כימות היסטולוגית של אוטם שריר לב כרוני אצל חולדות

1Cardiology, Department of Medicine, University of Fribourg
Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Valentin, J., Frobert, A., Ajalbert, G., Cook, S., Giraud, M. N. Histological Quantification of Chronic Myocardial Infarct in Rats. J. Vis. Exp. (118), e54914, doi:10.3791/54914 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Introduction

אוטם שריר הלב (MI) הוא הגורם המוביל למוות ונכות בעולם. מחלת לב כלילית היא הגורם העיקרי; MI נובע איסכמיה רצוף לאירועים כליליים כגון חסימה. כאשר רה-פרפוזיה לא מבוצע בתוך 6 שעות, איסכמיה הראשון גורם נמק שריר הלב בלתי הפיך. בחולים, האפיון של MI מסתמך על כלי אבחון שונים, לרבות סימנים קליניים, electrocardiography, הערכת רמות הפלזמה של סמנים ביולוגיים, אקו, הדמית MRI, היסטולוגית מנתח 1. אקוטי וכרוני MI מסווגים לשני שלבים שונים של פגיעה, בהתאם לעיתוי של יחסי נמק שריר הלב אל זמן של חסימה כלילית. בשלב החריף, המתרחשים במהלך 7 הימים הראשונים, מזוהה עם הפסד של cardiomyocytes, דלקת נרחבת, ועל הגיוס של פיברובלסטים. השלב תת-חריפים, מאופיינת הריפוי של רקמת לב ואת היווצרות צלקת, מתרחשבין 1 ל -4 - 6 שבועות. הרחבת האוטם, דליל קיר החדר, ואת התרחבות החדר לאפיין בשלב הכרוני. שיפוץ נרחב של החדר השמאלי תוצאות בהדרגה אי ספיקת לב חמורה 2.

MI המושרה על ידי קשירת העורק השמאלי הקדמי היורד קבע (LAD) מייצג את המודל מכרסם רמת אוטם לבבי כרוני. מחק ליגטורה כלילית החסימה כלילית. גודלו של האוטם תלוי באתר של המיתר. אפיון של פגיעת איסכמית שריר לב במודל מכרסם מבוצע באופן קלסי באמצעות רמות פלזמת סמן ביולוגיות, כגון טרופונין I ו- T 3, אקו, MRI, היסטולוגיה 4,5. רמות ביומרקר מתואמות עם היקף הרג cardiomyocyte. אקו מעריך את ירידת הערך השמאלית הפונקציה חדרית הנובע הפרעות תנועת קיר אזוריות. בנוסף, טכניקות הדמיה לא פולשנית, כגון MRI או ברזולוציה גבוההאקו, לאפשר ההערכה של הירידה בתנועת קיר, ההיקף באזור הצלקת עם זלוף מופחת שריר לב קיימא, ואת דליל הקיר. ממדים LV להתיר הערכה מדויקת של גודל האוטם. לבסוף, כימות של שריר לב קיימא והמת יכולה להתבצע לאחר מוות באמצעות כתמים ספציפיים סעיפים היסטולוגית של לבבות שנקטפו ומאפשרת אימות של גודל האוטם (IS). תכונה חשובה נוספת היא ההערכה של מדד ההתרחבות האוטמת (EI) 6. EI קשורה אוטם transmural והתחלות בתוך 3 הימים הראשונים. EI מאופיין הפחתה הדרגתית עובי דופן, גידול בגודל חלל LV, ושינויים סוגרים בכושר LV.

על מנת להעריך את היעילות הטיפולית של טיפולים חדשניים - בפרט, אסטרטגיות המשובים מבוססים על תאים, מטריצות, והערכת משלוח-מדויק גן של MI במכרסמים היא בעלת חשיבות עליונה.כאשר נמדדו על חתך יחיד שהושג ברמת שריר פפילרי, הגודל הוא עלול להיות מוטה בשל ההשתנות הגדולה שמקיים בפיתוח האוטם הבא קשירת LAD; ייתכן אוטם איפקס אז וטשטש. חשוב לציין, יותר מתודולוגיות מדויקת לגודל נקבע MI תוארה עבור עכברים 7-9 או חולדות 10. אף על פי כן, IS אינו מספיק כדי לכמת LV שיפוץ במדויק או הפחתות מושרות טיפולי (או סיכולים) של השיפוץ. ואכן, היא מתבטאת בדרך כלל כאחוז נפח LV הכולל הוערך על חתכי רוחב של הלב. אמנם שיטה זו תקפה עבור אוטם לבבי חריף, הדילול של קיר LV המתרחשים במהלך השיפוץ נשאר תחת הערכת 11,12. כימות morphometric מלאות של גודל אוטם ושינויים מבניים צריכות לכמת מספר פרמטרים, כגון אורכי endocardial ו epicardial ובקטרים, כמו גם אוטם ואזורים בריאים. אנו מתארים appr מתודולוגייםאוח כדי להעריך נכון MI שיפוץ במודל חולדה כרונית.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

כל החיות קיבלו טיפול אנושי בהתאם לאמנה האירופית על טיפול בבעלי חיים. הליכים כירורגיים בוצעו בהתאם לחוק צער בעלי חיים השוויצרי לאחר קבלת אישור של משרד וטרינר ממשלתי, פריבורג, שאושר על ידי משרד וטרינרית הפדרלי השוויצרי, שוויץ.

קציר לב 1.

הערה: כל התערבות כירורגית בוצעו תחת הרדמה isoflurane. נעשו מאמצים להקטין סבל לבעלי חיים. בפרט, כל החיות קיבלו הזרקה תת עורית של 0.1 מ"ג /-הרדמה מראש עצירות ק"ג. הפרוטוקול כירורגית עבור inducting אוטם שריר לב תואר בעבר במקום אחר 13.

  1. בצע sternotomy על חית myocardially אוטמת בהרדמה (חיה מחוברת לצינורות, 2.5% isoflurane, הרדמה תקינה אושר על ידי רפלקס קמצוץ כפה).
    1. פתח את החיה על ידי חיתוך העור ולאחר מכן את השריריםעם מספריים כירורגיות. חותכים את הצלעות על ימין ועל שמאל, ולאחר מכן הסר את החזה.
    2. הסר את ההידבקויות הנותרות לאחר הניתוח הקודם (קשירת LAD). חותכים את אבי העורקים ולהסיר את הלב. שים את רקמות 1 M KCl (PBS), ולאחר מכן לשטוף אותו עם PBS.

2. רקמות הכנה

  1. שים לב אוטם אורכי מטריקס לב עכברוש אקריליק. שמור את זה ב -20 מעלות צלזיוס במשך שעה 1.
  2. חותכים את הלב ישירות במטריצה ​​באמצעות סכין גילוח עם משוכל. ודא כל פרוסה הוא בעובי 2 מ"מ. חותך כ 5 - 7 שקופיות עבור כל לב (בהתבסס על רמת השיפוץ); זה נקרא דגימה שיטתית.
  3. בשלב זה, ביצוע כלוריד 2,3,5-triphenyltetrazolium מכתים (TTC) הוא אופציונלי (לשמור על הכיוון של base-to-איפקס פרוסות הלב).
    1. מדגירים TTC 1% ב PBS במשך 50 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. דגירה זה paraformaldehyde 4% (PFA) במשך 20 דקות עד 1 שעה. שים את הסעיפים between שני לוחות זכוכית עם מפרידי 2 מ"מימ ומצלמים עם מיקרוסקופ stereological מצמיד עם מצלמה בהגדלה 15X.
      זְהִירוּת! Paraformaldehyde רעיל.
  4. הקפאת שקופיות (אפשרות st 1)
    1. שים כל שקופית בתוך תבנית פלסטיק (10 x 10 x 5 מ"מ) עם הרכבה בינונית עבור cryotomy (הטמפרטורה חיתוך אופטימלי, אוקטובר), לשמור על האוריינטציה (למקם את הצד איפקס מונחה של הסעיף למטה בחלק התחתון של עובש). להקפיא את אובניים עם אדי 2-methylbutane תחת חנקן נוזל קירור במשך 10 - 15 דקות. לבסוף, לאחסן את הרקמה ב -80 ° C.
  5. Paraffinization (2 אפשרות nd)
    1. מניח כל שקופית הטבעת קלטות (לשמור על האורינטציה על ידי נחת צד אורינטציה-איפקס של הסעיף למטה בחלק התחתון של הקלטת) ולאחר מכן ב 4% PFA למשך 24 שעות. שים את זה בתוך לילה מכונה מעבד רקמות.
      1. דגירה זה 70% אתנול עבור שעה 2. דגירה זה ethanol 95% עבור 2 שעות. דגירה זה 100% אתנול עבור 3 שעות. דגירה זה xylol עבור 4 שעות. דגירה זה פרפין (מותכת ב 60 ° C בתנור) במשך 5 שעות. לבסוף, לעשות בלוקים על ידי הטבעת כל שקופית לב פרפין.

3. מסון-גולדנר Trichrome מכתים

  1. הפוך קטעי רקמה מבלוקים פרפין עם microtome ידנית (עובי: מיקרומטר 5) או מבלוקים אוקטובר עם cryostat מוגדר -18 ° C (עובי: מיקרומטר 7).
  2. כתם שקופיות אחד מכל חלק לב לכל חולדה (3 - 4 חלקים משוכל לכל שקופית) עם מסון-גולדנר trichrome מכתים (ראה נספח).
    הערה: התחל שלב זה עבור חלקי פרפין.
    1. ממיסים את השקופיות ב 60 מעלות צלזיוס בתנור. מתחת למכסה מנוע קטר, deparaffinize אותם xylol פעמים במשך 10 דקות כל אחד. רעננותם אותם אתנול 100%, 95% אתנול, 70% אתנול, ומים מזוקקים במשך 3 דקות כל אחד.
      הערה: התחל שלב זה עבור cryosectionים.
    2. תקן אותם לילה פתרון Bouin. לאחר מכן, לשטוף אותם במים זורמים מהברז במשך 10 - 15 דקות. יש לשטוף אותם במים מזוקקים. דגירה אותם hematoxylin של מאייר במשך 3 דקות.
    3. הסר את השקופיות ולהשאיר אותם במים מזוקקים למשך 5 דקות. לאחר מכן, דגירה אותם בחומצה Fuchsin-Ponceau למשך 5 דקות. יש לשטוף אותם 1% חומצה אצטית 1 דקות.
    4. לאחר מכן, דגירה אותם בחומצה phosphomolybdic אורנג G דקות 1. יש לשטוף אותם 1% חומצה אצטית דקות 1, דגירה אותם לצבוע בצבע ירוק בהיר במשך 10 דקות, ולשטוף אותם בחומצת 1% אצטית דקות 1.
    5. מייבש אותם אתנול 70% (30 שניות), 95% אתנול (30 שניות), ו -100 אתנול% (5 דקות). לשים טיפה אחת של הרכבה בינונית שרף על סעיפי רקמות, לכסות אותם עם coverslips, ולתת להם להתייבש.

4. ניתוח גודל האוטם

  1. סריקתתמונה אחד מכל להחליק על (בהגדלה 15X) סטראו יחד עם המצלמה. לצלם שליט עם אותה הגדרהים.
  2. השתמש בתוכנת ניתוח תמונה כדי למדוד את עובי הצלקת באמצע האוטם, עובי מחצה, חדר השמאלי באזור החלל (LV), באזור האוטם, ואזור רקמת LV משתמש.
    1. הגדר את קנה המידה עם התמונה השלטת (איור 1 א).
      1. הקישו על מדידות ולאחר מכן בחר Set המרה גורם. צייר קו בסרגל הכיול. קליק ימני על התמונה ולחץ על כיול הסוף. הערת הערך הבר, ולאחר מכן לחץ על אישור.
    2. בחר את LV מתמונת הלב המוכתם (האיור 1B). השתמש בכלי סגמנטים רבים. בחר את הנקודה-ידי נקודות LV, קליק ימני ואז העתק / הדבק בכל מקום.
    3. מדוד את עובי הצלקת מחצה באמצעות כלי מדידה למגזר אחד (איור 1 ג
    4. זיהוי אוטומטי של החלל, אוטם LV, ואזורי LV שימוש באפשרות מדידת השטח האוטומטית במצב RGB (1D איור).
      1. לחץ על הכלי. הפעל רק גבולות רציף במצב RGB. לבסוף, לחץ בתוך השטח של עניין לזהות אותו. במידת הצורך, להשתמש בכלי דיוק.
  3. חשב את גודל האוטם כיחס באזור האוטם לאזור LV.
  4. חישוב המדד הרחבה כדלקמן: [אזור חלל LV / כל אזור LV] / [עובי אוטם / עובי מחצה], עם אזור LV כולו כולל הוא את חלל LV ואזורי רקמות LV.
  5. לבסוף, חשב "ממוצע" עבור כל לב כדלקמן: [ממוצע של מדד הרחבה מן השקופיות האוטמות] [מספר השקופיות אוטמות / סה"כ שקופיות] *.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

שישה שבועות קשירה שלאחר LAD, לבבות נבצרו חולדות לואיס. 2 מ"מ סעיפי רקמות התקבלו מן הקודקוד לבסיס. הליך מכתים TTC בוצע על מנת להמחיש את האזור האוטם, המופיע בלבן, ואת שריר לב הבריא, המופיע באדום (איור 2). בהתאם לאתר של קשירת LAD, גודל האוטם משתנה. עבור MI גדול, אוטמים transmural נצפו מן הקודקוד לבסיס (איור 2 א). קטן אוטמים הציג רקמה לבנה אוטם גלויה מן הקודקוד אל אמצע הקטע של הלב (איור 2 ב). לקבלת אוטמים הלא transmural קטן, רקמה פיברוטית נצפתה על אחד או שניים בלבד חלקים מן הקודקוד (איור 2 ג).

5 מיקרומטר חלקים דקים מכל פרוסת לב נחתכו מוכתם trichrome מסון-גולדנר. תמונות של החתך השלם של הלב היורכשה תחת סטראו (איור 3). רקמות בריאות הופיעו באדום ואת רקמת החיבור בירוקה. אפליה בין כל צבע יכולה להתבצע בקלות עם תוכנת ניתוח תמונה.

עובי של האוטם ו מחצה, באזור חלל LV ואת השטח הכולל LV נמדדו מחושב לחשב את EI (טבלה 1). EI חושב עבור כל מקטע. בהתאם לגודל הלב, מספר סעיפים נעים בין 5 עד 7. עבור כל לב, EI הוא ממוצע של EI מכל קטע. EI נע בין 0 כדי 0,278 וגילה מגוון רחב של אוטמים בשריר הלב, עם קורות חיים של 58%. לשם השוואה, הממוצע של אחוז האוטם אל LV נע בין 0 ל 0.241, עם קורות חיים של 54% (טבלה 1). EI ואחוז האוטם היו בקורלציה משמעותית; ניתוח ספירמן הלא פרמטרית סיפק r-va מקדם המתאםlue של 0.491 (p = 0.005) (איור 4 א). עבור ערכי EI קרובים, כגון 0.11 ו -0.13, אחוז האוטם נע בין 5.8 ל -24.1%.

תפקוד לב הוערך על ידי אקו ברזולוציה גבוהה על קשירת 6 שבועות לאחר LAD על חיות הרדימו בוצע פעם אחת לפני קצירת לב. EI שנמדדת כימות היסטולוגית בקורלציה משמעותית עם EF. ניתוח ספירמן הלא פרמטרית סיפק r-ערך של -.709 (p = 0.005) (איור 4 ב).

איור 1
שלב-אחר-שלב באיור 1. איור של השימוש בתוכנת ניתוח תמונה. מדידות תיחום ואורך צבע אוטומטיים כללו את מספר שלבים. כיול א: קנה המידה של התמונה הוקמה. תמונה שלסרגל צולם באותו המצב כמו בסעיף הלב. אורכו של השליט היה מסומן להגדיר את מקדם המרת מידה. מרת מ- פיקסל מילימטרים בוצעה. הבחירה ב LV: החדר הימני נחתך מחוץ לתמונה באמצעות כלי הבחירה של התוכנה. ג LV מדידת עובי קיר מחץ: כלי המדידה הבודד שמש לכמת מרחקים. ברי הסולם עולים 3 מ"מ. ד אוטומטי כימות באזור: תיחום צבע אוטומטית בוצע במצב RGB. הבחירה אוטומטית בוצעה לאחר בחירת מצב הבחירה האוטומטית. בחירת צבע מבוסס יכולה להיות שונה; החוקר בצע שליטה ויזואלית של הרקמה הירוקה נבחרת להגדיל או להקטין את האזור שנבחר לפי צורך. ברי הסולם עולים 3 מ"מ. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. איור 2
איור 2. לב סעיפים ויטראז עם TTC. סעיפים 2 מ"מ של הלב מלא הוכתמו TTC. שריר לב בריא הופיע ברקמות אדומות fibrotic בלבן. שלושה לבבות בגדלים שונים אוטמים מוצגים. ת: אוטם transmural גדול, B: אוטם בינוני, ו- C: אוטם קטן. ברי הסולם עולים 3 מ"מ. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 3
איור 3. סעיפי לב ויטראז עם מסון-גולדנר Trichrome. סעיפי 5-מיקרומטר נחתכו מכל קטע לב השיג 6 שבועות קשירה שלאחר LAD. Staסעיפים שאינם עומדים הושמו תחת סטראו. תמונות של חלקים המלאים התקבלו עם הגדלה 15X. תמונת הנציג, שהושגה ברמת שרירי papillary (החץ חזרה), מראה שריר לב בריא ברקמות אדומות fibrotic בירוק. התמונה ממחישה את תיחום צבע האוטומטי עם תוכנת ניתוח תמונה, כמו גם את האתר שבו העובי האוטם ו מחץ נמדד (קווים שחורים). ברי הסולם עולים 3 מ"מ. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 4
מתאם איור 4. בין הרחבת המדד (EI) ואחוז האוטם הקשור ל LV (א) או מקטע הפליטה (EF) (B). הרגרסיה הליניארית (קו שחור) ו -95% לבטוחבמרווחי NCE (קווים מקווקווים) מיוצגים. המגזר השקלי הלא צמוד פרמטרית ספירמן r-ערך מדווח. ת: אחוז האוטם ו EI בקורלציה משמעותית (r = 0.567; p = 0.003). מדד התרחבות האוטם (EI) חושב [באזור חלל LV / כל אזור LV] / [עובי האוטם / עובי מחצה]. את כל שטח LV נמדד כמו חלל LV בשילוב ואזור רקמת LV. אחוז האוטם חושב כאזור רקמה באזור רקמות LV / אוטם. B: הפונקציה העריכה ב -6 שבועות קשירה שלאחר LAD באמצעות אקוקרדיוגרפיה ברזולוציה גבוהה בקורלציה משמעותית עם EI. פרמטרי שניהם היו בקורלציה משמעותית (r = -0.709, p = 0.005). אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

שולחן 1
שולחן1: הפרמטרים שנמדדו על סעיפים מאסון גולדנר מוכתם הלב.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

צעדים קריטיים בתוך הפרוטוקול

רקמת פיברוטית ניתן להעריך במדויק במודל חולדה כרוני MI באמצעות דגימה שיטתית של לב שנקטף ותמונת מנתח סעיפים היסטולוגית מוכתמת טריים-כרומטית המתקבלים בסיס לקודקוד. שני צעדים חשובים במיוחד עבור יישום פרוטוקול מוצלח. ראשית, השימוש KCl לקציר הלב מאפשר שריר הלב להישמר במצב רגוע. שלב זה חשוב להשוואות של ממדים אוטמים מלבבות שונות. שנית, קיבעון הלילה של הסעיף בתמיסת Bouin הוא קריטי להשגת מכתים trichrome בהיר.

שינויים ופתרון בעיות

עדר מכתים יכול להיות בגלל קשיים במהלך הקיבעון של הסעיף בתמיסת Bouin, כגון זמן דגירה מופחת או פג פתרונות Bouin. מכתים TTC הוא אופציונאלי could לשמש כדי להמחיש את גודל האוטם בצורה מהירה אך הלא-כמותי. חשוב לציין כי TTC יכול להתבצע עבור אותו הלב, לפני הכללת או אוקטובר או פרפין.

מגבלות של הטכניקה

הגישה הנוכחית מתירה לך לבחור בין סעיפי לב פרפין מוטבעים השתמר קריו וניתן להשתמש בו עבור immunostaining. אף על פי כן, בלב המלא צריך להיות מחולק, והרקמה לא ניתן להשתמש לצורך ניתוח נוסף, כגון כתם מערבי או RT-PCR עבור חלבון ביטוי גני המנתח.

משמעות של הטכניקה ביחס קיימים / שיטות חלופיות

מכיוון שתהליך כימות, בפרט, מספר סעיפים נתחו להשתנות משמעותי בין החקירות, המגדירים את המספר הקטן ביותר של סעיפים צורכים לקבל כימות אמינה היא בעל חשיבות עליונה. דואר Takagawat al. 9 הוכיחו כי אמינות מוגדלת עם מספר פרוסת לב מינימאלי של 6 - 8 חלקים של כל הלב של עכבר באמצעות מרווחי 1 מ"מ. בפרוטוקול הנוכחי, 5 - 7 סעיפים של לב החולדה כולו התקבלו בעת ביצוע חתך בעובי 2 מ"מ. יתר על כן, סעיפים 2 מ"מ הם סטנדרטיים שימוש תכוף גודל מכתים TTC. בנוסף, הדגימה המערכתית היא פשוטה ליישום ומציג היבט תקופתי המאפשר אפיון של הלב כולו.

מכל אחת את פרוסות 2 מ"מ, 5 סעיפים מיקרומטר נחתכו ומוכתמת. עבור כל מקטע של 5 מיקרומטר, כימות של עובי מחצה, עובי צלקת אורך, שטח צלקת כולל, באזור LV הכולל, ואזור חלל LV בוצעה, ואת הממוצע של כל פרמטר חושב לכל בעלי חיים. השתמשנו מסון-גולדנר מכתים סעיפים רזים ולא מכתים TTC סעיפי 2 מ"מ כדי לשפר את הדיוק הן של זיהוי הצבע האוטומטי וההערכהבאורכים. ואכן, מכתים TTC מעניין בעיקר בשלבים מוקדמים או מודלים reperfusion איסכמי לצורך זיהוי של האזור בסיכון 8,14, ולא לשלב כרוני.

MI המושרה מן קשירת LAD עשוי להשתנות תלוי באתר ליגטורה. במודל האוטם כרוני שהוצג, גודל הקשירה שונה בכוונה עבור כל חיה, ותוצאות עבור תנאים שונים של גודל אוטם שיפוץ נכחו לאחר 6 שבועות. בהתאם לכך, EI המחושב חשף מגוון רחב של אוטמים בשריר הלב ותמך ההבדל שנצפה בתפקוד הלב בקורלציה עם EF. כאשר דליל נרחב של המגזר האוטם התרחש, באזור של האוטם היה פחות בהרבה במקרה של סיסטיק transmural. במצב זה, המגדיר את גודל האוטם על ידי חישוב השטח של הרקמה האוטמת ביחס LV כולו (מבוטאים באחוזים של LV) היה להעריך את ההיקף בחולשה של האוטם. היעדר גonsideration עבור התרחבות LV-induced שיפוץ ודילול קיצוניים של הקיר LV האוטם שעלול להמעיט בהערכת גודל האוטם, בעוד האוטם נוכח העדר דליל הקיר היה יתר לאמוד את גודל האוטם, כפי שהוא מיוצג על ידי ערכים מחוץ סמך 95% הַפסָקָה. חיסרון זה יכול להתבטל דרך החישוב של EI.

הוכח כי שינוי צורת LV מתואם חיובי עם EI וקיר הדליל 15, 16. למרות EI יכול להיות מנבא של תפקוד LV, חשוב להדגיש כי אקו וניתוחים היסטולוגית הם שיטות משלימות להעריך את אוטם שריר הלב ברמה התפקודית ורקמות, בהתאמה. אקו מאפשר מחקר אורך, היסטולוגית המנתח לספק מבחני סוף נקודות יסוד המאפשרים כימות נוסף של מורפולוגיה LV, כגון עובי קיר.

יישומים או כיוונים לעתיד מובילים לירכיםאה מאסטרינג טכניקה זו

הדגימה המערכתית של הלב כולו ואת החישוב של EI הם בעלי העניין מיוחד כאשר מעריכים MI כרוני. בנוסף, שיטה זו תהיה מתאימה להערכת יעילות טיפול, בפרט עבור טיפולים חדשניים, כגון cell- מטריצה ​​מבוסס טיפולים שמטרתם הקטנת גודל אוטם שיפוץ. כימות אמין של התרחבות האוטם היא בעלת חשיבות עליונה עבור השוואות בין בעלי חיים שאינם מטופלים ומטופל, כפי היסטולוגית קצה מנתח מונע השוואה של לפני ואחרי גודל האוטם ו שלאחר הטיפול.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acrylic rat heart matrix 2 mm 72-5015 Harvard Appartus
Inspira advanced volume controlled ventilator Harvard Apparatus 557058
Catheter Insyte 14 G BD 381267
O.C.T BDHA361603E VWR
TTC T8877-10G Sigma Aldrich
Mayer hematoxylin MHS32-1L Sigma Aldrich
Acid Fuchsin
CI 42685
F8129-50G Sigma Aldrich
Ponceau Xylidin
CI 16150
P2395-25G Sigma Aldrich
Orange G
CI 16230
O3756-100G Sigma Aldrich
Light green
CI 42095
L5382-25G Sigma Aldrich
KCl P9333-500G Sigma Aldrich
Xylol 10315083 HoneyWell
Ethanol absolute 10303990 HoneyWell
2-methylbutane M32631-1L Sigma Aldrich
Stereogical microscope SM2800 Nikon
Formaldehyde 99340 Reactolab
Embedding cassette K113.1 Carl Roth
Bersoft Image measurement Software Bersoft.com Licensed software

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Amsterdam, E. A., et al. AHA/ACC Guideline for the Management of Patients with Non-ST-Elevation Acute Coronary Syndromes: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 64, e139-e228 (2014).
  2. Konstam, M. A., Kramer, D. G., Patel, A. R., Maron, M. S., Udelson, J. E. Left ventricular remodeling in heart failure: current concepts in clinical significance and assessment. JACC Cardiovasc Imaging. 4, 98-108 (2011).
  3. Frobert, A., et al. Prognostic Value of Troponin I for Infarct Size to Improve Preclinical Myocardial Infarction Small Animal Models. Front Physiol. 6, 353 (2015).
  4. Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Myocardial infarct size and area at risk assessment in mice. Exp Clin Cardiol. 17, 268-272 (2012).
  5. Guex, A. G., et al. Plasma-functionalized electrospun matrix for biograft development and cardiac function stabilization. Acta Biomater. 10, 2996-3006 (2014).
  6. Landa, N., et al. Effect of injectable alginate implant on cardiac remodeling and function after recent and old infarcts in rat. Circulation. 117, 1388-1396 (2008).
  7. Valente, M., et al. Optimized heart sampling and systematic evaluation of cardiac therapies inmouse models of ischemic injury: Assessment of cardiacremodeling and semi-automated quantification of myocardial infarctsize. Curr. Protoc. Mouse Biol. 5, 359-391 (2015).
  8. Csonka, C., et al. Measurement of myocardial infarct size in preclinical studies. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 61, 163-170 (2010).
  9. Zornoff, L. A., Paiva, S. A., Minicucci, M. F., Spadaro, J. Experimental myocardium infarction in rats: Analysis of the model. Arq. Bras Cardiol. 93, 434-440 (2009).
  10. Lichtenauer, M., et al. Myocardial infarct size measurement using geometric angle calculation. Eur J Clin Invest. 44, 160-167 (2014).
  11. Lutgens, E., et al. Chronic myocardial infarction in the mouse: cardiac structural and functional changes. Cardiovasc Res. 41, 586-593 (1999).
  12. Frobert, A., Valentin, J., Cook, S., Lopes-Vicente, L., Giraud, M. N. Cell-based therapy for heart failure in rat: double thoracotomy for myocardial infarction and epicardial implantation of cells and biomatrix. J Vis Exp. e51390 (2014).
  13. Takagawa, J., et al. Myocardial infarct size measurement in the mouse chronic infarction model: comparison of area- and length-based approaches. J Appl Physiol (1985). 102, 2104-2111 (2007).
  14. Fishbein, M. C., et al. Early phase acute myocardial infarct size quantification: validation of the triphenyl tetrazolium chloride tissue enzyme staining technique. Am Heart J. 101, 593-600 (1981).
  15. Weisman, H. F., Bush, D. E., Mannisi, J. A., Weisfeldt, M. L., Healy, B. Cellular mechanisms of myocardial infarct expansion. Circulation. 78, 186-201 (1988).
  16. Mannisi, J. A., Weisman, H. F., Bush, D. E., Dudeck, P., Healy, B. Steroid administration after myocardial infarction promotes early infarct expansion. A study in the rat. J Clin Invest. 79, 1431-1439 (1987).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics