Histologisk Kvantifisering av kronisk hjerteinfarkt i rotter

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Valentin, J., Frobert, A., Ajalbert, G., Cook, S., Giraud, M. N. Histological Quantification of Chronic Myocardial Infarct in Rats. J. Vis. Exp. (118), e54914, doi:10.3791/54914 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Introduction

Hjerteinfarkt (MI) er en ledende årsak til død og uførhet på verdensbasis. Koronar hjertesykdom er den viktigste årsaken; MI skyldes iskemi rad til koronare hendelser som okklusjon. Når reperfusjon ikke utføres innenfor de første 6 timer, induserer irreversibel ischemi myokardial nekrose. Hos pasienter, karakterisering av MI er avhengig av ulike diagnostiske verktøy, inkludert kliniske tegn, EKG, vurdering av plasmanivået av biomarkører, ekkokardiografi, MR imaging, og histologiske analyser ett. Akutt og kronisk MI klassifiseres som to forskjellige faser av skade i henhold til tidspunktet for myokardial nekrose i forhold til tidspunktet for koronar okklusjon. Den akutte fasen, forekommer i løpet av de første 7 dagene, er assosiert med tap av cardiomyocytes, omfattende betennelse, og rekruttering av fibroblaster. Den sub-akutte fase, karakterisert ved helbredelse av hjertevevet og dannelsen av et arr, oppstårmellom 1 og 4 - 6 uker. Utvidelse av infarkt, ventrikkel veggen tynning, og ventrikkel dilatasjon karakterisere kronisk fase. Omfattende ombygging av venstre hjertekammer gradvis fører til alvorlig hjertesvikt to.

MI fremkalt ved permanent venstre fremre nedstigende arterie (LAD) ligering representerer standard gnager-modell med kronisk hjerteinfarkt. Koronar ligaturinnstillingene ligner coronary okklusjon. Størrelsen på infarkt avhenger av området av ligaturen. Karakterisering av hjerteinfarkt iskemisk skade i en gnager modellen er klassisk utført ved hjelp av biomarkører plasmanivå, for eksempel troponin I og T 3, ekkokardiografi, MR og histologi 4,5. Biomarkør nivåer er korrelert med graden av kardiomyocytt død. Ekkokardiografi evaluerer venstre ventrikkel nyrefunksjon som følge av regionale veggbevegelse unormalt. I tillegg er ikke-invasive avbildningsteknikker, slik som MRI eller høyoppløseligekkokardiografi, tillate vurdering av reduksjonen i veggen bevegelse, vil volumet av arret område med redusert perfusjon og levedyktig hjertemuskelen, og veggen tynning. LV dimensjoner tillater presis evaluering av infarktstørrelsen. Endelig kan kvantifisering av levedyktige og døde hjertemuskelen bli utført post mortem ved hjelp av bestemte flekker av histologiske snitt av høstet hjerter og tillater verifisering av infarktstørrelse (IS). En annen viktig funksjon er evalueringen av infarkt utvidelse indeks (EI) 6. EI er forbundet med transmuralt infarkt og starter i løpet av de første 3 dager. EI er karakterisert ved en progressiv reduksjon i veggtykkelse, en økning i hulrom størrelse LV, og påfølgende endringer i LV form.

For å bedømme den terapeutiske effekt av nye behandlinger - i særdeleshet, den regenerative strategier basert på celler, matriser, og genavlevering-nøyaktig vurdering av MI i gnagere er av største betydning.Når den måles på et enkelt tverrsnitt oppnådd ved den papillære muskelnivået, kan IS størrelse bli forspent på grunn av den store variasjon som finnes i infarkt utvikling følgende LAD ligering; apex infarkt kan være så occulted. Viktigere, har mer nøyaktige metoder til bestemmes MI størrelse blitt beskrevet for mus 7-9 eller rotter 10. Likevel er ikke tilstrekkelig for å nøyaktig kvantifisere LV ombygging eller terapeutisk induserte reduksjoner (eller preventions) av ombygging. Faktisk er det ofte uttrykt som en prosent av total LV volum vurderes tverrsnitt av hjertet. Selv om denne metoden er gyldig for akutt MI, forblir tynning av LV veggen som oppstår under ombygging under-evaluert 11,12. En fullstendig morfometrisk kvantifisering av infarktstørrelse og strukturelle endringer bør kvantifisere flere parametere, slik som endokardiale og epikardiale lengder og diametre, samt av infarktet og friske områder. Vi beskriver en metodisk ca.oach å nøyaktig vurdere MI og ombygging i en kronisk rottemodell.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle dyr fikk human behandling i samsvar med den europeiske konvensjonen om Animal Care. Kirurgiske prosedyrer ble utført i samsvar med den sveitsiske Dyrevernloven etter å ha innhentet tillatelse fra Statens veterinærkontoret, Fribourg, godkjent av den sveitsiske føderale veterinærkontoret, Sveits.

1. Hjerte Høsting

MERK: Alle kirurgiske inngrep ble utført under isoflurananestesi. Arbeidet ble gjort for å redusere dyrs lidelser. Særlig alle dyr som mottok en subkutan injeksjon av 0,1 mg / kg buprenorfin pre-anestesi. Den kirurgiske protokoll for inducting hjerteinfarkt har tidligere blitt beskrevet andre steder 13.

  1. Utfør en sternotomi på en myocardially infarkt dyr under anestesi (intubert dyr, 2,5% isofluran, riktig anestesi bekreftet av pote klype refleks).
    1. Åpne dyret ved å skjære huden og deretter musklenemed kirurgiske saks. Skjær ribbeina på venstre og høyre, og deretter fjerne brystet.
    2. Fjern de voksn igjen etter den forrige operasjonen (LAD ligation). Skjær aorta og fjern hjertet. Sette vevet i 1 M KCl (i PBS), og deretter vaske det med PBS.

2. Tissue Forberedelse

  1. Sett infarkt hjertet lengderetningen i en akryl rottehjerte matrise. Hold det ved -20 ° C i 1 time.
  2. Skjær hjertet direkte i matrisen ved hjelp av et barberblad med en tverrgående. Sørg for hver skive er 2 mm tykk. Skjær ca 5-7 lysbilder for hvert hjerte (basert på ombygging nivå); dette kalles systematisk prøvetaking.
  3. På dette trinnet, utføring av 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid (TTC) farging er valgfritt (beholde orienteringen av hjerte skiver basis-til-spiss).
    1. Inkuber i 1% TTC i PBS i 50 min ved 37 ° C. Inkuber det i 4% paraformaldehyd (PFA) i 20 min til 1 time. Sett delene between to glassplater med 2 mm spacere og ta bilder med en stereological mikroskop kombinert med et kamera på 15X forstørrelse.
      FORSIKTIGHET! Paraformaldehyde er giftig.
  4. Slide frysing (1 st opsjon)
    1. Sette hvert lysbilde i en plastisk form (10 x 10 x 5 mm) med monteringsmedium for cryotomy (optimal skjæring temperatur, OCT), opprettholde den orientering (plasser apex rettede side av seksjonen ned på bunnen av formen). Fryse blokker med 2-methylbutane damper under flytende nitrogen kjøling for 10 - 15 min. Til slutt, lagre vev ved -80 ° C.
  5. Paraffinization (2 nd opsjon)
    1. Plasser hver side i å bygge inn kassetter (opprettholde orienteringen ved å plassere spissrettede side av seksjonen ned på bunnen av kassetten) og deretter i 4% PFA i 24 timer. Sett den i en vev prosessor maskin over natten.
      1. Inkuber det i etanol 70% i 2 timer. Inkuber det i ethanol 95% i 2 timer. Inkuber det i etanol 100% i 3 timer. Inkuber det i xylol i 4 timer. Inkuber det i parafin (smeltet ved 60 ° C i en ovn) i 5 timer. Til slutt, sørg blokker ved å bygge hvert hjerte lysbilde i parafin.

3. Masson-Goldner Trichrome Farging

  1. Gjør vevssnitt fra parafinblokker med en manuell mikrotom (tykkelse: 5 mikrometer) eller fra OCT blokker med en cryostat innstilt på -18 ° C (tykkelse: 7 pm).
  2. Flekk ett lysbilde fra hvert hjerte del for hver rotte (3 - 4 tverrgående snitt per lysbilde) med Masson-Goldner Trichrome flekker (se vedlegg).
    MERK: Start fra dette trinnet for parafinsnitt.
    1. Smelt lysbilder på 60 ° C i en ovn. Under en avtrekkshette, deparaffinize dem i xylen to ganger i 10 minutter hver. Rehydrere dem i 100% etanol, 95% etanol, 70% etanol, og destillert vann i 3 minutter hver.
      MERK: Start fra dette trinnet for cryosections.
    2. Fest dem i Bouin løsning over natten. Deretter skyll dem i rennende vann for 10 - 15 min. Skylle dem i destillert vann. Inkubere dem i Mayers hematoxylin i 3 min.
    3. Fjern lysbilder og la dem i destillert vann i 5 min. Deretter, inkuber dem i syrefuksin-Ponceau i 5 min. Skylle dem i 1% eddiksyre i 1 min.
    4. Deretter inkuber dem i fosfomolybdensyre Orange G i 1 min. Skylle dem i 1% eddiksyre i 1 minutt, inkuber dem i lys grønt fargestoff i 10 minutter, og skylle dem i 1% eddiksyre i 1 min.
    5. Dehydrere dem i 70% etanol (30 sek), 95% etanol (30 sek), og 100% etanol (5 min). Sett en dråpe av et harpiksholdig monteringsmedium på vevssnitt, dekk dem med Dekk, og la dem tørke.

4. infarktstørrelse Analysis

  1. Acquire ett bilde fra hvert lysbilde på en stereomikroskop (15x forstørrelse) kombinert med et kamera. Fotografere en linjal med samme innstillings.
  2. Bruker programvare for bildeanalyse for å måle arret tykkelse i midten av infarkt, septum tykkelse, venstre ventrikkel (LV) hulrom område, infarktområdet, og vevet området LV ved hjelp av.
    1. Sett skala med linjal bilde (figur 1A).
      1. Klikk på Målinger velg deretter Set omregningsfaktor. Tegn en linje på kalibreringslinjen. Høyreklikk på bildet og klikk på End kalibrering. Merk baren verdi, og klikk deretter OK.
    2. Velg LV fra farget hjerte bilde (figur 1B). Bruk Multiple segmentet verktøyet. Velg LV punkt-for-punkt, og deretter høyreklikk Kopier / Lim inn hvor som helst.
    3. Mål arret og septum tykkelse ved hjelp av ett segment måleverktøy (figur 1C
    4. Automatisk oppdage LV hulrom, infarkt, og LV områder bruker automatisk området måleverktøy i RGB-modus (figur 1D).
      1. Klikk på verktøyet. Aktiver Bare Borders og Sammenhengende i RGB-modus. Til slutt klikker du inne i området av interesse å oppdage det. Bruk om nødvendig presisjon verktøy.
  3. Beregn infarktstørrelsen som forholdet mellom infarktområdet til LV-området.
  4. Beregn utvidelse indeksen som følger: [LV hulrom området / hele LV-området] / [infarktet tykkelse / septum tykkelse], med hele LV-området, inkludert både LV hulen og vev områder LV.
  5. Endelig beregne en "gjennomsnittlig" for hvert hjerte som følger: [gjennomsnittlig utvidelse indeksen fra infarkt lysbilder] * [Antall infarcted lysbilder / Totalt antall lysbilder].

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Seks uker etter LAD ligation, ble hjerter høstet fra Lewis rotter. 2 mm vevssnitt ble oppnådd fra toppen til bunnen. En TTC fargeprosedyre ble utført for å visualisere infarktområdet, som vises i hvitt, og den friske myokard, som vises i rødt (figur 2). Avhengig av området av ligering av LAD varierer infarktstørrelsen. For store MI, ble transmurale infarkter observert fra apex til bunnen (figur 2A). Mindre infarkter present hvit infarkt vev synlig fra apex til midt-delen av hjertet (figur 2B). For små ikke-transmurale infarkter, ble fibrotisk vev observert kun på en eller to seksjoner fra toppunktet (figur 2C).

Tynne 5-mikrometer seksjoner fra hvert hjerte skive ble kuttet og farget med Masson-Goldner Trichrome. Bilder av hele tverrsnittet av hjertet varervervet under et stereomikroskop (figur 3). Friskt vev dukket opp i rødt og bindevevet i grønt. Diskriminering mellom hver farge kan lett utføres med en bildeanalyse programvare.

Tykkelsene av infarktet og septum, LV hulrom området og LV totale areal ble målt og beregnet til å beregne EI (tabell 1). EI ble beregnet for hver seksjon. Avhengig av hjertestørrelse, antall seksjoner varierte fra 5 til 7. For hvert hjerte, er det EI et gjennomsnitt av de EI fra hver seksjon. EI varierte 0 til 0,278, og viste et bredt spekter av myokardiale infarkter, med en CV på 58%. Til sammenligning, er gjennomsnittet av den prosentandel av infarktet og LV varierte 0 til 0,241, med en CV på 54% (tabell 1). EI og andelen av infarktet ble signifikant korrelert; en ikke-parametrisk analyse Spearman anordnet en korrelasjonskoeffisient r-value av 0,491 (p = 0,005) (figur 4A). For nære EI verdier, for eksempel 0,11 og 0,13 prosentandelen av infarkt varierte 5,8 til 24,1%.

Hjertefunksjon ble vurdert ved høy oppløsning ekkokardiografi 6 uker etter LAD ligation på bedøvede dyr og ble utført en gang før hjertet høsting. EI beregnet ut fra histologisk kvantifisering korrelerte signifikant med EF. En ikke-parametrisk analyse Spearman ga en r-verdi på -0,709 (p = 0,005) (figur 4B).

Figur 1
Figur 1. trinn-for-trinn Illustrasjon av bruk av Image Analysis Software. Automatisk fargeavgrensnings og lengdemålingene inkluderte flere trinn. A. Kalibrering: Omfanget av bildet ble satt opp. Et bilde aven linjal ble tatt i samme stand som hjertet delen. Lengden av linjalen ble merket for å definere omfanget omregningsfaktor. Konvertering fra pixel til millimeter ble utført. B. LV valg: Den høyre ventrikkel ble kuttet ut av bildet ved hjelp av markeringsverktøy av programvaren. C. LV vegg og septum tykkelse måling: Singelen måleverktøyet ble brukt til å kvantifisere avstander. Skalaen Linjene indikerer 3 mm. D. Automatisk område kvantifisering: Automatisk farge avgrensning ble utført i RGB-modus. Auto-utvalget ble utført etter å ha valgt automatisk valgmodus. Color-baserte utvalget kan endres; utprøver utført visuell kontroll av den valgte grønne vev og økt eller redusert valgt region som er nødvendig. Skalaen Linjene indikerer 3 mm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet. Figur 2
Figur 2. Hjerte §§ Farget med TTC. 2 mm-deler av fullt hjerte ble farget med TTC. Sunn myokard dukket opp i røde og fibrotiske vev i hvitt. Tre hjerter med forskjellige infarkt størrelser presenteres. A: stor transmuralt infarkt, B: medium infarktet, og C: lite infarkt. Skalaen Linjene indikerer 3 mm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 3
Figur 3. Hjerte §§ farget med Masson-Goldner Trichrome. 5-mikrometer seksjoner ble kuttet fra hvert hjerte seksjon fått 6 uker etter LAD ligering. Stastilt seksjonene ble plassert under et stereomikroskop. Bilder av fulle seksjoner ble oppnådd med 15X forstørrelse. Den representativt bilde, hentet på nivå med papillemusklene (pil tilbake), viser sunn hjertemuskelen i røde og fibrotiske vev i grønt. Bildet illustrerer automatisk farge avgrensning med bildeanalyse programvare, samt stedet hvor infarktet og septum tykkelse ble målt (svarte linjer). Skalaen Linjene indikerer 3 mm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 4
Figur 4. Sammenheng mellom ekspansjons Index (EI) og andelen av infarkt Relatert til LV (A) eller ejeksjonsfraksjon (EF) (B). Den lineære regresjon (svart linje) og 95% betroNCE intervaller (stiplede linjer) er representert. Den ikke-parametrisk Spearman r-verdien er rapportert. A: Prosentandelen av infarkt og EI signifikant korrelert (r = 0,567, p = 0,003). Infarkt utvidelse indeks (EI) ble beregnet som [LV hulrom området / hele LV-området] / [infarktet tykkelse / septum tykkelse]. Hele LV Området ble målt som den kombinerte LV hulrom og vev område LV. Prosentandelen av den infarkt ble beregnet som LV vevsområdet / infarkt vev område. B: Funksjonen vurdert til 6 uker etter LAD ligering ved hjelp av en høy oppløsning ekkokardiografi signifikant korrelert med EI. Begge parametere var signifikant korrelert (r = -0,709, p = 0,005). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Tabell 1
Bord1: Parametere Målt på Masson Goldner-farget hjerte paragrafer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Kritiske trinn i protokollen

Fibrotisk vev kan være nøyaktig vurderes i en kronisk MI rottemodell ved hjelp av systematisk prøvetaking av høstet hjerte og bildeanalyse av trichromatic-farget histologiske snitt hentet fra basen til apex. To trinn er spesielt viktig for en vellykket gjennomføring protokoll. Først, bruk av KCl for hjerte høsting tillater hjertemuskelen til å bli opprettholdt i en avslappet tilstand. Dette trinnet er viktig for sammenligninger av infarkt dimensjoner fra ulike hjerter. For det andre er det over natten fiksering av seksjonen i Bouin oppløsning kritisk for å oppnå lyse Trichrome farging.

Modifikasjoner og feilsøking

Fravær av flekker kan skyldes problemer under fiksering av seksjonen i Bouin løsning, som redusert inkubasjonstid eller utløpt Bouin løsninger. TTC farging er valgfritt og could anvendes for å visualisere infarktstørrelsen i en hurtig, men ikke-kvantitativ måte. Det er viktig å merke seg at TTC kan utføres på samme hjerte før inkludering i enten oktober eller parafin.

Begrensninger av teknikken

Den foreliggende løsning tillater at man kan velge mellom parafininnstøpte og kryo-konservert hjerteseksjoner, og kan brukes til farging. Ikke desto mindre har den fulle hjerte som skal seksjoneres, og vevet kan ikke bli benyttet for videre analyse, slik som western blot eller RT-PCR for protein og genekspresjon analyser.

Betydningen av Technique For eksisterende / alternative metoder

Fordi kvantifisering prosedyrer og, i særdeleshet, antall analyserte seksjoner varierer mye mellom undersøkelser, definere minimalt antall deler er nødvendig for å få en pålitelig kvantifisering er viktig. Takagawa et al. 9 viste at pålitelighet er maksimert med en minimal hjerte skive nummer 6 - 8 deler av hele hjertet av en mus ved hjelp av en mm intervaller. I den foreliggende protokoll, 5 - ble syv deler av hele rottehjerte oppnås når du utfører 2 mm tykk seksjonering. Videre er 2 mm seksjoner er en standard og ofte brukt størrelse for TTC farging. I tillegg er den systemiske sampling enkel å bruke og gir en periodisk aspekt som tillater karakterisering av hele hjertet.

Fra hver av de to-mm skiver, ble 5-mikrometer seksjoner kuttet og farget. For hver 5-um-delen ble kvantifisering av septum tykkelse, arr tykkelse og lengde, total arr område, total LV område, og LV hulrom område utført, og gjennomsnittet av hver parameter ble beregnet per dyr. Vi brukte Masson-Goldner farging av tynne seksjoner i stedet for TTC farging av 2 mm seksjoner for å forbedre nøyaktigheten av både den automatiske farge påvisning og vurderingav lengder. Faktisk, er TTC fargingen for det meste interessant for tidlig-fase eller iskemisk reperfusjon modeller for påvisning av området i fare 8,14, i stedet for det kroniske stadium.

MI indusert fra LAD ligation kan variere avhengig av ligatur nettstedet. I det presenterte kroniske infarkt modell, ble ligeringsstørrelsen hensikt modifisert for hvert dyr, og resultater for ulike forhold av infarktstørrelse og remodellering var tilstede etter 6 uker. I henhold til den beregnede EI viste et bredt spekter av myokardiale infarkter og støttet forskjellen observert i hjertefunksjonen korrelert med EF. Når omfattende fortynning av infarkt segmentet funnet sted, ble arealet av infarkt sterkt redusert i tilfelle av transmuralt fibrose. I denne tilstand avgrenser de infarktstørrelsen ved å beregne arealet av infarkt vev i forhold til hele LV (uttrykt som en prosentandel av LV) ville svakt vurdere omfanget av infarkt. Mangelen på consideration for ombygging-indusert LV dilatasjon og ekstrem fortynning av infarkt LV vegg kan undervurdere infarktstørrelsen, mens en infarkt stede i fravær av veggen tynning ville overvurdere infarktstørrelsen, representert ved verdiene utenfor 95% konfidensintervall intervall. Denne ulempe kan elimineres ved beregningen av EI.

Det har vist seg at den LV formendring er positivt korrelert med det EI og veggen tynning 15, 16. Selv om EI kan være en prediktor for LV-funksjon, er det viktig å understreke at ekkokardiografi og histologiske analyser er komplementære fremgangsmåter for å vurdere myokardial infarkt ved den funksjonelle og vev-nivå, henholdsvis. Ekkokardiografi kan longitudinell studie, og histologiske analyser gir grunnleggende endepunkts analyser som gir ekstra kvantifisering av LV morfologi, for eksempel veggtykkelse.

Fremtidige søknader eller Veibeskrivelse akteruter å mestre denne teknikken

Den systemiske prøvetaking av hele hjertet og beregning av EI er av særlig interesse ved vurdering av kronisk MI. I tillegg vil denne metoden være egnet for evaluering av behandlingseffekt, særlig for nye behandlinger, for eksempel celle- og matrisebaserte behandlinger som tar sikte på å redusere infarktstørrelse og ombygging. Pålitelig kvantifisering av infarkt utvidelse er av avgjørende betydning for sammenligninger mellom ikke-behandlede og behandlede dyr, som ende-punkt histologiske analyser utelukker sammenligning av infarktstørrelse før og etter behandling.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acrylic rat heart matrix 2 mm 72-5015 Harvard Appartus
Inspira advanced volume controlled ventilator Harvard Apparatus 557058
Catheter Insyte 14 G BD 381267
O.C.T BDHA361603E VWR
TTC T8877-10G Sigma Aldrich
Mayer hematoxylin MHS32-1L Sigma Aldrich
Acid Fuchsin
CI 42685
F8129-50G Sigma Aldrich
Ponceau Xylidin
CI 16150
P2395-25G Sigma Aldrich
Orange G
CI 16230
O3756-100G Sigma Aldrich
Light green
CI 42095
L5382-25G Sigma Aldrich
KCl P9333-500G Sigma Aldrich
Xylol 10315083 HoneyWell
Ethanol absolute 10303990 HoneyWell
2-methylbutane M32631-1L Sigma Aldrich
Stereogical microscope SM2800 Nikon
Formaldehyde 99340 Reactolab
Embedding cassette K113.1 Carl Roth
Bersoft Image measurement Software Bersoft.com Licensed software

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Amsterdam, E. A., et al. AHA/ACC Guideline for the Management of Patients with Non-ST-Elevation Acute Coronary Syndromes: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 64, e139-e228 (2014).
  2. Konstam, M. A., Kramer, D. G., Patel, A. R., Maron, M. S., Udelson, J. E. Left ventricular remodeling in heart failure: current concepts in clinical significance and assessment. JACC Cardiovasc Imaging. 4, 98-108 (2011).
  3. Frobert, A., et al. Prognostic Value of Troponin I for Infarct Size to Improve Preclinical Myocardial Infarction Small Animal Models. Front Physiol. 6, 353 (2015).
  4. Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Myocardial infarct size and area at risk assessment in mice. Exp Clin Cardiol. 17, 268-272 (2012).
  5. Guex, A. G., et al. Plasma-functionalized electrospun matrix for biograft development and cardiac function stabilization. Acta Biomater. 10, 2996-3006 (2014).
  6. Landa, N., et al. Effect of injectable alginate implant on cardiac remodeling and function after recent and old infarcts in rat. Circulation. 117, 1388-1396 (2008).
  7. Valente, M., et al. Optimized heart sampling and systematic evaluation of cardiac therapies inmouse models of ischemic injury: Assessment of cardiacremodeling and semi-automated quantification of myocardial infarctsize. Curr. Protoc. Mouse Biol. 5, 359-391 (2015).
  8. Csonka, C., et al. Measurement of myocardial infarct size in preclinical studies. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 61, 163-170 (2010).
  9. Zornoff, L. A., Paiva, S. A., Minicucci, M. F., Spadaro, J. Experimental myocardium infarction in rats: Analysis of the model. Arq. Bras Cardiol. 93, 434-440 (2009).
  10. Lichtenauer, M., et al. Myocardial infarct size measurement using geometric angle calculation. Eur J Clin Invest. 44, 160-167 (2014).
  11. Lutgens, E., et al. Chronic myocardial infarction in the mouse: cardiac structural and functional changes. Cardiovasc Res. 41, 586-593 (1999).
  12. Frobert, A., Valentin, J., Cook, S., Lopes-Vicente, L., Giraud, M. N. Cell-based therapy for heart failure in rat: double thoracotomy for myocardial infarction and epicardial implantation of cells and biomatrix. J Vis Exp. e51390 (2014).
  13. Takagawa, J., et al. Myocardial infarct size measurement in the mouse chronic infarction model: comparison of area- and length-based approaches. J Appl Physiol (1985). 102, 2104-2111 (2007).
  14. Fishbein, M. C., et al. Early phase acute myocardial infarct size quantification: validation of the triphenyl tetrazolium chloride tissue enzyme staining technique. Am Heart J. 101, 593-600 (1981).
  15. Weisman, H. F., Bush, D. E., Mannisi, J. A., Weisfeldt, M. L., Healy, B. Cellular mechanisms of myocardial infarct expansion. Circulation. 78, 186-201 (1988).
  16. Mannisi, J. A., Weisman, H. F., Bush, D. E., Dudeck, P., Healy, B. Steroid administration after myocardial infarction promotes early infarct expansion. A study in the rat. J Clin Invest. 79, 1431-1439 (1987).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics