: Value of Liver-specific Contrast Agent Gd-EOB-DTPA. Magn. Reson. Med. Sci. 6, 43-52 (2007).
  5. Leonhardt, M., et al. Hepatic Uptake of the Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent Gd-EOB-DTPA: Role of Human Organic Anion Transporters. Drug Metab. Dispos. 38, 1024-1028 (2010).
  6. Wadas, T. J., Wong, E. H., Weisman, G. R., Anderson, C. Coordinating Radiometals of Copper, Gallium, Indium, Yttrium, and Zirconium for PET and SPECT Imaging of Disease. J. Chem. Rev. 110, 2858-2902 (2010).
  7. Ametamey, S. M., Honer, M., Schubiger, P. A. Molecular Imaging with PET. Chem. Rev. 108, 1501-1516 (2008).
  8. Cutler, C. S., Hennkens, H. M., Sisay, N., Huclier-Markai, S., Jurisson, S. S. Radiometals for Combined Imaging and Therapy. Chem. Rev. 113, 858-883 (2013).
  9. Henze, M., et al. PET Imaging of Somatostatin Receptors Using [68GA]DOTA-D-Phe1-Tyr3-Octreotide: First Results in Patients with Meningiomas. J. Nucl. Med. 42, 1053-1056 (2001).
  10. Hofmann, M., et al. Biokinetics and imaging with the somatostatin receptor PET radioligand 68Ga-DOTATOC: preliminary data. Eur. J. Nucl. Med. 28, 1751-1757 (2001).
  11. Blau, M., Nagler, W., Bender, M. A. Fluorine-18: a new isotope for bone scanning. J. Nucl. Med. 3, 332-334 (1962).
  12. Green, M. A., Welch, M. J. Gallium Radiopharmaceutical Chemistry. Int. J. Radiat. Appl. Instrum. B. 16, 435-448 (1989).
  13. Rösch, F. Past, present and future of 68Ge/68Ga generators. Appl. Radiat. Isot. 76, 24-30 (2013).
  14. Liu, S. The role of coordination chemistry in the development of target-specific radiopharmaceuticals. Chem. Soc. Rev. 33, 445-461 (2004).
  15. Haubner, R., et al. Development of (68)Ga-labelled DTPA galactosyl human serum albumin for liver function imaging. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 40, (68), 1245-1255 (2013).
  16. Yang, W., Zhang, X., Liu, Y. Asialoglycoprotein Receptor-Targeted Radiopharmaceuticals for Measurement of Liver Function. Curr. Med. Chem. 21, 4-23 (2014).
  17. Chauhan, K., et al. 68Ga based probe for Alzheimer's disease: synthesis and preclinical evaluation of homodimeric chalcone in β-amyloid imaging. Org. Biomol. Chem. 12, 7328-7337 (2014).
  18. Chakravarty, R., Chakraborty, S., Dash, A., Pillai, M. R. A. Detailed evaluation on the effect of metal ion impurities on complexation of generator eluted 68Ga with different bifunctional chelators. Nucl. Med. Biol. 40, 197-205 (2013).
  19. Clevette, D. J., Orvig, C. Comparison of ligands of differing denticity and basicity for the in vivo chelation of aluminum and gallium. Polyhedron. 9, 151-161 (1990).
  20. Prinsen, K., et al. Development and evaluation of a 68Ga labeled pamoic acid derivative for in vivo visualization of necrosis using positron emission tomography. Bioorg. Med. Chem. 18, 5274-5281 (2010).
  21. Vogl, T. J., et al. Liver tumors: comparison of MR imaging with Gd-EOB-DTPA and Gd-DTPA. Radiology. 200, 59-67 (1996).
  22. Reimer, P., et al. Phase II clinical evaluation of Gd-EOB-DTPA: dose, safety aspects, and pulse sequence. Radiology. 177-183 (1996).
  23. Ba-Ssalamah, A., et al. MRT der Leber. Radiologe. 44, 1170-1184 (2004).
  24. Scott, R. P. W. Journal of Chromatography Library. 22A, Elsevier Scientific Publishing Co. A137-A160 (1983).
  25. Reichenbaecher, M., Popp, J. Strukturanalytik organischer und anorganischer Verbindungen. 1st, B. G. Teubner Verlag. Wiesbaden. (2007).
  26. Gross, J. H. Mass Spectrometry: A Textbook. Springer. (2004).
  27. Ma, T. S., Rittner, R. C. Modern Organic Elemental Analysis. Marcel Dekker, Inc. (1979).
  28. Mueller, D., et al. Simplified NaCl Based 68Ga Concentration and Labeling Procedure for Rapid Synthesis of 68Ga Radiopharmaceuticals in High Radiochemical Purity. Bioconjugate Chem. 23, 1712-1717 (2012).
  29. Roberts, T. R. Radio-column chromatography. Journal of Chromatography Library. 14, 103-132 (1978).
  30. Roberts, T. R. Radio-thin-layer chromatography. Journal of Chromatography Library. 14, 45-83 (1978).
  31. Green, M. A., Welch, M. J. Gallium radiopharmaceutical chemistry. Nucl. Med. Biol. 16, 435-448 (1989).
  32. Notni, J., Plutnar, J., Wester, H. J. Bone-seeking TRAP conjugates: surprising observations and their implications on the development of gallium-68-labeled bisphosphonates. EJNMMI Res. 2, 13 (2012).
  33. Schmitt-Willich, H., et al. Synthesis and Physicochemical Characterization of a New Gadolinium Chelate: The Liver-Specific Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent Gd-EOB-DTPA. Inorg. Chem. 38, 1134-1144 (1999).
  34. 68Ga generator for positron emission tomography. Zhernosekov, K., Nikula, T. DE102010037964B3 (2012).
  35. Simecek, J., Hermann, P., Wester, H. J., Notni, J. How is 68Ga Labeling of Macrocyclic Chelators Influenced by Metal Ion Contaminants in 68Ge/68Ga Generator Eluates? ChemMedChem. 8, 95-103 (2013).
  36. Baur, B., et al. Synthesis, Radiolabelling and In Vitro Characterization of the Gallium-68-, Yttrium-90- and Lutetium-177-Labelled PSMA Ligand, CHX-A''-DTPA-DUPA-Pep. Pharmaceuticals (Basel). 7, 517-529 (2014).
  37. Boros, E., et al. RGD conjugates of the H2dedpa scaffold: synthesis, labeling and imaging with 68Ga. Nucl. Med. Biol. 39, 785-794 (2012).
  38. Beck, W. S. Hematology. 5th, MIT press. Cambridge, Massachusetts. (1998).
  39. Patel, V., Morrissey, J. Practical and Professional Clinical Skills. 1, Oxford University Press Inc. New York. (2001).
  40. Bartke, A., Constanti, A. Basic Endocrinology. 1, CRC Press. (1998).
  41. Bernstein, L. R. Mechanisms of Therapeutic Activity for Gallium. Pharmacol. Rev. 50, 665-682 (1998).
  42. Clausen, J., Edeling, C. J., Fogh, J. 67Ga Binding to Human Serum Proteins and Tumor Components. Cancer Res. 34, 1931-1937 (1974).
  43. Dumont, R. A., et al. Novel 64Cu- and 68Ga-Labeled RGD conjugates show improved PET imaging of αvβ3 integrin expression and facile radiosynthesis [Erratum to document cited in CA156:116856. J. Nucl. Med. 52, 1498 (2011).
  44. Pohle, K., et al. 68Ga-NODAGA-RGD is a suitable substitute for 18F-Galacto-RGD and can be produced with high specific activity in a cGMP/GRP compliant automated process. Nucl. Med. Biol. 39, 777-784 (2012).
  45. Notni, J., Pohle, K., Wester, H. J. Be spoilt for choice with radiolabelled RGD peptides: Preclinical evaluation of 68 Ga-TRAP(RGD)3. Nucl. Med. Biol. 40, 33-41 (2013).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics