EOB-DTPA और गा (तृतीय) परिसर पर जांच इसका

Chemistry

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Summary

EOB-DTPA के अलगाव और बाद complexation प्राकृतिक गा (तृतीय) और 68 के साथ गा इस के साथ साथ प्रस्तुत किया जाता है, साथ ही लेबलिंग दक्षता पर सभी यौगिकों और जांच का गहन विश्लेषण, इन विट्रो स्थिरता और एन octanol / पानी के लिए एक प्रक्रिया radiolabeled परिसर के वितरण गुणांक।

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Greiser, J., Niksch, T., Weigand, W., Freesmeyer, M. Investigations on the Ga(III) Complex of EOB-DTPA and Its 68Ga Radiolabeled Analogue. J. Vis. Exp. (114), e54334, doi:10.3791/54334 (2016).

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Abstract

हम EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-Tris (carboxymethyl) -4 (ethoxybenzyl) -undecanedioic एसिड) ने जी.डी. (तृतीय) से जटिल और प्रोटोकॉल के लिए के अलगाव के लिए एक विधि का प्रदर्शन अपने उपन्यास गैर रेडियोधर्मी, यानी, प्राकृतिक गा (तृतीय) के रूप में भी रेडियोधर्मी 68 गा परिसर की तैयारी। Ligand के रूप में अच्छी तरह से गा (तृतीय) जटिल परमाणु चुंबकीय अनुनाद (एनएमआर) स्पेक्ट्रोस्कोपी, मास स्पेक्ट्रोमेट्री और मौलिक विश्लेषण की विशेषता थे। 68 गा एक 68 जीई / 68 गा जनरेटर से एक मानक क्षालन विधि द्वारा प्राप्त किया गया था। प्रयोगों EOB-DTPA की 68 गा-लेबलिंग दक्षता पीएच 3.8-4.0 प्रदर्शन किया गया मूल्यांकन करने के लिए। स्थापित विश्लेषण तकनीक रेडियो टीएलसी (पतली परत क्रोमैटोग्राफी) और रेडियो एचपीएलसी (उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी) दरियाफ्त की radiochemical शुद्धता निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया गया। 68 गा ट्रेसर 'lipophilicity एन octanol / पानी distributio के लिए पहली बार एक जांच के रूप में68 गा प्रजातियों एक पीएच 7.4 समाधान में मौजूद n गुणांक एक निष्कर्षण विधि द्वारा निर्धारित किया गया था। शारीरिक पीएच पर विभिन्न मीडिया में दरियाफ्त की इन विट्रो स्थिरता माप प्रदर्शन किया गया, अपघटन के विभिन्न दरों खुलासा।

Introduction

Gadoxetic एसिड, ligand के जी.डी. (तृतीय) जटिल EOB-DTPA 1 के लिए एक आम नाम, जिगर hepatocytes और उच्च प्रतिशत से अपनी विशिष्ट तेज होने के कारण Hepatobiliary चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई)। 2,3 में एक बार उपयोग किया जाता है इसके विपरीत एजेंट Hepatobiliary उत्सर्जन की यह फोकल घावों और यकृत ट्यूमर के स्थानीयकरण सक्षम बनाता है। 2-5 हालांकि, एमआरआई तकनीक की कुछ सीमाएं (जैसे, विपरीत एजेंटों की विषाक्तता, क्लौस्ट्रफ़ोबिया या धातु प्रत्यारोपण के साथ रोगियों में सीमित प्रयोज्यता) एक विकल्प के नैदानिक ​​उपकरण के लिए फोन ।

पोजीट्रान एमिशन टोमोग्राफी (पीईटी) एक आणविक इमेजिंग विधि, जिसमें एक रेडियोधर्मी पदार्थ (अनुरेखक) की एक छोटी राशि प्रशासित किया जाता है, जिस पर शरीर में इसके वितरण एक पीईटी स्कैनर द्वारा दर्ज की गई है। 6 पीईटी एक गतिशील तरीका है कि उच्च के लिए अनुमति देता है छवियों के स्थानिक और लौकिक संकल्प के साथ ही परिणाम की मात्रा का ठहराव, करने के लिए बिनाएमआरआई इसके विपरीत एजेंटों के साइड इफेक्ट के साथ सौदा। प्राप्त जानकारी के चयापचय जानकारीपूर्ण मूल्य आगे अतिरिक्त इमेजिंग तरीकों से प्राप्त शारीरिक डेटा के साथ संयोजन के द्वारा बढ़ाया जा सकता है, के रूप में सबसे अधिक पीईटी / सीटी स्कैनर में कंप्यूटेड टोमोग्राफी (सीटी) के साथ संकर इमेजिंग द्वारा हासिल की।

पीईटी के लिए उपयुक्त एक दरियाफ्त की रासायनिक संरचना एक रेडियोधर्मी आइसोटोप पोजीट्रान emitter के रूप में सेवारत शामिल करना चाहिए। Positrons एक छोटी जीवन-काल के बाद से वे लगभग तुरंत आसपास के ऊतकों के परमाणु गोले के इलेक्ट्रॉनों के साथ सफाया किया है। विनाश करके आंदोलन की विपरीत दिशा के साथ दो 511 कीव गामा फोटॉनों उत्सर्जित कर रहे हैं, पीईटी स्कैनर द्वारा दर्ज की गई हैं जो। 7,8 एक अनुरेखक, पीईटी nuclides एक अणु को covalently बाध्य किया जा सकता है के रूप में करने के लिए, 2-deoxy- में मामला है 2- [18 एफ] fluoroglucose (FDG), सबसे बड़े पैमाने पर इस्तेमाल पीईटी दरियाफ्त। 7 हालांकि, एक nuclide भी एक या कई ligands के लिए coordinative बांड फार्म कर सकते हैं (जैसे[68 ga] -DOTATOC 9,10) या (भंग अकार्बनिक लवण के रूप में लागू किया जा उदाहरण के लिए, [18 एफ] सोडियम फ्लोराइड 11)। कुल मिलाकर, दरियाफ्त की संरचना महत्वपूर्ण है क्योंकि यह अपने biodistribution, चयापचय और उत्सर्जन व्यवहार को निर्धारित करता है।

एक उपयुक्त पीईटी nuclide सुविधाजनक पोजीट्रान ऊर्जा और उपलब्धता के साथ ही एक आधा जीवन इरादा जांच के लिए पर्याप्त तरह अनुकूल विशेषताओं गठबंधन करना चाहिए। 68 गा nuclide पिछले दो दशकों में पीईटी के क्षेत्र में एक आवश्यक शक्ति बन गया है। 12,13 यह एक जनरेटर प्रणाली के माध्यम से इसकी उपलब्धता है, जो एक साइक्लोट्रॉन के आसपास के क्षेत्र से स्वतंत्र रूप से साइट पर लेबलिंग की अनुमति देता है की वजह से है। एक जनरेटर में, मां nuclide 68 जीई एक स्तंभ जिसमें से बेटी nuclide 68 गा eluted और बाद में लेबल है एक उपयुक्त chelator करने पर अवशोषित कर लेता है। 6,14 के बाद से 68 गा nuclide एक trival रूप में मौजूद हैईएनटी केशन सिर्फ जी.डी. (तृतीय) 10,13 की तरह, 68 गा साथ EOB-DTPA chelating बजाय gadoxetic एसिड के रूप में एक ही समग्र नकारात्मक चार्ज के साथ एक जटिल उपज होगा। तदनुसार, कि 68 गा दरियाफ्त पीईटी इमेजिंग के लिए उपयुक्तता के साथ एक समान लक्षण जिगर विशिष्टता गठबंधन हो सकता है। हालांकि gadoxetic एसिड खरीदा है और निम्न संदर्भ में, disodium नमक के रूप में प्रशासित किया जाता है हम जी.डी. [EOB-DTPA] और रूप में यह उल्लेख होगा गा [EOB-DTPA], या 68 गा [के रूप में गैर रेडियोधर्मी गा (तृतीय) को जटिल EOB-DTPA] सुविधा के लिए radiolabeled घटक के मामले में।

उनकी प्रयोज्यता का मूल्यांकन करने के रूप में पीईटी के लिए ट्रेसर, रेडियोधर्मी धातु परिसरों, पहले इन विट्रो में बड़े पैमाने पर जांच की जानी विवो या पूर्व vivo प्रयोगों में की जरूरत है। एक संबंधित चिकित्सा समस्या के लिए उपयुक्तता का निर्धारण करने के लिए, biodistribution व्यवहार और निकासी प्रोफाइल, स्थिरता, अंग विशिष्टता और सेल या Tissu जैसे विभिन्न विशेषताओं दरियाफ्तई तेज की जांच की जानी चाहिए। उनकी गैर-आक्रामक चरित्र के कारण, इन विट्रो निर्धारण अक्सर इन विवो प्रयोगों के लिए पहले प्रदर्शन कर रहे हैं। यह आम तौर पर स्वीकार किया है कि DTPA और उसके डेरिवेटिव गतिज जड़ता की कमी इन परिसरों के कारण 68 गा के लिए chelators, तुलनात्मक तेजी से अपघटन में जिसके परिणामस्वरूप के रूप में सीमित उपयुक्तता की जब विवो में प्रशासित रहे हैं। यह मुख्य रूप से 14-20 apo- transferrin एक के रूप में अभिनय के कारण होता है प्लाज्मा में 68 गा के लिए प्रतियोगी। फिर भी, हम इस नए Hepatobiliary इमेजिंग, जिसमें नैदानिक ​​जानकारी मिनट के भीतर प्रदान की जा सकती बाद इंजेक्शन 3,4,21-23, जिससे जरूरी नहीं कि लंबी अवधि के दरियाफ्त स्थिरता की आवश्यकता में अपनी संभव आवेदन के विषय में दरियाफ्त की जांच की। इस उद्देश्य के लिए हम gadoxetic एसिड से EOB-DTPA अलग-थलग और शुरू में प्राकृतिक गा (तृतीय) है, जो दो स्थिर आइसोटोप, 69 गा और 71 के मिश्रण के रूप में मौजूद है साथ complexation प्रदर्शन 68 गा के निम्नलिखित केलेशन के लिए गैर रेडियोधर्मी मानक के रूप में सेवा प्राप्त की। हम तरीकों की स्थापना की थी और साथ ही साथ EOB-DTPA के 68 Galabeling दक्षता का निर्धारण करने के लिए और नए 68 गा दरियाफ्त की lipophilicity और विभिन्न मीडिया में अपनी स्थिरता की जांच करने के लिए उनकी उपयुक्तता का मूल्यांकन किया।

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Protocol

1. EOB-DTPA और गा की तैयारी [EOB-DTPA]

सावधानी: उपयोग करने से पहले कृपया इस्तेमाल किया कार्बनिक सॉल्वैंट्स, एसिड और alkalines के सभी प्रासंगिक सामग्री सुरक्षा डाटा शीट (MSDS) से परामर्श करें। एक धूआं हुड में सभी चरणों को पूरा करने और व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (सुरक्षा चश्मा, दस्ताने, प्रयोगशाला कोट) का उपयोग करें।

  1. Gadoxetic एसिड से EOB-DTPA का अलगाव
    1. एक फ्लास्क में 0.25 एम gadoxetic एसिड इंजेक्शन समाधान के 3 मिलीलीटर रखो। oxalic एसिड के 500 मिलीग्राम (5.6 mmol) उभारा समाधान करने के लिए जोड़ें।
    2. 1 घंटे के लिए सरगर्मी के बाद, एक मिलाना कम दबाव का उपयोग कर के माध्यम से निलंबन फिल्टर। क्रमश: पानी के 3 मिलीलीटर के साथ छाछ तीन बार धोएं।
    3. जलीय filtrates का मिश्रण है और एक पीएच इलेक्ट्रोड के साथ समाधान लैस। छानना करने के लिए 12 एम हाइड्रोक्लोरिक एसिड जोड़ें जब तक पीएच -0.1 के बारे में है।
    4. Vacuo में विलायक हटाये एक बेरंग अवशेषों उपज के लिए। अक्रिय गैस के तहत स्टोर।
    5. अवशेषों को अच्छी तरह से धो (कम से कम तीनएथिल एसीटेट के साथ बार) oxalic एसिड से अधिक दूर करने के लिए। Vacuo में छाछ सूखी।
    6. कमरे के तापमान पर पानी के 2 मिलीलीटर में छाछ redissolve और फिर एक बर्फ स्नान में समाधान शांत। एक बेरंग चिपचिपा ठोस मनाया जाता है बर्फ स्नान को हटाने के बिना, के गठन तक 0.5 एम जलीय सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान dropwise जोड़ें।
    7. निस्तारण से पानी निकाल दें। ठंडे पानी के 1 मिलीलीटर के साथ ठोस दो बार धोएं। पहला उत्पाद अंश उपज के लिए vacuo में ठोस सूखी।
    8. स्तंभ क्रोमैटोग्राफी (सिलिका, मेथनॉल / पानी 4/1) के माध्यम से निथर पानी के संयुक्त अंशों से एक दूसरे उत्पाद अंश अलग। 24 vacuo में विलायक निकालें।
    9. तो इस प्रकार प्राप्त ठोस शुद्ध सफेद नहीं है, पानी के 1 मिलीलीटर में यह redissolve उत्पाद वेग को बाद में 10 मिलीलीटर Diethyl ईथर के इथेनॉल के 10 मिलीग्राम और जोड़ें। एक मिलाना कम दबाव और vacuo में सूखे का उपयोग कर के माध्यम से फ़िल्टर।
    10. जोड़नादोनों EOB-DTPA की ठोस भिन्न और एनएमआर स्पेक्ट्रोस्कोपी, 25 बड़े पैमाने पर spectrometric 26 और मौलिक 27 विश्लेषण प्रदर्शन।
  2. गा के संश्लेषण [EOB-DTPA]
    चेतावनी: एक शुष्क वातावरण के तहत निष्क्रिय स्टोर ठोस गा (तृतीय) क्लोराइड, क्योंकि हवा, नमी या तेल अपघटन के साथ संपर्क पर जगह लेता है, संक्षारक धुएं और, पीले भूरे या काले दोष के गठन में जिसके परिणामस्वरूप।
    1. पानी की 100 मिलीलीटर में गा (तृतीय) क्लोराइड की 1.94 ग्राम (11.0 mmol) भंग द्वारा एक 0.11 एम स्टॉक समाधान तैयार है। पानी के 4 मिलीलीटर के साथ 25% जलीय अमोनिया समाधान के 1 मिलीलीटर पतला।
    2. पानी की 10 मिलीलीटर में एक फ्लास्क में EOB-DTPA के 80 मिलीग्राम (0.15 mmol) भंग। यदि आवश्यक हो, पूरा विघटन को प्राप्त करने के लिए विलायक गर्मी।
    3. गा (तृतीय) क्लोराइड स्टॉक समाधान के 1.4 मिलीलीटर (0.15 mmol) जोड़ें। एक उत्तेजक और पीएच-इलेक्ट्रोड के साथ कुप्पी लैस। पतला जलीय अमोनिया समाधान dropwise जोड़ें जब तक समाधान के पीएच लगभग 4.1 है। ro पर हलचल30 मिनट के लिए ओम तापमान।
    4. Vacuo में विलायक निकालें। एक फ्लास्क में छाछ, एक केंद्रीय और समानांतर ओर गर्दन के साथ एक stillhead के साथ सुसज्जित रखें। एक ठंडा उंगली और एक वैक्यूम पंप आउटलेट के साथ कंधे गर्दन के साथ केंद्रीय गर्दन लैस
    5. कम दबाव (125 डिग्री सेल्सियस, 0.6 मिलीबार) के तहत अवशेषों हीट। समय समय पर ठंडा उंगली और अभी भी सिर से sublimated अमोनियम क्लोराइड (कांच की सतह के सफेद कोटिंग के रूप में दिखाई दे रहा) को हटाने, साथ ही एक से थोड़ा गीले कपड़े से कुप्पी के ऊपरी हिस्सों से। प्रक्रिया जारी रखें जब तक वहाँ नए उदात्तीकरण का कोई स्पष्ट गठन है।
    6. क्रमश: अमोनियम क्लोराइड के अंतिम निशान हटाने, छाछ गर्म मेथनॉल के 0.5 मिलीलीटर के साथ तीन बार धोने के लिए। Vacuo में बेरंग छाछ सूखी। एनएमआर स्पेक्ट्रोस्कोपी, 25 बड़े पैमाने पर spectrometric 26 और मौलिक 27 विश्लेषण प्रदर्शन।

2. सामान्य लेबलिंग प्रक्रिया

चेतावनी: सभी पूर्वरेडियोधर्मी पदार्थ के साथ प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष संपर्क सहित periments केवल प्रशिक्षित कर्मियों द्वारा किया जाना चाहिए। उचित परिरक्षण उपकरण का उपयोग करें। किसी भी रेडियोधर्मी कचरे को अलग से ले लीजिए और दुकान और वैध नियमों के अनुसार निपटान।

  1. जनरेटर के क्षालन
    नोट: मां dodecyl-3,4,5-trihydroxybenzoate सिलिका पर ऑक्साइड के रूप में ही nuclide के साथ एक 40 mCi 68 जीई / 68 गा जनरेटर इस्तेमाल किया गया था। क्षालन और शुद्धि एक संयुक्त स्वचालित प्रक्रिया एक क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप और औषधि इकाई का उपयोग कर के रूप में, मैन्युअल रूप से प्रदर्शन किया जा सकता है या, के रूप में इस प्रक्रिया में मामला था।
    1. , 1.0 एम और 0.05 एम हाइड्रोक्लोरिक एसिड 5.5 एम के समाधान तैयार करें। 5.0 एम सोडियम मिलीलीटर प्रति 5.5 एम हाइड्रोक्लोरिक एसिड के 25 μl युक्त क्लोराइड का एक समाधान तैयार है। 4.1 ग्राम सोडियम एसीटेट, 1 मिलीलीटर एचसीएल (30%) और 2.5 मिलीलीटर हिमनदों एसिटिक एसिड के संयोजन और 50 मिलीलीटर पानी के साथ मिश्रण गिराए द्वारा पीएच 4.6 की एक बफर समाधान तैयार है।
    2. precपी एस-एच + यह धीरे धीरे निस्तब्धता बाद में 5 मिलीलीटर पानी की 1.0 एम हाइड्रोक्लोरिक एसिड के 1 मिलीलीटर और साथ द्वारा कारतूस ondition।
    3. 4 मिलीलीटर 0.05 एम एचसीएल के साथ जनरेटर की सिलिका स्तंभ Elute। 12 लोड पी एस-एच + कारतूस पर 68 गा eluate।
    4. पानी की 5 मिलीलीटर के साथ कारतूस फ्लश और बाद में हवा के 5 मिलीलीटर के साथ सूखी। 1 मिलीलीटर 5.0 एम अम्लीय सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ कारतूस से 68 गा Elute। 28
  2. 68 गा साथ EOB-DTPA की लेबलिंग
    1. पानी के 1 मिलीलीटर में EOB-DTPA के 1 मिलीग्राम (1.9 μmol) भंग। इस समाधान से 100 μl (0.19 μmol) लेते हैं और उन्हें पानी की 9.9 मिलीलीटर के साथ पतला एक 19 सुक्ष्ममापी (10 माइक्रोग्राम / एमएल) EOB-DTPA के शेयर समाधान तैयार करने के लिए।
    2. समाधान 68 गा युक्त के 50 μl (बराबर 22-29 MBq) निकालें और एक शीशी में डाल दिया। EOB-DTPA की एक 19 मिमी स्टॉक समाधान के 50 μl (0.5 माइक्रोग्राम) और 300 μl हे जोड़ेंएफ 4.0 पीएच को बढ़ाने के लिए बफर। संक्षिप्त हिला और 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर समाधान सेते हैं। 1-5 μl के एक विभाज्य निकालें और एचपीएलसी या टीएलसी विश्लेषण करने के लिए डाल दिया।
    3. । पानी / trifluoroacetic एसिड (99.9% / 0.1%), बी - - acetonitrile / trifluoroacetic एसिड (99.9% / 0.1%), ढाल एक: एक उलट चरण (आरपी) C18 स्तंभ 29 का उपयोग निम्न मोबाइल चरण पर रेडियो एचपीएलसी विश्लेषण प्रदर्शन : 06 मिनट 80% एक → 0% A (0.5 मिलीग्राम / मिनट), 610 मिनट 0% A (0.5 मिलीग्राम / मिनट)।
    4. वक्र के तहत क्षेत्र के रूप में रेडियो एचपीएलसी संकेतों के शिखर तीव्रता का निर्धारण करते हैं। इस प्रकार के रूप में दरियाफ्त की radiochemical शुद्धता (आरसीपी) के रूप में लेबलिंग उपज की गणना:
      आरसीपी = एक गा-EOB-DTPA / (ए गा + A गा-EOB-DTPA) 100% ∙
      एक गा-EOB-DTPA: 68 गा [EOB-DTPA] की वक्र के तहत क्षेत्र
      एक जीए: से मुक्त 68 गा वक्र के तहत क्षेत्र

3. लेबलिंग दक्षता

  1. वर्णन के रूप में लेबलिंग प्रक्रियाओं का प्रदर्शनखंड 2. उपयोग डी 68 गा eluate की गतिविधि शुरू करने के लिए एक सुसंगत रेंज, जैसे, 22-29 MBq (40-140 μl, eluate की ताजगी पर निर्भर करता है)।
  2. बफर समाधान के लिए आवश्यक राशि पीएच (68 गा eluate की मात्रा पर निर्भर करता है 40-190 μl) 3.8-4.0 को समायोजित करने के लिए जोड़ें। ligand शेयर समाधान के लिए आवश्यक राशि (एक 19 मिमी समाधान के 10-70 μl) जोड़ें।
  3. पानी के लिए आवश्यक मात्रा में 1.75 मिलीलीटर के लिए प्रत्येक लेबलिंग जांच की कुल मात्रा को समायोजित करने के लिए जोड़ें। अच्छी तरह मिक्स और नमूना कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए खड़े हो जाओ। धारा 2 में वर्णित के रूप में लेबलिंग उपज का निर्धारण करने के लिए एचपीएलसी विश्लेषण करते हैं।
  4. 0.1 माइक्रोग्राम के चरणों में 0.1 माइक्रोग्राम और माइक्रोग्राम के बीच 0.7 ligand की मात्रा के साथ लेबलिंग प्रक्रियाओं का प्रदर्शन। प्रत्येक ligand एकाग्रता के लिए triplicates में प्रयोगों का प्रदर्शन। मतलब उपज और मानक विचलन की गणना।

4. इन विट्रो स्थिरता

  1. जनरल पीrocedure और तैयारी
    1. 10 मिमी की एक फॉस्फेट एकाग्रता के साथ एक पीबीएस शेयर समाधान तैयार करने के लिए विआयनीकृत पानी की 200 मिलीलीटर में (पीबीएस) फॉस्फेट बफर खारा की एक गोली भंग।
    2. 22-29 MBq 68 गा की लेबलिंग, खंड 2 में वर्णित के रूप में 68 गा eluate की मात्रा पर निर्भर करता है कि धारा 3 वापस लेने के नमूने के रूप में वर्णित EOB-DTPA शेयर समाधान के 0.5 μl के साथ प्रदर्शन, बफर की राशि को समायोजित, लेबलिंग समाधान दरियाफ्त की 6-12 MBq स्थिरता माप प्रदर्शन करने के लिए हैं।
    3. Eluent के रूप में 0.1 एम जलीय सोडियम साइट्रेट का उपयोग कर 80 मिमी सिलिका जेल लेपित एल्यूमीनियम प्लेट पर रेडियो टीएलसी विश्लेषण करते हैं और एक टीएलसी रेडियोधर्मिता स्कैनर के साथ प्लेटों का विश्लेषण। 30 वक्र के तहत क्षेत्र के रूप में निर्धारित बनाने के लिए टीएलसी संकेतों की तीव्रता। इस प्रकार के रूप में दरियाफ्त की आरसीपी की गणना:
      आरसीपी = एक गा-EOB-DTPA / (ए गा-गा-मुक्त + A EOB-DTPA + A गा-कोलाइडयन) ∙ 100%
      एक गा-EOB डीटीPA: 68 गा [EOB-DTPA] की वक्र के तहत क्षेत्र
      एक गा-मुक्त: से मुक्त 68 गा वक्र के तहत क्षेत्र
      एक गा-कोलाइडयन: कोलाइडयन 68 गा की वक्र के तहत क्षेत्र
    4. हर समय बिंदु के लिए आरसीपी टी / आरसीपी 0 गणना। इस प्रकार मानकीकृत आरसीपी बनाम के बाद से शुरुआती बिंदु टी = 0 मिनट समय का अंतर प्लॉट।
      आरसीपी टी = समय बिंदु टी में 68 गा [EOB-DTPA] के आरसीपी।
      आरसीपी 0 = 68 गा [EOB-DTPA] टी = 0 मिनट की आरसीपी।
  2. फॉस्फेट बफर खारा में स्थिरता (ए)
    1. लेबलिंग समाधान के 65 μl करने के लिए 7.4 पीएच को बढ़ाने के लिए पीबीएस शेयर समाधान के 150 μl और सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान (0.1 एम) के 60 μl जोड़ें। अच्छी तरह से मिश्रण।
    2. 1-5 μl के एक विभाज्य निकालें ( 'प्रारंभिक बिंदु') टीएलसी विश्लेषण करने के लिए। इसके तत्काल बाद 37 डिग्री सेल्सियस पर एक मशीन में समाधान की दुकान और प्रतिनिधित्व पर टीएलसी विश्लेषण करने के लिए aliquots को दूर3 घंटा से अधिक समय अंक ative।
  3. पीबीएस में एपीओ -transferrin से अधिक की दिशा में स्थिरता (बी)
    1. लेबलिंग समाधान के 120 μl करने के लिए 7.4 पीएच को बढ़ाने के लिए पीबीएस शेयर समाधान के 50 μl और सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान (0.1 एम) के 430 μl जोड़ें। एपीओ -transferrin (25 मिलीग्राम / एमएल) के एक समाधान के 40 μl जोड़ें। अच्छी तरह से मिश्रण।
    2. 1-5 μl के एक विभाज्य निकालें ( 'प्रारंभिक बिंदु') टीएलसी विश्लेषण करने के लिए। इसके तत्काल बाद 37 डिग्री सेल्सियस पर एक मशीन में समाधान की दुकान और 3 घंटा से अधिक प्रतिनिधि समय बिंदुओं पर टीएलसी विश्लेषण करने के लिए aliquots को हटा दें।
  4. मानव सीरम में स्थिरता (सी)
    1. मानव सीरम के 500 μl करने के लिए 7.4 पीएच को बढ़ाने के लिए लेबलिंग समाधान के 25 μl और सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान (0.1 एम) के 45 μl जोड़ें। अच्छी तरह से मिश्रण।
    2. 1-5 μl के एक विभाज्य निकालें ( 'प्रारंभिक बिंदु') टीएलसी विश्लेषण करने के लिए। इसके तत्काल बाद एक incu में समाधान स्टोर37 डिग्री सेल्सियस पर Bator और aliquots निकालें 3 घंटा से अधिक प्रतिनिधि समय बिंदुओं पर टीएलसी विश्लेषण करने के लिए।

5. वितरण गुणांक का निर्धारण LogD

  1. धारा 2 में वर्णित के रूप में लेबलिंग समाधान के 50 μl करने के लिए 7.4 पीएच को बढ़ाने के लिए पीबीएस शेयर समाधान के 20 μl और सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान (0.1 एम) के 170 μl जोड़ने लेबलिंग प्रक्रियाओं का प्रदर्शन।
  2. कि समाधान से 200 μl वापस लेने और यह एक प्लास्टिक वी शीशी में डाल दिया। एन octanol के 200 μl जोड़ें। 2 मिनट के लिए शीशी और भंवर बंद करें। फिर 5 मिनट के लिए 1600 XG पर नमूना अपकेंद्रित्र।
  3. N -octanol चरण और जलीय चरण प्रत्येक से 40 μl के triplicates निकालें और उन्हें अलग-वी शीशियों में डाल दिया। सावधान परतों मिश्रण करने के लिए नहीं हो।
  4. 30 सेकंड के लिए एक गामा अच्छी तरह से काउंटर में प्रत्येक नमूने की गतिविधि को मापने। प्रत्येक नमूना तुरंत माप दो बार दोहराने और उसका मतलब गतिविधि Ᾱ टी की गणना के लिए टी सूची, W1, Ᾱ टी, डब्ल्यू 2 और Ᾱ टी, डब्ल्यू 3 (जलीय नमूनों में गतिविधियों) और Ᾱ टी, O1,टी, O2,टी, ओ 3 (एन octanol में गतिविधियों) के साथ-साथ संबंधित अपने दृढ़ संकल्प के समय बिंदु टी।
  5. टी 0 के रूप में पिछले नमूने का माप के समय बिंदु को परिभाषित करें। निर्धारित बनाने के लिए और गणना Δt = टीटी 0 से मिनट में Δt की सूची। , Ᾱ टी के क्षय सुधार प्रदर्शन निम्न सूत्र का उपयोग:
    0 = Ᾱ टी · 2 (Δt / 68 मिनट)।
  6. 0, गणना डब्ल्यू के मतलब के रूप में Ᾱ 0, W1,0, डब्ल्यू 2 और Ᾱ 0, डब्ल्यू 3 के साथ ही Ᾱ 0, हे के मतलब के रूप में Ᾱ 0, O1,0, O2 और Ᾱ 0, ओ 3। निम्न सूत्र का उपयोग logD की गणना:
    logD = लॉग [(Ᾱ 0, डब्ल्यू · 33 माइक्रोग्राम)]।
  7. triplicates में पूरे प्रयोग के प्रदर्शन और इसके मानक विचलन के साथ मतलब logD गणना।

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Representative Results

Ligand EOB-DTPA और गैर रेडियोधर्मी गा (तृतीय) जटिल 1 एच और 13 सी {} 1 एच एनएमआर स्पेक्ट्रोस्कोपी, मास स्पेक्ट्रोमेट्री और मौलिक विश्लेषण के माध्यम से विश्लेषण किया गया। 1 टेबल में सूचीबद्ध और आंकड़े 1-6 में चित्रित परिणामों पदार्थों की शुद्धता की जाँच करें।

68 जीई / 68 गा जनरेटर की क्षालन 400-600 MBq 68 गा का समाधान नहीं निकला। वर्णित वांछित दरियाफ्त 68 गा [EOB-DTPA] के गठन में लेबलिंग प्रक्रिया के परिणाम, रेडियो एचपीएलसी चोटी 2.8 मिनट (चित्रा 7) के एक अवधारण समय प्रदर्शन के रूप में संकेत दिया। 220 एनएम (2.7 मिनट, 8 चित्रा) पर यूवी की तुलना डिटेक्टर में गा [EOB-DTPA] मानक की अवधारण समय के साथ तुलना करें सफल लेबलिंग की पुष्टि करता है। (चित्रा बेबुनियाद 68 गा 2.1 मिनट पर रेडियो शिखर के रूप में पाया जाता है7)। ईओ-BDTPA की 68 गा-लेबलिंग दक्षता एचपीएलसी के माध्यम से ligand एकाग्रता के एक समारोह के रूप में लेबलिंग उपज (9 चित्रा) के निर्धारण से जांच की गई। पैदावार तीन प्रतियों में निर्धारित किया गया है और मानक विचलन की गणना की गई।

पीएच और, समाधान में मौजूद बेबुनियाद या anions की एकाग्रता पर निर्भर करता है गैर लेबल 68 गा विभिन्न प्रजातियों, जैसे, gallates या अघुलनशील हाइड्रॉक्साइड में मौजूद हो सकता है। 31 सामान्यीकृत शब्द "मुक्त 68 गा" 32 सभी गैर लेबल के लिए प्रयोग किया जाता है हाइड्रोक्साइड, जो आम तौर पर "कोलाइडयन 68 गा" कहा जाता है, सिवाय इसके समाधान में प्रजातियों। वर्णित विश्लेषण शर्तों के तहत, नि: शुल्क 68 गा एक टीएलसी थाली पर विलायक फ्रंट (आर एफ = 1.0) के साथ चलता है। कोलाइडयन 68 गा, एचपीएलसी के माध्यम से पता नहीं किया जा सकता है, जबकि एक टीएलसी थाली पर गतिविधि के रूप में प्रकट होता हैमूल में (आर एफ = 0)। एक टीएलसी प्लेट एक टीएलसी रेडियोधर्मिता स्कैनर के साथ विश्लेषण का एक प्रतिनिधि वर्णलेख 10 चित्र में दिखाया गया है। दरियाफ्त अलग प्रतिधारण व्यवहार दर्शाती है, पर निर्भर करता है कि लेबलिंग समाधान का एक नमूना (पीएच 3.8-4.0, आर एफ = 0.3) या शारीरिक का एक नमूना पीएच (आर एफ = 0.5) विश्लेषण किया गया था।

पतला पीबीएस में दरियाफ्त की स्थिरता, हौसले लेबल 68 गा [EOB-DTPA] शारीरिक पीएच के नमूने को जोड़ा गया है, पतला युक्त पीबीएस (फॉस्फेट एकाग्रता 5.5 मिमी, ए), apo- transferrin से अधिक (1.6 मिलीग्राम / एमएल की जांच करने के लिए 0.8 की एक फॉस्फेट एकाग्रता मिमी, बी) और मानव सीरम (सी), क्रमशः के साथ। समय के साथ, नमूनों में दरियाफ्त की radiochemical शुद्धता (आरसीपी टी) टीएलसी के माध्यम से निर्धारित किया गया था। बरकरार दरियाफ्त का प्रतिशत आरसीपी टी के अनुपात के रूप में गणना की गईसंबंधित समय अंक और आरसीपी 0 प्रारंभिक बिंदु पर (तालिका 2)। इस आरसीपी 0 (93-96%) भिन्न की दरियाफ्त युक्त लेबलिंग समाधान के कारण जरूरी हो गया था। बरकरार दरियाफ्त की इस प्रकार मानकीकृत प्रतिशत चित्रा 11 में समय के एक समारोह के रूप में दिखाया गया है।

एक पतला पीबीएस समाधान में दरियाफ्त की logD जलीय नमूने के निर्धारण के लिए तैयार थे। नमूने, एन octanol के साथ मिलाया गया और बाद में centrifuged aliquots दोनों चरणों में गतिविधि एकाग्रता का निर्धारण करने के लिए हटा दिया गया। गतिविधि मूल्यों और logD के बाद गणना उसके 3 टेबल में चित्रित कर रहे हैं। इसका मतलब logD मूल्य 3.54 ± 0.08 है।

आकृति 1
चित्रा 1. 1 EOB-DTPA के एच एनएमआर स्पेक्ट्रम। < / strong> स्पेक्ट्रम 400.1 मेगाहर्ट्ज पर डी ओ 2 में दर्ज किया गया था। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2. 13 सी {} 1 एच EOB-DTPA की -NMR स्पेक्ट्रम। स्पेक्ट्रम 100.6 मेगाहर्ट्ज पर डी ओ 2 में दर्ज किया गया था। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3. EOB-DTPA के एमएस (electrospray आयनीकरण (ईएसआई), मेथनॉल, नकारात्मक मोड)।54334fig3large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा 4. 1 एच एनएमआर गा [EOB-DTPA] के स्पेक्ट्रम। स्पेक्ट्रम 400.1 मेगाहर्ट्ज पर डी ओ 2 में दर्ज किया गया था। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 5
चित्रा 5. 13 सी {} 1 एच गा [EOB-DTPA] की -NMR स्पेक्ट्रम। स्पेक्ट्रम 100.6 मेगाहर्ट्ज पर डी ओ 2 में दर्ज किया गया था। उसकी क्लिक करें ई यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए।

चित्रा 6
चित्रा 6 गा [EOB-DTPA] (ईएसआई, मेथनॉल, नकारात्मक मोड) के एमएस, आणविक चोटी के आइसोटोप पैटर्न के एक विस्तृत चित्रण के साथ। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 7
चित्रा 7. प्रतिनिधि एचपीएलसी की 68 गा [EOB-DTPA] भागों में युक्त बेबुनियाद 68 गा, के रूप में रेडियोधर्मिता डिटेक्टर द्वारा दर्ज की गई। बेबुनियाद 68 गा 2.1 मिनट की एक अवधारण समय को दर्शाती एक नमूना की वर्णलेख, जबकि दरियाफ्त 2.8 मिनट में पता चला है ।लक्ष्य = "_blank"> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

आंकड़ा 8
चित्रा 8. प्रतिनिधि एचपीएलसी मानक पदार्थ गा [EOB-DTPA] की वर्णलेख, 220 एनएम पर यूवी की तुलना चैनल में पता चला है। ठंड मानक की अवधारण समय 2.7 मिनट है। इस का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें चित्रा।

9 चित्रा
9 चित्रा EOB-DTPA की 68 गा-लेबलिंग दक्षता का चित्रण। के रूप में एचपीएलसी के माध्यम से निर्धारित लेबलिंग उपज EOB-DTPA की एकाग्रता के एक समारोह (22-29 MBq शुरू गतिविधि, पीएच 3.8-4 रूप में साजिश रची है.0, 5 मिनट, आरटी)। मानक विचलन त्रुटि सलाखों से दिखाया गया है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 10
चित्रा 10. प्रतिनिधि टीएलसी वर्णलेख अलग 68 प्रजातियों गा खुलासा। 68 गा [EOB-DTPA] पतला पीबीएस में (फॉस्फेट एकाग्रता 5.5 मिमी, पीएच = 7.4) का एक नमूना ऊष्मायन के 110 मिनट के बाद विश्लेषण किया गया था। कोलाइडयन 68 गा की अनुकरणीय वितरण (आर एफ = 0), 68 गा [EOB-DTPA] (आर एफ = 0.5) और नि: शुल्क 68 गा (आर एफ = 1.0) एक 70 मिमी टीएलसी थाली पर के रूप में एक टीएलसी रेडियोधर्मिता स्कैनर से पता लगाया है प्रस्तुत किया। गिनता क्षय को सही कर रहे हैं। एक बड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करेंयह आंकड़ा का संस्करण।

11 चित्रा
विभिन्न मीडिया में 68 गा [EOB-DTPA] का 11 चित्रा। स्थिरता निर्धारण। क्षय सही, के रूप में टीएलसी के माध्यम से निर्धारित बरकरार दरियाफ्त की मानकीकृत प्रतिशत, समय के एक समारोह के रूप में दिखाया गया है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

तालिका एक
तालिका 1 चोटियों को एनएमआर स्पेक्ट्रोस्कोपी, एमएस और EOB-DTPA और गा [EOB-DTPA] के लिए प्रदर्शन किया मौलिक विश्लेषण। सापेक्ष एमएस शिखर तीव्रता% में दिया जाता है, काम के परिणाम वर्ग कोष्ठक में दिए गए हैं। मौलिक मूल्यों सी एच एन calcu थेसी 23 के लिए lated h 33 एन 3 हे 11 · एच 2(EOB-DTPA) और (एनएच 4) 0.75 एच 1.25 [सी 23 h 28 गण मन 3 हे 11] · 2H 2(गा [EOB-DTPA])।

सारणी 2
विभिन्न मीडिया में 68 गा [EOB-DTPA] की तालिका 2 स्थिरता दृढ़ संकल्प। 68 गा [EOB-DTPA] मीडिया ए, बी और सी में की आरसीपी दिए गए समय के बिंदुओं पर टीएलसी के माध्यम से निर्धारित किया गया था। नमूनों की रचना दरियाफ्त / नि: शुल्क 68 गा / के% में प्रतिशत कोलाइडयन 68 गा के रूप में दिया जाता है। बरकरार दरियाफ्त का प्रतिशत आरसीपी टी / आरसीपी 0 के अनुपात के रूप में मानकीकृत है। आरसीपी 0 पर टी = 0 मिनट दरियाफ्त के संबंधित आरसीपी है।


तालिका 3. logD क्षय का निर्धारण, को सही मान 0 अल्फा तीन aliquots (एक्स = 1, 2, 3) प्रत्येक चरण से हटा (डब्ल्यू एन -octanol: जलीय, ओ) की एक्स एक नमूने की। सभी गतिविधियों सीपीएम में दिए गए हैं। प्रोटोकॉल की धारा 5 में वर्णित के रूप LogD गणना की जाती है। प्रयोग दो बार दोहराया गया था।

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Discussion

EOB-DTPA एक बहु कदम संश्लेषण 33 के माध्यम से सुलभ है, लेकिन बस के रूप में अच्छी तरह से उपलब्ध विपरीत एजेंटों gadoxetic एसिड युक्त से अलग किया जा सकता है। इस उद्देश्य के लिए, केंद्रीय जी.डी. (तृतीय) आयन oxalic एसिड की एक अतिरिक्त के साथ उपजी जा सकता है। हटाने जी.डी. (तृतीय) oxalate और oxalic एसिड के बाद ligand पीएच 1.5 पर ठंडे पानी में तेज़ी से अलग किया जा सकता है। हालांकि, क्रम में छानना की पैदावार कॉलम क्रोमैटोग्राफी बढ़ाने के बजाय या एक अनुवर्ती प्रक्रिया के रूप में किया जा सकता है। किसी भी विधि से 70% की कुल पैदावार में विश्लेषणात्मक शुद्ध ligand (आंकड़े 1-3, 1 टेबल) अर्जित करता है।

हमने पाया है कि आदेश गा अलग-थलग करने में [EOB-DTPA] अमोनिया समाधान के साथ पीएच का समायोजन, सोडियम हाइड्रॉक्साइड के उपयोग की तुलना में फायदेमंद है क्योंकि द्वारा उत्पाद अमोनियम क्लोराइड बनाने की क्रिया के माध्यम से बहुत हाइड्रोफिलिक अवशेषों से हटाया जा सकता है। ऊपर उल्लिखित शर्तों के तहत इस प्रक्रिया जगह धीमी गति से लेता हैLy। चूंकि क्लोराइड की गैर नगण्य मात्रा में अभी भी पांच दिनों के बाद पहचाने जाने थे, शेष नमक मेथनॉल के साथ बाहर धोया गया था। हालांकि इस काम हुआ गा [EOB-DTPA] का आंशिक नुकसान में प्रक्रिया का परिणाम, उत्पाद 46% की समग्र आय के साथ विश्लेषणात्मक पवित्रता में प्राप्त हुई थी (4-6, 1 टेबल आंकड़े)। दोनों EOB-DTPA और उसके गा के अलगाव के लिए (तृतीय) परिसर, उलट चरण क्रोमैटोग्राफी के उपयोग के शुद्धिकरण का एक वैकल्पिक तरीके के रूप में माना जाना चाहिए, जब अत्यधिक ध्रुवीय सॉल्वैंट्स का उपयोग करने के बाद से विशेष रूप से सिलिका जेल के अपघटन की संभावना है।

EOB-DTPA की लेबलिंग प्रक्रिया अत्यधिक शुद्ध सॉल्वैंट्स, रसायन और धातु मुक्त उपकरणों के उपयोग की आवश्यकता प्रतिस्पर्धा धातु आयनों की उपस्थिति से बचने के लिए, 68 गा के कारण nanomolar मात्रा में मौजूद जा रहा है (1.75 मिलीलीटर नमूने में 68 गा के 2 MBq 0.14 एनएम के एक nuclide एकाग्रता बराबर)। 68 गा के लिए EOB-DTPA की लेबलिंग पांच मिनट के भीतर पीएच 3.8-4.0 पर होता हैकमरे के तापमान पर Utes। 68 गा-लेबलिंग दक्षता पर जांच लेबलिंग उपज के निर्धारण प्रतिक्रिया की स्थिति पीएच, तापमान और प्रतिक्रिया समय रखने के साथ-साथ 68 गा निरंतर की या एक उचित सीमा में गतिविधि शुरू करते समय की आवश्यकता है। प्रत्येक डेटा बिंदु के लिए (यानी, ligand एकाग्रता) प्रयोग कम से कम तीन बार एक उचित आत्मविश्वास के स्तर प्रदान करने के लिए, कर रहे हैं बहुत ही कम किया जाना चाहिए दोनों ligand और 68 गा की सांद्रता के बाद से और लेबलिंग उपज इसलिए की भी मामूली विचलन के प्रति संवेदनशील प्रतिक्रिया की स्थिति। उदाहरण के लिए, 68 गा eluate उम्र के रूप में, मात्रा बढ़ाने की aliquots एक निरंतर शुरुआती गतिविधि प्रदान करने के लिए है, जिससे बफर की बढ़ती मात्रा की आवश्यकता होती है वापस लिया जा करने की जरूरत है। इसके अलावा, क्षय उत्पाद 68 Zn, जो खुद 68 गा के लिए एक प्रतियोगी के रूप में कार्य कर सकता है की सांद्रता बढ़ रही है, इस प्रकार के नकारात्मक labelin को प्रभावित करने में eluate परिणामों की उम्र बढ़नेजी दक्षता। 13,34,35 22-29 MBq 68 गा के व्यावहारिक रूप से मात्रात्मक लेबलिंग का नि: शुल्क 68 सामग्री गा ≤ 2% और के बारे में 5 के साथ, EOB-DTPA की मात्रा ≥ 0.7 माइक्रोग्राम (9 चित्रा) के साथ ऊपर उल्लिखित शर्तों के तहत हासिल की है नमूनों में कोलाइडयन 68 गा वर्तमान%।

एचपीएलसी से मुक्त 68 गा गा और 68 [EOB-DTPA] बेहतर आधारभूत जुदाई प्रदान की है, यह कोलाइडयन 68 गा पता लगाने के लिए अनुकूल नहीं है। इसलिए हम टीएलसी स्थिरता माप के दौरान आरसीपी, जिसमें transferrin या प्रोटीन वाली की मात्रा का ठहराव 68 गा आवश्यक था निर्धारित करने के लिए चुना है। हम आधारभूत जुदाई इस उद्देश्य (चित्रा 10) के लिए स्वीकार्य पाया; हालांकि, कोलाइडयन भिन्न, एचपीएलसी विश्लेषण के बाद, विकल्प के रूप में माना जा सकता है दूर करने के लिए आकार अपवर्जन क्रोमैटोग्राफी या निस्पंदन तरीकों 15,36 का उपयोग करें। 68 गा परिसर में एक मजबूत आरईटी दर्शातीटीएलसी प्लेटों पर ention (आर एफ = 0.3) यदि नमूने के रूप में शारीरिक पीएच (आर एफ = 0.5) पर नमूने के लिए विरोध के लेबलिंग समाधान से सीधे वापस ले लिया है। हम सुझाव है कि इस अवलोकन परिसर के विभिन्न protonation राज्यों से समझाया जा सकता है।

में 68 गा ट्रेसर के इन विट्रो स्थिरता निर्धारण आमतौर पर है, साथ ही apo- युक्त transferrin 37 है, जो या खून में 68 गा के लिए मुख्य प्रतिद्वंद्वी है समाधान में पीबीएस 15,17 या वैकल्पिक बफर सिस्टम शारीरिक पीएच 37 नकल उतार में प्रदर्शन कर रहे मानव सीरम 15,17। हमारे प्रयोगों में पीबीएस के लिए 0.1 एम सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान के अलावा 7.4 के लिए नमूने का पीएच को समायोजित करने के लिए आवश्यक था। फॉस्फेट एकाग्रता गिरावट की दर प्रभावित करती है कि हम जोर नहीं कर सकता, स्थिरता प्रयोगों के बाद से फॉस्फेट एकाग्रता (0.8 मिमी और 5.5 मिमी (ए)) झुकेंगे गैर reprodu बदलती के समाधान मेंCIBLE का परिणाम है। हालांकि, हमने पाया है कि एक समाधान बी, युक्त एपीओ -transferrin और 0.8 मिमी फॉस्फेट (जो सामान्य प्लाज्मा सामग्री 38 की सीमा के भीतर है 1.6 मिलीग्राम / एमएल) (मानव रक्त आम तौर पर 0.8-1.5 की एक फॉस्फेट स्तर मिमी 39,40 दर्शाती ), एक दर मानव सीरम (सी) में नमूदार के लिए तुलनीय में अपघटन का कारण बनता है। समाधान में एसी, 185 मिनट कोलाइडयन 68 की विषय सामग्री के बाद गा के बारे में 24% से, वृद्धि हुई थी, जबकि 68 से मुक्त गा सामग्री समाधान में 11% की वृद्धि हुई थी समाधान बी में 17% और समाधान सी में 27% (2 टेबल )। तथ्य यह है कि 68 गा दरियाफ्त अपघटन द्वारा गठित रूप में मुफ्त 68 गा मुख्य रूप से उपहार के रूप में कोलाइडयन करने के लिए या विरोध के प्रोटीन वाली बी में 68 गा और सी transferrin संतृप्ति या तुलनात्मक रूप से धीमी गति से transferrin बाध्यकारी दरों की वजह से हो सकता है। (चित्रा 11) 68 गा [EOB-DTPA] के आम तौर पर समान DTPA निकाली गई chelators की विशेषता ट्रेसर के बराबर है। 15,16,18, जल्दी धमनियों और शिराओं जिगर का छिड़काव चरण के बारे में जानकारी हैं बाद प्रशासन पहले 3 मिनट के भीतर 4,21 एमआरआई स्कैन प्रदर्शन से प्राप्त की जी.डी. [EOB-DTPA], hepatocyte उपस्थिति 20 मिनट 3,4,23 को कई घंटे 21,22 इंजेक्शन के बाद करने में देरी चरण में पता चला है, जबकि। मानव सीरम में 20 मिनट के बाद 68 गा [EOB-DTPA] का 93% बरकरार रहेगा। उम्मीद के मुताबिक, संकेत करने वाली शोर अनुपात उस समय तक 68 गा-transferrin, जो प्लाज्मा और ऊतकों को व्यक्त transferrin रिसेप्टर्स में मौजूद है, के रूप में अच्छी तरह से मुक्त 68 गा gallate है की बढ़ती मात्रा के कारण खराब हो गया होगा। 41,42

एक ट्रेसर ऊतक वितरण एन octanol / जल विभाजन गुणांक लॉग इन करने की भविष्यवाणी के लिएपी या वितरण गुणांक दो चरणों में गतिविधि सांद्रता के अनुपात के रूप में निर्धारित किया जा सकता logD। परिभाषा के अनुसार, logD पैरामीटर एक माध्यम है, जो दरियाफ्त के विभिन्न protonation राज्यों के साथ ही जलीय चरण में इसकी अपघटन की संभावना के कारण यह हमारे प्रयोगों के लिए उपयुक्त बनाता में मौजूद कई प्रजातियों के बीच अंतर नहीं है। निष्कर्षण द्वारा logD निर्धारित करने के लिए जलीय माध्यम आमतौर पर पीबीएस के साथ buffered है रक्त की स्थिति। 17,43-45 ऊपर उल्लिखित कारणों से हम पीबीएस पतला इस्तेमाल के लिए नकल करने के लिए, 0.8 मिमी और शारीरिक पीएच की एक फॉस्फेट एकाग्रता का प्रदर्शन। N -octanol और centrifugation के साथ निकासी के बाद, कम किया जा करने के लिए एक ही चरण से कई aliquots को हटाने के pipetting की वजह से अशुद्धियों के लिए अनुमति देता है। एन octanol में बहुत कम गतिविधि सांद्रता के कारण एक जलीय चरण के साथ पार संक्रमण से बचने के लिए सावधान रहना चाहिए और एक अलग शीशी में मात्रात्मक हस्तांतरण सुनिश्चित करने के लिए। distribसंविधान इस प्रक्रिया द्वारा निर्धारित गुणांक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य थे, और जब वे lipophilicity का एक मोटा अनुमान के लिए अनुमति देते हैं, जी.डी. की एक logP [EOB-DTPA] के लिए एक प्रत्यक्ष तुलना संभव नहीं है। जी.डी. [EOB-DTPA] lipophilicity से मुख्य रूप से नहीं बल्कि इसके Hepatobiliary तेज रहने वाले विषयों या कोशिकाओं में अतिरिक्त प्रयोगों की 68 गा [EOB विवो में biodistribution के बारे में अधिक विस्तृत जानकारी के साथ ही स्थिरता प्रदान करने के लिए आवश्यक होगा जिसके परिणामस्वरूप की विशिष्टता के कारण -DTPA]। कुल मिलाकर, छिड़काव के लिए इमेजिंग एजेंट और जल्दी Hepatobiliary चरण के रूप में एक आवेदन कल्पना है।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
primovist Bayer - 0.25 M
gallium(III) chloride Sigma-Aldrich Co. 450898
water (deionized) - - tap water deionizing equipment by Auma-Tec GmbH
hydrochloric acid 12 M VWR 20252.29
sodium hydroxide Polskie Odczynniki Chemiczne S.A. 810925429
oxalic acid Sigma-Aldrich Co. 75688
ethyl acetate Brenntag GmbH 10010447
silica gel Merck KGaA 1.10832.9025 Geduran Si 60 0.063-0.2 mm
TLC silica gel 60 F254 Merck KGaA 1.16834.0001
methanol VWR 20903.55
ethanol Brenntag GmbH 10018366
eiethylether VWR 23807.468 stored over KOH plates
ammonia solution (25%) VWR 1133.1
pH electrode VWR 662-1657
stirring and heating unit Heidolph 505-20000-00
pump Ilmvac GmbH 322002
frit - custom design
NMR spectrometer Bruker Coorporation - Ultra Shield 400
mass spectrometer Thermo Fisher Scientific Inc. -
elemental analyser Hekatech GmbH Analysentechnik - EuroVector EA 3000 CHNS
deuterated water D2O euriso-top D214 99.90% D
Material/Equipment required for labeling procedures
68Ge/68Ga generator ITG Isotope Technologies Garching GmbH A150
pump and dispenser system Scintomics GmbH - Variosystem
hydrochloric acid 30% (suprapur) Merck KGaA 1.00318.1000
water (ultrapur) Merck KGaA 1.01262.1000
sodium chloride (suprapur) Merck KGaA 1.06406.0500
sodium acetate (suprapur) Merck KGaA 1.06264.0050
glacial acetic acid (suprapur) Merck KGaA 1.00066.0250
sodium citrate dihydrate VEB Laborchemie Apolda 10782 >98.5%
PS-H+ Cartridge (S) Macherey-Nagel 731867 Chromafix
apo-Transferrin Sigma-Aldrich Co. T2036
PBS buffer (tablets) Sigma-Aldrich Co. 79382
human serum Sigma-Aldrich Co. H4522 from human male AB plasma
flasks, columns, etc. custom design
pH electrode Knick Elektronische Messgeräte GmbH & Co. KG 765-Set
binary pump (HPLC) Hewlett-Packard G1312A (HP 1100)
UV Vis detector (HPLC) Hewlett-Packard G1315A (HP 1100)
radioactive detector (HPLC) EGRC Berthold
HPLC C-18-PFP column Advanced Chromatography Technologies Ltd. ACE-1110-1503/A100528
HPLC glass vials GTG Glastechnik Graefenroda GmbH 8004-HP-H/i3µ
pipette Eppendorf -
plastic vials Sarstedt AG & Co. 6542.007
plastic vials Greiner Bio-One International GmbH 717201
activimeter MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH - Isomed 2010
tweezers custom design
incubator Heraeus Instruments GmbH 51008815
vortex mixer Fisons - Whirlimixer
centrifuge Heraeus Instruments GmbH 75003360
gamma well counter MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH - Isomed 2100
water for chromatography Merck KGaA 1.15333.2500
acetonitrile for chromatography Merck KGaA 1.00030.2500
trifluoroacetic acid Sigma-Aldrich 91707
TLC radioactivity scanner raytest Isotopenmessgeräte GmbH B00003875 equipped with beta plastic detector

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