Of Bilgisayar İzleme tarafından Analiz Edilmiş Olfaktor Davranışlar
1The Solomon H. Snyder Department of Neuroscience, Center for Sensory Biology, Johns Hopkins University School of Medicine, 2MRC Clinical Sciences Center, Imperial College London

Published 8/20/2016
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Neuroscience

You must be subscribed to JoVE to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit," you agree to our policies.

 

Summary

Cite this Article

Copy Citation

Lin, C. C., Riabinina, O., Potter, C. J. Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer. J. Vis. Exp. (114), e54346, doi:10.3791/54346 (2016).

Please note that all translations are automatically generated through Google Translate.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Nörobiyoloji önemli bir zorluk nedeniyle karmaşık davranışları, güçlü genetik teknikler ve kompakt sinir sisteminde uygun hayvan davranışları yönlendirecek. Drosophila melanogaster tür soruşturmaların için mükemmel bir model sistem işlev nasıl sinir devreleri anlamaktır. Laboratuvar davranış testleri uzun (örneğin Phototaxis, kemotaksis, duyusal öğrenme ve bellek) 1-3 karşılık gelen davranışları altında yatan nöral mekanizmalar doğal çevrenin özelliklerini taklit ve incelemek için Drosophila ile kullanılmıştır. Belirli sinir alt kümelerini etiket transgenik Drosophila hatları büyük koleksiyonları son durumu ile, davranış testleri davranışları 4-11 ile nöronların bağlamak için önemli bir rol almış. Birlikte veri analizi için altta yatan hesaplama rutinleri ile çok yönlü ve tekrarlanabilir paradigmalar, çeşitli genotyp ile aday sinek hatları hızlı testler için vazgeçilmezdires. Özellikle yararlı test edilen hayvanların, deney süresi ve sunulan uyarıcı niteliği sayısında esnek kurulumları vardır. seçim tahlil de kazanmak ve analiz etmek kolay tekrarlanabilir veri oluşturmak gerekir. Burada, Drosophila davranışsal tepkileri tahlil edilmesi için bir sistem ve bir protokol ayrıntılı bir tarifi büyük dört alan alanda uçan sunulmuştur. Kur, tek bir koku uyarana sinek tepkilerini tahlil için kullanılmaktadır; Bununla birlikte, aynı kurulum çok koku, görsel veya Optogenetic uyaranlara, ya da bunların bir kombinasyonu test etmek için modifiye edilebilir. olfactometer kurulum kokuları yanıt sinek popülasyonlarının faaliyet kayıtları ve hesaplamalı analitik yöntemler sinek davranışlarını ölçmek için uygulanır. Toplanan veriler verimli veri toplama ve deneysel koşullar optimizasyonu için gereklidir deneysel çalışma, hızlı okuma-out almak için analiz edilir.

Introduction

Dış ortama uyum ve cevap verme yeteneği bütün hayvanların hayatta kalması için kritik öneme sahiptir. Bir hayvan, tehlikeleri önlemek yiyecek ararlar ve arkadaşları bulmak ve önceki deneyimlerinden öğrenmek gerekiyor. Duyu sistemleri, görsel, kimyasal ve mechanosensory olarak uyaranlara, çeşitli almak ve yorumlanır ve çözülecek merkezi sinir sistemine bu sinyalleri göndermek için çalışır. Beyin daha sonra yemek için kazarak ya da yırtıcı kaçan olarak algılanan ortama göre uygun motor davranışları, yönlendirir. duyu sistemleri dış dünyayı algılar ve beyin çözer ve kararları yönlendirir nasıl nörobiyoloji önemli bir sorundur nasıl anlamak.

Drosophila melanogaster nasıl nöral devreleri kılavuz davranışları araştırmak için güçlü bir model sistem. Bakımı basit ve ucuz olmasının yanı sıra, Drosophila çok çeşitli ve karmaşık sisteme ait davranışları gösteren, henüz COMPAC ile bunuyaklaşık 100.000 nöron sinir sistemini t. Güçlü genetik teknikler Drosophila genomu işlenmesi için mevcuttur ve transjenik soylarda binlerce selektif ve tekrarlanabilir nöronların 10-13 aynı alt kümelerini etiket olduğu oluşturulmuştur. Bu transgenik çizgiler, seçici olarak etiketli nöronların (aktive veya inhibe) aktivitesini değiştirmek için kullanılabilir ve bu manipülasyonlar kadar sinir işlevleri kılavuz davranışları araştırmak için kullanılabilir.

Çoklu davranış testleri çeşitli Drosophila davranışlarını incelemek için geliştirilmiştir. Drosophila birçok hayvanlar gibi, böyle, yiyecek bulma arkadaşları bulma ve tehlikelerin önlenmesi gibi birçok davranış seçenek, rehberlik için koku alma duygusu kullanın. Koku alma, bu nedenle dış uyaranlara algılanır ve uygun seçimler rehberlik edecek bir hayvanın sinir sistemi tarafından nasıl yorumlandığı araştırmak için iyi bir duyu sistemidir. Bu nedenle, bir çok deney araştırılmak geliştirilmiştirting larva ve yetişkin koku davranışlar. Geleneksel, Drosophila koku davranışlar doğuştan tahlil için kullanılan ve koku davranışları 3 öğrenilebilir iki seçenek T-labirent paradigması ile analiz edilmiştir. Bu testte, yaklaşık 50 sinek iki boru arasında bir seçenek sunulur: bir boru, söz konusu koku içeren ve bir kontrol Deodorantını (genellikle koku çözücü) içerir. Sinekler bir seçim yapmak için zaman belirli bir süre verilir ve daha sonra farklı odacıklarda olan sineklerin sayısı sayılır. T-labirent sayıda deney için basit bir deney de, bazı sınırlamalar vardır. Örneğin, koku davranışlar yalnızca bir zaman noktasında ölçülür ve bu zaman noktasında önce yapılan farklı seçenek atılır. Benzer şekilde, nüfus içindeki sinekler bireysel davranışları ihmal edilmiştir. Buna ek olarak, T-labirent hataları tanıtmak olabilir sineklerin manuel sayım gerektirir. Son olarak, sadece iki ölçülen seçenek için, bugenellikle ince davranış değişiklikleri tespit etmek için gerekli istatistiki gücünü azaltır. İki seçenek T-labirent bir alternatif dört kadran (dört alanı) olfactometer 14-18 olduğunu. Bu deneyde, hayvanlara arena dört köşesinin her kokulandınlmış hava potansiyel kaynağı ile dolu olan bir ring araştırmak. arena dört deneysel olarak tanımlanmış koku kadranın oluşumunu maksimize etmek bir puckered yıldız şekli vardır. Koku sonra köşelerinden birinde verilirse yalnızca bu tek kadranda yer alıyor. Hayvanların davranışları üç kontrol kadranlarda davranışları karşılaştırıldığında kolaylıkla girdikleri ve koku kadranı terk izlenir ve edilebilir. Dört bölgeli olfactometer tahlil böylece kayıtları büyük bir deneysel arenada üzerinde koku uyaranlara zamansal ve mekansal davranış tepkisi.

Dört bölgeli olfactometer ilk Pettersson ve ark., 15 ve Vet ve arkadaşları tarafından geliştirilmiştir. 17 ol araştırmak içinBireysel parazitik Hymenoptera fabrika davranışsal tepkileri. Faucher ve ark., 18 ve Semmelhack ve Wang 16 bireysel Drosophila koku yanıtları izlemek için kurulum uyarladı. Dört bölgeli olfactometer testi koku ve koşulları geniş bir yelpazede için izin, çekici ve itici tepkiler aynı ölçüde hassastır. Özel olarak yazılmış sinek izleme yazılımı, Alex Katsov 19 tarafından geliştirilen ve şu anda (Malzeme ayrıntılı) Julian Brown tarafından yapılmaktadır, dört bölgeli olfactometer 14,20-23 daha yeni uygulamalarına ek avantajlar getirmiştir. Yüksek mekansal aynı anda 100 sinekler (27.5 piksel / cm) ve herhangi bir zaman noktasında pozisyon, hız ve sinekler ivme gibi çeşitli parametreler, ayıklanması sağlar çözünürlük, zamansal (sn 30 kare) kadar tahlil etmek artık mümkün. Bu kokuları 20 sineklerin davranışsal tepkilerin dinamikleri soruşturma sağlar (Malzeme Tablo ayrıntılı) diğer video yakalama yazılımı birleşmeyle, aynı yapılandırma esnek izleme sürelerini tanır ve daha düşük bir kare hızında görüntü alarak en fazla 24 saat boyunca sinekler izlemek için kullanılabilir. Bu seçenek, sineklerin yumurtlama davranışları incelemek ve ovipositional tercihleri ​​14 ile vücut pozisyonlarını karşılaştırmak için kullanıldı. Dört alan olfaktometrenin da çok modlu yanıtları çalışma (örneğin, koku ve görsel) uyaranlara kullanılabilir, ya da duyusal uyaranların sunum Optogenetic 9 veya thermogenetic 21 uyarımı birleştirmek. Ayrıca, yüksek zamansal çözünürlük yörüngeleri çıkarma fo izin verirtopluluk veri kümesinde r her sinek. Bu nedenle, yöntem koku güdümlü nüfus davranışları ve aynı zamanda bireysel sosyal etkileşimler hakkında soruşturma sağlar. Bu testte elde edilen veriler, davranışsal ekranlar için dört alan olfaktometrenin kullanılmasına imkan verir, sağlam ve yüksek oranda tekrarlanabilir.

Biz dört kadran olfactometer için buraya kurulum düzeneğini açıklar. Biz daha çok konsantre etil propiyonat cevaben elma sirkesi ve itme cevaben koku cazibe tahlil kullanımını göstermektedir. Son olarak, biz tarif ve kaydedilen sinek izleme verilerinin analizi için örnek kod sağlar.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Kurulum Montaj

  1. sağlanan çizim (Ek Malzemeler, SupplementalSketch_StarShapedArena.pdf) 'e göre politetrafloroetilen (PTFE) dışarı yıldız şekilli arena (0.7 cm 19.5 cm 19.5 cm) imalatı. Arena ticari ya da özel bir tesis ile imal edilebilir.
  2. İki cam plakalar (2 mm kalınlığında 20.25 cm 20.25 cm) Edinme ve hassas bir elmaslı matkap ucu kullanarak cam plakaların birinin merkezinde (~ çapı 0.7 cm) bir delik açın.
  3. davranışsal arena için bir ışık geçirmez davranış kutusunu imalatı. Ayrıca sağlanan çizimler (Yardımcı Malzeme, SupplementalSketch_LightTightBox.pdf) göre kızıl ötesi CCD video kamera için bir ışık geçirmez kamera kutusu imalatı. kutu ticari ya da özel bir tesis ile imal edilebilir.
  4. arka duvarı ve davranış kutunun yan duvarlarına LED diziler klima monte edin. sıcaklık probu yerleştirinGerçek zamanlı sıcaklık geri beslemesi ve ayarlanması için bir yan delikten davranış kutusunda (Şekil 1 ve ayrıntılar için 2 bakınız).
  5. Kameranın IR filtresi ve dairesel polarize takın ve kamera kutusu içine aksamını monte edin. Davranış kutusu ve kamera kutusu davranış kutusunun daha iyi sıcaklık kontrolü (detaylar için Şekil 1 ve 2'ye bakınız) için bir cam pencere ile ayrılır.
  6. Bir kamera adaptörü Kızılötesi CCD kamera bağlayın. USB dönüştürücü kamera adaptörünü bağlayın. veri toplama için bilgisayardaki USB bağlantı noktasına USB dönüştürücü bağlayın.
  7. üreticinin talimatlarına göre bilgisayardaki video dönüştürücü sürücüyü yükleyin. İsteğe bağlı olarak, kamera ayarları ve satın alma parametreleri geniş bir yelpazede erişmek için USB video dönüştürücü üreticisi tarafından sağlanan görüntü işleme yazılımı yükleyin.
  8. çıkışı "ile klima ünitesi (bağlayınsıcaklık kontrol sıcaklık kontrolörü arkasında) üzerine termokupl "" aracılığıyla sıcaklık kontrol arkasında) ve sıcaklık probu (üzerinde ". davranış kutusu içine probu yerleştirin.
    Not: Yerleşimimizin sıcaklık kontrol sistemi 18 ° C ve 30 ° C arasında kutu sıcaklık muhafaza edebilir. Daha yüksek ya da daha düşük ortam sıcaklıkları nöronal aktivitenin işlemek veya sinaptik iletim inhibe deneyler thermogenetic (dTrpA1, TrpM8 ya shibire ts) için yararlı olabilir. En deneyler için, sıcaklık 25 ° C'de muhafaza edilir.
  9. (Detaylı şemaları ve bağlantı parçaları için Şekil 1B bakınız) aşağıdaki adımlarda koku dağıtım sistemi monte:
    1. merkezi klima sistemi, hava girişini kontrol etmek için hava basıncı regülatörü kullanın. Merkezi A havanın temizlenmesi için basınç regülatörü (odun kömürü ile dolu) karbon hava filtresi iletişimeir sistemi.
    2. yüksek çözünürlüklü debimetre tüpler tarafından düzenlenen çoklu kanallardan oluşan akış kontrol sistemi monte edin.
    3. Şekil 1B ve 2F gösterildiği gibi bir manifoldu yoluyla debimetre tüpleri karbon hava filtresinden çıkışını bağlayın. Debimetreler bırakarak temiz hava odasına ihraç veya ısmarlama koku odalarına 24 içine girilirse düzenleyen elektronik kontrollü 3-yollu selenoid valfler aracılığıyla debimetre tüplerin çıkışını yönlendirin.
    4. üreticinin kılavuzuna göre selenoid vana denetleyicisi takın.
  10. bir veri toplama cihazı (DAQ) ve üreticinin kılavuzuna göre bir güç kaynağına bağlayarak elektronik hava debimetre monte edin. Her deneyden önce arenada her kadranda eşit debileri doğrulamak için DAQ arayüzü yazılımı yükleyin.

2. Olfaktor Uyaranlar Hazırlık

  1. 5 koku hazırlayınbir plastik dış kap meydana karınca odalar 24, orta kısmında cam iç kap, ısmarlama bir PTFE kapak parçası, orijinal saklama kabı kapağı çıkarıldı ve iki tek-yönlü vana.
    Not: PTFE kapağın çevresinde bir O-halka koku perfüzyon sırasında koku haznesinden hava kaçağı önlemek için kullanılabilir. Şematik ve odaların fotoğraflar için Şekil 2 Şekil 1'e bakınız.
  2. Solvent kontroller için dört Odorant odaları ve bir test odorant için bir bölmeyi kullanın. (Iyice deneyler önce karıştırın test Koku moleküllerini + uygun çözücüler) solvent veya odorant seyreltme 1000 ul cam kapları doldurun ilgili plastik hazne içerisindeki cam kap yerleştirin (plastik odasına sıvı dışarı dökmek değil) ve kapağı sıkın . her zaman test odorant ve solvent kontrolleri için temiz odasını kullandığınızdan emin olun.
    Not: Koku cazibe w elma sirkesi (% 5 asitlik) ve 1/16 seyreltme ile tetiklenebilirater. Bunun aksine, koku itme davranışı mineral yağ içinde, etil propionat% 10 seyreltme kullanılarak incelenebilir. Bu durumlarda, kontrol uyaranlar saf mineral yağ ile koku odaları bulunmaktadır.

3. Fly Hazırlık

  1. Arka standart mısır unu ortamında uçar. 30 erkek ve bir standart şişede 30 kadın ebeveyn sineklerin yerleştirin ve onları 25 ° C veya oda sıcaklığında 5 gün boyunca yumurtalarını edelim.
  2. Her deney için, yeni eclosed toplamak (<1 gün eski) 25 erkek ve 25 kadın kısa CO 2 anestezi altında uçuyor.
  3. 2-4 gün standart bir uçucu madde ile bir şişe içinde sinekler tutun.
  4. 40-42 saat deneyden önce, CO olmadan 2 anestezi sinekler transferi   ~ 10 mi,% 1 agaroz jeli ile flakon. Bu onların lokomotor aktiviteyi artırmak için yardımcı olur gıda olmadan nemlendirilmelidir sinekler devam edecektir.
    Not: Sinekler% 90'ından fazlası açlık hayatta gerekir. Bazı genotipleri iyileşmek azsenin ve 40 saat açlık boyunca bunu yapmak olmayabilir. Bu gibi durumlarda, örneğin 24-28 saat gibi daha kısa süreler kabul edilebilir ama hepsi deneysel koşullar ve tekrarlar için aynı tutulmalıdır.

Çekici ve Kovucu Parfüm katkılar 4. Davranışsal Tepkiler

  1. Sıcaklık kontrolörü açın ve 25 ° C olarak ayarlayın.
  2. Odorant odasının çıkışına hortumu takarak ve odorant odaları (kontrol ve test koku) bağlayın push-to-connect davranış kutusunda uydurma.
  3. kontrolü ve Odorant Airstreams / dk 100 ml eşit olduğundan emin olmak için hava akımı ölçer kullanılarak her kadranda akış hızını kontrol edin.
  4. Tamamen kuru hava (~ 3-4 dk) PTFE sinek arena ve% 70 etanol 2-3 kez ile cam plakalar temizleyin ve onlara izin verir.
  5. kelepçeler ile arenaya cam plakalar yapıştırın.
  6. Transferi 2 anestezi cam plakalar birinde delikten arenaya CO olmadan uçar. kıçtaer transferi, kaçmasını önlemek için sinek delik dairesel örgü yerleştirin.
    Not: CO2 anestezi Drosophila davranışı 25 etkilediği gösterilmiştir ve davranışsal deney, 24 saat içinde kullanılmamalıdır.
  7. ışık geçirmez odasına sinekler arena yerleştirin arena köşelerine davranış kutusuna montaj-connect push-to bağlı boru bağlayarak dört kontrol hava akımları bağlamak, odasının kapısını kapatın ve 10- bekleyin 15 dk sinekler yeni ortama alışmak izin vermek. Mümkünse, önyargı deneysel sonucu olabilir olası minimum ışık sızıntısını önlemek için, deneyler yapılmaktadır odasında ışıkları kapatın.
  8. sinekler 4 kontrol hava akımlarına maruz edildiği bir 5-10 dk kontrol deneyini, çalıştırın.
  9. , Sinekler arenada düzgün yayılı emin olmak için (aşağıda Veri analizi bölümüne bakınız) hemen verileri analiz ve Gözde mekan Endeksi yakıno arena içinde tercih ya da kaçınma hiçbir kontrolsüz kaynakları (örn dışarıdan, düzensiz ısı dağılımı, düzensiz arena, koku kirliliği, vb sızan ışık) olduğunu doğrular olarak 0'a Bu adım, esastır. Sinekler eşitsiz dağıtıldığı ya da lokomotor aktivite düşükse, sinekler atmak tekrar arena temizleyin (4.4 Adım) ve deney tekrar sineklerin yeni bir toplu kullanın.
  10. 3-yollu vana veya konnektör tüpleri yeniden takarak açarak kurulum, test odorant odasına bağlayın.
  11. 5-10 dakika test deneme çalıştırın ve aşağıdaki 5. bölümde tartışıldığı gibi verileri analiz (ayrıca Referans 14 ve Şekil 3). 20 dakika daha uzun Kayıtlar hesaplama işlemi zor olabilir veri dosyaları neden olabilir. artık deneysel kayıtlar istenirse, hızla durdurmak ve izleme programı yeniden başlatın. Bu deneysel kayıtlar arasında bir ~ 10 sn boşluğu sonuçlanır.
  12. Discard sinekler.
  13. Temiz arena ve cam% 70 etanol ile plakaları (4.4 Adım) ve ışık geçirmez muhafaza içinde bağlayıcı tüpleri değiştirin. deneyler hızlandırmak için yeni bir temiz arenada kullanılabilir ve deneysel çalışır yaparken kirli arena temizlenmelidir.
  14. Gerekirse, sineklerin yeni bir parti ile başka bir deneme çalıştırın. Birkaç deneyler aynı gün çalıştırmak ise, hiçbir odorant bir önceki test vadede sistemin bırakılır sağlamak için aşırı özen gösterin. Bu normalde CO 2 koku maddesi veya düşük konsantrasyonlarda ile ilgili bir sorun değil, deneysel çalışmalar arasında 24 saat boşluğu kadar için son derece konsantre uyaranlara ihtiyaç duyulabilir. Odorant kirlenme kontrol deneyleri sırasında şüphesi varsa ek olarak, akış boruları sonra tüm boru değiştirilebilir. Her zaman sürekli sistemi temizlemek için deneyler arasında kuru havayı bırakın

5. Veri Analizi

Not: Önerilen sinek izleme edinme Softwar(Malzeme ayrıntılı, e) satın alma sırasında gerçek zamanlı olarak sinekleri izler ve zaman damgası ve * dat formatında algılanan tüm sinekler koordinatlarını kaydeder. Biz ısmarlama bir Matlab rutin Matlab biçime verileri dönüştürmek için ve verileri analiz etmek için geliştirdik. Kod örnekleri Yardımcı Malzeme verilmiştir, ancak uygulama ayrıntıları veri toplama için kullanılan yazılıma bağlı olacaktır.

  1. ham verileri yükleyin. Arena hatlarını takip mekansal maske oluşturun ve gürültü (Şekil 4A, Ek Kod MaskSpatialFiltering.m, Score.m, DrawCircularMask temsil olarak arena dışında kalan tüm veri noktalarını kaldırmak için ham verilere maske uygulayın. m).
  2. Bu veriler, ses veya hareketsiz sinekler (Şekil 4B, Ek kod TemporalFiltering.m) tarafından üretilen olması muhtemeldir olarak 3 saniye daha uzun süre için 0.163 cm / s altında bir hızda hareket tüm veri noktaları çıkarın.
  3. Kalan verileri görselleştirmekTek yörüngeleri tek seferde onları çizerek ya da noktalar (Şekil 3, Ek Kod SingleTrajectoryViewer.m).
    Not: dört alan koku sınırlarının yeri muhtemelen kullanılan gibi herbir koku verici madenin özellikleri ve hava akımı oranları gibi faktörlere bağlıdır. Örneğin, çok uçucu koku muhtemelen daha az uçucu koku daha tam olarak koku kadranı dolduracaktır. Bu nedenle, her bir odorant biraz farklı bir koku sınırları sergileyebilir olasıdır. Bu, belirli bir noktadan hava örnek için bir vakum kullanılır, ve böylece bu noktada odorant konsantrasyonu bozan olarak koku sınırları ölçmek için bir fotoiyonizasyon detektörün kullanımı sorunlu olabilir. Bununla birlikte, koku sınırları hızla sinek davranışsal verilere dayanarak tahmin edilebilir. Örneğin, farklı koku yanıt olarak biriken uçucu parçalar göre bir koku sınır açık Şekil 3C ve 3D gözlemlenebilir.
  4. CalKontrol deneyleri hiçbir tercih yanıtı oluşturmak olmadığını belirlemek için, ve aynı zamanda bir odorant (veya optogenetic 9) uyarana tepki erişmek için bir cazibe endeksi hesaplanmalıdır. Bir Yere İndeksi (AI) hesaplamak için, bir kontrol veya test kayıt son 5 dakika kullanın. +1 (Mutlak cazibe) ve -1 (mutlak itme) arasında kalan cazibe bir ölçü elde etmek için, aşağıdaki formül AI hesaplamak için kullanılır:
    denklem 1
    N test test kadranda veri noktalarının sayısı olduğu, N kontrol üç kontrol kadranda veri noktalarının ortalama sayısıdır. Hiçbir tercih sıfıra yakın değerlere belirtilir gibi Bu tedbir sezgisel. Bununla birlikte, doğru odorant kadranında yer almaktadır sinek sayısına oranını göstermez. Bu ölçü elde etmek için, yüzde indeksi (PI) kullanılabilir:
    denklem 2 N test test kadranda veri noktalarının sayısı ve N toplam dört kadranda veri noktalarının toplam sayısıdır. Bu formül 0.25 davranışsal tercihi (Şekil 3E ve 4C, Yardımcı Kod AttractionIndex.m) karşılık gelen, 0 ve 1 arasında düşen bir ölçü sağlar.
  5. Her tekrarı için sineklerin yeni bir grup kullanarak, her deneysel koşul 5-10 tekrarlar çalıştırın. Kolmogorov-Smirnov parametrik olmayan bir test (Şekil 3F, Matlab kstest2 fonksiyonu) kullanarak denetimleri koşulları arasında ya da karşı çekim dizinleri karşılaştırın.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Dört bölgeli olfactometer tahlil kayıtları ve büyük bir davranış alan üzerinde birçok sinekler yürüme faaliyetlerini analiz eder. Parfüm bir, iki, üç ya da dört kadran butonu hava akışları içine sokulabilir. kokuların yokluğunda, sinekler serbestçe tüm dört çeyrek arasında hareket edecektir. un-kasıtlı önyargıları tahlil girmiş değil olduğunu gösterir gibi bu davranış gözlemlemek için çok önemlidir. Bu önyargıları ışık, sıcaklık dalgalanmaları, hava akımı farklılıkları, ya da koku kirleticileri içerebilir. Şekil 3B 25 erkek dört kadran olfactometer davranışsal tepkilerini gösterir ve 25 kadın havayı kurutmak için uçar. Toplanan verilerden bir tek sinek parça da Şekil 3B vurgulanır ve bu sinek tüm davranışsal arena keşfetmek olduğunu göstermektedir edilir. 5 dakikalık test süresi boyunca tüm analiz parçalar için cazibe indeks skoru (AI) indicati, 0'a yakınkoku kadranda cazibe eksikliği ng. Benzer şekilde, deney yüzde indeksi (PI), gerçekleştirilen 5 dakikalık bir test süresi boyunca dört çeyrek oldukça daha dağıtıldı belirten 0.24.

Çekici bir odorant dört alan davranışsal tepki Şekil 3C gösterilmiştir. Elma sirkesi hava akımına sokulur   Test koku odasına elma sirkesi bir% 6.25 seyreltme koyarak koku kadranda hava akımı üst bıraktı. gri renkte gösterilir toplanan sinek parçaları çoğu sinekler bu koku kadranda toplamak olduğunu göstermek ve artık dört kadran keşfetmek. Tek renkli sinek parça bir sinek elma sirkesi koku kadranı girdikten sonra, o çekici koku kadranda kalma eğiliminde olduğunu göstermektedir. Deney için 0.94 AI bu odorant güçlü cazibe belirten 1'e yakındır. 0.92 PI sinekler% 92 r olduğunu gösteriranaliz dönemi boyunca koku kadranda emained.

Bir itici odorant dört alan davranışsal tepki Şekil 3D'de gösterilmektedir. bir koku odasına yerleştirilir odorant etil propionat% 10 sulandırılmış sol üst hava akışı için koku kaynağı olarak kullanıldı. analiz deney için kümelendiği sinek parçaları koku kadran kaçınılmasını, koku güdümlü itme düşündüren göstermektedir. Tek renkli sinek parça çabuk, koku kadranı girilen bir sinek, koku kadranda önlemek için arkasını döndü göstermektedir. -0.68 AI itme işaret eden, 0'dan ve güçlü bir itici odorant yanıt -1 yakın göstergesidir. Deney için 0.06 PI paletli uçucu veri noktalarının (nötr koku deneylerde ~% 25 ile karşılaştırıldığında) sadece% 6 deney boyunca koku kadranda bulunduğunu göstermektedir.

Şekil 3E AI ve PI puanları arasındaki ilişkiyi diyagramları. Daha bilgilendirici olabilir ve nasıl bu numaralar çekici veya itici davranışları ile ilgilidir.

Dört alan deneyi sağlam ve tekrarlanabilir koku davranışlar sonuçlanır. Bu durum, Şekil 3F'de gösterildiği gibi kontrol ve deney koşulları arasındaki niceliksel karşılaştırmalar için izin verir ve aynı zamanda ince olfaktör tanımlanmasını sağlartarafsızlık sapan y yanıtları.

Veriler, yüksek uzaysal ve zamansal çözünürlüğe elde edilir Dahası, sinekler farklı faaliyet dinamiklerini (Şekil 3'te gösterildiği gibi) bu tip bir tekli sinekler yörüngeleri olarak davranışsal tepkileri, birçok faktöre, çalışma, hem de karakterize etmek mümkündür bir koku alan (örneğin, yön ve hız 19,20 değişiklikler).

Genellikle arena sıkça temizlenmeleri gerekmektedir, özellikle de her bir deney için tam olarak aynı konumda dört alan arena konumlandırmak için zor olabilir. Resim komut, Şekil 4A'da gösterildiği gibi, ilk veriyi oturtulması ile, bu küçük farklılıklar telafi analiz eder. Bu durumda, dört alan arena şekli hesaplanır ve bu alanı dışında yalan veri noktaları kaldırılır. Bu izlenen nesneler genellikle deb temsilris ya da yanlış izlenir yansımaları. onlar arena içinde yalan ve dolayısıyla gürültüyü temsil etmemektedir gibi, bu veri noktaları hatalı veri analizleri önlemek için kaldırılır önemlidir. Benzer şekilde, gürültü ya da arena içinde sinekler olmayan hareketli temsil edebilir paletli veri noktalarını kaldırmak için de önemlidir. Bunu başarmak için, bir analiz komut dosyası (Şekil 4B'de gösterildiği gibi) temel olarak hareket etme veri noktaları kaldırır kullanılan (ve burada verilen gibi). Bu veri noktası azınlıkta genellikle, henüz tutma analizlerde hatalara yol açacaktır.

Görülecek göstergesi ve tercih göstergesi skorları, belirli bir süre sonra hesaplanabilir (örneğin, 5 dakika, deneyin sonunda Şekil 3'te gösterildiği gibi). Sinekler yüksek uzaysal ve zamansal çözünürlüğe sahip izlenir beri, benzer analizler deney boyunca yapılabilecek Ancak, unutulmamalıdır. BuŞekil 4C'de gösterilen bu Attractionda Endeksi ve yüzde indeksi skorları bir süre boyunca sürekli olarak 10 dak kutularına hesaplanır. Böyle bir analiz, böyle bir etkene alışkanlık olarak deney boyunca oluşabilecek koku değişiklikleri, daha iyi takdir sağlar.

Şekil 1
Şekil 1:. Dört bölgeli olfactometer şematik (A) davranış kurulumu bir koku verme sisteminin oluşur, sıcaklık kontrol sistemi (diagrammed değil), görüntü alma sistemi, (IR bir bilgisayara bağlı ışıkları ve IR CCD kamera LED) dört kadran arena ve ışık geçirmez davranış ve arena kutuları. Kırmızı daireler Şekil 2. (B) 'de gösterildiği karşılık gelen bileşenleri koku verme sisteminin detaylı tasarımı belirler. Yeşil karakterler f bağlantı / dönüşüm boyutları temsilittings. 1/16 kimliği ve 1/8 OD borular 1/8 kimliği ve 1/4 OD bu pembe etiketli ise sarı etiketli. Kısaltmalar: IR kızılötesi; CF, Sıkıştırma Montaj; BF, Dikenli Dizaynı, MNPT, Erkek Milli Boru Konu. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

şekil 2
Şekil 2:. Koku Testi Kur Fotoğraflar (A) kamera kutusu ve davranış kutusunun Geniş alan görünümü. Davranış kutusunun içinde (B) Görünüm. sıcaklık probu, bağlayıcı tüpleri ve IR LED dizileri etiketlenir. (C) Dört kadranda arena. (D) davranış kutusuna bağlı koku dağıtım sistemi Geniş alan görünümü. Kamera kutusu CCD kamera ortaya çıkarmak için kaldırılmıştır. (E (F) örneği. (G) Yüksek çözünürlüklü akım tüpler hava akışını düzenler. (H) flowtube düzenleyiciler aşağı koku teslim tüp ve konnektörleri. Temiz hava, bir koku haznesi geçirilir veya odaya atılır eğer (I) selenoid vana düzenler. (J) koku odaları tek yönlü valf bağlanır ve koku verici için bir iç cam kap içerirler. (K) davranış kutu koku teslim boru bağlamak dışında bas-bağlantı parçaları içeriyor. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 3,
Örnek Veriler dört alan Koku Testi kullanarak Oluşturulan dört alan arena (A) şematik.. Dört kadran sadece kuru hava perfüzyon içerdiğinde (B) Nötr tepkiler gözlenir. Sol üst kadranda gelen perfüze elma sirkesi bir% 6.25 seyreltme (C) Gözde yanıtları. (D) Repulsion davranışları% 10 etil propiyonat tarafından tetiklenen. Şekil 2B-2B, elde edilen verilerin tek bir yörünge çizilmiştir. Bir renk degrade mavi ve kırmızı renkler sırasıyla kayıtların başlangıç ​​ve bitiş olmak üzere kayıt süresi kursu belirtmek için kullanılır. (E) Gözde İndeksi (AI) ve Yüzde İndeksi (PI) karşılaştırılması. (F) Ortalama AI hiçbir koku ile 3- 6 deneyler (Kontrol), Elma sirkesi (ZMA) ve% 10 Etil Propionat (AP). Hata çubukları SEM'i göstermektedir. Istatistiksel fark Kolmogorov-Smirnov te tarafından değerlendirildist. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 4,
Şekil 4:. Örnek Veri Veri Analizi Adımlar tarafından üretilen MaskSpatialFiltering.m tarafından yapılan verilerin, (A) Mekansal filtreleme arena dışında kalan veri noktalarını kaldırmak için. Kırmızı daireler arena sınırlarını tanımlamak için kullanılan çevrelerin ilk konumlarını göstermektedir. Siyah daireler çemberi takarak elde edilen nihai pozisyonları, veri (dört alanın içinde gölgeli alana gri) özetliyor vardır. Kırmızı noktalar ve siyah ok ucu bu filtreleme aşamasından sonra veri kümesinden kaldırılacak veri noktalarını belirtir. TemporalFiltering.m tarafından yapılan (B) veri Zamansal filtreleme. Bu filtreleme adım çok slo hareket veri noktaları kaldırırWLY ya da hiç, onlar olmayan hareket sinekler tarafından veya arenadan kir / yansımaları tarafından oluşturulan olması muhtemeldir olarak. kesikli kırmızı kutu ile çevrili bir kırmızı nokta, bu filtreleme adım silinecektir aynı koordinatları ile ~ 6,000 veri noktalarının pozisyonları gösterir. (Cı) Gözde Endeksi (AI) ile AttractionIndex.m bir deneyin son 5 dakika boyunca 10 dak kutularına hesaplanan yüzde indeksi (PI),. Bu indeksler Zamansal profilleri davranışsal tepkilerin dinamikleri hakkında bilgi içeren ve davranışların detaylı analiz için kullanılabilir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Burada açıklanan dört alan olfactometer yabani tip ve mutant Drosophila uçar büyük popülasyonlarının koku yanıtları incelemek için çok yönlü bir davranış sistemdir. Her deney (kurulum, deneysel çalışır ve temizlik dahil) ~ 1 saat sürer ve 4-6 deneyler rutin olarak her gün yapılabilir. 5 dakika boyunca 40-50 sinekler kullanan tipik bir deney yaklaşık 450.000 analiz için veri noktaları paletli oluşturur. tarif edilen konfigürasyon, min gün arasında değişen bir zaman dönemi boyunca koku tepki ya da diğer duyusal uyaranları diğer böcekler ya da böcek larvalarının hareketlerini izlemek için, minör modifikasyonlarla, kullanılabilir. dört-kadranlı deney çekici ve itici uyaranlara hem etkilerine karşı duyarlıdır. Çoğu koku -0.9 ve +0.9 (Denklem 1) arasındaki çekim indeksleri (AI) oluşturur. 0,5 1 aralığında bir AI AI ise -1 -0.5 aralığında olduğu içinde, uyaranlara sinek güçlü çekim davranışını belirtirGüçlü kovucular tarafından tetiklenen. Genel olarak konuşursak, kontrol kokuları ile nötr yanıt (kuru hava, nemli hava, madeni yağ) + 0.1 ile -0.1 arasında düşmek gerekir. AI genellikle sinekler Odorant tüyleri, ilk cazibe ve yeni bir uyaran doğru lokomotor aktivite artışı ve uyarana cevap olarak nihai duyarsızlaştırma yürümek gerektiren zamanı yansıtan deney deney süresince değişir. Ön-test kontrol çalışır önemlidir ve sinekler istenen uyaran yokluğunda arenada düzgün yayılı emin olmak için dikkatlice yapılmalıdır.

arenada sinek mekansal önyargı en sık nedenleri şunlardır: deneyimlerimiz, sinekler gibi küçük bir hava akımı farklılıkları tespit edebiliyoruz muhtemelen bağlantısız boru düzensiz hava akımları, ya da yıldız şeklinde arena yetersiz kenetlenmiş cam plakalar ( 15 ml / dk); ayarlanarak iyileştirilebilir arena boyunca düzensiz ısı dağılımı,Klima ünitesi arena sıcaklığı bile emin olmak için zayıf ve daha yaygın hava akışını ve / veya daha uzun edinim öncesi dönemi (~ 20 dk) oluşturmak için; siyah bant ile deliğin kapatılması ile azalabilir sıcaklık probu açılması yoluyla minimum ışık sızıntısı; Arenada veya kurulum (arena, flowtubes, ışık geçirmez muhafaza, vb parçaları) iyice temizlenmeli ve kurumaya bırakılır birkaç gün veya mümkün değiştirilmesi gerekir bu durumda hava dağıtım sistemi, artık koku.

koku ekipmanın bakım güvenilir ve tutarlı sonuçlar için önemlidir. Bas-bağlanmak davranış kutusu ve hava girişleri ve arena iç duvarlarında parçaları keskin kokular kullanılması durumunda her deneyde sonra etanol ile temizlenmiş ve tamamen kurumasına izin verilmelidir. Cam levhaların kalıntı koku ve kirleri çıkarmak için genellikle yeterlidir,% 70 etanol ile üç kez yıkandı, ama heksan yararlıdırsinekler tarafından yatırılan organik bileşik kaldırarak (örneğin, feromonlar uzun hidrokarbon zincirlerinden oluşan). genellikle koku davranışları etkileyecek aromatik bileşenler içerdiğinden Sabun genellikle tavsiye edilmez. Davranışı kutusu sistemi bakiye kokuların çıkarılmasını kolaylaştırmak için deneyler arasında, kuru hava girişleri (örneğin gece boyunca) bağlı kalması gerekmektedir.

sinekler lokomotor aktivite düşükse, genellikle gürültülü ve değişken Atraksiyon İndeksi ile sonuçlanan çok az veri noktaları, oluşturabilir. Daha uzun açlık ve kayıt süreleri bu sorunu çözmek için yardımcı olabilir. Sinekler hasta iseniz aksine, açlık 24-28 saat genellikle sürece deneyler boyunca tutarlı olarak hareket aktivitesini arttırmak için yeterli olacaktır. Sineklerin sağlıklı durumunu korumak ve lokomosyon artan arasında ince bir denge vardır. 40 saat açlıktan bir başlangıç ​​noktası olarak kullanılabilir ve daha sonra da değiştirilebilirDeneysel sonuçlara göre gerekli. Cazibe Endeksleri biraz böylece açlık süresinin karıştırıcı etkilerini önlemek amacıyla aynı süre için tüm deney hayvanlarına açlıktan esastır, açlık süresi etkilenecektir. Daha uzun açlık süreleri genellikle çekici yanıtları güçlü (0 yakın) itici tepkiler zayıf yapmak ve. Kuru hava kontrol hava akımları sinekler kurumaya eğilimi ve daha uzun bir süre 40 dakika kullanılmamalıdır.

Dört bölgeli olfactometer tek uyarana 16,18 tekli veya çoklu sinek yanıtları incelemek için ya da uyaranlar arasında seçim tercihini incelemek için kullanılabilir. Örneğin, farklı koku dört çeyrek her kullanılabilir. Bu aynı zamanda, koku kadranın sınırları inceleyerek koku karışımları yanıtlarını belirlemek için kullanılabilir. Izleme sistemi tek tek parçalar toplanan veriler izole edilmesini sağlar bile, olduğuna dikkat edilmelidirmümkün olan tek başına test edildiğinde daha bir grubun bir parçası olarak tahlil tek tek sinek farklı davranır olabilir. Örneğin, sineklerin gruplar nedeniyle sinekler 26 arasındaki fiziksel etkileşimleri koku eşliğinde itme artış görülmez. İzleme sistemi ve düzeni de olmayan koku tahlillerinde kullanım için adapte edilebilir. Tahlil çerçevesi kolayca optogenetic stimülasyon ya da thermogenetics için bir termal plaka 27 için bir LED dizisi 9 barındırabilir. Sistem, aynı zamanda, örneğin yumurtlama davranışı 14 çalışma için, bir çok saat arasında bir zaman ölçeği davranışsal seçimler incelemek için adapte edilebilir. Bu durumda, alıcı çerçeve hızı büyük veri dosyaları nesil ve nem ve alt-tabaka (% 1 agaroz jeli) içindeki bir kaynak önlemek için ayarlanması gerekmektedir yumurtlama substrat olarak verilmesi gerekmektedir.

Bu kurulum bir sınırlaması sinekler ve Arena-altındaki nesneleri IR-yansıtıcı olarak izlenmesini ise bir optogenetic herhangi elemanı veyathermogenetic deney IR, alakasız veri noktaları post-processing sırasında kaldırılması gerekir yansıtır. Şu anda farklı sinekler sürekli ayırt olmasını sağlayan bir mekansal çözünürlükte sinekler film de mümkün değildir, ancak bu daha gelişmiş video kameralar kullanarak, gelecekte daha iyi olabilir. Mevcut sistemde başka sınırlama sinekler hareket yürüme davranışları teşvik etmek iki boyutlara sınırlandırılmıştır ve koku kaynaklı uçuş yanıtları engeller olacaktır.

Ek otomatik deneyleri de sineklerin koku tek davranışları ya da grupları araştırmak için geliştirilmiştir dikkat edilmelidir. Burada tarif edilen deney en benzer tasarım Beshel ve Zhong 28 tarafından geliştirilen bir yöntemdir. Bu deneyde, ~ 30 sinekler yanıtları küçük dairesel alanda izlenen kokular arena wa boyunca 1 4 koku limanlarından teslim edildiği (dört alan arena kabaca dörtte alan)ll ve dairesel alanda merkezinde bir delikten kaldırıldı. Daha küçük bir arenada yanı sıra, diğer tasarım farklılıkları esas (yerine dört alan arena puckered duvarları yönettiği olarak odorant kadran boyunca bir) koku limanlara yakın konsantre ışık koşulları altında gerçekleştirilen davranışları ve Koku moleküllerini içerir. Bununla birlikte, dairesel bir alan sinekler koku yanıtları taranması için uygun bir yöntem olup, burada açıklanan uçucu izleme tasarımına uyarlanabilir.

Alternatif bir yaklaşım aynı anda kokulara tepki olarak çok tek sinek etkinliğini izlemek etmektir. Flywalk deneyde, tek tek sinekleri, küçük tüplere yerleştirilir ve koku boru 29,30 içinden perfüze zaman yanıtlarının izlenir. hızlarda ileri veya geri yönde değişiklikler, veya değişiklik, bir odorant genellikle çekici veya itici olup olmadığını ölçmek için kullanılabilir. Bu deney, dört alan deneyi gibi, otomatik olarak sinek m izlerovements ve çok hızlı bir şekilde kokuların geniş bir aralığı için koku tepkilerini ölçmek için kullanılabilir. Ancak, dört-alan aksine, böyle bir yörünge dönüm açıları ve potansiyel sosyal etkileşimler gibi karmaşık motorlu dinamikleri, belki Flywalk tahlil kayıt kaçırdı.

Tek yürüyüş sinek otomatik izleme aynı zamanda bir T-labirent tipi tahlil 31,32 adapte edilmiştir. Bu deneyde, sineklerin kokular bölmenin ortasında bir bağlantı noktası üzerinden iki bölmenin sonunda ve çıkış perfüze edildiği küçük oda yerleştirilir. Sinekler pozisyonları da otomatik olarak izlenir. Bu taklit, bir tek sinek ölçeğinde bir T-labirent çerçevesi üzerinde. optogenetics ile birlikte, bu deney, özellikle koku öğrenme ve hafıza aracı sinir devreleri analizi için uygun olan ve aynı zamanda tek sinekler koku tercihlerini ölçmek için kullanılabilir. Benzer daha büyük mekansal alanlar üzerinde oluşabilecek karmaşık etkinlik dinamiklerini izlemek olamaz, Flywalk içinBöyle sinek popülasyonunda yalnızca ortaya yiyecek arayan 14 ya da davranışlar sırasında ortaya o kadar.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Air delivery system  (Quantity needed)
Tubing and connectors
Thermoplastic NPT(F) Manifolds Cole-Parmer, IL, USA R-31522-31 1
Hex reducing  nipple (1/4MNPT->1/8MNPT) McMaster-Carr, IL, USA 5232T314 1
Tubing (ID:1/8) McMaster-Carr, IL, USA 5108K43 50 Ft
Tubing (ID:1/16) McMaster-Carr, IL, USA 52355K41 100 Ft
Barbed tube fittings McMaster-Carr, IL, USA 5117K71 1 pack
Push-to-connect tube fittings McMaster-Carr, IL, USA 5779K102 4
Barbed Tube Fittings (1/4MNPT->1/8BF) McMaster-Carr, IL, USA 5463K439 1 pack (10)
Barbed Tube Fittings (1/8MNPT->1/8BF) McMaster-Carr, IL, USA 5463K438 2 pack (10) 
Barbed Tube Fittings (1/8MNPT->1/16BF) McMaster-Carr, IL, USA 5463K4 2 pack (10) 
Barbed Tube Fittings (1/4MNPT->1/4BF) McMaster-Carr, IL, USA   5670K84 1
Hex head plug McMaster-Carr, IL, USA 48335K152 1
Air pressure regulator, air filter and flowmeters (Quantity needed)
Labatory gas drying unit W A HAMMOND DRIERITE CO LTD, OH, USA Model: L68-NP-303; stock #26840 1
Multitube frames for 150 mm flowtubes Cole-Parmer, IL, USA R03215-30 1
Multitube frames for 150 mm flowtubes Cole-Parmer, IL, USA R03215-76 1
150 mm flowtubes Cole-Parmer, IL, USA R-03217-15 9
Valve Cartridge Cole-Parmer, IL, USA R-03218-72 9
Precision Air regulator McMaster-Carr, IL, USA 6162K13 1
Soleniod valves Automate Scientific, Berkeley, CA 02-10i 4
Solenoid valve controller ValveLink 8.2, Automate Scientific, Berkeley, CA 01-18 1
Electronic flow meter Honeywell AWM3100V 1
DAQ (NI USB-6009, National Instruments) and a  National Instruments NI USB-6009 1
Power supply Extech Instruments 382200 1
Odor chambers
Polypropylene Wide Mouth jar 2 oz; 60 ml Nalgene 562118-0002 At least 5 are required per experiment, but a separate chamber is required for each dillution of each odorant. Available at Container Store, part #635114)
Glass odor chamber, 0.25 oz Sunburst Bottle LB4B At least 5 are required per experiment 
"In" valve for odor chamber Smart Products, Inc., CA, USA 214224PB-0011S000-4074 1 of these parts is used per odor chamber but they need to be replaced frequently
"Out" valve for odor chamber Smart Products, Inc., CA, USA 224214PB-0011S000-4074 1 of these parts is used per odor chamber but they need to be replaced frequently
O ring RT Dygert International, MN, USA AS568-029 Buna-N O-R 1 pack (100)
Fly arena, camera and behavior boxes (Quantity needed)
Behavior and camera box material Interstate plastics, CA, USA ABS black extruded (https://www.interstateplastics.com/Abs-Black-Extruded-Sheet-ABSBE~~ST.php) 1803 sq inch
Teflon for fly arena and odor chamber inserts, 3/8" thick, 12" x 12" McMaster-Carr, IL, USA 8545K27  1
Glass plates, 1/8" Thick, 9" x 9" McMaster-Carr, IL, USA 8476K191  2
Dual action thermoelectric controller WAtronix Inc, CA, USA DA12V-K-0 1
IR LED array Advanced Illumination, Rochester, VT, USA AL4554-88024, PS24-TL 2 LED arrays and one power supply
Air conditioner Unit Melcor Store  MAA280T-12 1
Imaging system (Quantity needed)
Cosmicar/Pentax C21211TH (12.5 mm F/1.4) C-mount Lens B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA PEC21211 KP 1
CCXC-12P05N Interconnect Cable B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA SOCCXC12P05N 1
DC-700 Camera Adapter B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA SODC700 1
B+W 40,5 093 IR filter B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA 65-072442 1
TiFFEN 40.5 mm Circular polarizer Amazon 1
IR Videocamera Industrial Vision Source, FL, USA Sony XC-EI50 (SY-XC-E150) 1
USB video converter The Imagingsource, NC, USA DFG/USB2-It 1
iFlySpy2 (fly tracking software) Julian Brown, Stanford, Calfornia: julianrbrown@gmail.com iFlySpy2 1
IC Capture 2.2 software The Imagingsource, NC, USA (http://www.theimagingsource.com/en_US/products/software/iccapture/)
Miscellaneous (Quantity needed)
Dremel rotary tool Dremel, Racine, WI, USA Dremel 8000-03  1
Diamond-coated drill bits for glass cutting Available from various suppliers; MSC industrial Supply Co, Melville, NY 90606328 1

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Benzer, S. Behavioral mutants of Drosophila isolated by countercurrent distribution. Proc Natl Acad Sci U S A. 58, (3), 1112-1119 (1967).
  2. Thorpe, W. H. Further studies on pre-imaginal olfactory conditioning in insects. Proc R Soc B. 127, (848), 424-433 (1939).
  3. Tully, T., Quinn, W. G. Classical conditioning and retention in normal and mutant Drosophila melanogaster. J Comp Physiol A. 157, (2), 263-277 (1985).
  4. Anholt, R. R., Mackay, T. F. Quantitative genetic analyses of complex behaviours in Drosophila. Nat Rev Genet. 5, (11), 838-849 (2004).
  5. Vosshall, L. B. Into the mind of a fly. Nature. 450, (7167), 193-197 (2007).
  6. Wu, M. N., Koh, K., Yue, Z., Joiner, W. J., Sehgal, A. A genetic screen for sleep and circadian mutants reveals mechanisms underlying regulation of sleep in Drosophila. Sleep. 31, (4), 465-472 (2008).
  7. Dankert, H., Wang, L., Hoopfer, E. D., Anderson, D. J., Perona, P. Automated monitoring and analysis of social behavior in Drosophila. Nat Methods. 6, (4), 297-303 (2009).
  8. Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. High-throughput ethomics in large groups of Drosophila. Nat Methods. 6, (6), 451-457 (2009).
  9. Aso, Y., et al. Mushroom body output neurons encode valence and guide memory-based action selection in Drosophila. Elife. 3, e04580 (2014).
  10. Pfeiffer, B. D., et al. Tools for neuroanatomy and neurogenetics in Drosophila. Proc Natl Acad Sci U S A. 105, (28), 9715-9720 (2008).
  11. Pfeiffer, B. D., et al. Refinement of tools for targeted gene expression in Drosophila. Genetics. 186, (2), 735-755 (2010).
  12. Venken, K. J., et al. Genome engineering: Drosophila melanogaster and beyond. Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. (2015).
  13. Diao, F., et al. Plug-and-play genetic access to drosophila cell types using exchangeable exon cassettes. Cell Rep. 10, (8), 1410-1421 (2015).
  14. Lin, C. C., Prokop-Prigge, K. A., Preti, G., Potter, C. J. Food odors trigger Drosophila males to deposit a pheromone that guides aggregation and female oviposition decisions. Elife. 4, (2015).
  15. Pettersson, J. An aphid sex attractant. Insect Systematics & Evolution. 1, (1), 63-73 (1970).
  16. Semmelhack, J. L., Wang, J. W. Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion. Nature. 459, (7244), 218-223 (2009).
  17. Vet, L. E. M., Lenteren, J. C. V., Heymans, M., Meelis, E. An airflow olfactometer for measuring olfactory responses of hymenopterous parasitoids and other small insects. Physiological Entomology. 8, (1), 97-106 (1983).
  18. Faucher, C., Forstreuter, M., Hilker, M., de Bruyne, M. Behavioral responses of Drosophila to biogenic levels of carbon dioxide depend on life-stage, sex and olfactory context. J Exp Biol. 209, (Pt 14), 2739-2748 (2006).
  19. Katsov, A. Y., Clandinin, T. R. Motion processing streams in Drosophila are behaviorally specialized. Neuron. 59, (2), 322-335 (2008).
  20. Gao, X. J., et al. Specific kinematics and motor-related neurons for aversive chemotaxis in Drosophila. Curr Biol. 23, (13), 1163-1172 (2013).
  21. Gao, X. J., Clandinin, T. R., Luo, L. Extremely sparse olfactory inputs are sufficient to mediate innate aversion in Drosophila. PLoS One. 10, (4), e0125986 (2015).
  22. Ronderos, D. S., Lin, C. C., Potter, C. J., Smith, D. P. Farnesol-detecting olfactory neurons in Drosophila. J Neurosci. 34, (11), 3959-3968 (2014).
  23. Riabinina, O., et al. Improved and expanded Q-system reagents for genetic manipulations. Nat Methods. 12, (3), 219-222 (2015).
  24. Lundstrom, J. N., Gordon, A. R., Alden, E. C., Boesveldt, S., Albrecht, J. Methods for building an inexpensive computer-controlled olfactometer for temporally-precise experiments. Int J Psychophysiol. 78, (2), 179-189 (2010).
  25. Colinet, H., Renault, D. Metabolic effects of CO2 anaesthesia in Drosophila melanogaster. Biology Letters. 8, (6), 1050-1054 (2012).
  26. Ramdya, P., et al. Mechanosensory interactions drive collective behaviour in Drosophila. Nature. 519, (7542), 233-236 (2015).
  27. Ofstad, T. A., Zuker, C. S., Reiser, M. B. Visual place learning in Drosophila melanogaster. Nature. 474, (7350), 204-207 (2011).
  28. Beshel, J., Zhong, Y. Graded encoding of food odor value in the Drosophila brain. J Neurosci. 33, (40), 15693-15704 (2013).
  29. Steck, K., et al. A high-throughput behavioral paradigm for Drosophila olfaction - The Flywalk. Sci Rep. 2, 361 (2012).
  30. Thoma, M., Hansson, B. S., Knaden, M. High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm. J. Vis. Exp. (106), (2015).
  31. Claridge-Chang, A., et al. Writing memories with light-addressable reinforcement circuitry. Cell. 139, (2), 405-415 (2009).
  32. Parnas, M., Lin, A. C., Huetteroth, W., Miesenbock, G. Odor discrimination in Drosophila: from neural population codes to behavior. Neuron. 79, (5), 932-944 (2013).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats