Author Produced

نموذج الماوس لزرع البنكرياس باستخدام تقنية تعديل الكفة

* These authors contributed equally
Medicine
 

Summary

بين زرع الأعضاء الصلبة البطن، الطعوم البنكرياس هم عرضه لتطوير الأضرار الفساد المرتبطة بالإصابة ضخه الاسكيمية شديدة، مما يؤدي في نهاية المطاف إلى فقدان الفساد المبكر. ويصف هذا البروتوكول نموذج لزرع بنكرياس موريني باستخدام تقنية غير خياطة الكفة، مناسبة بشكل مثالي لتحليل هذه الأضرار المبكرة، والضارة بالصحة.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Cardini, B., Oberhuber, R., Hein, S. R., Eiter, R., Hermann, M., Kofler, M., Schneeberger, S., Brandacher, G., Maglione, M. Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique. J. Vis. Exp. (130), e54998, doi:10.3791/54998 (2017).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

نماذج الماوس له مزايا عديدة في بحوث زرع الأعضاء، بما في ذلك سهولة التعامل، ومجموعة متنوعة من السلالات وراثيا محددة تحديداً جيدا، وتوافر نطاق أوسع من المسابر الجزيئية والمواد الكاشفة لأداء في فيفو ، فضلا عن في المختبر الدراسات. استناداً إلى تجربتنا مع نماذج مختلفة من زرع مورين، قمنا بتطوير نموذج زرع بنكرياس هيتيروتوبيك في الفئران بقصد تحليل الآليات الكامنة المرتبطة بالإصابة أضرار الفساد المبكر الاسكيمية شديدة ضخه. خلافا للسابق وصف تقنيات استخدام تقنيات خياطة، وهنا يصف لنا إجراء جديد باستخدام تقنية غير خياطة الكفة.

في السنوات الأخيرة، وقد أجرينا أكثر من 300 عمليات زرع البنكرياس في الفئران مع معدل نجاح العام > 90%، نسبة نجاح وصف ابدأ قبل في زرع بنكرياس الماوس. العمود الفقري لهذا الأسلوب غير خياطة الكفة لعودة التوعي الفساد يتكون من خطوتين رئيسيتين: (ط) سحب السفينة المتلقية أكثر البولي إيثيلين/بولي أميد الكفة وتحديد ذلك مع حرف مزدوج كفافى، و (ثانيا) وضع السفينة الجهات المانحة على افيرتيد السفينة المتلقية وتحديد ذلك مع حرف مزدوج كفافى ثانية. الناتجة عن ذلك استمرارية النتائج الطبقة غشائي في الآفات ثرومبوجينيك أقل بمعدلات عالية من سالكيه، وأخيراً معدلات نجاح عالية.

في هذا النموذج، وملامسة الشرياني يتحقق عن طريق سحب الشريان الاورطي البطني من الاختلاس المانحة عبر الشريان السباتي المشترك افيرتيد للحيوان المتلقي. التصريف الوريدي للفساد يتحقق عن طريق سحب الوريد البابي للاختلاس على حبل الوريد الخارجي افيرتيد للمتلقي. ويقدم هذه المخطوطة تفاصيل وخطوات حاسمة لاستعادة الجهاز والجهاز غرس الإجراءات التي سوف تسمح للباحثين ذوي المهارات ميكروسورجيكال للقيام الزرع بنجاح في مختبراتها.

Introduction

زرع البنكرياس الكلي المتزامنة (SPK) يمثل المعيار الحالي للرعاية للمرضى الذين يعانون من مرض البول السكري ونهاية مرحلة المرض الكلوي. نتائج زرع ناجحة في استقلال الأنسولين طويلة الأجل المرتبطة بتحقيق الاستقرار أو التراجع حتى ميكروانجيوباثي السكري و نوعية حياة أفضل1. ومع ذلك، خلافا لزرع الجهاز الصلبة المشتركة الأخرى، مثل الكلي وزرع الكبد، البنكرياس الطعوم أكثر عرضه للإصابة ضخه الاسكيمية (IRI). الحوادث المبلغ عنها ليصل إلى 35% الخطر الاختلاس، بل حتى المريض، البقاء على قيد الحياة2،3.

الأكسدة، اضطرابات ميكروسيركولاتوري، وزيادة التعبير السيتوكينات الموالية التحريضية، وجزيئات الالتصاق الناتج أخيرا في تفعيل بطانية وفقدان سلامتها، كل نسبت إلى هذه الإصابة غير متمكنة من الفساد 4-الآليات الجزيئية الدقيقة من IRI معروفة إلى حد كبير وحتى الآن، قد تختلف من جهاز لجهاز.

وعلى الرغم من التقدم الكبير في استخدام نماذج في المختبر ، تطوير نماذج حيوانية أمر حاسم لتعميق المعرفة بالآليات الجزيئية التي تشارك في الفساد المرتبطة بأي آر أي تعديلات بعد زرع البنكرياس. وقد وضعت عدة نماذج زرع بنكرياس في القوارض5،6، ولكن يقال واحد فقط في الفئران7. كعب أخيل لهذه الغاية مطالبين microsurgical الداخلي هو معدل بقاء انخفاض نسبة 46 في المائة. ومع ذلك، تمثل نماذج الماوس أفضل نموذج للبحوث المتعلقة بزرع الأعضاء، نظراً لأكبر مجموعة من أدوات التحليل الجزيئي يمكن أن تطبق عليهم. استناداً إلى خبرة واسعة ميكروسورجيكال في الفئران مع الجهاز مختلف عمليات الزرع8،،من910، قمنا بتطوير تقنية جديدة، واستنساخه بدرجة عالية للبنكرياس هيتيروتوبيك، وسرطان عنق الرحم زرع في الفئران مع > نسبة النجاح 90% باستخدام تقنية غير خياطة الكفة. مع هذا الأسلوب، يتم تقليل التعقيدات المتصلة أناستوموسيس إلى الحد أدنى، ويمكن تحقيق نسبة نجاح عالية بالمقارنة مع نموذج خياطة11. وحتى الآن، قد وصف نموذج الماوس واحد فقط مع معدلات نجاح مماثل ليو وآخرونفي12. ومع ذلك، لا توجد دراسات نشرت حتى الآن باستخدام هذا النموذج.

Protocol

من أجل تجنب ردود اللويموني، ودقة التحقيق الاسكيمية ضخه الفساد المتعلقة بإصابة الضرر، ينبغي أن تستخدم زوج بين المانح والمتلقي سينجينيك. في هذا البروتوكول، الذكور C57BL6 (H2ب) 10-12-أسبوع استخدمت الفئران وزنها ز 26 إلى 28 كحجم مطابقة أزواج بين المانح والمتلقي. جميع الحيوانات كانوا يسكنون في منشأة حرة ممرض حاجز وتلقى الرعاية البشرية امتثالا "مديري المدارس من المختبرات الحيوانية الرعاية" صاغتها "المجتمع الوطني" للبحوث الطبية، وفي "دليل لرعاية واستخدام من مختبر الحيوانات" أعدتها "الأكاديمية الوطنية للعلوم"، ونشرت من قبل "المعاهد الوطنية للصحة" (المعاهد الوطنية للصحة المنشور رقم 86-23، تنقيح عام 1985). ووافقت وزارة التعليم والعلوم والثقافة النمساوية التجارب الموصوفة في هذه المخطوطة (BMWF-66.011/0056-II/3b/2011).

1-البنكرياس المشتريات

  1. تخدير الحيوان المانحين مع حقن داخل (القائمة) إكسيلازيني (5 ملغ/كغ من وزن الجسم) والكيتامين (100 مغ/كغ من وزن الجسم) باستخدام إبرة (ز) 27-قياس.
  2. حلاقة الشعر في منطقة البطن باستخدام آلة حلاقة كهربائية، وإصلاح الماوس على الحقل المنطوق في موقف ضعيف مع خيوط شريط.
  3. فرك ميدان المنطوق ثلاث مرات مع جاوزيس الكلورهيكسيدين بالدماء.
  4. تنفيذ شق البطن خط الوسط مع ملحق سوبكوستال ثنائية باستخدام مقص. بلطف اكستريورز الأحشاء إلى اليسار بعصي القطن المعقمة، والتفاف عليها في شاش ترطب. رفع في إكسيفويد cranially مع المشبك البعوض لتوفير أقصى حد من التعرض تجويف البطن للخطوات التالية.
  5. باستخدام إبرة ز 19، حقن 400 ميليلتر من عقيمة الحل كلوريد الصوديوم الهيبارين 1:4 هيبارينيسيشن في أدنى الوريد الأجوف (IVC). بعد إزالة الإبرة، euthanize الحيوان من اكسسانجوينيشن ترانسيكتينج من الشريان الاورطي.
  6. تشريح الشريان الاورطي البطني بين أصل الشريان المساريقي العلوي والشريان الكلوي الحق بفصل الأنسجة الليفية استخدام الملقط نصيحة منحنية بلطف. وتقوض الشريان الاورطي والتعادل مع حرف مزدوج حرير 8-0.
  7. تحديد الرباط هيباتودودينال، الذي يعمل بين العفج بوستبيلوريك وهيلم الكبد. تقسيم الصفراوية أسفل مدخل القناة الكيسي بعد حرف مزدوج القاصي، ولطف تشريح وقطاع الوريد البابي ديستالي ممكن أن يكون طول ما يكفي لأداء ملامسة في المتلقي.
  8. صراحة باستخدام الملقط الحافة المنحنية، تشريح الشريان الاورطي البطني بدءاً من حرف مزدوج السابقة (راجع الخطوة 1، 6). تقوض النسيج بيرياورتيك استخدام الملقط نصيحة منحنى والتعادل مع حرف مزدوج حرير 8/0 وقطاع أنه مع المقص.
    1. استخدام الملقط القطبين، يتجمد جميع فروعها القطنية وقطاع الشريان الاورطي مع مقص قدر الإمكان للحجاب الحاجز، بغية توفير ما يكفي طول ملامسة السفينة. في الماضي، قطاع الشريان الاورطي الفعل المشروطة أعلاه الشريان الكلوي الأيسر.
  9. نتخلل البنكرياس مع حقنه ز 19 مع 5 مل من 4 درجات مئوية نضح الحامض الأميني-تريبتوفان-كيتوجلوتاراتي الحل بطريقة أنتيجرادي عن طريق الشريان الاورطي البطني، حتى يكون هناك النفايات السائلة واضحة قادمة من الوريد البابي. تطبيق ضغط منخفض لتجنب تشكيل ذمة.
    ملاحظة: إجراء الخطوات 1.5 إلى 1.9 بطريقة سريعة وموحدة لتفادي أي تحيز بتدهور الدماغية الحارة للاختلاس المستردة.
  10. استبدال الأحشاء في التجويف الصفاقى استخدام العصي القطن المعقمة.
  11. استخدام الملقط الحافة المنحنية، فصل تدريجي بدءاً من العفج بوستبيلوريك، والمضي قدما حتى وصلت إلى رباط تريتز البنكرياس. لهذه الخطوات، تحديد المجالات avascular النسيج الضام بين البنكرياس والجدار الإثناعشرية.
    1. تشريح هذه المناطق باستخدام الملقط نصيحة منحنى بغية عزل السفن الجسور بين البنكرياس والاثني عشر صراحة. تمرير 8-0 حرف مزدوج حرير حول كل بنية الأوعية الدموية المعزولة وإدراك التعادل.
    2. وأخيراً، قطاع بنية الأوعية الدموية مع مقص نحو الجدار الإثناعشرية. بنفس الطريقة، استخدم خياطة حرير 8/0 لفصل البنكرياس من مساريق وعرضية القولون والمعدة.
      ملاحظة: أثناء هذا الإجراء، هو متصلة القناة تشوليدوتشو-البنكرياس.
  12. تحديد الرباط جاستروسبلينيك تشغيل من الطحال إلى المعدة، وفروع المعدة قصيرة، قبل رفع المعدة cranially وقطع عليه مع المقص. اترك الطحال يعلق على الاختلاس المستردة.
    ملاحظة: من أجل تقليل الفساد ريوارمينج، ري البنكرياس باستمرار باستخدام حقنه 10 مل بإبرة ز 19 مع الحل الباردة الحامض الأميني-تريبتوفان-ketoglutarate نضح المخزنة على الجليد.
  13. وأخيراً، إزالة البنكرياس من موقع الجهات المانحة (الشكل 1B) باستيعاب الطحال مع الملقط، ونقلها إلى المتلقي.
    1. بدلاً من ذلك، تؤدي الإصابة ضخه شديدة الاسكيمية، تخزينها الاختلاس في العقيمة، 4 درجة مئوية نضح حل ح 16 قبل غرس ذلك في الحيوان المتلقي.

2-المستلم إعداد

  1. تخدير الحيوان المتلقي مع حقن القائمة إكسيلازيني (5 ملغ/كغ من وزن الجسم) والكيتامين (100 مغ/كغ من وزن الجسم) باستخدام إبرة ز 27.
  2. حلاقة منطقة عنق الرحم الجانبي حق استخدام آلة حلاقة كهربائية، وضع الماوس على الحقل المنطوق في موقف ضعيف. إصلاح الماوس باستخدام خيوط شريط. تجنب إرهاق أطرافه الجبهة لتجنب المساس بالتنفس.
  3. فرك ميدان المنطوق ثلاث مرات باستخدام جاوزيس الكلورهيكسيدين بالدماء.
  4. إجراء حق ناصف، شق الجلد منحرف قليلاً من شق جوجولار إلى زاوية الفك السفلي الأيمن.
  5. بصراحة تحديد وتعبئة الفروع الجانبية من حبل الوريد الخارجي الحق. يتجمد لهم مع الملقط القطبين وقطاع منهم مع المقص.
  6. رفع الفص الأيمن للغدة اللعابية اللهاة cranially، وتحديد بيديكلي والأوعية الدموية، وكوي باستخدام الملقط القطبين. إزالة الفص حسب ترانسيكتينج بيديكلي كوتيريزيد بالمقص.
  7. قياسا إلى الخطوة 2، 5، تحديد جميع فروع الآنسي من حبل الوريد الخارجي وكوي لهم مع الملقط القطبين وقطاع منهم مع المقص.
تقوض حبل الوريد الخارجي مع تلميح منحنى ملقط cranially قدر الإمكان، واضطر أنه مع الأربطة الحرير اثنين 8-0، وترك مساحة كافية بين الحروف المركبة.
  • قطاع حبل الوريد الخارجي بين الحروف الموضوعة سابقا اثنين مع مقص مستقيم.
  • تمرير نهاية الدانية من حبل الوريد الخارجي عن طريق الرباط البولي إثيلين (القطر الداخلي ل 0.75 ملم، القطر الخارجي مم 0.94)، وإصلاح مقبض الكفة مع المشبك ميكروهيموستات وريدي.
  • إزالة التعادل في نهاية السيجارة السفينة وايفرت السفينة على الرباط. إصلاح هذا السياق افيرتيد في الرباط مع دائرية 8/0-حرير حرف مزدوج (الشكل 1A).
  • بروكسيمالي وديستالي كوي الجزء السطحي من العضلات الترقوية الصحيح وقطاع أنه مع مقص، وإزالته.
  • بلطف تعبئة الشريان السباتي المشترك وتقويضها دون التشعب، واضطر مرتين، مع التأكد من عدم ربط التشعب السباتي. قطع السفينة بين العلاقات.
  • على غرار الخطوة 2.9 وتمرير نهاية الدانية الشريان السباتي المشترك عن طريق الرباط بولي أميد (القطر الداخلي ملم 0.57، خارج القطر من 0.6 مم) وإصلاحه مع المشبك microvascular الشرياني.
  • إزالة حرف مزدوج في نهاية السيجارة الأوعية الدموية، وتوسيع التجويف باستخدام سفينة ديلاتاتورس برفق. إيفرت السفينة عبر الرباط الشرياني، وإصلاحه مع حرف حرير 8/0 مزدوج (الشكل 1A).
  • 3-غرس

    1. مكان الفساد في منطقة الرقبة للمستلم باستخدام الطحال كمؤشر، مع الرئيس الموجه أفقياً، ذيل بما في ذلك الطحال ميديالى ومن جذوعها سفينة فينترو-كاودالي. استخدام القطن العصي لموقف الابتزاز بشكل صحيح.
    2. اجذب الوريد البابي للاختلاس البنكرياس عبر الوريد الخارجي للحيوان المتلقي الذي قد تم افيرتيد سابقا، وثابت على الكفة المناسبة (راجع الخطوة 2، 10). الإصلاح مع 8/0 حرف مزدوج حرير دائرية.
    3. سحب السيجارة من الشريان الاورطي البطني للفساد عبر الشريان السباتي المشترك افيرتيد للحيوان المتلقي. الإصلاح مع كفافى 8/0 حرير حرف مزدوج (الشكل 1).
    4. تحديد سفن الطحال قريبة من هيلم الطحال، وتقويضها بالملقط نصيحة منحنية. ربطها مع الأربطة الحرير 8/0 وقطاع سفن الطحال لإزالة الطحال. وأخيراً، تقصير الروابط.
    5. استخدام المشبك تطبيق الملقط، إزالة المشبك في الرباط الوريدي الأولى. قم بإزالة المشبك الشرياني.
      ملاحظة: إذا كان زرع ناجحة، الاختلاس البنكرياس سوف تكون ريبيرفوسيد فورا عرض لون وردي متجانسة ونبض الشرايين مرئية (الشكل 1).
    6. ترطيب الاختلاس مع المحلول الملحي نورموثيرميك.
    7. إزالة مؤشر الرباط الوريدي استخدام الملقط على التوالي.
    8. إغلاق الجرح الجراحي مع قيد تشغيل خياطة 6-0.

    4-بعد العملية الجراحية الرعاية (نقطة النهاية)

    1. بعد هذا الإجراء، تطبيق يصل إلى 0.5 مل من المحلول الملحي العادي تحت الجلد (الليبي) للاستعاضة عن فقدان السوائل الموضعية باستخدام إبرة ز 19.
    2. إبقاء هذا الحيوان المتلقي على وسادة تدفئة حتى الشفاء الكامل من التخدير.
    3. بمجرد مستيقظا، العودة الحيوان المتلقي إلى مرفق الإسكان، حيث يمكن أن يكون الغذاء والمياه libitum الإعلانية.
    4. لمنع الألم بعد العمل الجراحي، إدارة الحق بعد العملية (1) بوبرينورفين (يتعلق 0.1 مغ/كغ) كل ح 12 لأول 5 أيام ويتعلق 4 مغ/كغ (2) والايبوبروفين كل ح 12 الليبي في الأسبوع الأول.
    5. وبغية تقدير كمية التغذية السليمة، رصد الوزن (ز) كل حيوان المستفيدة كل يوم. فقدان وزن أكثر من 10-15 في المائة مقارنة بالوزن في جراحة اليوم، اللامبالاة، تشل، العودة عازمة جداً، فضلا عن الإصابات الجراحية الجانب تمثل نقاط النهاية.
      1. وفي هذه الحالة وكذلك بعد أن وصلت إلى نقطة النهاية السريرية، التضحية بالحيوان باستخدام المحطة الطرفية isoflurane استنشاق.

    Representative Results

    على مدى العقد الماضي، أجرينا أكثر من 300 من عمليات زرع البنكرياس في الفئران. بعد وضع البروتوكول، وكان هناك البقاء على قيد الحياة عموما من > 90%. وكان السبب الرئيسي لفشل، تليها تجلط الاختلاس مع التهاب البنكرياس اللاحقة الاختلاس نخرية الفتاكة النزيف بعد العملية الجراحية. وفي كلتا الحالتين، تم التوصل إلى نقاط النهاية خلال 24 ساعة وتم التضحية بالحيوانات. لم يكن هناك أي اضطرابات عصبية، أعراض مثل عسر البلع، والتهابات الجانب الجراحي في هذه السلسلة.

    للتحقيق في وظيفة الغدد الصماء الطعوم المزروعة، ومن ثم التحقق من صحة سالكيه الطراز، حملت فرط سكر الدم في الفئران المستفيدة بالمعالجة المسبقة مع جرعة واحدة من بالستريبتوزوتوسين إينترابيريتونيلي التطبيقية (312.5 مغ/كغ من وزن الجسم) 4 أيام قبل الجراحة. واعتبرت الفئران هايبرجليسيميك إذا كانت مستويات الجلوكوز في الدم > 300 ملغ/دل. ويبين الشكل 2 ألف مستويات السكر في الدم من مختلف الفئات. الفئران تلقي الطعوم دون وقت الاسكيمية باردة مطولة من ح 16 بلغ نورموجيلسيميا خلال 24 ساعة بعد زرع الأعضاء، والإبقاء على هذه الحالة الأيضية خلال فترة الملاحظة كامل. في المقابل، ظلت الحيوانات غير زرع هايبرجليسيميك. نظراً لأننا مهتمون بأثر الاسكيمية أضرار الفساد المرتبطة بالإصابة ضخه في وظيفة الغدد الصماء، أضفنا مجموعة ثالثة التي يتعرض فيها الطعوم الوقت الاسكيمية الباردة ح 16 لفترات طويلة (CIT) و 45 دقيقة من الوقت الاسكيمية الحارة (فيت). الفئران التي تتلقى هذه الطعوم لم تصل إلى نورموجليسيميا، وكان لا بد من التضحية بعد 48 ساعة نتيجة لتطور التهاب البنكرياس الحاد، الذي أبدى أن تكون قاتلة في هذا النموذج13.

    هذا النموذج مفيد لمختلف المشاريع الرامية إلى التحقيق في الفساد المبكر الاسكيمية ضخه المرتبطة بالإصابة على الأضرار. شملت إجراء المزيد من التحقيقات، بين أمور أخرى، مجهرية الأسفار إينترافيتال [كنفوكل] للتحديد الكمي لاختلالات microcirculatory إجراء ح 2 بعد زرع الأعضاء. على النقيض ميكروفيسيلس ترقيع تعززت عن طريق حقن 0.3 مل من ديكستران fluorescein isothiocyanate-المسمى 0.4% (MW 150 000) في هذا السياق القضيب. يعرض الشكل 2B نمط شعرية عادية البنكرياس مورين ساذج وطعم زرع البنكرياس، الذي كان لا تتعرض لفترات طويلة CIT (الشكل 2). وفي المقابل، يظهر الشكل 2D انهيار دوران الأوعية الدقيقة نتيجة لفضح الفساد البنكرياس لفترات طويلة سالف الذكر.

    Figure 1
    الشكل 1 : الصور الموضعية. (أ) عرض الموضعية للسفن المتلقية التي أعدت لملامسة. تم افيرتيد على الكفة البولي إثيلين وريدي الوريد الخارجي (1) والثابتة مع 8/0 حرف مزدوج حرير دائرية. في القياس، وقد افيرتيد الشريان السباتي المشترك (2) وثابتة على مدى الرباط الشرياني بولي أميد أصغر. مقياس بار 1 مم. (ب) الاختلاس البنكرياس خارج الموقع. الوريد البابي (1) وعقب السيجارة للشريان الاورطي البطني (2) اللازمة لملامسة الأوعية الدموية. يتم استرداد جنبا إلى جنب مع البنكرياس الطحال (3) ويستخدم كمؤشر. سيتم إزالة الطحال قبل ضخه الاختلاس. مقياس بار 1 سم. عرض الموضعية (ج) أناستوموسيس. (1) هو الوريد البابي سحبت الرباط من حبل الوريد الخارجي افيرتيد (2) والثابتة مع تعميم تعادل حرير 8-0. وبالمثل، يتم سحب السيجارة الابهر الابهر البطني (3) ما يزيد على الكفة الشريان السباتي المشترك افيرتيد (4). مقياس بار 1 مم. (د) عرض الموضعية للاختلاس البنكرياس perfused بعد ضخه دقيقة 5: بعد إزالة الوريد، تليها المشبك الشرياني، يعرض الاختلاس بنجاح زرع البنكرياس لون وردي متجانسة. تم إزالة الطحال قبل ضخه (1: السفينة الطحال الواصلة). تغيير حجم شريط 1 سم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

    Figure 2
    الشكل 2 : وظيفة الغدد الصماء من الاختلاس البنكرياس و [كنفوكل] في فيفو المجهري fluorescence. الشكل 2A يبين تخطيط الخطي مع مستويات السكر في الدم من الفئران زرع دون CIT (n = 10، PTX ث/س CIT، الخط الأزرق)، الفئران غير زرع (n = 11، لا PTX، الخط الأحمر)، والفئران تلقي الطعوم التي تتعرض لفترات طويلة CIT (PTX + ح 16 CIT، n = 10، الخط الأخضر). وقدمت كافة المستلمين سابقا hyperglycemic مع القائمة بالستريبتوزوتوسين يتعلق 312.5 مغ/كغ بينما جميع المستفيدين من الطعوم دون CIT كانت قادرة على البقاء على قيد الحياة فترة الملاحظة كامل (50 يوما) مع وظيفة الغدد الصماء سليمة، بقيت الفئران غير زرع hyperglycemic خلال فترة الملاحظة كامل. الفئران تلقي الطعوم يتعرض إلى ح 16 CIT لم تنتعش من ارتفاع السكر في الدم، وكان لا بد من التضحية ح 48 بعد جراحة زرع الأعضاء، نظراً لفقدان الوزن لأكثر من 10-15%. كانت التضحية الفئران الباقين على قيد الحياة فترة الملاحظة كامل في اليوم 50 بعد قياس glycemia آخر واحد. تم تقييم دوران الأوعية الدقيقة في زرع الطعوم قبل الأسفار إينترافيتال [كنفوكل] مجهرية ح 2 بعد زرع الأعضاء. البنكرياس ساذجة كعناصر تحكم. يبين الشكل 2 نمطاً شعرية عادية في البنكرياس ساذجة. ويعتبر أيضا شبكة شعرية عادية في زرع الطعوم لا تخضع لفترات طويلة CIT (الشكل 2). على النقيض من ذلك، لوحظ أن انهيار دوران الأوعية الدقيقة في زرع الطعوم تتعرض لفترات طويلة CIT (الشكل 2D). مقياس بار 100 ميكرومتر. البيانات في الرسم البياني يتم التعبير عنها ك ± الانحراف المعياري. PTX: زرع بنكرياس؛ الاتصالات وتكنولوجيا المعلومات: الاسكيمية الباردة الوقت؛ ث/س: دون الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

    Discussion

    أضرار الفساد المرتبطة بفرجينيا الملازمة لزرع الأعضاء الصلبة، ويتميز باضطراب في دوران الأوعية الدقيقة. تراكم نواتج الأيض عدة خلال المرحلة الدماغية، والشروع في شلالات التحريضية وساطة أساسا من الأنواع الأكسجين والنيتروجين التفاعلي، النتائج في تلف الأنسجة خلال الابتزاز ضخه4. تتالي هذا قد يعرض للخطر نجاح ليس فقط على المدى القصير، ولكن أيضا على المدى الطويل، ومن ثم كثيرا التأثيرات و بقاء المرضى14. وحتى الآن، يمثل زرع البنكرياس الكلي مجتمعة، والعلاج المفضل للمرضى الذين يعانون من نوع السكري 1 مع نهاية مرحلة المرض الكلوي15. وقد أظهرت دراسات عديدة أن زرع بنكرياس الكلي مشتركة ناجحة لم يكن سوى استعادة وحماية وظائف الكلي الاختلاس في المستلمين السكري، لكن أيضا استقرار أو حتى عكس مضاعفات ثانوية، بما في ذلك الأعصاب، وكذلك المشاريع المتناهية الصغر وماكروانجيوباثي16،،من1718.

    وعلى الرغم من الجهود المستمرة في الحد، والاستبدال، وصقل (3 R) في أبحاث الحيوانات، استنساخ عمليات الفيزيولوجية المرضية المعقدة مثل فرجينيا مستحيل مجرد في الإعدادات في المختبر . ولذلك، تزال تعتبر نماذج حيوانية لتكون أداة مثالية للبحوث متعدية19،20. نماذج الماوس مثل الموضحة هنا له مزايا عديدة مقارنة بالفئران أو الحيوانات الأخرى نماذج. وهذه تشمل توافر كميات هائلة من سلالات الماوس فطري وراثيا المحددة جيدا (مثل سلالات معدلة وراثيا والمغلوب) وعدد كبير من أدوات التحليل الجزيئي، فضلا عن وسيلة سهلة ورخيصة التعامل مع21. وميزة رئيسية لنموذج وصف يكمن في الأسلوب غير خياطة الكفة. باستخدام هذه التقنية المعروضة هنا، معدلات نجاح > 90% قابلة للتحقيق، وهو كبير أفضل النماذج الموصوفة سابقا بالمقارنة مع22. باستخدام هذا الأسلوب غير خياطة، خفضنا إلى حد كبير المضاعفات الشائعة مثل صدمة غائر، وتجلط الدم، وتضيق أناستوموسيس12. وثمة ميزة أخرى لهذا الأسلوب يتكون من موقف خارج البطن للفساد، الذي يرتبط بالانتعاش السريع بعد العملية الجراحية للمتلقي. بالإضافة إلى ذلك، يجعل موقع عنق الرحم مناسبة تماما في فيفو التحليلات، مثل التصوير الحي للابتزاز من اكستيريوريشن دون أي توتر22.

    ويعتبر العيب الرئيسي لهذا النموذج هو انسداد مجرى البنكرياس، التي لا تشبه واقع السريرية. في هذا النموذج، يتولى تصريف إفرازات ربط القناة تشوليدوتشو-البنكرياس. على المدى الطويل، وهذا النتائج في التليف ملحوظ وضمور الغدة دون أن يؤدي إلى التهاب البنكرياس22graft. بسبب هذا التدهور في إفرازات الأنسجة، الذي لاحظ أننا أقرب كما في يوم 30 بعد زرع الأعضاء، ونحن نعتقد أن هذا النموذج غير مناسبة لفترة طويلة الأجل المراقبة. وفي المقابل، يجعل وظيفة الغدد الصماء فوائضه ضوابط gylcemic المستلم كأداة سهلة لتقييم يومي للدالة من الاختلاس13،،من2324.

    وهذه الخصائص تجعل هذا نموذجا مثاليا لتحليل مبكر الاختلاس الإصابات المرتبطة بالحفاظ على فترات طويلة أو مع الحفاظ على مختلف الحلول والتقنيات. ولتحقيق النجاح الأمثل مع هذا النموذج، يجب النظر في عدة خطوات حاسمة. البنكرياس نفسها عرضه للتلاعب. ولذلك، يقلل لطيف التعامل مع استخدام العصي القطن أثناء استرداد الجهاز وغرس الصدمات الميكانيكية. وينبغي تجنب استيعاب مباشرة الغدة مع الملقط، أنه سيفضي حتما إلى أضرار شديدة الفساد. ولنفس السبب، يتم استرداد جنبا إلى جنب مع البنكرياس الطحال، ويستخدم كمؤشر. وهذا هو أيضا أنشئت في الممارسة السريرية. شرك آخر ينطوي على التروية الباردة، الذي يتحقق من نضح عبر الجذع الابهري باستخدام حل نضح الحامض الأميني-تريبتوفان-كيتوجلوتاراتي 4 درجات مئوية. بموجب هذا، يمكن تجنبها تورم الغدة مفرطة التي بيرفوسينج برفق الاختلاس. يجب استخدام الحل نضح المتبقية يبلل الاختلاس، بغية الحفاظ على درجة الحرارة المنخفضة أثناء استرداد الجهاز.

    فيما يتعلق بإعداد المستلم مجموعات تشريح دقيق من حبل الوريد الخارجي فضلا عن الشريان السباتي المشترك القاعدة لنجاح ريفاسكولاريسيشن. في التعرض الكامل وخاصة الوريد عن طريق إزالة جميع روافد، ليس فقط، بل أيضا في الأنسجة الدهنية المحيطة بها، هي ضرورية من أجل تفادي الضغط الخارجي وتضيق بالانسجة الدهنية المتبقية. اختيار أقطار الكفة المناسبة أمر حاسم. استناداً إلى التجربة المشتركة، للفئران وزنها بين 25 إلى 28 ز، قطر داخلي ملم 0.57 للرباط الشرياني، وبين 0.75 و 0.8 ملم للرباط الوريدي، من المناسب. تنظيف قطع حواف الأصفاد دقيقة، إلزامية لتجنب تمزيق السيجارة السفينة. ويتحقق توسع الأوعية، لا سيما من الشريان، أفضل باستخدام سفينة ديلاتاتورس مع نصائح الجميلة. وكقاعدة عامة، ينبغي أن تكون السفينة قادرة على الاتساع التجويف مرتين من الرباط. أثناء عملية افيرتينج السفينة أكثر وتحديد ذلك في الرباط، نوصي بتثبيت المشابك الأوعية الدموية بوضعها تحت رفرف جلد، كما هذا يخفف من هذه الخطوة الحاسمة.

    وكما سبق ذكره، غير خياطة الكفة-التقنية يمثل طريقة سهلة لملامسة الأوعية الدموية ويمكن تنفيذها ضمن 5 دقائق. الموضع الصحيح للفساد في منطقة الرقبة للمستلم غير ذات أهمية قصوى لعودة التوعي الصحيح. بموجب هذا، الموضع الصحيح النهائي من الفساد في منطقة الرقبة قد المتوقعة بغية السماح ملامسة آمنة ومستقيمة وخالية من التوتر في الوريد والشريان. وقد السفن التي تكون طويلة جداً تجنبها، إذ قد يؤدي ذلك إلى إعاقة التدفق إلى الخارج بسبب مجعد. ولنفس السبب، الرباط-المقبض في ملامسة وريدي كما ينبغي إزالة بعد ضخه. في حالات النزف مترجمة من الاختلاس البنكرياس، يمكن تحقيق الأرقاء ناجحة عن طريق ضغط على الجانب النزيف لمدة 5 دقائق باستخدام العصي القطن بلطف. وهذا هو الطريق الوحيد الناجح لإدارة هذا النوع من المضاعفات.الكي، حتى ولو انتقائية للغاية، أدى إلى فقدان الفساد في جميع الحالات تقريبا، بسبب التهاب البنكرياس نخرية.

    وباختصار، قمنا بتطوير طريقة لزرع البنكرياس في الفئران استخدام تقنية غير خياطة الكفة، ممكناً من الناحية التقنية وميكروسورجيكالي ومعدلات نجاح ممتازة. نظراً لتليف بروجريدينت البنكرياس بسبب انسداد مجرى الهواء، هذا النموذج هي مناسبة أفضل للمجالات البحثية التي تركز على بداية الفساد الأضرار. ويهدف هذا المخطوط للسماح للباحثين بأمان إنشاء هذا النموذج في مختبراتها.

    Disclosures

    الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

    Acknowledgments

    هذا العمل أيده المنح #2008-1-596 و # يوني-0404/1956 "Tiroler ويسينشافتسفوندس (توف)" (https://www.tirol.gv.at/en/)، وعن طريق منحة #2013-042018 من "Förderungsprogramm بدء تشغيل واجهة المستخدم المتعددة اللغات" في "إنسبروك الجامعة الطبية".

    Materials

    Name Company Catalog Number Comments
    Adventitia Scissors S&T S-00102 Straight
    Dumont # 7 Forceps FST  11271- 30 Curved Tip 0.17 x 0.1 mm
    Yasargil Clip Mini Permanent 7mm Aesculap FE720K
    Micro vessel clip S&T B1 00396 V
    Vessel dilatator S&T D-5a.2, 00125
    Clip applier S & T CAF-4 00072 for venous cuff
    Clip applier Aesculap FE572K  for the arterial cuff
    Polyethylene tube Portex Ltd Inner diameter 0.75 mm for venous cuff
    Polymide tubing Vention Medical  141-0051 Inner diameter 0.8 mm (Alternative for polyethylene tube from Portex Ltd)
    Polymide tubing Vention Medical 141-0033 Inner diameter 0.57 mm for arteriail cuff
    Bipolar forceps Micromed 140-100-015
    8/0 silk ligatures Catgut GmbH, Merkuramed 17209008
    Custodiol HTK solution Dr. Franz Köhler Chemie 59997
    Ketamin Graeub aniMedica GmbH 32554
    Xylasol Graeub aniMedica GmbH 50855

    DOWNLOAD MATERIALS LIST

    References

    1. Gruessner, A. C. 2011 update on pancreas transplantation: comprehensive trend analysis of 25,000 cases followed up over the course of twenty-four years at the International Pancreas Transplant Registry (IPTR). Rev Diabet Stud. 8, (1), 6-16 (2011).
    2. Troppmann, C. Complications after pancreas transplantation. Curr Opin Organ Transplant. 15, (1), 112-118 (2010).
    3. Fernández-Cruz, L., et al. Native and graft pancreatitis following combined pancreas-renal transplantation. Br J Surg. 80, (11), 1429-1432 (1993).
    4. Eltzschig, H. K., Eckle, T. Ischemia and reperfusion-from mechanism to translation. Nat Med. 17, (11), 1391-1401 (2011).
    5. Konigsrainer, A., Habringer, C., Krausler, R., Margreiter, R. A technique of pancreas transplantation in the rat securing pancreatic juice for monitoring. Transpl. Int. 3, (3), 181-182 (1990).
    6. Lee, S., Tung, K., Koopmans, H., Chandler, J., Orloff, M. Pancreaticoduodenal transplantation in the rat. Transplantation. 13, (4), 421-425 (1972).
    7. Tori, M., Ito, T., Matsuda, H., Shirakura, R., Nozawa, M. Model of mouse pancreaticoduodenal transplantation. Microsurgery. 19, (2), 61-65 (1999).
    8. Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. (92), e50753 (2014).
    9. Brandacher, G., et al. Tetrahydrobiopterin compounds prolong allograft survival independently of their effect on nitric oxide synthase activity. Transplantation. 81, (4), 583-589 (2006).
    10. Zou, Y., Brandacher, G., Margreiter, R., Steurer, W. Cervical heterotopic arterialized liver transplantation in the mouse. J Surg Res. 93, (1), 97-100 (2000).
    11. Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant. Exp Clin Transplant. 8, (3), 245-249 (2010).
    12. Liu, X. Y., Xue, L., Zheng, X., Yan, S., Zheng, S. S. Pancreas transplantation in the mouse. Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 9, (3), 254-258 (2010).
    13. Maglione, M., et al. Donor pretreatment with tetrahydrobiopterin saves pancreatic isografts from ischemia reperfusion injury in a mouse model. Am J Transplant. 10, (10), 2231-2240 (2010).
    14. Drognitz, O., Obermaier, R., von Dobschuetz, E., Pisarski, P., Neeff, H. Pancreas transplantation and ischemia-reperfusion injury: current considerations. Pancreas. 38, (2), 226-227 (2009).
    15. White, S., Shaw, J., Sutherland, D. Pancreas transplantation. Lancet. 373, (9677), 1808-1817 (2009).
    16. Morath, C., et al. Simultaneous pancreas-kidney transplantation in type 1 diabetes. Clin Transplant. 23, (Suppl 21), 115-120 (2009).
    17. Perseghin, G., et al. Cross-sectional assessment of the effect of kidney and kidney-pancreas transplantation on resting left ventricular energy metabolism in type 1 diabetic-uremic patients: a phosphorous-31 magnetic resonance spectroscopy study. J Am Coll Cardiol. 46, (6), 1085-1092 (2005).
    18. Secchi, A., Caldara, R., La Rocca, E., Fiorina, P., Di Carlo, V. Cardiovascular disease and neoplasms after pancreas transplantation. Lancet. 352, (9121), 65 (1998).
    19. Kirk, A. D. Crossing the bridge: large animal models in translational transplantation research. Immunol Rev. 196, 176-196 (2003).
    20. de Jong, M., Maina, T. Of mice and humans: are they the same?--Implications in cancer translational research. J Nucl Med. 51, (4), 501-504 (2010).
    21. Niimi, M. The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon. J Heart Lung Transplant. 20, (10), 1123-1128 (2001).
    22. Maglione, M., et al. A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis. Surgery. 141, (5), 682-689 (2007).
    23. Cardini, B., et al. Crucial role for neuronal nitric oxide synthase in early microcirculatory derangement and recipient survival following murine pancreas transplantation. PLoS One. 9, (11), e112570 (2014).
    24. Maglione, M., et al. Prevention of lethal murine pancreas ischemia reperfusion injury is specific for tetrahydrobiopterin. Transpl Int. 25, (10), 1084-1095 (2012).

    Comments

    0 Comments


      Post a Question / Comment / Request

      You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

      Usage Statistics