Neurologiskt betingade bedömningar i en musmodell av Neonatal hypoxisk-ischemisk hjärnskada

Published 11/24/2017
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Neuroscience

Your institution must subscribe to JoVE's Neuroscience section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Vi utförde ensidiga halspulsådern ocklusion postnatal dag 7-10 CD-1 mus pups att skapa en neonatal hypoxisk-ischemisk (HI) modell och undersökt effekterna av HI hjärnskada. Vi studerade neurologiskt betingade funktioner hos dessa möss jämfört med icke-operatör normala möss.

Cite this Article

Copy Citation

Kim, M., Yu, J. H., Seo, J. H., Shin, Y. K., Wi, S., Baek, A., et al. Neurobehavioral Assessments in a Mouse Model of Neonatal Hypoxic-ischemic Brain Injury. J. Vis. Exp. (129), e55838, doi:10.3791/55838 (2017).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Vi utförde ensidiga halspulsådern ocklusion på CD-1 möss att skapa en neonatal hypoxisk-ischemisk (HI) modell och undersökt effekterna av neonatal HI hjärnskada genom att studera neurologiskt betingade funktioner hos dessa möss jämfört med icke-operatör (dvs. normala) möss. Under studien användes ris-Vannuccis metod att inducera neonatal HI hjärnskador i postnatal dag 7-10 (P7-10) möss. HI operationen utfördes på valparna av ensidiga halspulsådern ligering och exponering till hypoxi (8% O2 och 92% N2 för 90 min). En vecka efter operationen, skadade hjärnor utvärderades med blotta ögat genom halvtransparent skallen och var kategoriseras in i undergrupper baserat på frånvaro (”inga kortikala skadan” grupp) eller närvaro (”kortikala skadan” grupp) av kortikala skadan, till exempel en skada i höger hjärnhalva. På vecka 6, följande neurologiskt betingade tester utfördes för att utvärdera de kognitiva och motoriska funktionerna: passivt undvikande uppgift (PAT), stege walking test och grepp hållfasthetsprovningen. Dessa beteendemässiga tester är bra att fastställa effekterna av neonatal HI hjärnskada och används i andra musmodeller av neurodegenerativa sjukdomar. I denna studie visade neonatal HI hjärnan skada möss motoriska brister som motsvarade högra hjärnhalvan skador. Beteendemässiga resultaten är relevanta för de brister som observerats hos neonatala HI patienter, såsom cerebral pares eller neonatal strokepatienter. I denna studie en musmodell av neonatal HI hjärnskada inrättades och visade olika grader av motor underskott och kognitiv försämring jämfört med icke-operatör möss. Detta arbete ger grundläggande information om HI musmodell. MRI-bilder visar de olika fenotyperna, åtskilda enligt svårighetsgraden av hjärnskador av motoriska och kognitiva tester.

Introduction

Neonatal HI hjärnskada uppstår under tidig barndom (cirka två patienter per 1 000 barn)1,2,3,4,5. Studier om neonatal HI hjärnskada är viktigt, och med hjälp av en etablerad musmodell för neonatal HI hjärnan skada kan underlätta i vivo preklinisk forskning på HI hjärnskada.

Traditionella HI modeller används på vuxna råttor6. För den nyfödda modellen används ofta metoden ris-Vannucci på P7 råttor7,8. Men eftersom råttor och möss är något annorlunda9,10, trots att de båda gnagare, vi utfört en modifierat ris-Vannucci metod på CD-1 valpar på P7-10, baserat på tidigare studier som visade att P7-10 är perioden med omogna oligodendrocyter, motsvarar mänskliga termen P011,12. Neonatal HI musmodell etableras genom både ligering av den ensidiga halspulsådern och mössen exponering för hypoxi med 8% syre i P7-10 ungar.

Mössen utsättas för det förfarande som visade olika grader av hjärnskador i området posterolateral i höger hjärnhalva. För att identifiera den kognitiva och motoriska brister, neurologiskt betingade bedömningar baserade på PAT, utfördes stege walking test, och grepp styrka test. Skillnaderna mellan icke-operatör (dvs. normalt) och HI möss analyserades. Detta arbete presenteras grundläggande information om HI musmodell. MRI bilderna visar de olika fenotyperna, skilda enligt svårighetsgraden av hjärnan skador med hjälp av motoriska och kognitiva tester.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alla djur var inrymt i en standard bur (27 × 22,5 × 14 cm-3) i en anläggning ackrediterade av föreningen för bedömning och ackreditering av Laboratory Animal Care (AAALAC) och får mat och vatten ad libitum under omväxlande 12-h ljus/mörk cykler. Författarna följde djurskyddsbestämmelserna, och de experimentella rutiner godkändes av den institutionella djur vård och användning kommittén av Yonsei University College of Medicine (IACUC nr 2010-0252; 2013-0220).

1. musmodell av Neonatal HI hjärnskada

  1. Söva pups med isofluran.
    1. Placera pups (mindre än 5) in en anesthetizing låda och Stäng locket.
    2. Slå på anesthetizing systemet för cirka 15 min; Justera gas och isofluran använder en tabell top anestesi maskin. Justera syre flödesmätarens till 1,5 L/min. Justera den isofluran spridare till 3-5% för induktion av anestesi.
    3. Efter 15 min, justera den isofluran spridare till 1-2% för underhåll av anestesi.
  2. Lägga en fullt sövda pup i dissektion Mikroskop (buken inför forskaren) och säkra den med tejp.
  3. Göra ett ~0.7-mm snitt i halsen med steriliserad sax.
  4. Ta försiktigt bort den fettvävnad som använder steriliserad pincett och exponera den ensidiga rätt halspulsådern.
  5. Ligera den ensidiga rätt halspulsådern med en 5-0 resorberbar sutur.
  6. Sutur snittet i halsen med 5-0 sutur.
  7. Placera varje valp i en 37 ° C varma hypoxisk kammare för 1 h för återvinning. Stäng inte locket kammare.
  8. 1 h efter operationen, när valparna är helt vaken, Stäng hypoxi kammare locket och minska gas nivåer för att fastställa hypoxisk villkor (8% O2 och 92% N2).
  9. Efter 90 min av hypoxi, återvänder pups till sina burar.
  10. En vecka efter den HI hjärnskada, upprepa steg 1.
    1. Efter anestesi, gör ett snitt i hårbotten med steriliserad sax och pincett att identifiera hjärnan lesionen i området posterolateral i höger hjärnhalva.
      Obs: Denna behandling framkallar syrebrist i valpar. Förekomsten och omfattningen av hjärnskada i alla möss bedöms visuellt med blotta ögat genom halvtransparent skallen. Som bestäms av storlek eller volym av missfärgning (dvs hjärnan lesionen), är ungar indelade i grupper. Om det finns inga synliga kortikala skadan, indelas musen i gruppen ”inga kortikala skadan”. Om det finns en synlig kortikala skada (dvs. en lesion i höger hjärnhalva), klassificeras musen i gruppen ”kortikala skadan”. Eftersom klassificeringen av möss i grupper sker en vecka efter operationen, kan grupperingarna ändras när morfologier av hjärnan proverna definieras tydligt vid tidpunkten för offer1,2,3, 4.

Figure 1
Figur 1: Modellering neonatal HI hjärnskada hos möss.
(A) en sju dagar gamla mus pup opererades och den ensidiga rätt halspulsådern var sammanskrivna. (B) pups placerades i en hypoxisk kammare för 90 min. med 8% O2 och 92% N2. (C, D och E) Hjärnor med neonatal HI skada visade olika svårighetsgrad av skada och var kategoriseras baserat på graden av skada. Vecka 14, hjärnor erhölls och lesioner var visualiserat. (C) bild av en hjärna som klassificeras som en ”inga kortikala skada”. Båda (D) och (E) klassificerades i gruppen ”kortikala skadan”. (F, G och H) Representativa MRT av (C), (D), och (E) möss, respektive. (F) skada i hippocampus indikeras med en gul pil och lesioner i den högra hjärnhalvan är också indicerat med gula pilar (G och H). Skala barer = 1 mm vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.

2. neonatal beteendemässiga tester

Obs: Här, de beteendemässiga testerna utfördes vid 6 veckors ålder.

  1. Passivt undvikande uppgift.
    Obs: För att utvärdera minnesfunktion baserat på lärande och undvikande av ett aversivt stimulus, en två-fack steg-genom PAT bör genomförs13,14,15,16.
    1. Placera musen i ljusa facket av Plexiglas transfer rutan (41,5 × 21 × 35 cm-3) i en PAT apparatur.
    2. Efter 30 s, öppna dörren giljotinen och spela in latenstid för musen för att flytta i mörka facket (upp till 300 s).
    3. Stäng luckan till giljotinen när alla fyra extremiteterna av musen är helt inne i mörka facket.
    4. Administrera elektriska fot chock (0,5 mA) för 2 s och musen tillbaka till sin bur.
    5. Ersätta musen i den ljusa facket 24 h efter elektrisk fot chocken.
    6. Öppna den giljotin dörr 10 s efter musen placeras fullt i ljusa kupén och registrera latenstid för musen för att flytta i mörka facket (upp till 300 s).
  2. Stege walking test.
    Obs: Stege rung gångavstånd uppgift tillåter diskriminering mellan subtila störningar av motorisk funktion genom att kombinera kvalitativa och kvantitativa analyser av skickliga gångavstånd17,18.
    1. Slå på en videokamera.
    2. Placera musen på panelen start av stege och omedelbart börja inspelningen.
    3. Spela in video, med fokus på mus armar och ben.
    4. Stoppa inspelning när musen berör den sista panelen på stegen. Upprepa och tillbaka resan fyra gånger.
    5. Analysera videoinspelning och manuellt räkna antalet glider av varje framben, enligt följande:
      1. Spela inspelning av video på en dator med låg hastighet (0,1 x) och räkna stegen manuellt.
  3. Grepp hållfasthetsprovningen.
    Obs: Grepp hållfasthetsprovningen utförs med ett grepp styrka mätaren, vilket inkluderar en push-pull töjningsmätaren.
    1. Fixa grepp styrka apparaten på en akryl panel.
    2. Placera musen på panelen akryl och håll stjärten.
      1. Flytta handen håller svansen så att musen kan nå och grepp i metalltråd av apparaten.
    3. Tillåt flera prövningar tills musen grips en triangulär bit metalltråd (2 mm i diameter); Slaganordningens maximala kraft registreras automatiskt i gram av apparaten.
      Obs: Använd medelfrekvensen kraft tre prövningar för analys19,20,21.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Alla data är uttryckta som medelvärde ± standardavvikelsen för medelvärdet (SEM). Jämförelse av variabler mellan de två grupperna genomfördes med hjälp av en oberoende eller Parade t-test på SPSS statistikprogram. En p-värdet < 0.05 ansågs statistiskt signifikant.

Hjärnor med neonatal HI skada visade olika svårighetsgrad av skada och var kategoriseras med detta (figur 1 c- E). Hjärnor erhölls vid vecka 14 och lesioner var visualiserat. Figur 1 c visar en hjärna som klassificeras som en ”inga kortikala skadan” hjärnan, figur 1 d visar en hjärna som klassificeras som en mild skada och figur 1E visar en allvarligt skadad hjärna. Både (D) mild och (E) svåra skador klassificerades i gruppen ”kortikala skadan”. Efter operationen HI var 13 veckor gamla möss avbildas med hjälp av MRI, och resultaten (figur 1F-H) är representativa bilder av (C), (D), och (E) skador, respektive. Även om det fanns inga betydande lesion på morfologin av hjärnan, MRI bilden visade Hippocampus skada (figur 1F). Skador på hippocampus (figur 1F, anges med en gul pil) framgår något i lindrigt skadade hjärnan. En allvarligt skadad hjärna förlorade musen de flesta av den högra hjärnhalvan (figur 1 g och H, anges med en gul pil).

Eftersom hjärnor med HI skada visade Hippocampus skadafigur 1F-H, utställda möss med HI skada minne underskott jämfört med de normala möss. PAT prestanda är närbesläktad med Hippocampus skador13,15,16,19. Figur 2 visar att möss med HI skada hade mer kognitiva underskott än normala möss13, bedömt i PAT (normala n = 10; HI-n = 9). En statistiskt signifikant skillnad observerades mellan baslinjen och 24-h minnestest hos normala möss, vilket visas i figur 2A (*p = 0,003 baserat på ett parat t-test). Figur 2B visar förändringarna i kognitiv funktion i HI skada mössen jämfört med normala möss (delta (Δ) är skillnaden mellan baslinjen och 24-h test)13.

Eftersom endast den högra hjärnhalvan var skadad, neonatal HI hjärnan skada möss visade hemiplegi motoriska funktioner. Skillnaden i andelen följesedlar på tvärgående stegpinnarna av stegen i förhållande till det totala antalet åtgärder som vidtagits av varje forelimb användes för att jämföra normala möss med neonatal HI hjärnan skada möss17,19. Figur 3 visar att slip kontralaterala forelimb i HI hjärnan skada mössen var betydligt högre än i de normala möss (normala n = 19; Hej n = 18; *p = 0,010 baserat på ett oberoende t-test)22, men ingen skillnad observerades i ipsilaterala forelimb(p = 0,798 baserat på ett oberoende t-test).

Dessutom eftersom greppstyrka innebär motoriska cortex i hjärnan, normal och kortikala skadan grupperna visade skillnader i grepp makt. Även om resultaten från greppstyrka testa visade ingen skillnad mellan normal och inga kortikala skadan möss (figur 4A; normala n = 4; inga kortikala skadan n = 12), grafen visar att grepp kraften i kontralaterala forelimb var betydligt svagare i kortikala skadan möss än i de normala möss (figur 4B, normala n = 4; kortikala skadan n = 36; *p = 0,036 baserat på ett oberoende t-test)21,22,23.

Figure 2
Figur 2: PAT i neonatal HI hjärnskada och normala möss.
(A) latenstid i ljusa kupén var mätt och jämfört mellan neonatal HI hjärnskada och normala möss (n = 9 och n = 10, respektive). (B) mätning vid tidpunkten för den elektroniska chocken ansågs baslinjen, och långtidsminnet utvärderades 24 h efter det elektriska stöt. Delta (Δ) 24-h latens var skillnaden mellan funktionen utvärderas på 24 h och vid baslinjen. p< 0,05; alla data uttrycks som den medelvärde ± SEM vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.

Figure 3
Figur 3: Forelimb slip hastighet i stege walking test.
Av kontralateral och ipsilaterala forelimb slip utvärderades mellan normal och HI hjärnan skada möss (n = 19 och n = 18, respektive). p< 0,05; alla data uttrycks som den medelvärde ± SEM. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.

Figure 4
Figur 4: Grepp hållfasthetsprovningen i neonatal HI hjärnskada och normala möss.
Grepp kraften i kontralaterala forelimb var utvärderas och jämförs mellan (A) normal, inga kortikala skadan och (B) kortikala skadan möss (n = 4, n = 12, n = 36). * p< 0,05; alla data uttrycks som den medelvärde ± SEM. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

I denna studie vi inducerad HI hjärnskada i en neonatal P7-10 CD-1 mus och identifierade hjärnskador med relevanta kognitiva och motoriska brister. Under detta förfarande var ocklusion av den ensidiga rätt halspulsådern kritisk. I det här steget kan artären vara skadad och slits. De flesta valpar som upplevt en artär tår dog. Omvänt, om forskare sammanskrivna en annan blod ven i stället för den ensidiga rätt halspulsådern, hjärnan av pup skadades endast lindrigt och inga betydande fenotyp kunde observeras24.

I denna studie på grund av variationer i möss och lesion volym, hjärnor var kategoriseras in i flera grupper (Figur 1 C-H). Flera möss med lindrigt skadade hjärnor hade skador endast i hippocampus och inte i kortikala regionen (figur 1F)13. Omvänt, flera möss med allvarligt skadade hjärnor förlorade de flesta av den högra hjärnhalvan, och cortices var allvarligt skadade (figur 1 g och H). Forskare bör därför identifiera storleken på lesionen en vecka efter den procedur19,25. Eftersom hjärnor utvärderades med Magnettomografi, var bestämning av volymen och storleken på en lesion mer tillförlitliga. Därför rekommenderar vi att forskare utvärdera hjärnor med hjälp av MRI, även om okulärbesiktning med blotta ögat är också möjlig.

Cerebral pares uppstår vanligen under tidig barndom, med en incidens av cirka två patienter per 1 000 barn5. Eftersom neonatal HI musmodell kunde vara en representativ modell av cerebral pares eller neonatal stroke4,11,26, originalplansinformationen från denna studie kan användas i preklinisk forskning på cerebral pares eller neonatal stroke.

Neurologiskt betingade bedömningar är användbara för att identifiera fenotyperna av kognitiva och motoriska underskott13. Neurologiskt betingade bedömningar infördes i denna studie är också anpassningsbara och används ofta för andra neurodegenerativa sjukdomar, som Huntingtons, Parkinsonss, och så vidare. Forskare bör vara medveten om att försökspersoner under PAT, få en elektrisk stöt. Därför bör PAT utföras senast, så elstöt inte påverkar de andra beteendemässiga bedömningarna.

För vidare studier behöver forskarna studera en sham manövrerade grupp jämfört med gruppen HI. För en specifik kontrollgrupp, kan forskare gör ett snitt på halsen och stänga snittet utan någon artär ligatur. För att efterlikna HI operationen, bör dessa valpar sättas in i hypoxisk kammaren, men utan hypoxi, för samma tid som en HI-gruppen innan de returneras till sina burar.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna har ingen konkurrerande intressen.

Acknowledgements

Denna studie stöddes av bidrag från National Research Foundation (NRF-2014R1A2A1A11052042; 2015M3A9B4067068), ministeriet för vetenskap och teknik, Republiken Korea, koreanska hälsa teknik R & D projekt (HI16C1012), hälsoministeriet & Välfärd, Republiken Korea och programmet ”Dongwha” fakulteten forskning bistånd av Yonsei University College of Medicine (6-2016-0126).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hypoxic chamber Jeung Do Bio & Plant Co Experimental Builder
PAT apparatus Jeung Do Bio & Plant Co Experimental Builder
The ladder rung walking Jeung Do Bio & Plant Co Experimental Builder
SDI Grip Strength System San Diego Instruments Inc.
Grip-Strength Meter Ugo Basile 47200
Harvard Apparatus Fluovac anesthetizing system  Harvard Apparatus
Anesthetizing box acryl box
I-Fran Liquid (Isofluorane) Hana Pharm. Co., Ltd. General Anesthetics ( isoflurane 100ml)
CD-1 mice Orient Co., Ltd.
Blue Nylon Mono Non-Absorbbable suture 5-0 50cm Ailee Co., Ltd. NB 521
IBM SPSS Statistics IBM Ver. 23

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Yager, J. Y. Animal models of hypoxic-ischemic brain damage in the newborn. Semin Pediatr Neurol. 11, (1), 31-46 (2004).
  2. Vannucci, R. C., et al. Rat model of perinatal hypoxic-ischemic brain damage. J Neurosci Res. 55, (2), 158-163 (1999).
  3. Im, S. H., et al. Induction of striatal neurogenesis enhances functional recovery in an adult animal model of neonatal hypoxic-ischemic brain injury. Neuroscience. 169, (1), 259-268 (2010).
  4. Clowry, G. J., Basuodan, R., Chan, F. What are the Best Animal Models for Testing Early Intervention in Cerebral Palsy? Front Neurol. 5, (258), 1-17 (2014).
  5. Colver, A., Fairhurst, C., Pharoah, P. O. Cerebral palsy. Lancet. 383, (9924), 1240-1249 (2014).
  6. Levine, S. Anoxic-ischemic encephalopathy in rats. Am J Pathol. 36, 1-17 (1960).
  7. Rice 3rd, J. E., Vannucci, R. C., Brierley, J. B. The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat. Ann Neurol. 9, (2), 131-141 (1981).
  8. Lafemina, M. J., Sheldon, R. A., Ferriero, D. M. Acute hypoxia-ischemia results in hydrogen peroxide accumulation in neonatal but not adult mouse brain. Pediatr Res. 59, (5), 680-683 (2006).
  9. Brazel, C. Y., Rosti 3rd, R. T., Boyce, S., Rothstein, R. P., Levison, S. W. Perinatal hypoxia/ischemia damages and depletes progenitors from the mouse subventricular zone. Dev Neurosci. 26, (2-4), 266-274 (2004).
  10. Buono, K. D., et al. Mechanisms of mouse neural precursor expansion after neonatal hypoxia-ischemia. J Neurosci. 35, (23), 8855-8865 (2015).
  11. Rumajogee, P., Bregman, T., Miller, S. P., Yager, J. Y., Fehlings, M. G. Rodent Hypoxia-Ischemia Models for Cerebral Palsy Research: A Systematic Review. Front Neurol. 7, (57), 1-20 (2016).
  12. Hagberg, H., Peebles, D., Mallard, C. Models of white matter injury: comparison of infectious, hypoxic-ischemic, and excitotoxic insults. Ment Retard Dev Disabil Res Rev. 8, (1), 30-38 (2002).
  13. Wi, S., Yu, J. H., Kim, M., Cho, S. R. In Vivo Expression of Reprogramming Factors Increases Hippocampal Neurogenesis and Synaptic Plasticity in Chronic Hypoxic-Ischemic Brain Injury. Neural Plast. 2016, (2580837), 1-11 (2016).
  14. Lu, Y., Christian, K., Lu, B. BDNF: a key regulator for protein synthesis-dependent LTP and long-term memory? Neurobiol Learn Mem. 89, (3), 312-323 (2008).
  15. Manabe, T., et al. Facilitation of long-term potentiation and memory in mice lacking nociceptin receptors. Nature. 394, (6693), 577-581 (1998).
  16. Alonso, M., et al. BDNF-triggered events in the rat hippocampus are required for both short- and long-term memory formation. Hippocampus. 12, (4), 551-560 (2002).
  17. Seo, J. H., et al. In Situ Pluripotency Factor Expression Promotes Functional Recovery From Cerebral Ischemia. Mol Ther. 24, (9), 1538-1549 (2016).
  18. Kim, M. S., et al. Environmental enrichment enhances synaptic plasticity by internalization of striatal dopamine transporters. J Cereb Blood Flow Metab. 36, (12), 2122-2133 (2015).
  19. Lee, M. Y., et al. Alteration of synaptic activity-regulating genes underlying functional improvement by long-term exposure to an enriched environment in the adult brain. Neurorehabil Neural Repair. 27, (6), 561-574 (2013).
  20. Rha, D. W., et al. Effects of constraint-induced movement therapy on neurogenesis and functional recovery after early hypoxic-ischemic injury in mice. Dev Med Child Neurol. 53, (4), 327-333 (2011).
  21. Chong, H. J., Cho, S. R., Jeong, E., Kim, S. J. Finger exercise with keyboard playing in adults with cerebral palsy: A preliminary study. J Exerc Rehabil. 9, (4), 420-425 (2013).
  22. Chong, H. J., Cho, S. R., Kim, S. J. Hand rehabilitation using MIDI keyboard playing in adolescents with brain damage: a preliminary study. NeuroRehabilitation. 34, (1), 147-155 (2014).
  23. Seo, J. H., Yu, J. H., Suh, H., Kim, M. S., Cho, S. R. Fibroblast growth factor-2 induced by enriched environment enhances angiogenesis and motor function in chronic hypoxic-ischemic brain injury. PLoS One. 8, (9), e74405 (2013).
  24. Washington, P. M., et al. The effect of injury severity on behavior: a phenotypic study of cognitive and emotional deficits after mild, moderate, and severe controlled cortical impact injury in mice. J Neurotrauma. 29, (13), 2283-2296 (2012).
  25. Cho, S. R., et al. Astroglial Activation by an Enriched Environment after Transplantation of Mesenchymal Stem Cells Enhances Angiogenesis after Hypoxic-Ischemic Brain Injury. Int J Mol Sci. 17, (9), 1-15 (2016).
  26. Tsuji, M., et al. A novel reproducible model of neonatal stroke in mice: comparison with a hypoxia-ischemia model. Exp Neurol. 247, 218-225 (2013).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats