在EOB-DTPA和镓(三)复杂的调查其

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Summary

一种用于EOB-DTPA的分离和随后的络合天然镓(III)和68镓是本文中所呈现,以及所有化合物和调查上标记效率的透彻分析,体外稳定性和辛醇 /水过程放射性标记的复杂分配系数。

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Greiser, J., Niksch, T., Weigand, W., Freesmeyer, M. Investigations on the Ga(III) Complex of EOB-DTPA and Its 68Ga Radiolabeled Analogue. J. Vis. Exp. (114), e54334, doi:10.3791/54334 (2016).

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Abstract

我们证明为EOB-DTPA(3,6,9-三氮杂-3,6,9-三(羧甲基)-4-(乙氧基苄基)-undecanedioic酸)从其钆(III)络合物和协议的分离方法制备其的新的非放射性的, 天然镓(Ⅲ),以及放射性68镓络合物。通过核磁共振(NMR)谱,质谱和元素分析复杂的配位体以及作为Ga(III)进行了表征。68嘎通过标准洗脱法从68锗/ 68 Ga产生获得。实验,以评估在pH值进行3.8-4.0 EOB-DTPA的68嘎标记效率。建立的分析技术无线电TLC(薄层色谱法)和无线电HPLC(高效液相色谱法)来测定示踪剂的放射化学纯度。由于68嘎示踪剂'亲脂性辛醇/水分布的第一个调查的存在于pH为7.4的溶液68镓物种n个系数是由萃取法在体外在生理pH下在各种媒体示踪剂的稳定性的测量进行测定。,揭示分解的不同的费率。

Introduction

Gadoxetic酸,对配体的钆(III)络合物的EOB-DTPA 1的通用名称,是在肝胆磁共振成像(MRI)。2,3-一个常用的造影剂由于其特异性摄取由肝细胞和高百分比肝胆排泄它使局灶性病变和肝脏肿瘤的本地化。2-5然而,MRI技术有一定的局限性(如造影剂毒性,患者的幽闭恐惧症或金属植入物的应用受到限制)调用的替代诊断工具。

正电子发射断层扫描(PET)是一种分子成像方法,其中,一种放射性物质(示踪)的少量施用,在其它在体内的分布由PET扫描器记录6 PET是一种动态的方法,其允许高图像的空间和时间分辨率以及结果的量化,而无需处理MRI造影剂的副作用。所获得的代谢信息的信息值可与来自其他成像方法接收解剖数据进一步增加组合,最通常通过在PET / CT扫描仪计算机断层扫描(CT)的混合成像实现的。

适用于PET示踪剂的化学结构必须包括用作正电子发射放射性同位素。正电子有一个短暂的寿命,因为它们几乎立即消灭与周围组织的原子炮弹电子。通过湮灭与运动的相反方向的两个511keV的伽玛光子发射,这是由PET扫描器记录。-7,8-为了形成示踪剂,PET的核素可以共价结合到分子,如在2-脱氧的情况下2- [18 F] fluoroglucose葡萄糖(FDG),是最广泛使用的PET示踪剂。7然而,核素也可以形成配位键合到一个或多个配体( [68镓] -DOTATOC 9,10)或溶解无机盐)施加( 例如,[18 F]氟化物钠11。总而言之,示踪剂的结构是至关重要的,因为它决定了它的生物分布,代谢和排泄行为。

合适的PET核素应该结合像便利正电子的能量和可用性,以及半衰期足够预期调查有利特征。 68镓核素已成为PET的字段的必要的力,在过去的二十年。12,13这主要是由于通过一个发电机系统其可用性,它独立地允许在现场标签从回旋加速器的附近。在一台发电机,母核素68戈被吸收在从该子体核素68镓洗脱,随后标记,以一个合适的螯合剂的一列。6,14由于68镓核素的存在是为繁琐耳鼻喉科阳离子就像钆(III)10,13,螯合EOB-DTPA 68嘎,而不是将产生复杂的具有相同的整体负电荷的gadoxetic酸。相应地,68镓示踪剂可能与适宜用于PET成像合并相似的特性肝特异性。虽然gadoxetic酸购买并施用二钠盐,在下面的上下文中,我们将称其为钆〔EOB-DTPA]和非放射性镓(Ⅲ)配合物作为镓[EOB-DTPA],或68镓[ EOB-DTPA]为方便起见放射性标记组分的情况下。

要用作PET示踪剂,放射性金属配合物需要被广泛地在体外第一检查,在体内离体实验评估其适用性。要确定相应的医学难题的适用性,各种示踪特征,如生物分布行为和清除轮廓,稳定性,器官特异性和细胞或Tissu酒店Ë摄取需要进行调查。由于它们的非侵入性的性质, 在体外测定常常之前在体内实验进行。人们普遍承认,DTPA及其衍生物是有限的适用性如由于这些配合螯合剂为68镓缺乏动力学惰性,导致同等快速分解的,当体内施用。14-20这主要是通过充当载脂蛋白转引起竞争对手68嘎血浆。然而,我们研究了关于在肝胆成像,其特征在于,可在数分钟内提供诊断信息后注入3,4,21-23,从而不一定需要长期示踪剂稳定性及其可能的应用这种新的示踪剂。为此目的,我们从gadoxetic酸分离EOB-DTPA和最初与天然镓(Ⅲ),它存在两个稳定同位素,69 Ga和71的混合物进行的络合68的Ga以下螯合。我们采用建立的方法,同时评估其是否适合确定EOB-DTPA的68 Galabeling效率,并探讨新的68嘎示踪剂的亲脂性及其在不同介质中的稳定性。

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Protocol

1. EOB-DTPA和Ga的制备EOB-DTPA]

注意:使用前请先咨询的使用有机溶剂,耐酸,耐碱所有相关的材料安全数据表(MSDS)。执行所有步骤,在通风橱中,并使用个人防护用品(防护眼镜,手套,实验室外套)。

  1. 从gadoxetic酸EOB-DTPA的分离
    1. 花费3毫升0.25M的gadoxetic酸注射溶液到烧瓶中。草酸的500毫克(5.6毫摩尔)添加到搅拌的溶液中。
    2. 搅拌1小时后,通过使用减压玻璃料过滤悬浮液。用3毫升的水洗涤残余物三次,分别。
    3. 合并的含水滤液和装备有pH电极的溶液。添加12M盐酸向滤液直到pH为约-0.1。
    4. 在真空中除去溶剂,得到一种无色残余物。在惰性气体下储存。
    5. 彻底清洗残余物(至少三个次),用乙酸乙酯以除去过量的草酸。干燥在真空下将残余物。
    6. 再溶解在2ml水,残余物在室温下,然后冷却在冰浴中的溶液中。不除去冰浴,加入0.5M的氢氧化钠水溶液逐滴直至形成一种无色胶固体观察。
    7. 通过倾析除去水。固体两次用1毫升冷水冲洗。干燥该固体在真空下 ,得到第一个产物级分。
    8. 隔离的倾析水通过柱色谱法(二氧化硅,甲醇/水4/1)将合并的级分的第二产品级分。24 在真空中除去溶剂。
    9. 如果这样得到的固体是不是纯白色,再溶解它在1ml水中,加入10毫升乙醇,随后10毫升二乙醚中以沉淀出产物。通过采用减压真空干燥玻璃料过滤
    10. 结合无论EOB-DTPA的固体成分并进行NMR光谱,25质谱26和元素分析27。
  2. 嘎的合成EOB-DTPA]
    注意:在干燥惰性气氛下储存固体镓(III),氯化,因为在与空气,水份或油脂分解接触发生,导致腐蚀性烟雾和形成的黄色,棕色或黑色杂质。
    1. 由镓(III),氯化1.94克(11.0毫摩尔)溶解于100ml水制备0.11 1M贮存液。稀释加入1ml 25%氨水溶液用4毫升水。
    2. 溶解EOB-DTPA的80毫克(0.15毫摩尔)在10毫升水的烧瓶中。如果需要的话,加热溶剂以达到完全溶解。
    3. 添加镓(III),氯化原液1.4毫升(0.15毫摩尔)。装备有搅拌器和pH电极的烧瓶中。加稀氨水溶液中滴加直至溶液的pH为约4.1。在搅拌滚装嗡温度30分钟。
    4. 在真空中除去溶剂。放置在一烧瓶中的残余物中,配有中央和平行的侧颈部stillhead。装备中央颈部用冷却手指和侧颈部用真空泵出口
    5. 加热减压(125℃,0.6毫巴)的残基。周期性地从冷却手指和静止头从烧瓶的上部用微湿布除去升华氯化铵(如玻璃表面的白色涂层可见),以及。继续这个过程,直到有新的升华没有明显的形成。
    6. 分别取出的氯化铵最后的痕量三次用0.5毫升热甲醇洗涤残余物。干燥真空无色残余物。执行NMR光谱,25质谱26和元素分析27。

2.一般标记过程

注意:所有前periments包括与放射性物质直接或间接接触,必须仅通过受过训练的人员进行。请使用适当的屏蔽设备。单独收集任何放射性废物和储存,并按照现行规定处理。

  1. 发电机的洗脱
    注:绑定为氧化物的十二烷基3,4,5-三羟基苯二氧化硅母核素一个40毫居里68锗/ 68镓发生器使用。洗脱和纯化可以手动进行,或者,如在此过程中的情况下,作为使用蠕动泵和分配器单元组合的自动化过程。
    1. 制备的5.5米的解决方案,1.0M和0.05M的盐酸。制备的5.0微米含有25微升的每毫升5.5摩尔的盐酸氯化钠溶液。通过组合4.1克乙酸钠,加入1ml的HCl(30%)和2.5毫升冰醋酸和水的混合物稀释至50ml制备的pH 4.6的缓冲溶液。
    2. PRECondition对PS-H +盒通过用1ml的1.0M的盐酸,随后5ml水慢慢冲洗它。
    3. 用4ml的0.05M盐酸洗脱发生器的二氧化硅柱12装入68镓洗脱液上对PS-H +墨盒。
    4. 冲洗盒用5毫升水,随后用5毫升的空气干燥。从盒1毫升5.0微米酸化氯化钠溶液洗脱6828
  2. EOB-DTPA的标签与68
    1. 溶解EOB-DTPA的1毫克(1.9微摩尔)在1毫升水中。从该溶液中取100微升(0.19微摩尔)和9.9毫升水稀释它们,以制备19微米(10微克/毫升)的EOB-DTPA的原液。
    2. 删除50微升(相当于22-29活度)含68嘎溶液,放入瓶中。加EOB-DTPA的19毫米原液的50微升(0.5微克)和300微升ö˚F缓冲到pH升至4.0。简要地摇动并孵育在室温下将溶液5分钟。除去1-5微升的等分试样,并把通过HPLC或TLC分析。
    3. 。水/三氟乙酸(99.9%/ 0.1%),B - -乙腈/三氟乙酸(99.9%/ 0.1%),梯度A:在反相(RP)C18柱29使用以下流动相进行无线HPLC分析:06分钟80%A→0%A(0.5毫升/分钟),610分钟0%A(0.5毫升/分钟)。
    4. 确定的无线型HPLC信号作为曲线下面积的峰强度。计算出示踪剂的标记率如放射化学纯度(RCP)如下:
      RCP = A 嘎EOB-DTPA /(A + A 嘎EOB-DTPA)∙100%
      Ga-EOB-DTPA:68嘎[EOB-DTPA]的曲线下面积
      Ga的:下免费68嘎曲线下面积

3.标记效率

  1. 执行程序的标签作为描述d在部分2,使用一个一致的范围开始68镓洗脱液活性, 例如,22-29活度(40-140微升,取决于洗脱物的新鲜度)。
  2. 添加所需的缓冲溶液的量以调节pH至3.8-4.0(40-190微升,这取决于68镓洗脱液的体积上)。添加所需的配体原液量(10-70微升19毫溶液)。
  3. 添加所需量的水到每个标记探针的总体积调整至1.75毫升调匀并让样品静置在室温下5分钟。在第2节,以确定标记率进行HPLC分析。
  4. 执行与0.1微克步骤0.1微克和0.7之间微克配位体的量的标记过程。一式三份每个配体浓度进行实验。计算平均产量和标准偏差。

4. 体外稳定性

  1. 一般≥10rocedure和准备
    1. 在200毫升的去离子水溶解的磷酸盐缓冲盐水的片剂(PBS)中以制备PBS原液10mM的磷酸盐浓度。
    2. 用0.5微升EOB-DTPA原液进行22-29活度68嘎的标签,如第2部分所述根据不同的68嘎洗脱液的体积,调节缓冲量,如在第3节撤柜样本描述含6-12活度示踪剂进行稳定度测量标签解决方案。
    3. 上用0.1M含水柠檬酸钠作为洗脱液80毫米硅胶被覆铝板进行无线TLC分析,并用薄层色谱放射性扫描器分析板30确定TLC信号的强度为曲线下面积。计算出示踪剂的RCP如下:
      RCP = A 嘎EOB-DTPA /(A-免费嘎 + A 嘎EOB-DTPA + A 嘎胶体 )∙100%
      Ga-EOB-DTPA:在68嘎[EOB-DTPA]的曲线下面积
      Ga免费电话 :下免费68嘎曲线下面积
      Ga胶体 :面积在68胶体嘎曲线
    4. 计算RCP / RCP 0为每个时间点。积从而标准化RCP 自出发点t = 0分钟的时间差。
      RCP T =在时间点t 68嘎[EOB-DTPA]的RCP。
      RCP 0 = RCP 68嘎[EOB-DTPA]在t = 0分钟。
  2. 在磷酸盐缓冲盐水稳定性(A)中
    1. 到65微升的标记溶液添加的PBS原液15​​0微升和60微升的氢氧化钠溶液(0.1M)将pH提高到7.4。调匀。
    2. 除去1-5微升等分进行TLC分析('起点')。立即孵化器解决方案存储在37℃,取出等分在代表进行TLC分析经3小时ative时间点。
  3. 朝过量载脂蛋白 -transferrin的在PBS中的稳定性(B)中
    1. 至120微升的标记溶液添加的PBS原液50微升和430微升的氢氧化钠溶液(0.1M)将pH提高到7.4。添加40微升载脂蛋白 -transferrin(25毫克/毫升)的溶液。调匀。
    2. 除去1-5微升等分进行TLC分析('起点')。立即在培养箱的溶液储存于37℃,取出等分试样在代表时间点超过3小时,从而进行TLC分析。
  4. 人血清中的稳定性(C)
    1. 到500微升的人血清中添加的标记溶液25微升和45微升的氢氧化钠溶液(0.1M)将pH提高到7.4。调匀。
    2. 除去1-5微升等分进行TLC分析('起点')。立即存储在一个INCU溶液乌兰巴托37℃,取出等分在代表时间点超过3小时进行TLC分析。

5.确定分配系数的LogD

  1. 如第2中所述为50微升的标记溶液添加的PBS原液20微升和170微升的氢氧化钠溶液(0.1M)将pH升高到7.4进行标记的程序。
  2. 从解决方案支取200微升,放入一个塑料V-瓶。加入200μl 辛醇的。关闭小瓶涡旋2分钟。然后在1600 xg离心离心样品5分钟。
  3. n辛醇相和各水相取出的40微升一式三份,并把它们放在单独的V-小瓶。要小心,不要混淆层。
  4. 测量在30秒的伽马井计数器各样品的活性。对于每个样品立即重复测量两次,并计算其平均活动ᾹŤ ᾹT,W1,ᾹT,W2ᾹT,W3(水样中的活动),并ᾹT,O1,ᾹT,O2,ᾹT,O3与各自沿(在辛醇活动)他们的决心的时间点t。
  5. 定义的最后一个样本为t 0的测量的时间点。确定并通过计算ΔT= TT 0列出Δt的以分钟。执行Ᾱ 衰变校正,使用下面的公式:
    Ᾱ0 =ᾹT·2(ΔT/ 68分钟)。
  6. 计算Ᾱ0,W为平均Ᾱ0,W 1,Ᾱ0,W2Ᾱ0,W3以及Ᾱ0,O作为平均Ᾱ0,O1,Ᾱ0,O2Ᾱ0,O3。使用下列公式计算logD:
    logD =日志[(Ᾱ )/(Ᾱ0,W·33微克)。
  7. 执行一式三份整个实验和计算平均logD与标准偏差一起。

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Representative Results

该配体EOB-DTPA和非放射性镓(III)络合物通过 1 H和13 C {1 1 H} NMR谱,质谱和元素分析进行分析。 表1中列出并描绘在图1-6的结果证实了物质的纯度。

68锗/ 68镓发生器洗脱,得到400-600活度68嘎的解决方案。在所需的示踪剂68镓[EOB-DTPA]形成所述标记程序的结果,表示为无线电HPLC峰表现出2.8分钟( 图7)的保留时间。与在220纳米(2.7分钟, 图8)的UV-Vis检测镓[EOB-DTPA]标准的保留时间比较证实成功标记。不协调的68嘎在2.1分钟被检测为无线电峰( 7)。 EO-BDTPA的68 Ga的标记效率通过测定标记率作为 HPLC的配位体浓度的函数( 图9)的影响。产率以一式三份测定,并计算标准偏差。

根据pH和存在于溶液中,不协调或阴离子浓度非标记68镓可以以各种物种, 例如 ,没食子酸酯或不溶性氢氧化物存在。31广义术语“游离68”32被用于所有未标记物种中,除了氢氧化,这是通常称为“胶体68嘎”的解决方案。根据所描述的分析条件下,游离68嘎移动与溶剂前沿(R F = 1.0)上的TLC板上。胶体68嘎不能 HPLC进行检测,而在TLC板上显示为活动在原点(R F = 0)。 TLC板用TLC放射性扫描器分析的代表性色谱图示于图10中 。该示踪物表现出不同的保留的行为,这取决于是否贴标签溶液的样品(pH为3.8-4.0,R F = 0.3)或生理样品pH值(R F = 0.5)进行了分析。

调查示踪剂在稀释的PBS的稳定性,新鲜标记68镓[EOB-DTPA]加入到生理pH的样品,含有稀释的PBS(磷酸盐浓度5.5毫,A)中 ,过量的载脂蛋白转铁(1.6毫克/毫升分别为0.8的磷酸盐浓度毫,B)和人血清(C)。随着时间的推移,示踪剂的样品中的放射化学纯度(RCP t)的 TLC测定。完好示踪剂的百分比计算为的RCP 的比例各个时间点和RCP 0在起点( 见表2)。这是必要的,因为含不同RCP 0(93-96%)的示踪剂的标签解决方案。完好示踪剂的这样的标准化百分比表示为时间在图11中的功能。

一种用于在稀释PBS溶液示踪剂logD含水样品的测定分别准备。样品用辛醇混合,离心并除去随后等分试样,以确定在这两个阶段的活性浓度。活性值和logD随后计算列于表3中描述,平均logD值是3.54±0.08。

图1
图1 1 EOB-DTPA的H-NMR谱。 < / STRONG>光谱在400.1兆赫记录在D 2 O操作。 请点击此处查看该图的放大版本。

图2
图2. 13 C {1 小时} EOB-DTPA的-NMR谱谱在100.6兆赫记录在D 2 O操作。 请点击此处查看该图的放大版本。

图3
图3. EOB-DTPA的MS(电喷雾电离(ESI),甲醇,负模式)。54334fig3large.jpg“目标=”_空白“>点击此处查看该图的放大版本。

图4
嘎[EOB-DTPA] 4. 1 H-NMR谱。谱在400.1兆赫记录在D 2 O操作。 请点击此处查看该图的放大版本。

图5
图5. 13 C {1 小时}嘎[EOB-DTPA]的-NMR谱谱在100.6兆赫被记录了D 2 O操作。 请点击她的 E要查看此图的放大版本。

图6
图6. MS嘎[EOB-DTPA(ESI,甲醇,负模式),随着分子峰的同位素模式的详细描述一起请点击此处查看该图的放大版本。

图7
68嘎[EOB-DTPA]含有份不协调68镓,所记录的放射性检测器。不协调68镓显示出2.1分钟的保留时间的样品的图7.代表性HPLC色谱图 ,而示踪剂在2.8分钟检测。目标=“_空白”>点击此处查看该图的放大版本。

图8
标准物质嘎[EOB-DTPA] 8. 代表性HPLC色谱,如在220nm紫外可见通道上检测。冷标准的保留时间是2.7分钟。 请点击此处查看这个大版本数字。

图9
图9. 描写的 EOB-DTPA的 68 Ga的标记效率。的标记率, 经由 HPLC测定被绘制为EOB-DTPA的浓度的函数(22-29活度起始活性,pH值3.8-42.0,5分钟,室温)。标准偏差由误差条表示。 请点击此处查看该图的放大版本。

图10
图10.代表性薄层色谱揭示不同68镓物种。68镓[EOB-DTPA]在稀释PBS(磷酸浓度5.5毫米,pH值= 7.4)的样品110分钟孵育后进行分析。胶体68的Ga示例性分布(R F = 0),68镓[EOB-DTPA(R F = 0.5)和自由68镓用TLC放射性扫描仪作为检测(R F = 1.0)上70mm的TLC板是呈现。计数衰变校正。 请点击此处查看大图版本这个数字。

图11
在不同介质 68 嘎[EOB-DTPA] 图11。稳定性测定 衰变纠正,如通过 TLC确定完整示踪剂的标准化率,被描述为时间的函数。 请点击此处查看该图的放大版本。

表格1
NMR光谱,质谱和EOB-DTPA和Ga [EOB-DTPA]进行元素分析,相对MS峰强度在给出%,分配表1的结果在方括号中给出。元素CHN值分别为calcu迟来的C 23 H 33 N 3 O 11·H 2 O(EOB-DTPA)和(NH 4),0.75H 1.25 [C 23 H 28的GaN 3 O 11·2H 2 O(GA [EOB-DTPA])。

表2
表2. 在不同介质中 稳定性的测定 68 嘎[EOB-DTPA] 68嘎[EOB-DTPA]媒体A,BC的RCP在给定的时间点, 通过薄层色谱法测定。样品的组合物被给定为在示踪剂/免费68镓/%的百分比的胶体68镓。完好示踪剂的百分比被标准化为的RCP / RCP 0比。 RCP 0是在t = 0分钟时的示踪剂的各自的RCP。


3. logD衰减的测定校正值α0,三等分(X = 1,2,3)从各相中除去(W N辛醇:水,O)X的样品。所有活动都在CPM给出。 LogD是在协议的第5节计算。实验重复两次。

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Discussion

EOB-DTPA是通过多步骤合成33访问,但可能只是以及由含有gadoxetic酸可用的造影剂中分离。为了这个目的,中央的Gd(III)离子可以与过量草酸的沉淀。除去钆(Ⅲ)草酸盐和草酸后的配位体可以通过沉淀在冷水中,在pH 1.5分离。然而,为了增强滤液产量柱色谱可以代替或作为后续程序执行的。任一方法产生的70%的总产率的分析纯的配体( 图1-3, 表1)。

我们发现,为了分离镓[EOB-DTPA]调节pH用氨溶液有利相比,使用氢氧化钠,由于副产物氯化铵可以从经由升华的非常亲水的残基被除去。在上述条件下这一过程发生慢LY。自氯化物的不可忽略的量仍然可检测的五天后,剩下的盐,用甲醇洗出。虽然在嘎[EOB-DTPA]的部分损失这个后处理过程的结果,在分析纯度得到具有46%的总产率得到产物( 图4-6, 表1)。对于这两种EOB-DTPA和其嘎的隔离(Ⅲ)配合物,使用反相色谱法的应被视为纯化的替代方法,尤其是因为硅胶分解使用高极性溶剂时是可能的。

EOB-DTPA的标记过程需要使用高纯度的溶剂,化学品和无金属的设备,以避免竞争金属离子的存在下,由于68嘎在纳摩尔量在场(1.75 ml样品在2活度68的Ga等于0.14纳米的核素浓度)。 EOB-DTPA的标签,以68嘎发生在pH值3.8-4.0培养5 min之内茨在室温。对68 Ga的标记效率调查所需要的标记率的测定,同时保持反应条件的pH值,温度和反应时间以及开始的68镓恒定或在一个合理的范围内的活性。对于每一个数据配体浓度)的试验应进行至少三次,以提供合理的置信度,因为这两个配位体和68的Ga的浓度非常低,因此,标记率敏感的甚至轻微的偏差反应条件。例如,作为68镓洗脱液年龄,增大体积的等分试样需要被抽出,以提供一个恒定的起始活性,从 ​​而需要缓冲的增加量。另外,在增加了衰变产物68的Zn,这本身可能作为竞争者为68的Ga浓度,从而产生不利影响labelin洗脱液结果的老化克效率。13,34,35 22-29活度68的Ga几乎定量标记是在上述条件下用EOB-DTPA的量≥0.7微克( 图9)来实现,以镓的免费68含量≤2%至约5 %胶体68嘎目前在样品。

尽管HPLC提供的免费68 Ga和68嘎[EOB-DTPA]卓越的基线分离,它不适合探测胶体68嘎。因此,我们选择了TLC确定过程中的稳定性测量RCP,其中被要求转或蛋白结合的定量68嘎。我们发现基线分离用于此目的( 图10)可以接受的;然而,使用尺寸排阻色谱法或过滤方法15,36以除去胶体组分,然后通过HPLC分析,可能会被认为是替代方案。 68嘎复杂表现出更强的RETention在TLC板(RF = 0.3),如果样本是从标记溶液直接排出,而不是在生理pH(R F = 0.5)样品。我们建议此观察可能是由复杂的不同的质子化状态进行说明。

68镓示踪剂体外稳定性测定在PBS 15,17或替代缓冲系统模仿生理pH 37,以及在含有载脂蛋白37,它是在血液68镓主要竞争者,或在溶液中通常进行的人血清15,17。在我们的实验中,加入0.1M氢氧化钠溶液来PBS中需要对样品的pH调节至7.4。我们不能断言磷酸盐浓度影响降解速率,由于稳定性实验在不同的磷酸盐浓度(0.8毫和5.5毫米(A)中 ),得到非reprodu解埚结果。然而,我们发现,一个B溶液,含有载脂蛋白 -transferrin(1.6毫克/毫升,这是内正常血浆含量38的范围),0.8 mM磷酸盐(人血液通常表现出0.8-1.5的磷酸盐水平毫39,40 ),会导致分解在相当于人血清(℃)在该可观察到的速率。在解决方案交流 ,经过185分钟的胶体68的含量尕却增加了约24%,而免费68嘎内容已在溶液中的增加了11%,在溶液B(17%和27%溶液C 表2 )。该68镓由示踪剂分解而形成的事实是主要存在自由68镓,而不是胶体或蛋白结合的68镓在BC可能是由于转饱和或同等慢转结合率。 68嘎[EOB-DTPA]的( 图11)相当于示踪剂具有相似的DTPA衍生的螯合剂。15,16,18一般,对肝脏的早期动脉和静脉灌注相位信息是通过施用后前3分钟4,21内执行磁共振成像扫描得到的Gd [EOB-DTPA],而在经延迟的相位检测20分钟3,4,23长达几个小时21,22注射后肝细胞的存在。人血清中20分钟后,68嘎[EOB-DTPA]的93%保持不变。预期地,所述信噪比由时间会变坏,由于量68 Ga的运铁蛋白,它存在于血浆和组织表达转受体,以及免费68镓没食子酸酯的增加。41,42

对于预测示踪剂的组织分布辛醇/水分配系数登录P或分配系数logD可以被确定为在两相的活性浓度的比率。根据定义,logD参数不存在于介质中,这使得它适合于我们的实验中,由于所述示踪剂的不同的质子化状态以及其在水相中分解的可能性的多个物种之间区分。以确定logD通过萃取含水介质通常是用PBS缓冲模仿血的条件。17,43-45对于我们使用稀释的PBS上述原因,显示出0.8毫和生理pH的磷酸盐浓度。以下用辛醇和离心提取,从同相除去几等份的允许造成通过移液误差减小。由于在n-辛醇的活性非常低浓度的一种应该小心,以避免与水相的交叉污染,并确保定量转移到一个独立的小瓶中。 DISTRIB通过此方法测定ution系数分别为重现性好,同时,它们允许亲脂性的粗略估计,一个直接比较钆的logP [EOB-DTPA]是不可能的。由于钆[EOB-DTPA]所得主要不是从亲脂性,而是其在活体或细胞肝胆摄取更多的试验,有必要提供 68嘎[EOB 体内的生物分布更广泛的信息,以及稳定性的特异性-DTPA。总之,应用程序作为显像剂的灌注和早期肝胆阶段是可以想象的。

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
primovist Bayer - 0.25 M
gallium(III) chloride Sigma-Aldrich Co. 450898
water (deionized) - - tap water deionizing equipment by Auma-Tec GmbH
hydrochloric acid 12 M VWR 20252.29
sodium hydroxide Polskie Odczynniki Chemiczne S.A. 810925429
oxalic acid Sigma-Aldrich Co. 75688
ethyl acetate Brenntag GmbH 10010447
silica gel Merck KGaA 1.10832.9025 Geduran Si 60 0.063-0.2 mm
TLC silica gel 60 F254 Merck KGaA 1.16834.0001
methanol VWR 20903.55
ethanol Brenntag GmbH 10018366
eiethylether VWR 23807.468 stored over KOH plates
ammonia solution (25%) VWR 1133.1
pH electrode VWR 662-1657
stirring and heating unit Heidolph 505-20000-00
pump Ilmvac GmbH 322002
frit - custom design
NMR spectrometer Bruker Coorporation - Ultra Shield 400
mass spectrometer Thermo Fisher Scientific Inc. -
elemental analyser Hekatech GmbH Analysentechnik - EuroVector EA 3000 CHNS
deuterated water D2O euriso-top D214 99.90% D
Material/Equipment required for labeling procedures
68Ge/68Ga generator ITG Isotope Technologies Garching GmbH A150
pump and dispenser system Scintomics GmbH - Variosystem
hydrochloric acid 30% (suprapur) Merck KGaA 1.00318.1000
water (ultrapur) Merck KGaA 1.01262.1000
sodium chloride (suprapur) Merck KGaA 1.06406.0500
sodium acetate (suprapur) Merck KGaA 1.06264.0050
glacial acetic acid (suprapur) Merck KGaA 1.00066.0250
sodium citrate dihydrate VEB Laborchemie Apolda 10782 >98.5%
PS-H+ Cartridge (S) Macherey-Nagel 731867 Chromafix
apo-Transferrin Sigma-Aldrich Co. T2036
PBS buffer (tablets) Sigma-Aldrich Co. 79382
human serum Sigma-Aldrich Co. H4522 from human male AB plasma
flasks, columns, etc. custom design
pH electrode Knick Elektronische Messgeräte GmbH & Co. KG 765-Set
binary pump (HPLC) Hewlett-Packard G1312A (HP 1100)
UV Vis detector (HPLC) Hewlett-Packard G1315A (HP 1100)
radioactive detector (HPLC) EGRC Berthold
HPLC C-18-PFP column Advanced Chromatography Technologies Ltd. ACE-1110-1503/A100528
HPLC glass vials GTG Glastechnik Graefenroda GmbH 8004-HP-H/i3µ
pipette Eppendorf -
plastic vials Sarstedt AG & Co. 6542.007
plastic vials Greiner Bio-One International GmbH 717201
activimeter MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH - Isomed 2010
tweezers custom design
incubator Heraeus Instruments GmbH 51008815
vortex mixer Fisons - Whirlimixer
centrifuge Heraeus Instruments GmbH 75003360
gamma well counter MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH - Isomed 2100
water for chromatography Merck KGaA 1.15333.2500
acetonitrile for chromatography Merck KGaA 1.00030.2500
trifluoroacetic acid Sigma-Aldrich 91707
TLC radioactivity scanner raytest Isotopenmessgeräte GmbH B00003875 equipped with beta plastic detector

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