Histologisk Kvantificering af kronisk hjerteinfarkt i rotter

1Cardiology, Department of Medicine, University of Fribourg
Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Valentin, J., Frobert, A., Ajalbert, G., Cook, S., Giraud, M. N. Histological Quantification of Chronic Myocardial Infarct in Rats. J. Vis. Exp. (118), e54914, doi:10.3791/54914 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Introduction

Myokardieinfarkt (MI) er en førende årsag til død og invaliditet i hele verden. Koronar hjertesygdom er den vigtigste årsag; MI skyldes iskæmi i træk til koronare hændelser såsom okklusion. Når reperfusion ikke udføres inden for de første 6 timer, iskæmi inducerer irreversibel myokardienekrose. Hos patienter, karakterisering af MI er afhængig af forskellige diagnostiske værktøjer, herunder kliniske tegn, elektrokardiografi, vurdering af plasmaniveauer af biomarkører, ekkokardiografi, MRI scanning, og histologiske analyser 1. Akut og kronisk MI er klassificeret som to forskellige faser af skade efter timingen af ​​myocardienekrose forhold til tidspunktet for koronar okklusion. Den akutte fase, der opstår under de første 7 dage, er forbundet med tab af cardiomyocytter, omfattende inflammation, og rekrutteringen af ​​fibroblaster. Sub-akutte fase, kendetegnet ved heling af hjertevævet og dannelsen af ​​et ar, opstårmellem 1 og 4 - 6 uger. Udvidelse af infarkt, ventrikel væg udtynding, og ventrikel dilatation karakterisere den kroniske fase. Omfattende ombygning af venstre ventrikel gradvist resulterer i alvorlig hjerteinsufficiens 2.

MI induceret af permanent venstre forreste nedadgående arterie (LAD) ligering repræsenterer standard gnaver model af kronisk myocardial infarkt. De koronar ligatur efterligner koronar okklusion. Størrelsen af ​​infarkt afhænger på stedet af ligaturen. Karakterisering af myocardial iskæmisk læsion i en gnaver-model er klassisk udført under anvendelse biomarkør plasmaniveauer, såsom troponin I og T 3, ekkokardiografi, MRI, og histologi 4,5. Biomarkør niveauer er korreleret med omfanget af cardiomyocyte død. Ekkokardiografi vurderer venstre ventrikel nyrefunktion som følge af regionale væg bevægelse abnormiteter. Desuden ikke-invasive billeddannelsesteknikker, såsom MRI eller høj opløsningekkokardiografi, at omfatte vurdering af reduktionen i væggen bevægelse, mængden af ​​arret med reduceret perfusion og levedygtig myocardium, og væggen udtynding. LV dimensioner tillader det nøjagtig evaluering af infarktstørrelse. Endelig kan kvantificering af levedygtige og døde myocardium udføres postmortem hjælp specifikke pletter af histologiske snit af høstede hjerter og tillader kontrol af infarktstørrelse (IS). Et andet vigtigt element er evalueringen af infarktet ekspansion indeks (El) 6. EI er forbundet med transmural infarkt og starter inden for de første 3 dage. EI er kendetegnet ved en gradvis reduktion i vægtykkelse, en stigning i LV hulrum størrelse og deraf følgende ændringer i LV form.

For at vurdere den terapeutiske effekt af nye behandlinger - især de regenerative strategier baseret på celler, matricer, og gen-levering-præcis vurdering af MI hos gnavere er af afgørende betydning.Når den måles på en enkelt tværsnit opnås ved papillærmusklen niveau, kan IS størrelse være forspændt på grund af den store variation, der eksisterer i infarkt udvikling efter LAD ligering; toppunktet infarkt kan derefter tildækkes. Vigtigere, har mere præcise metoder til bestemt MI størrelse blevet beskrevet for mus 7-9 eller rotter 10. Ikke desto mindre, IS er utilstrækkelig til præcist at kvantificere LV ombygninger eller terapeutisk inducerede reduktioner (eller preventions) af ombygningen. Faktisk er almindeligvis udtrykt som en procentdel af den samlede LV volumen vurderet på tværsnit af hjertet. Selv om denne metode er gyldig for akut MI, udtynding af LV væg forekommer under remodeling forbliver under overvejelse 11,12. En komplet morfometrisk kvantificering af infarktstørrelse og strukturelle ændringer bør kvantificere flere parametre, såsom endokardiale og epikardiale længder og diametre, samt infarkt og raske områder. Vi beskriver en metodisk ca.oach præcist at vurdere MI og ombygning i en kronisk rottemodel.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle dyr modtog human måde i overensstemmelse med den europæiske konvention om Animal Care. Kirurgiske procedurer blev udført i overensstemmelse med den schweiziske Dyrenes Beskyttelse lov efter at have indhentet tilladelse fra staten Veterinærkontoret, Fribourg, der er godkendt af den schweiziske forbundsdomstol Veterinærkontoret, Schweiz.

1. Heart Høst

BEMÆRK: Alle kirurgiske indgreb blev udført under isofluran anæstesi. blev gjort en indsats for at mindske dyrenes lidelser. Navnlig modtog alle dyr en subkutan injektion af 0,1 mg / kg buprenorphin pre-anæstesi. Den kirurgiske protokol for luftindtag myokardieinfarkt er tidligere blevet beskrevet andetsteds 13.

  1. Udfør en sternotomi på en myocardially infarkt dyr under anæstesi (intuberet dyr, 2,5% isofluran, ordentlige anæstesi bekræftet af pote knivspids refleks).
    1. Åbn dyret ved at skære i huden og derefter musklernemed kirurgiske sakse. Skær ribbenene på venstre og højre, og fjern brystet.
    2. Fjern de sammenvoksninger tilbage efter tidligere operation (LAD ligation). Skær aorta og fjerne hjertet. Sætte vævet i 1 M KCI (i PBS), og derefter vaske det med PBS.

2. Vævspræparation

  1. Sætte infarcted hjerte på langs i en akryl rottehjerte matrix. Holde det ved -20 ° C i 1 time.
  2. Skær hjertet direkte i matricen ved hjælp af et barberblad med en tværgående. Sørg hver skive er 2 mm tyk. Cut ca. 5 - 7 dias for hvert hjerte (baseret på remodeling niveau); dette kaldes systematisk prøvetagning.
  3. I dette trin udfører 2,3,5-triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) -farvning er valgfri (holde orienteringen af ​​hjerte skiver bunden mod apex).
    1. Inkuber i 1% TTC i PBS i 50 minutter ved 37 ° C. Inkuber det i 4% paraformaldehyd (PFA) i 20 minutter til 1 time. Sæt afsnittene between to glasplader med 2-mm afstandsstykker og tage billeder med en stereologiske mikroskop kombineret med et kamera på 15X forstørrelse.
      FORSIGTIGHED! Paraformaldehyd er giftigt.
  4. Slide frysning (1. option)
    1. Sætte hvert objektglas i en plast støber (10 x 10 x 5 mm) med montering medium til cryotomy (optimal opskæring temperatur, OCT), opretholde orienteringen (placere spidsen orienterede side af sektionen ned på bunden af ​​støbeformen). Frys blokke med 2-methylbutan dampe under flydende nitrogen køling i 10 - 15 min. Endelig opbevares vævet ved -80 ° C.
  5. Paraffinization (2. option)
    1. Placer hver slide i indlejring kassetter (opretholde orienteringen ved at placere spidsen orienterede side af sektionen ned på bunden af ​​kassetten) og derefter i 4% PFA i 24 timer. Put det i et væv processor maskine natten over.
      1. Inkuber det i ethanol 70% i 2 timer. Inkuber den i ethanol 95% i 2 timer. Inkuber det i ethanol 100% i 3 timer. Inkuber det i xylen i 4 timer. Inkuber det i paraffin (smeltet ved 60 ° C i en ovn) i 5 timer. Endelig skal du blokke ved at integrere hvert hjerte slide i paraffin.

3. Masson-Goldner trichromfarvning

  1. Gør vævssnit fra paraffinblokke med en manuel mikrotom (tykkelse: 5 um) eller fra OLT blokke med en kryostat indstillet til -18 ° C (tykkelse: 7 um).
  2. Farv en dias fra hvert hjerte del for hver rotte (3 - 4 tværgående sektioner pr slide) med Masson-Goldner trichromfarvning (se bilag).
    BEMÆRK: Start fra dette trin for de paraffinsnit.
    1. Smelt objektglassene ved 60 ° C i en ovn. Under en emhætte, afparaffiniser dem i xylen to gange i 10 min hver. Rehydrere dem i 100% ethanol, 95% ethanol, 70% ethanol og destilleret vand i 3 minutter hver.
      BEMÆRK: Start fra dette trin for kryosektionens.
    2. Fix dem i Bouin løsning natten over. Derefter skyl dem i rindende vand i 10 - 15 min. Skyl dem i destilleret vand. Inkuber dem i Mayers hematoxylin i 3 min.
    3. Fjern objektglassene og efterlade dem i destilleret vand i 5 minutter. Derefter inkuberes dem i syre Fuchsin-Ponceau i 5 min. Skyl dem i 1% eddikesyre i 1 min.
    4. Dernæst inkuberes dem i phosphomolybdænsyre Orange G i 1 min. Skyl dem i 1% eddikesyre i 1 minut, inkuberes dem i lysegrøn farve i 10 minutter, og skyl dem i 1% eddikesyre i 1 min.
    5. Dehydrere dem i 70% ethanol (30 sek), 95% ethanol (30 sek), og 100% ethanol (5 min). Put en dråbe harpikslignende montering medium på vævssnit, dække dem med dækglas, og lad dem tørre.

4. infarktstørrelse Analyse

  1. Anskaf et billede fra hvert dias på et stereomikroskop (15X forstørrelse) kombineret med et kamera. Fotografere en lineal med den samme indstillings.
  2. Bruge billedanalyse software til at måle arret tykkelse i midten af ​​infarkt, septum tykkelse, den venstre ventrikel (LV) hulhed feltet infarktareal, og LV vævsområde bruger.
    1. Indstil skalaen med linealen billede (figur 1A).
      1. Klik på Målinger vælg derefter Set Conversion Factor. Tegn en linje på kalibrering bar. Højreklik på billedet og klik på Afslut kalibrering. Bemærk baren værdi, og klik derefter på OK.
    2. Vælg LV fra farvede hjerte billede (figur 1B). Brug Multiple segment værktøjet. Vælg LV punkt for punkt, og derefter højreklik Kopier / Sæt ind overalt.
    3. Måle tykkelsen ar og septum hjælp af måling enkelt segment (figur 1C
    4. Registrer automatisk LV hulrum, infarkt, og LV områder ved hjælp af den automatiske område måleværktøj i RGB-tilstand (Figur 1D).
      1. Klik på værktøjet. Aktiver Kun Grænser og Sammenhængende i RGB-tilstand. Endelig skal du klikke inde i området af interesse at opdage det. Brug om nødvendigt præcisionsværktøj.
  3. Beregn infarktstørrelse som forholdet mellem infarktet område af LV-området.
  4. Beregn ekspansion indeks som følger: [LV hulrum område / hele LV-området] / [infarkt tykkelse / septum tykkelse], med hele LV området, herunder både LV hulrum og LV væv områder.
  5. Endelig beregne en "gennemsnitlige" for hvert hjerte som følger: [gennemsnitlig ekspansion indeks fra de infarkt dias] * [Antal infarkt dias / Samlet antal dias].

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Seks uger efter LAD ligering blev hjerter høstet fra Lewis-rotter. 2 mm vævssnit blev opnået fra apex til basis. En TTC farvning procedure blev udført for at visualisere infarkt område, som vises i hvidt, og den sunde myocardium, som vises i rød (figur 2). Afhængigt af stedet for ligering af LAD, den infarktstørrelse varierer. For store MI blev transmurale infarkter observeret fra apex til basis (figur 2A). Mindre infarkter præsenteret hvid infarkt væv synlig fra apex til midtersektionen af hjertet (figur 2B). For små, ikke-transmurale infarkter blev fibrøst væv observeret på kun en eller to sektioner fra toppunktet (figur 2C).

Tynde 5 um snit fra hvert hjerte skive blev skåret og farvet med Masson-Goldner trichrom. Billeder af hele tværsnittet af hjertet varerhvervet under et stereomikroskop (figur 3). Sundt væv optrådte i rødt og bindevæv i grøn. Skelnen mellem hver farve kan let udføres med en billedopløsning analysesoftware.

Tykkelserne af infarktet og septum, LV hulrum området og LV samlede areal blev målt og beregnet til at beregne EI (tabel 1). EI blev beregnet for hver sektion. Afhængig af hjertet størrelse, antallet af sektioner varierede fra 5 til 7. For hvert hjerte, EI er et gennemsnit af EI fra hver sektion. EI var på mellem 0 til 0,278 og afslørede en bred vifte af myokardieinfarkter, med en CV på 58%. Til sammenligning var gennemsnittet af den procentdel af infarkt af LV var på mellem 0 til 0,241, med en CV på 54% (tabel 1). EI og den procentdel af infarkt blev signifikant korreleret; en ikke-parametrisk Spearman-analyse gav en korrelationskoefficient r-value af 0,491 (p = 0,005) (figur 4A). For tæt EI værdier, såsom 0,11 og 0,13, den procentdel af infarkt varierede fra 5,8 til 24,1%.

Hjertefunktion blev vurderet ved høj opløsning ekkokardiografi ved 6 uger efter LAD ligering på bedøvede dyr og blev udført en gang før hjerte høst. EI beregnet ud fra histologiske kvantificering korreleret signifikant med EF. En ikke-parametrisk Spearman-analyse gav en R-værdi på -0,709 (p = 0,005) (figur 4B).

figur 1
Figur 1. Trin-for-trin Illustration af Brug af software Image Analysis. Automatisk afgrænsning farve og længde målinger omfattede flere trin. A. Kalibrering: Omfanget af billedet blev oprettet. Et billede afen lineal blev taget i samme stand som hjertet sektion. Længden af ​​linealen blev markeret til at definere omfanget omregningsfaktor. Konvertering fra pixel til millimeter blev udført. B. LV valg: Den højre hjertekammer blev skåret ud af billedet ved hjælp af markeringsværktøjet af softwaren. C. LV væg og septum tykkelse måling: Den enkelt måling værktøj blev anvendt til at kvantificere afstande. Skalaen søjler indikerer 3 mm. D. Automatisk området kvantificering: Automatisk farve afgrænsning blev udført i RGB-tilstand. Auto-selektion blev udført efter valg auto-valgtilstanden. Farve-udvælgelse kan ændres; investigator udført visuel kontrol af den udvalgte grønne væv og forøget eller reduceret det valgte område efter behov. Skalaen søjler indikerer 3 mm. Klik her for at se en større version af dette tal. Figur 2
Figur 2. Heart snit farvet med TTC. 2 mm sektioner af det samlede hjerte blev farvet med TTC. Sund myocardium optrådte i røde og fibrotiske væv i hvidt. Tre hjerter med forskellige infarkt størrelser præsenteres. A: stor transmural infarkt, B: medium infarkt, og C: lille infarkt. Skalaen søjler indikerer 3 mm. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 3
Figur 3. Heart snit farvet med Masson-Goldner Trichrome. 5-um snit blev skåret fra hver hjerte sektion opnået 6 uger efter LAD ligering. Stained sektioner blev placeret under et stereomikroskop. Billeder af den fulde snit blev opnået med 15X forstørrelse. Den repræsentativt billede, opnået på niveau med de papillære muskler (tilbage pil), viser sund myocardium i røde og fibrøse væv i grønt. Billedet viser den automatiske farve afgrænsning med billedanalyse-software, samt det sted, hvor tykkelsen af ​​infarkt og septum blev målt (sorte linjer). Skalaen søjler indikerer 3 mm. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 4
Figur 4. Korrelation Mellem Expansion Index (EI), og den procentdel af infarktet Related til LV (A) eller Uddrivningsfraktion (EF) (B). Den lineære regression (sort linie) og 95% betroNCE intervaller (stiplede linjer) er repræsenteret. Den ikke-parametriske Spearman r-værdi er rapporteret. A: Den procentdel af infarkt og EI signifikant korreleret (r = 0,567; p = 0,003). Den infarkt ekspansion index (EI) blev beregnet som [LV hulrum område / hele LV-området] / [infarkt tykkelse / septum tykkelse]. Hele LV område blev målt som den kombinerede LV hulrum og LV vævsområde. Den procentdel af infarkt blev beregnet som LV vævsareal / infarkt vævsområde. B: Funktionen vurderes ved 6 uger efter LAD ligation ved hjælp af en høj opløsning ekkokardiografi signifikant korreleret med EI. Begge parametre var signifikant korreleret (r = -0,709, p = 0,005). Klik her for at se en større version af dette tal.

tabel 1
Tabel1: Parametre Målt på Masson Goldner-farvede Heart Sektioner.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Kritiske trin i protokollen

Fibrøst væv kan præcist vurderes i en kronisk MI rotte model med systematisk prøvetagning af den høstede hjerte og image analyser af trikromatiske-farvede histologiske snit opnået fra basen til spids. To skridt er særligt vigtige for en vellykket implementering af protokol. Først anvendelsen af ​​KCl til hjertet høsten opnår hjertemusklen, der skal holdes i en afslappet tilstand. Dette trin er vigtigt for sammenligning af infarkt dimensioner fra forskellige hjerter. For det andet, overnight fiksering af sektionen i Bouin-opløsning er kritisk for at opnå lyse trichromfarvning.

Ændringer og fejlfinding

Fravær af farvning kan skyldes vanskeligheder under optagelsen af ​​afsnittet i Bouin løsning, såsom reduceret inkubationstid eller udløbet Bouin løsninger. Den TTC farvning er valgfrit og could anvendes til at visualisere infarkt størrelse i en hurtig, men ikke-kvantitativ måde. Det er vigtigt at bemærke, at TTC kan udføres for det samme hjerte forud for medtagelse i enten OLT eller paraffin.

Begrænsninger af teknikken

Den foreliggende fremgangsmåde tillader én at vælge mellem paraffinindlejrede og kryo-konserverede hjerte sektioner og kan anvendes til immunfarvning. Alligevel hele hjertet skal sektioneret, og vævet kan ikke bruges til yderligere analyse, såsom western blot eller RT-PCR for protein og genekspression analyser.

Betydningen af Teknik med Respekt for eksisterende / Alternative Metoder

Fordi kvantificering procedurer og især, at antallet af analyserede strækninger varierer meget mellem undersøgelser, der definerer det minimale antal sektioner, der er nødvendige for at opnå en pålidelig kvantificering er altafgørende. Takagawa et al. 9 viste, at pålideligheden er maksimeret med et minimalt hjerte skive antal 6 - 8 sektioner af hele hjertet af en mus under anvendelse af 1-mm-intervaller. I nærværende protokol, 5 - blev 7 sektioner af hele rotte hjerte opnås ved udførelse af 2-mm tyk sektionering. Endvidere 2 mm sektioner er en standard og ofte anvendt størrelse for TTC-farvning. Derudover systemiske prøveudtagning er enkle at anvende og præsenterer en periodisk aspekt, der tillader karakterisering af hele hjertet.

Fra hver af de 2-mm skiver blev 5-um snit skåret og farvet. For hver 5-um snit blev kvantificering af septum tykkelse, ar tykkelse og længde, total ar areal, det samlede LV-området, og LV hulrum område udføres, og gennemsnittet af hver parameter blev beregnet for hvert dyr. Vi brugte Masson-Goldner farvning af tynde sektioner snarere end TTC farvning af 2 mm sektioner for at forbedre nøjagtigheden af ​​både den automatiske farve påvisning og vurderinglængder. Faktisk TTC-farvning er hovedsagelig interessant for tidlig fase eller iskæmiske reperfusion modeller til påvisning af risikoområdet 8,14, snarere end til den kroniske fase.

MI induceres fra LAD ligering kan variere efter ligaturen site. I præsenterede kronisk infarkt model blev ligering størrelse bevidst ændret for hvert dyr, og resultater for forskellige betingelser for infarktstørrelse og remodeling var til stede efter 6 uger. Følgelig viste den beregnede EI en bred vifte af myokardieinfarkter og støttet forskellen observeret i hjertefunktionen korreleret med EF. Når omfattende udtynding af infarktramt segment opstod, blev området mellem infarktet stærkt reduceret i tilfælde af transmural fibrose. I denne tilstand, som definerer infarktstørrelse ved at beregne arealet af infarkt væv i forhold til hele LV (udtrykt i procent af LV) ville svagt vurdere omfanget af infarktet. Manglen på consideration for remodeling-induceret LV dilatation og ekstrem udtynding af infarkt LV væg kan undervurdere infarkt størrelse, mens en infarkt stede i fravær af muren udtynding ville overvurdere infarkt størrelse, som repræsenteret ved værdierne uden for 95% sikkerhed interval. Denne mangel kunne elimineres gennem beregning af EI.

Det er blevet vist, at LV formændring er positivt korreleret med EI og væg udtynding 15, 16. Selvom EI kan være en indikator for LV-funktion, er det vigtigt at understrege, at ekkokardiografi og histologiske analyser er komplementære metoder til at vurdere den myokardieinfarkt på det funktionelle og vævsniveau hhv. Ekkokardiografi giver langsgående undersøgelse, og histologiske analyser giver grundlæggende end-point analyser, der tillader yderligere kvantificering af LV morfologi, såsom vægtykkelse.

Fremtidige Programmer eller vejvisning agtenis Mastering Denne teknik

Den systemiske prøveudtagning af hele hjertet og beregning af EI er af særlig interesse ved vurdering kronisk MI. Desuden vil denne fremgangsmåde være egnet til vurdering af behandlingseffekt, især til nye behandlinger, såsom celle- og matrix-baserede behandlinger, der skal reducere infarktstørrelse og remodeling. Pålidelig kvantificering af infarkt ekspansion er af afgørende betydning for sammenligninger mellem ikke-behandlede og behandlede dyr, som endepunkt histologisk analyser hinder for sammenligning af infarkt størrelse før og efter behandling.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acrylic rat heart matrix 2 mm 72-5015 Harvard Appartus
Inspira advanced volume controlled ventilator Harvard Apparatus 557058
Catheter Insyte 14 G BD 381267
O.C.T BDHA361603E VWR
TTC T8877-10G Sigma Aldrich
Mayer hematoxylin MHS32-1L Sigma Aldrich
Acid Fuchsin
CI 42685
F8129-50G Sigma Aldrich
Ponceau Xylidin
CI 16150
P2395-25G Sigma Aldrich
Orange G
CI 16230
O3756-100G Sigma Aldrich
Light green
CI 42095
L5382-25G Sigma Aldrich
KCl P9333-500G Sigma Aldrich
Xylol 10315083 HoneyWell
Ethanol absolute 10303990 HoneyWell
2-methylbutane M32631-1L Sigma Aldrich
Stereogical microscope SM2800 Nikon
Formaldehyde 99340 Reactolab
Embedding cassette K113.1 Carl Roth
Bersoft Image measurement Software Bersoft.com Licensed software

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Amsterdam, E. A., et al. AHA/ACC Guideline for the Management of Patients with Non-ST-Elevation Acute Coronary Syndromes: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 64, e139-e228 (2014).
  2. Konstam, M. A., Kramer, D. G., Patel, A. R., Maron, M. S., Udelson, J. E. Left ventricular remodeling in heart failure: current concepts in clinical significance and assessment. JACC Cardiovasc Imaging. 4, 98-108 (2011).
  3. Frobert, A., et al. Prognostic Value of Troponin I for Infarct Size to Improve Preclinical Myocardial Infarction Small Animal Models. Front Physiol. 6, 353 (2015).
  4. Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Myocardial infarct size and area at risk assessment in mice. Exp Clin Cardiol. 17, 268-272 (2012).
  5. Guex, A. G., et al. Plasma-functionalized electrospun matrix for biograft development and cardiac function stabilization. Acta Biomater. 10, 2996-3006 (2014).
  6. Landa, N., et al. Effect of injectable alginate implant on cardiac remodeling and function after recent and old infarcts in rat. Circulation. 117, 1388-1396 (2008).
  7. Valente, M., et al. Optimized heart sampling and systematic evaluation of cardiac therapies inmouse models of ischemic injury: Assessment of cardiacremodeling and semi-automated quantification of myocardial infarctsize. Curr. Protoc. Mouse Biol. 5, 359-391 (2015).
  8. Csonka, C., et al. Measurement of myocardial infarct size in preclinical studies. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 61, 163-170 (2010).
  9. Zornoff, L. A., Paiva, S. A., Minicucci, M. F., Spadaro, J. Experimental myocardium infarction in rats: Analysis of the model. Arq. Bras Cardiol. 93, 434-440 (2009).
  10. Lichtenauer, M., et al. Myocardial infarct size measurement using geometric angle calculation. Eur J Clin Invest. 44, 160-167 (2014).
  11. Lutgens, E., et al. Chronic myocardial infarction in the mouse: cardiac structural and functional changes. Cardiovasc Res. 41, 586-593 (1999).
  12. Frobert, A., Valentin, J., Cook, S., Lopes-Vicente, L., Giraud, M. N. Cell-based therapy for heart failure in rat: double thoracotomy for myocardial infarction and epicardial implantation of cells and biomatrix. J Vis Exp. e51390 (2014).
  13. Takagawa, J., et al. Myocardial infarct size measurement in the mouse chronic infarction model: comparison of area- and length-based approaches. J Appl Physiol (1985). 102, 2104-2111 (2007).
  14. Fishbein, M. C., et al. Early phase acute myocardial infarct size quantification: validation of the triphenyl tetrazolium chloride tissue enzyme staining technique. Am Heart J. 101, 593-600 (1981).
  15. Weisman, H. F., Bush, D. E., Mannisi, J. A., Weisfeldt, M. L., Healy, B. Cellular mechanisms of myocardial infarct expansion. Circulation. 78, 186-201 (1988).
  16. Mannisi, J. A., Weisman, H. F., Bush, D. E., Dudeck, P., Healy, B. Steroid administration after myocardial infarction promotes early infarct expansion. A study in the rat. J Clin Invest. 79, 1431-1439 (1987).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics