Kol tekniği aort transplantasyonu - eğitici bir Video bir fare Model kullanma

Medicine
 

Summary

Biz farelerde kol tekniği kullanarak bir orthotopic aort nakli modeli mevcut. Bu damar hastalığı çalışmalarda istihdam bir çok hızlı anastomoz yöntemdir.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Rowinska, Z., Gorressen, S., Merx, M. W., Koeppel, T. A., Zernecke, A., Liehn, E. A. Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video. J. Vis. Exp. (128), e54915, doi:10.3791/54915 (2017).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Orthotopic aort nakli kol tekniği kullanarak yaralanma ile başarısızlık oranı sadece % 10-20 aortaya azaltır. Kısa ve kolay çalışmalar ISO/allo greft izin 20 dk ortalama kol yöntemini kullanan farelerde aort anastomose vakti gelmişti. Aşağıdaki makalede, bizim Laboratuvarda kullanılan aort nakli yordam. Fareler % 1.5 birim isoflurane ve yüz maskesi ile % 100 oksijen karışımı ile anestezi. Bu noktada, renal arter ve onun çatallanma arasında aorta segment vena kava, serbestçe hazırlanan ve clampedat ayrılmış olan tek ipek dikiş proksimal ve distal kesimi. Aort kaldırma önce heparin içeren bir serum fizyolojik çözüm inferior vena kava enjekte ettiler. Sonra aort kelepçeler arasında kesildi ve serum fizyolojik heparin çözüm Lümen temizlemek için kullanılmıştır. Monofilament dikiş kol teknikle abdominal aort orthotopic pozisyonda nakli için kullanıldı.

Introduction

Bir önceki çalışmada belirttiği gibi büyük ilgi belirli vasküler yanıt greft tarafından neden olduğu ve arteriogenic çevre ile bağlı bazı sistemik faktörler arasında ayrımcılık sağlayan fare aort nakli modelleri için ödenen 1 , 2 , 3. eleme ve transgenik fareler durumu önemli bir rol oynar en büyük etken olduğunu. Böyle bir model onların katılımı belirlenmesi ve ateroskleroz ve anevrizma oluşumu4, gibi dejeneratif damar hastalığı gelişimi ile ilişkili yeni patofizyolojik yolları belirleme imkanı sunuyor 5.

Bu bir iç iskemi/reperfüzyon aşılama sırasında yaralanma nakli için amaçlanan damarları görünebilir dikkati çekiyor. Bu nedenle, greft bütünlüğü veya ameliyat sonrası dönemde beklenmeyen bir enflamatuar reaksiyon ile belirli sorunları oluşumunu muhtemelen dejeneratif vasküler hastalıklar3 patofizyolojik değişiklikler iyileştirmelerden dışarıda bırakılamaz ,4,5,6,7. Kol anastomoz damarları arter anastomoz az bir milimetre çapında için alternatif sıra içinde yöntemidir ve başarılı bir şekilde daha sonra adapte böbrek ve kalp nakli Sıçanlarda aort için uygulanmıştır Dambrin ve ark. tarafından farelerde nakli 8 , 9 , 10 , 11.

Aort hasar kol nakli tekniği kullanılarak bu ortalama sadece 20 dakika süren nedeniyle bir çok düşük teknik başarısızlık oranı ile en aza indirgemek. Önceki sonuçlarımız kol tekniği1kullanarak nakli sonra bir isograft vivo içinde mükemmel fonksiyonel ve yapısal özelliklerini gösterdi. Dambrin ve ark. tarif bu kısa bir öğrenme eğrisi başarı oranı % 78'i şey bitti sonra10. Örneğin8sıçan böbrek nakli kol teknikle trombozu Engelbrecht vd gözlemlemek değil tromboz gibi komplikasyonlar nadirdir.

Fare aort nakli modeli ile kol anastomoses ISO/homogreft reaksiyonlar transplante gemi içinde çalışmak için hızlı ve kolay bir araçtır. Bu video bizim laboratuvarda yapılan aort nakli yordamı gösterir. Bu nakli model vasküler hastalık altta yatan patolojik mekanizmaları tanımlamada yararlı olabilir ve moleküler ve farmakolojik müdahaleler12daha fazla değerlendirilmesi için katkıda bulunabilir.

Protocol

hayvan konular içeren yordamlar onaylanan kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) tarafından RWTH Aachen Üniversitesi, AZ 84-02.04.2012.A234.

Not: yordamı farelerde yetişkin erkek yaban tip CD1 arka plan ile kullanma uygulaması gösterilmiştir. Fareler önce ve yemek, özel veteriner kontrol ve tedavi için uygun erişimi temin ameliyattan sonra bir özel laboratuvar biriminde tutmak. Hayvanlar üzerinden aldıysanız dışında bir haftalık iklimlendirme ameliyat gerçekleştirmeden önce izin.

1. donör hazırlanması

  1. steril malzeme ve aletleri steril koşullar enfeksiyonları önlemek için ameliyat sırasında korumak için kullanın.
  2. Her fare % 1.5 karışımı ile birim isoflurane ve % 100 oksijen bir yüz maskesi ile anestezi. Fare sırtüstü pozisyon ve teyp bir platformda ayakları için ameliyat masasına yattı. Onun refleksleri fare yeterince anestezi emin olmak için arka ayaklarına pinching tarafından kontrol edin. İşlem sırasında kurutma önlemek için göze oftalmik merhem yerleştirin.
  3. Tüm saç depilatory bir jel kullanarak karından kaldırın veya bir tıraş makinesi kullanın. Steril koşullarda işlemini gerçekleştirin. Scrubs klorheksidin ve steril su alternatif ile karın dezenfekte.
  4. Makas veya neşter ile donör aort Ensizyon karın üzerinden kaldırın. Bağırsak el ile sağa doğru çekin. Hafifçe el ile bağırsak üzerinde toz ücretsiz eldiven kullanarak yan yansıtır.
    1. Bağırsak nemli tutmak için serum ıslak gazlı bez bir parça yerleştirin.
    2. Uzağa--dan çok dikkatli bir künt diseksiyon cımbızla kullanarak çevreleyen doku abdominal aort teşrih.
    3. Renal arterler ve onun çatallanma vena kava üzerinden arasında aorta segment cımbızla ayırın.
    4. Bu segmentte çok dikkatli bir şekilde 11-0 monofilament tek dikiş kullanarak tüm küçük dalları güvenli.
    5. Aort kaldırmadan önce 0.5 ml (mL) tuzlu çözüm inferior vena kava 50 U heparin içeren enjekte.
    6. Aorta segment kaldırıldıktan sonra exsanguinate donör hayvanın izin.
    7. Dokuları tam olarak serum fizyolojik ile durulayın ve buz gibi Salin bir kaba hemen transfer.

2. Alıcının hazırlanması

  1. % 1.5 karışımı ile alıcı hayvan birimi isoflurane ve % 100 oksijen bir yüz maskesi ile anestezi sonra saç kaldırmak ve (Bölüm 1) dezenfekte. Bir neşter ile leğen kemiği için xiphoid gelen bir orta hat kesi yapmak ve karın duvarları geri çek. Gözlerde kuruluk işlem sırasında önlemek için oftalmik merhem yerleştirin.
  2. Tuzlu çözüm bağırsaklarında ıslatılmış gazlı bez ve çok yavaşça yerinden hayvan için şal ' yolunda.
  3. İnfrarenal aortada ücretsiz renal arterler arasında proksimale teşrih ve cımbız ile klemple çatallanma.
  4. Bu segmentte çok dikkatli bir şekilde 11-0 monofilament tek dikiş kullanarak tüm küçük dalları güvenli.
  5. 6-0 tek ipek dikiş ile aort proksimal ve distal kısımları kelepçe.
  6. Kelepçeler arasında orta aort bölmek ve Lümen açık temizlemek için heparinized serum fizyolojik ile kesme biter sulamak.
  7. Greft aort herhangi bir burulma düzgün donör ve alıcı (yerleştirerek önlemek için dikkat çekici 11-0 monofilament ile dikiş tarafından takip alan gemi eklenen besleme gemi ucuyla orthotopic bulunduğu yer şekil 1) 10.
  8. dikkatle bitişik harfler bir izlenebilirliği anastomoz yürütülmesi sonra serbest bırakmak. Distal klempi piyasaya çıkış tarihi. Alçak basınç birlikte proksimal yüksek basınç yan bırakmadan önce duvarlar tutan bu sonuç.
  9. Greft hemen sıvı ve görünür nabzını kontrol edin. Yavaşça ipek kalıntıları çıkarmak. 1-2 mm en iyi örtüşme uzunluğudur donör ve alıcı aort arasında.
  10. Karın karın boşluğu döndürmek ve bütün kapatmak ile çalışan 3-0 Poliglikolik asit dikiş yarası.
  11. Fare buprenorfin vermek (0,05 mg/kg vücut ağırlığı subkutan (SC)) anestezi sonlandırmadan önce.
  12. Bir hayvan, tamamen bilinçli kadar sahipsiz bırakmayın. Ağrı yönetmek terapi buprenophine 0,05 mg/kg vücut ağırlığı ile yönetilen SC ameliyat sonrası üç gün boyunca günde üç kere Kurumsal Gözetim vücut tarafından onaylanmış.
  13. Yukarıda açıklanan
  14. hasat, doku anestezi için olarak alıcı fareler ve floş gemi fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) ile % 4 formaldehit/PBS tarafından takip (pH 7.4 =) kardiyak ponksiyon tarafından. Greftler yavaşça çıkarın. %4 formaldehit/PBS gecede fiksasyonu sonra işlem örnekleri daha fazla ve parafin içinde embed.

Representative Results

Yükseltilmiş bir tromboz riski olsa anestezi gözlenen hiçbir fiziksel bozulma ile 15-30 dakika içinde fareler kurtarıldı. Ultrason analiz Postoperatif takip sırasında kullanıldı. Çalışmada kullanılan yaban tipi fareler hiçbir değişiklik onların Lümen boyutta sergiledi. Buna göre ne stenoses ne de aneurysmal oluşumları gözlenmiştir. Organ nakli hayvanlar plak geliştirme (Şekil 2) damar duvarlarının sergilemek başarısız oldu.

İmmunohistology gibi geleneksel boyama prosedürler plak, desen düz kas hücreleri ve makrofajlar birikimi belirlemek için kullanılabilir. Histolojik çalışma ve immunohistokimyasal boyama greft bütünlüğünü sınamak için aşılama sonra 6 hafta gerçekleştirilen. Histolojik boyama (Hematoksilen ve Eozin (o) ve immunohistokimyasal (düz kas aktin (SMA) ve makrofaj (MAC2)) boyama (şekil 3) bize gösterdi değişmeden düz kas hücreleri, sağlam endotel hücre astar ve Hayır dağıtım şekilleri intima hücrelerde birikimi. Bu bulgular Hayır önemli lezyon veya hücre harekete geçirmek aşılı gemiler (şekil 3) algılandığını göstermektedir.

Figure 1
Resim 1 : Kollu tekniği. Abdominal aort kol tekniği kullanarak nakli. Bu yordamda bulaşan aort yüzeysel ısırıkları besleme gemi mevcut ile orthotopic pozisyonda yerleştirilmişti. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 2
Resim 2 : İntraoperatif ve ultrason resimleri. İntraoperatif (nekropsi) görünümü greft 6 hafta sonra nakli(a), üç boyutlu ultrason (B) ve B-modu görünümü (C) örnekleri. Ameliyat sonrası takip ultrason kullanılarak yapılmıştır. Resimleri herhangi bir değişiklik ile greft açıklık Lümen boyutlu olarak göster. Ayrıca, hiçbir stenoses veya aneurysmal oluşumları gözlenmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3 : Histolojik ve immünhistokimya görüntüler. 6 hafta sonra nakli transplante hayvanların histolojik ve immünhistokimya temsilcisi görüntüler. Önemli lezyon yok içinde transplante aortas Histoloji tarafından tespit edilmiştir (Hematoksilen ve Eozin, o, 100 X büyütme, ölçek çubuğu = 50 µm), (düz kas aktin SMA (kırmızı) veya makrofaj MAC2 (yeşil), 200 X büyütme, ölçek çubuğu = boyama immunohistokimyasal 25 µm). Çekirdeklerin DAPI tarafından (mavi) karşı lekeli. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Discussion

Bu çalışmada önce çeşitli diğer nakli modelleri farelerde iyice analiz3,6,7,10,13,14vardı. O bizim ölçütleriyle eşleşen ve kol anastomoz geleneksel uçtan uca dikiş yöntemleri ile karşılaştırıldığında yüksek bir güvenilirlik gösterdi aort nakli Dambrin vd tarafından değişiklikleri ile kol tekniği kullanarak model seçildi 1 , 10.

Bu önemli ölçüde azaltılmış çapraz klemp süresi ameliyat sırasında aorta zarar en aza ile birçok yönden olumlu bir tekniktir. Tromboz sıklığı düşük gemi kalibre donör ve alıcı arasında bir potansiyel uyumsuzluk kaçınarak ek olarak gözlendi. Yukarıdaki gözlemleri bu teknik son derece aort nakli farelerde vasküler hastalığı araştırma için uygun olun.

Bir takip çalışması bir ultrason nakli sonra 8 hafta gerçekleştirildiği, herhangi bir önemli değişiklik algılanmadı. Bu varsayımlar aort cerrahisi sırasında herhangi bir hasar en az1olacağını doğruladı.

Bu makalede sunulan aşılama yordam hiçbir bozulma greft bütünlüğü ve işlevi hem de güvence altına alır. Bu nedenle, bu deneysel nakli model dejeneratif damar hastalığı genetik farelerde gelecekteki moleküler ve farmakolojik araştırmalar için değerli bir araç olarak hizmet söylenebilir.

İnanıyoruz video rehber bu basit arterio-arter modeli kullanımını gösteren malzeme öğretim olarak işlev görebilir ve daha verimli tartışma vasküler patolojiler birçok önemli konularda katkıda bulunacaktır. Bu çok hızlı anastomoz yöntem genetiği farelerde damar hastalıkları eğitim için kullanılabilir. Bir değişiklik ile ekimi kombine anevrizma modeli olarak da kullanılabilir.

İşlem sırasında kritik noktaları vardır. Dikiş yerleştirilmesi en önemli adım olduğunu. Cerrah tarafından donör ve alıcı doğru hizalaması herhangi bir burulma aort önlemek için dikkat çekmek vardır. Kelepçeler dikkatle anastomoz muayene sonra kaldırılır. Distal klempi her zaman ilk alçak basınç duvarlar birlikte önce proksimal yüksek basınç yan yayın holding sonuçlanan piyasaya sürülmelidir. Düzgün bir şekilde yayın dizisi takip sonucu kanasın.

Disclosures

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Acknowledgements

Roma Wieczorek ve onların mükemmel düzenleme yardım için Peter Kurdybacha ve Leon Decker ve Uli Heuter onların mükemmel teknik destek için teşekkür etmek istiyorum.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Halsey Needle Holder Fine Science Tools 12001-13
Dumont #5 Forceps - Fine Science Tools 11254-20
Lexer-Baby Scissors Fine Science Tools 14079-10
Castroviejo Micro Needle Holder Fine Science Tools 12060-01
Vannas Scissors Aesculap, Germany Typ OC498R
Castroviejo Suture Forceps Geuder, Germany 19015
6-0 silk black (Silk) Deknatel, Research Triangle Park NC, USA 18020-60- FST
11-0 monofilament (Ethilon) Ethicon, Norderstedt, Germany EH7438G
3-0 polyglycolic acid suture (Serafit) Serag-Wiessner, Naila, Germany 60203214
Isofluorane Any genericon
Heparin Any genericon
0.9% saline Any genericon
Buprenorphine Any genericon
Bepanthene eye and nose cream Bayer, Germany
Microscop Zeiss Opmi MDO/S5
Vaporiser Eickemeyer TEC3
Ultrasound Vevo, Canada 770,2100

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Rowinska, Z., et al. Non- invasive in vivo analysis of a murine aortic graft using high resolution ultrasound microimaging. Eur J Radiol. 81, (2), 244-249 (2012).
  2. Daugherty, A. Mouse models of atherosclerosis. Am J Med Sci. 323, (1), 3-10 (2002).
  3. Xu, Q. Mouse models of arteriosclerosis: from arterial injuries to vascular grafts. Am J Pathol. 165, (1), 1-10 (2004).
  4. Daugherty, A., Cassis, L. A. Mouse models of abdominal aortic aneurysms. Arterioscler Thromb Vasc .Biol. 24, (3), 429-434 (2004).
  5. Zernecke, A., Shagdarsuren, E., Weber, C. Chemokines in atherosclerosis: an update. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, (11), 1897-1908 (2008).
  6. Chereshnev, I., et al. Mouse model of heterotopic aortic arch transplantation. J Surg Res. 111, (2), 171-176 (2003).
  7. Koulack, J., McAlister, V. C., Giacomantonio, C. A., Bitter-Suermann, H., MacDonald, A. S., Lee, T. D. Development of a mouse aortic transplant model of chronic rejection. Microsurgery. 16, (2), 110-113 (1995).
  8. Engelbrecht, G., Kahn, D., Duminy, F., Hickman, R. New rapid technique for renal transplantation in the rat. Microsurgery. 13, (6), 340-344 (1992).
  9. Baxter, K., Hao, P. M., Howden, B. O., Saunder, A., Jablonski, P. Modified technique of abdominal heart transplantation in the rat. J Heart Lung Transplant. 17, (11), 1057-1064 (1998).
  10. Dambrin, C., Calise, D., Pieraggi, M. T., Thiers, J. C., Thomsen, M. Orthotopic aortic transplantation in mice: a new model of allograft arteriosclerosis. J Heart Lung Transplant. 18, (10), 946-951 (1999).
  11. Siemionow, M. Histopathology of microarterial anastomoses: end-to-end versus end-in-end (sleeve) technique. J Hand Surg Am. 15, 619-625 (1990).
  12. Charo, I. F., Ransohoff, R. M. The many roles of chemokines and chemokine receptors in inflammation. N Engl J Med. 354, (6), 610-621 (2006).
  13. Sun, H., et al. Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation. Microsurgery. 18, (6), 368-371 (1998).
  14. Guo, L., Agarwal, A., George, J. F. Orthotopic aortic transplantation in mice for the study of vascular disease. J Vis Exp. (69), e4338 (2012).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics