Utveckling av en direkt Pulp-tak modell för utvärdering av pulpa sårläkning och Reparativ Dentin bildning hos möss

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Vi beskriver en steg-för-steg-metod för att utföra direkt pulpaöverkappning på möss tänder för utvärdering av pulpal sårläkning och reparativa dentin formation in vivo.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Song, M., Kim, S., Kim, T., Park, S., Shin, K. H., Kang, M., Park, N. H., Kim, R. Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice. J. Vis. Exp. (119), e54973, doi:10.3791/54973 (2017).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Protocol

Möss köptes från Jackson Laboratory och förvaras i en patogen-fri vivarium i UCLA Avdelningen för försöksdjursmedicin (DLAM). Experimenten utfördes enligt de godkända institutionella riktlinjer från djurkommittén förbundskanslerns forskning (ARC # 2016-037).

1. Mus Anesthetization

  1. Använd åtta veckor gamla kvinnliga C57 / BL6-möss (n = 3).
  2. Söva mössen med användning av ketamin (80 till 120 mg / kg av mus vikt) / xylazin (5 mg / kg mus vikt) lösningar och administrera intraperitonealt (ip) i en dos av 10 ml / kg.
  3. Förbered ketamin (80-120 mg / kg) / xylazin (5 mg / kg) lösningar och administrera dem intraperitonealt (ip) i en dos av 10 ml / kg.
  4. Kontrollera att mössen helt bedövad genom att utföra en tå nypa.

2. Massa-capping ordningen

  1. Placera munnen hållaren i musens mun.
  2. Säkra munnen hållaren på bordet så att hanannons är vänd uppåt.
  3. Placera mikroskopet (10X) ovanpå munnen så att den första maxillary molar är fullt synliga.
  4. Använda ¼ runt bur i en hög hastighet handstycke vid 200.000 rpm, ta bort emalj del av tanden i mitten tills massan är synlig genom den transparenta dentinet. Utsätt inte massan med borren.
  5. Med hjälp av en # 15 endodontisk K-fil (diameter på 150 um), perforera genom dentinet och exponera massan.
    OBS: Särskild försiktighet bör iakttas så att tandbenet skräp inte få skjuts in i massan. Detta kan undvikas genom att vrida på K-filen kvartalsvis och sedan dra den K-fil ut.
  6. Blanda MTA med sterilt H2O i enlighet med tillverkarens instruktioner. Leverera och placera MTA på den exponerade massan med spetsen på explorer. Använd baksidan av papperet punkten (fin) för att packa MTA i den exponerade massan genom försiktig knackning. Den tjockare sidan av papperet punkten är platt och därför tillåterför korrekt kondensation av MTA i den exponerade massan.
  7. Etsa tand för 15 s genom att placera 35% fosforsyra etsmedel där det bara täcker tanden. Var noga med att begränsa placeringen av etsmedlet, eftersom det kan irritera tandköttsvävnader.
    OBS: Etsmedlet kommer i en spruta och används för att rugga kuggytorna så att dentala adhesiver kan strömma in för att mediera mikromekanisk bindning på tand. Eftersom de är viskösa, kan det vara fristående genom att anbringa små mängder direkt på tanden.
  8. Använd negativ pressad avsugning för att avlägsna etsmedlet. Använd en bomullspellet som är lätt indränkt med H2O för att avlägsna rester av etsmedlet. Upprepa detta steg tills etsmedlet är helt borttagen från tanden.
  9. Med hjälp av en trycklufts duster, försiktigt torka tanden.
  10. Tillämpa tand lim med hjälp av baksidan av papperspunkten.
  11. Gör limskiktet tunt med tryckluft för 3 s.
  12. Cure dentala lim för 20 s med hjälp av härdning-ljusenhet.
  13. Placera den flytbara kompositen i små mängder på tand som capped med MTA. Använd spetsen på explorer att flöda kompositen i tandspåren.
  14. Härda kompositen i 30 s med användning av en ljushärdande enhet för att polymerisera den. Kontrollera att kompositen fullständigt härdade och hårt med hjälp av explorer.

3. Post-op Care

  1. Administrera karprofen (5 mg / kg) subkutant (se) omedelbart efter att massan-capping procedur.
  2. Placera möss på en värmedyna med låg effekt för att hålla djuren varma innan de vaknar.
  3. Återgå mössen till terrariet för bostäder.

4. Vävnads Upphandling

  1. Efter 5 - 6 veckor, avliva möss genom cervikal dislokation under fullständig anestesi tillstånd med isofluran.
  2. Försiktigt bort överkäke från basen och lägg den i en 50-ml rör. Fäst entire käke som innehåller både massa utjämnade tanden och kontra icke-begränsade tand i 4% paraformaldehyd i PBS, pH 7,4, vid 4 ° C över natten, och sedan lagra den i en 70% etanollösning.
    OBS: Paraformaldehyd är giftigt och cancerframkallande. Korrekt användning paraformaldehyd bör övervakas som beskrivs i standardrutiner (SOP).
  3. Skanna musen maxillae använder μCT skanningen. För att säkra maxillae under avsökning linda proverna med gasväv indränkt med 70% etanol och placera dem i 15 ml cellodlings rör.

5. μCT Scanning

  1. Förbered prover för μCT skanning. I korthet, linda proverna med gasväv indränkt med 70% etanol och säkra dem i en generisk 15-ml cellodlings koniska rör. Montera röret på μCT avsökningssteget, som det beskrivs i tillverkarens instruktioner.
  2. Ställa in röntgenkälla till en ström på 145 | iA, en spänning av 55 kVp, och en exponeringstid av 200 ms.
  3. Utföra bildinhämtning med μCT scanner vid ett 20-um upplösning och med en 0,5 mm Al-filter.
  4. Rekonstruera bilden och visualisera den 11.
  5. När μCT skanningen är klar, börja avkalkning med 5% EDTA och 4% sackaros i PBS (pH 7,4) under 2 veckor.

6. Vävnadsbearbetning och färgning

  1. Bädda in urkalkade vävnader i paraffin. Innan inbäddning, trimma överkäken genom att göra en sagittal snitt omedelbart främre till den första molar. Medan inbäddning, placera denna yta nedåt, så att den längsgående sektionen av den första molar är skärytan.
  2. Med hjälp av mikrotomen förbereda 5 pm tjocka diabilder. De massa capping områden sammanfaller vanligen med distopalatal (DP) rot, vilken kan användas som ett landmärke. Bestämma den exakta området av intresse genom att undersöka den histologi under ljusmikroskop och jämföra μCT bilder.
  3. För H & E-färgning, deparaffinize och rehydrera glasen med xylen (2 x) och serieutspäddes etanol (100% EtOH 2x, 95% EtOH 2x, och 70% EtOH 1x).
  4. Skölj objektglasen med rinnande kranvatten.
  5. Fläcka med Hematoxylin lösning under 2,5 min och skölj med kranvatten.
  6. Doppa dem i 95% etanol under 1 minut.
  7. Fläcka med Eosin lösning under 1 min och skölj med kranvatten.
  8. Dehydrera med serieutspädd etanol (70% EtOH 1x, 95% EtOH 2x, och 100% EtOH 3x) och xylen (3 x).
  9. Montera bilderna med monteringslösning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Här visade vi steg-för-steg-anvisningar för att utföra pulpaöverkappning på möss tänder. En av de viktigaste aspekterna av pulpaöverkappning i möss är att ha lämplig apparat. I detta avseende har den mikroskop med en 10X power förstoring är väsentligt (Figur 1A). För att skapa en klass-I-liknande preparat i tanden, använde vi en ¼-runda burr i en elektrisk höghastighetshandstycke vid 200.000 rpm (Figur 1B). Alternativt kan varje annan motorer, inklusive de som använder tryckluft, kan användas för att framställa en tand.

I figur 2A-2E, är representativa steg för att utföra pulpaöverkappning visas. Klass-I-liknande beredning utfördes (figur 2B). Eftersom en vattenstråle kan dränka mössen under förfarandet, rekommenderas inte dess användning. Av denna anledning är det viktigt att förbereda tanden med mild och intermittent stroke för att förhindra överhettning. Användningen av tryckluft rekommenderas också för att ge kyleffekter. Medan utsätta massan med en endodontisk fil, ta försiktighet inte att driva tandbenet skräp i massan, eftersom det kan störa tolkning av data i reparativ dentin bildning (figur 2C). Detta kan undvikas genom att använda den komprimerade luften. På samma sätt bör MTA placeras på den exponerade massan utan att trycka alltför långt in i massan. MTA placering kan uppnås genom att använda baksidan av pappersspets med mjuka trummande rörelser (Figur 2D). Följande MTA placering bör tanden rengöras med H 2 O-indränkt bomull pelletar för avlägsnande av eventuellt kvarvarande MTA i spåren, som kan interferera med bindningen av det sammansatta på tanden. Konventionella metoder för sammansatta restaurering används, inklusive etsning tandytorna, priming och bindning med lim, och placera och härdning av flytande kompositer (Figur 2E).

Sex veckor efter pulpaöverkappning mössen skördades och toppvyn fotograferades för att bekräfta att kompositen var fortfarande intakt (figur 3A). μCT scanning visade signifikant nedgång av pulpal utrymme i massa-capped gruppen (figur 3B), vilket antyder att reparativt dentin bildades i massan. De urkalkade vävnader prover utsattes för H & E-färgning för att ytterligare undersöka histologiskt bildningen av reparativt dentin in vivo. I kontrollgruppen, odontoblastic skikt (OB) var framträdande uppenbart runt kanterna på tandbenet (Figur 4A - 4C). I motsats härtill hade massan-capping grupp betydande mängder reparativt dentin (RD) utformad i pulpal utrymmet (Figur 4D - 4F). Intressant nog visade en närmare undersökning att reparativ dentin (RD) uppvisade en typisk egenskap hos dentin (t.ex. s triated linjer som representerar dentinkanaler, röd pil), samt att av ben (t.ex. osteocyter representerar fångade osteoblaster, svarta pilspetsar). När vi färgades för Dentin Matrix Protein 1 (DMP1), en markör för odontogena differentiering 12, fann vi en signifikant ökning av DMP1 expression i massan av massan-capped tand i jämförelse med den hos den icke-begränsade tand (figur 5A och 5B) , vilket visar att reparativt dentin bildades inom massan.

Figur 1
Figur 1: Utrustning Setup för Pulp-capping ordningen. (A) Ett mikroskop (10X) för att visualisera mus tand. (B) Den höghastighetshandstycke och elmotorn motorn för framställning av en klass I-preparat för att exponera massan.= "_ Blank"> Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 2
Figur 2: Representant Stegen i täckordningen. (A) Unprepared tanden på maxillary första molar i en mus. (B) Första emalj borttagning med hjälp av kvartsrund bur. (C) Massa exponering med hjälp av endodontisk fil. (D) MTA placering i den exponerade massan. (E) Composite restaurering placering på tanden. Baren representerar 500 nm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 3
Figur 3: Klinisk presentation och μCT Scanning av Pulp-tak och icke-begränsade tand hos möss. (A) ocklusalt vy av mus maxillae på massan-capped tand (vänster) och icke-begränsade tand (höger). (B) De tvärsnitts μCT bilder av maxillae. Baren representerar 500 nm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 4
Figur 4: histologiska tecken på Reparativ Dentin Bildning in vivo. (AC) H & E-färgning av icke-begränsade maxillary första molar i en mus vid 100X, 200X och 400X. (DE) H & E färgning av massa utjämnade maxillary första molar i en mus på 100X, 200X, och 400X. Baren representerar 100 pm (OB = odontoblast lager, RD = reparativa dentin, svarta pilspetsar =osteocytes; röd pil = dentinkanaler). Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 5
Figur 5: Immunohistokemisk Färgning av DMP1. (A) DMP1 färgning av icke-begränsade maxillary första molar i en mus vid 400X. (B) DMP1 färgning av massa utjämnade maxillary första molar i en mus på 400X. Baren representerar 100 nm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

För närvarande finns det flera olika experimentella modeller för att validera effekter in vivo av dentala material, ställningar, eller tillväxtfaktorer på odontogena differentiering av dentala massa stamceller (DPSC) 13. Dessa modeller inkluderar ektopisk autolog transplantation av DPSC in i ett organ, såsom njurkapseln, eller subkutan transplantation av DPSC in i immunförsvagade möss med byggnadsställningar 14,15. Emellertid är dessa metoder begränsade i det att deras odontogena effekt på DPSC inte utförs i orthotopic massamiljön. Å andra sidan, är orthotopic transplantation i massa- eller massa-kapslingsförfaranden på en tand som används i större djur 16,17. Även om dessa modeller är värdefulla för att utvärdera odontogena potential i orthotopic miljö, är användningen av dessa modeller till stor del observations i naturen, vilket ger begränsade mekanistiska insikter om massa sårläkning och reparativ dentin bildning. I detta papper presenterar vi en detaljerad metod för att utföra massa-kapsling i möss. Detta steg-för-steg innefattar anesthetizing mössen, förbereda klass-I-liknande hålighet, placera de massa tak material, skörda maxillae, analysera med μCT skanning och bedöma vävnadsprover för reparativ dentin bildning. Vår massa tak musmodell kommer att bidra till att undersöka de grundläggande molekylära mekanismerna för pulpa sårläkning in vivo i samband med reparativa dentin genom att möjliggöra användningen av transgena eller knockoutmöss, som är allmänt tillgängliga i forskarsamhället.

Nya studier har visat flera musmodeller där tandbenet bildning observerades 18,19. Saito et al. skapade en klass-I-liknande preparat utan exponering massa, som stimulerar reaktionära, inte reparativa, tandben bildning. Både reaktionära dentin och reparativ tandben klassificeras som tertiär dentin, Som bildar följande extern stimulering till tanden. Emellertid, till skillnad från reaktionärt dentin, som bildas genom att befintliga odontoblaster, är reparativa dentin bildas av odontoblast-liknande celler, såsom DPSC, då massan blir exponerade och de odontoblastic skikten breached 20. Därför är det inte utgör en faktisk massa tak förfarande på kliniken. I en annan studie glasjonomer användes att begränsa massaexponering 19. Emellertid visade en klinisk studie att glas jonomer inducerad kronisk inflammation, men inte reparativt dentin 21. I detta avseende vår massa-capping musmodell bättre representerar den faktiska massa-capping förfarandet i patienter.

Det är anmärkningsvärt att när vi skördade möss efter mer än 6 veckor, uppträdde reparativ dentin bildning i hela massakammaren och rotkanalerna (Figur 4). En sådan iakttagelse är ganska oväntat, eftersom vi förväntade reparativa dentin bildning vid juniInsatser mellan massan-kapselmaterialet och massan. Dock är potent mineralisering av massan även observerats i kliniska miljöer, särskilt i relativt unga patienter 22. Eftersom åtta veckor gamla möss som användes i denna studie anses vara "unga vuxna" 23, finns en möjlighet varigenom dessa möss hyser fortfarande betydande odontogena potential. Därför skulle det vara värt att undersöka åldrandets effekter av reparativ dentin bildning hos möss.

Våra histologiska undersökningar avslöjade att, även om reparativt dentin var tydligt utformad i massa-capped tand, fanns egenskaper hos både dentin och benbildning, vilket framgår av närvaron av dentinkanalerna (röd pil) och osteocyter (svarta pilhuvuden) i det reparativa dentin (Figur 5). Sådana observationer antyder att reparativt dentin bildning kan induceras genom att lokalt bosatt odontoblast-liknande tandmassa stamceller, såväl som infiltrating mesenkymala stamceller från det omgivande benet.

Jämfört med de dentin bildande celler, fann vi inga dentin-resorberande celler inuti massan, enligt bestämning med tartrat-resistent syrafosfatas (TRAP) färgning (data ej visade). I själva verket framkallar pulpal eller periapikal inflammation osteoklastbildning på benytor runt tanden, men inte på tandbenet ytor på grund av än så länge okända mekanismer 24. Notera fanns en tydlig avgränsning mellan det befintliga dentin och den nybildade reparativa dentin (Figur 4). En tidigare studie visade ett liknande fenomen; när en tand extraheras i närvaro av bisfosfonat eller anti-RANKL antikropp, som båda hämmar funktionen hos osteoklaster, det fanns tydliga avgränsningar mellan befintliga lamellärt ben och nybildade filtben 25. Detta begrepp stöder ytterligare avsaknad av dentin-resorberande celler i massan. Tillsammans vår etablerade musmodell skulle provide unika möjligheter att undersöka mekanismerna för massa sårläkning och reparativa dentin bildning in vivo.

Finns det en begränsning till massan-capping musmodell. Genetiska smink mellan människor och möss är uppenbarligen annorlunda. Det fullständiga genomet har sekvenserats i människor och möss, och det finns ca 85% likhet i de proteinkodande regionerna mellan möss och människor 26,27. I linje med detta begrepp föreslogs det att resultaten i samband med pulpaöverkappning av djur som inte nödvändigtvis återspeglar hos människor 28. Ändå är djurmodeller flitigt i forskarvärlden att rekapitulera mänskliga sjukdomar in vivo, såsom kollagen-inducerad artrit för reumatoid artrit 29 ovariactomy-inducerad benförlust för osteoporos 30, lipopolysackarid (LPS) administration för systemisk chock 31, och ligatur placering för parodontit 32. Som sådan massa-capping mouSE-modellen kommer att vara avgörande för att undersöka de molekylära mekanismerna för massa sårläkning och reparativa dentin bildning in vivo. Ändå, precis som andra djurmodeller, tolkning och validering av resultaten från massa tak musmodell bör noga utvärderas.

Sammanfattningsvis demonstrerar den aktuella studien framgångsrika pulpaöverkappning i möss. Till skillnad från andra kända modeller, kommer detta massa tak musmodell ger en ovärderlig forskningsverktyg inom massa förnyelse och reparativ dentin bildning eftersom det ger: 1) en möjlighet att utnyttja allmänt tillgängliga genetiskt manipulerade musstammar för att belysa de bakomliggande mekanismerna vid molekylär nivå och 2) ett ekonomiskt effektivt sätt att få statistiskt signifikanta resultat genom att öka provstorlekar. Ytterligare studier väntar, inklusive objektiv kvantifiering av reparativa dentin bildning in vivo, åldersberoende effekter av reparativ dentin bildning, utvärning av kliniskt tillgängliga massa capping material, och validering av molekylära bestämningsfaktorer som krävs för korrekt pulpal sårläkning och reparativ dentin förnyelse.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Denna studie stöddes av R01DE023348 (RHK) från NIDCR / NIH och fakulteten Research Grant (RHK) från rådet för forskning av Academic senaten i Los Angeles uppdelningen av University of California.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
BM-LED stereo microscope MEIJI Techno Microscope 
Optima MCX-LED  Bien Air Dental 1700588-001 Electic motor engine
isoflurane Henry schein animal health NDC 11695-0500-2
1/4 round bur Brasseler 001092T0
Endodontic K-file Roydent 98947
ProRoot MTA Dentsply PROROOT5W MTA
Paper point Henry schein 100-3941
Ultra-Etch Ultradent product Inc. Phosphoric acid etchant
OptiBond SoloPlus Kerr 29669 Adhesives
Coltolux LED Coltene/whaledent Inc. C7970100115 Curing light unit
Characterization tint Bisco T-14012 Flowable composite
Skyscan Breuker 1275 uCT scanner
Microm Thermo HM355S Microtome
Hematoxyline-1 Thermo Scientific 7221
Eosin-Y Thermo Scientific 7111
Cytoseal 60 Thermo Scientific 8310-16 Mounting solution

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dye, B., Thornton-Evans, G., Li, X., Iafolla, T. Dental caries and tooth loss in adults in the United States, 2011-2012. NCHS Data Brief. (197), 197 (2015).
  2. Bagramian, R. A., Garcia-Godoy, F., Volpe, A. R. The global increase in dental caries. A pending public health crisis. Am J Dent. 22, (1), 3-8 (2009).
  3. Koliniotou-Koumpia, E., Tziafas, D. Pulpal responses following direct pulp capping of healthy dog teeth with dentine adhesive systems. J Dent. 33, (8), 639-647 (2005).
  4. Tarim, B., Hafez, A. A., Cox, C. F. Pulpal response to a resin-modified glass-ionomer material on nonexposed and exposed monkey pulps. Quintessence Int. 29, (8), 535-542 (1998).
  5. Tziafa, C., Koliniotou-Koumpia, E., Papadimitriou, S., Tziafas, D. Dentinogenic responses after direct pulp capping of miniature swine teeth with Biodentine. J Endod. 40, (12), 1967-1971 (2014).
  6. Dammaschke, T., Stratmann, U., Fischer, R. J., Sagheri, D., Schafer, E. A histologic investigation of direct pulp capping in rodents with dentin adhesives and calcium hydroxide. Quintessence Int. 41, (4), 62-71 (2010).
  7. Jegat, N., Septier, D., Veis, A., Poliard, A., Goldberg, M. Short-term effects of amelogenin gene splice products A+4 and A-4 implanted in the exposed rat molar pulp. Head Face Med. 3, 40 (2007).
  8. Paterson, R. C., Radford, J. R., Watts, A. The response of the rat molar pulp of two proprietary calcium hydroxide preparations. Br Dent J. 151, (6), 184-186 (1981).
  9. Sela, J., Ulmansky, M. Reaction of normal and inflamed dental pulp to Calxyl and zinc oxide and eugenol in rats. Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 30, (3), 425-430 (1970).
  10. Maurice, C. G., Schour, I. Experimental cavity preparations in the molar of the rat. J Dent Res. 34, (3), 429-434 (1955).
  11. Skyscan, N. V. NRecon user manual. Available from: http://bruker-microct.com/next/NReconUserGuide.pdf (2011).
  12. Sohn, S., et al. The Role of ORAI1 in the Odontogenic Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells. J Dent Res. 94, (11), 1560-1567 (2015).
  13. Kim, S., Shin, S. J., Song, Y., Kim, E. In Vivo Experiments with Dental Pulp Stem Cells for Pulp-Dentin Complex Regeneration. Mediators Inflamm. 2015, 409347 (2015).
  14. Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 97, (25), 13625-13630 (2000).
  15. Yu, J., et al. Odontogenic capability: bone marrow stromal stem cells versus dental pulp stem cells. Biol Cell. 99, (8), 465-474 (2007).
  16. Zhu, X., et al. Transplantation of dental pulp stem cells and platelet-rich plasma for pulp regeneration. J Endod. 38, (12), 1604-1609 (2012).
  17. Iohara, K., et al. Dentin regeneration by dental pulp stem cell therapy with recombinant human bone morphogenetic protein 2. J Dent Res. 83, (8), 590-595 (2004).
  18. Saito, K., Nakatomi, M., Ida-Yonemochi, H., Ohshima, H. Osteopontin Is Essential for Type I Collagen Secretion in Reparative Dentin. J Dent Res. (2016).
  19. Hunter, D. J., et al. Wnt Acts as a Pro-Survival Signal to Enhance Dentin Regeneration. J Bone Miner Res. (2015).
  20. Goldberg, M., Kulkarni, A. B., Young, M., Boskey, A. Dentin: structure, composition and mineralization. Front Biosci (Elite Ed). 3, 711-735 (2011).
  21. Nascimento, A. B., Fontana, U. F., Teixeira, H. M., Costa, C. A. Biocompatibility of a resin-modified glass-ionomer cement applied as pulp capping in human teeth). Am J Dent. 13, (1), 28-34 (2000).
  22. Bogen, G., Kim, J. S., Bakland, L. K. Direct pulp capping with mineral trioxide aggregate: an observational study. J Am Dent Assoc. 139, (3), 305-315 (2008).
  23. Miller, R. A., Nadon, N. L. Principles of animal use for gerontological research. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 55, (3), 117-123 (2000).
  24. Shah, A., Song, M., Cao, Y., Kang, M. K., Kim, R. H. Osteoclasts are absent in pulpal and periapical inflammatory lesions. J Dent Res. 95, 1503 (2016).
  25. Williams, D. W., et al. Impaired bone resorption and woven bone formation are associated with development of osteonecrosis of the jaw-like lesions by bisphosphonate and anti-receptor activator of NF-kappaB ligand antibody in mice). Am J Pathol. 184, (11), 3084-3093 (2014).
  26. McPherson, J. D., et al. A physical map of the human genome. Nature. 409, (6822), 934-941 (2001).
  27. Gregory, S. G., et al. A physical map of the mouse genome. Nature. 418, (6899), 743-750 (2002).
  28. Hilton, T. J. Keys to clinical success with pulp capping: a review of the literature. Oper Dent. 34, (5), 615-625 (2009).
  29. Holmdahl, R., Bockermann, R., Backlund, J., Yamada, H. The molecular pathogenesis of collagen-induced arthritis in mice--a model for rheumatoid arthritis. Ageing Res Rev. 1, (1), 135-147 (2002).
  30. Kalu, D. N., Chen, C. Ovariectomized murine model of postmenopausal calcium malabsorption. J Bone Miner Res. 14, (4), 593-601 (1999).
  31. Yokochi, T. A new experimental murine model for lipopolysaccharide-mediated lethal shock with lung injury. Innate Immun. 18, (2), 364-370 (2012).
  32. Abe, T., Hajishengallis, G. Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice. J Immunol Methods. 394, (1-2), 49-54 (2013).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics