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真空の血のコレクション システムと非麻酔下ラットの尾静脈からの採血を繰り返す

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Summary

ここでは、吸引チューブを用いた非麻酔下ラットの単純な尾静脈採血法について述べる。このメソッドは、血液への直接暴露のリスクを低減し、簡単に単一の穿刺から複数のサンプルを取ってします。

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Zou, W., Yang, Y., Gu, Y., Zhu, P., Zhang, M., Cheng, Z., Liu, X., Yu, Y., Peng, X. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. J. Vis. Exp. (130), e55852, doi:10.3791/55852 (2017).

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Abstract

血液は、サンプリング場所の数のラットから収集できます。例えば、尾静脈採血の真向かいにあります。ただし、尾静脈薄いは穿刺するは難しいことがあります。さらに、尾静脈低血流には、十分な血液を取得するサンプリング間隔の長い時間が必要です。本報告では、単純な血液サンプリング法、真空採血の収集方法、通常非麻酔のラットに使用ここで、患者から血液サンプルを取得するために使用について説明します。22 G 蝶針の先端が約 20 °、および血の角度で尻尾の先端から約 2-3 cm は va に蝶針のゴムの端を挿入して真空チューブで収集された外側尾静脈のいずれかに挿入されました。cuum 採血管。現在の実験では、実験群は 95% と 90% 初心者グループの成功率であったことを示します。成功率穿刺時間が 2 つのグループ間で類似し。サンプリング期間であった初心者グループと比較実験群で有意に短かった。結論としては、この真空採血方法非麻酔下ラットの尾静脈からの連続採血が可能かつ簡単に学ぶこと、他の信頼性の高い代替従来使用血液サンプリング技術となる可能性があります。ラット。

Introduction

ラットから採血は、さまざまな実験的研究に必要です。ラットから採血の技術、心、レトロ軌道神経叢、頚静脈、伏在静脈、尻尾の血管、頚動脈、腹部大動脈と上大静脈の穿刺があります。麻酔1,2(大伏在静脈と尻尾の血管穿刺) を除くほとんどのテクニックが必要です。ラットの尾の静脈は定期的に採血、血管注射の穴を開けます。暖かい水でテールを治療後血管は拡張そして操作に適したラットが麻酔3時でさえ。

実験小動物2の血液サンプルを取得する新しい、改良された技術の開発、にもかかわらず常に小動物からサンプリングするときに十分な血液を得やすくないです。ラットの尾静脈血サンプリング4の真向かいにあります。ただし、尾静脈が薄く、従ってそれを穴をあけることは難しい、その低血流による十分な血液を得るため長い時間がかかるでしょう。採血吸引チューブ システムを介して、日常臨床で典型的な方法です。このクローズド システムにより採血の血への直接暴露のリスクを低減し、単一の穿刺5から複数のサンプルを容易にしました。本報告では、吸引チューブを用いた非麻酔下ラットにおける単純な尾静脈採血法について説明します。この方法は簡単にマスターし、大量のラットにおける繰り返し血液を取得する使用できます。

Protocol

すべてのプロシージャは、動物ケア委員会の華中大学の科学と技術 (武漢、中国) に同済医学大学評議会によって承認されました。原稿が到着に従って準備された (動物資源研究領域: In Vivo実験のレポート) のガイドライン6

1. 畜産

  1. Sprague-dawley (SD) ラットを使用 (n = 20、男性 10 例、8 週齢、261 に 291 g の重量を量ることを意味 = 272.85 ±9.07 g) 実験動物センターの華中科学技術大学から、ケアとの使用のためのガイドに従いラットを維持実験動物、米国国立衛生研究所 (NIH 文書 No.85-23, 1996 改訂) 刊
  2. ハウス食品や飲料水への無料アクセスと標準的な条件の下で。保つ木シェービング 530 cm2ケージでラットは寝具します。各ケージに 2 匹のラットを家します。部屋の環境 (マイクロ分離または換気ケージング) にすべてのケージを開けてください。
  3. 実験的プロトコルに携わるスタッフは定期的にラットを扱うことを確認します。
  4. 部屋の温度 21 ° C と 23 ° c. の間を維持します。通常塩の食事料金を与える (0.3 %nacl) 研究中。

2. 採血手順

注: 真空の血のコレクション システム二重先の尖った針 [22 G (0.7 mm × 25 mm)] のプラスチック製のホルダーとゴム栓 (図 1) と真空管 (2 mL) のシリーズで構成されます。

  1. プラスチック製の拘束ホルダーでラットを置き、目に見える汚れや糞便を除去する (20-30 ° C) ぬるま湯で尻尾を洗います。アシスタントは、拡張の位置に尻尾を保持している、70% エタノール、尾を拭き、オフに静脈にガーゼで拭き取ります。
  2. 22 G 蝶針の先端を挿入位置外側尾静脈 (5 mm 程度) のいずれか (図 2) 約 20 ° の角度で尾の先端から約 2-3 cm。真空の血のコレクションの管 (図 3) に蝶針のゴムの端を挿入することによって真空のコレクションの管に血液を収集します。
    注: 最大コレクション血液量は 1.2 mL7です。
  3. 血のコレクションの後針を除去し、血液の流れを停止する 15 30 s のガーゼで穿刺部位を軽く押さえます。プラスチック製の拘束ホルダーからラットをリリースし、そのケージにラットを返します。
  4. 血血しょうを収集するために抗凝固剤として EDTA を含むチューブを使用します。優しく血液抗凝固剤を混合し、氷の上、サンプルに縦置きに数回チューブを反転します。
  5. 血漿または血清を分離する 10 分間 2,000 x g で冷却遠心分離機の血液サンプル コレクション チューブを遠心します。
  6. 血漿/血清、赤と白の血液細胞層を邪魔しないように世話を抽出します。血清を収集するには、抗凝固剤なしのチューブを使用します。サンプルの両方のタイプは、すぐに使用または 1 年間-80 ° C で保存できます。
    注: 成功した血のコレクションは、毎回 1.2 mL の血液を得ることとして定義されました。最大穿刺時間が設定された 3 つの試験に第 3 穿刺後総血液量は 1.2 mL より低いそれを定義した場合失敗した血のコレクションとして。サンプリング期間は、尾静脈穿刺から採血後蝶針の除去を開始します。
  7. 72 週間以内に 2 回血を収集します。
    1. テストし、この手法の有効性を確認この血液コレクション プロトコルを実行する前に 2 h の 2 つの医学生 (初心者) を訓練します。20 ラットを使用し、10 ラット 2 経験豊富な仲間 (実験群) と 2 の医学生 (初心者グループ) によって 10 のラットから採血します。

3. 統計解析

  1. 平均値 ± 標準偏差としてデータを表現し、SPSS 統計 17 で分析します。Α 値 0.05 選ばれた、したがって p < 0.05 は、統計的に有意と考えられていた。

Representative Results

サンプリング期間、体の質量、および 2 つのグループの採血量
血は、各グループで 2 週間以内に 2 回 10 ラット (男性 5) から採取しました。両方のグループの平均体重が似ていた (272.00 ±9.66 g と 273.70 ±8.87 g)。サンプリング時間は初心者グループと比較実験群で有意に短かった (3.28 ±0.83 分、p 対 2.77 ±0.53 分 < 0.05) (表 1)。

成功率し、2 つのグループの回の穿刺
成功率は 95% (19/20) 実験群と 90% (18/20) 初心者のためのグループ (p > 0.05)。穿刺時間は大幅に異なる 2 つのグループの間なかった (1.85 ± 0.75 分、p 対 1.50 ±0.61 分 > 0.05) (表 2)。この方法は簡単に学ぶこと、そしてトレーニング 2 時間後技術を習得できることが示唆されました。

Figure 1
図 1:2 mL 真空採血管 (左); 22 G 蝶針 (センター) プラスチック製の拘束ホルダー (右).この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 2
図 2:位置に外側尾静脈 (5 mm 程度) に針の先端が挿入されたおおよそ 20 ° の角度で尾の先端から約 2-3 cmこの図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 3
図 3:成功した穿刺しますこの図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

実験群 初心者のためのグループ
性別 体重 (g) 収集した血液量 (mL) サンプリング時間 (分) 性別 体重 (g) 収集した血液量 (mL) サンプリング時間 (分)
E1 1 男性 291 1.2 3.12 B1 1 男性 282 1.2 3.18
E1 2 男性 291 1.2 2.73 B1 2 男性 282 1.2 2.18
E2-1 男性 276 1.2 2.3 B2 1 男性 264 1.2 3.73
E2 2 男性 276 1.2 2.37 B2 2 男性 264 1.2 2.47
E3-1 男性 267 1.2 2.73 B3 1 男性 265 1.2 3.52
E3 2 男性 267 1.0 3.88 B3 2 男性 265 1.2 2.53
E4-1 男性 263 1.2 2.41 B4 1 男性 289 1.2 2.32
E4 2 男性 263 1.2 2.52 B4 2 男性 289 1.2 3.62
E5-1 男性 265 1.2 3.61 B5 1 男性 277 1.2 3.48
E5 2 男性 265 1.2 2.42 B5 2 男性 277 1.2 3.12
E6-1 女性 285 1.2 3.33 B6 1 女性 274 0.9 4.87
E6-2 女性 285 1.2 3.03 B6 2 女性 274 1.2 3.37
E7-1 女性 271 1.2 2.82 B7 1 女性 268 1.0 3.93
E7-2 女性 271 1.2 2.42 B7 2 女性 268 1.2 3.82
E8-1 女性 268 1.2 1.93 B8-1 女性 262 1.2 2.07
E8-2 女性 268 1.2 3.05 B8 2 女性 262 1.2 3.67
E9-1 女性 273 1.2 2.52 B9 1 女性 281 1.2 4.38
E9-2 女性 273 1.2 3.17 B9-2 女性 281 1.2 4.57
E10 1 女性 261 1.2 1.82 B10 1 女性 275 1.2 2.53
E10 2 女性 261 1.2 3.25 B10 2 女性 275 1.2 2.28
平均 2.77 3.28
最初の血のコレクションの実験群ラットの en-1: シリアル番号。
2 回目の採血の実験群ラットの en-2: シリアル番号。
最初の血のコレクションの初心者グループのラットの Bn-1: シリアル番号。
2 回目の採血の初心者グループのラットの Bn-2: シリアル番号。

表 1: 血の結果は実験グループと初心者グループに収集されます。

血のコレクションの時間 平均穿刺回 時間あける 2 回を穿刺します。 3 回を穿刺します。 失敗しました 成功率
実験群 20 1.50 ±0.61 11 8 0 1 95%
初心者のためのグループ 20 1.85 ± 0.75 7 9 2 2 90%
1 つの時間穿刺: ラット最初の穿刺後の成功の血のコレクションの数
穿刺: 成功した血のコレクションに 2 番目の穿刺後ラットの数の 2 倍します。
3 回穿刺: ラット 3 穿刺後の成功の血のコレクションの数
失敗しました: ラットの数 3 穿刺後採血に失敗しました

表 2 穿刺時間と実験群・初心者グループの成功率の比較。

Discussion

本報告では、ラットに学ぶ簡単血液収集方法について説明します。私たちの結果は、このメソッドが繰り返しラットから大量の血液を収集するために可能であります。また、短期的な学習曲線を持つこのメソッドを容易に習得できます。この手順は、非麻酔のラットにおいて実行することができます、だけ動物に最小限のストレスの原因します。

血液は、ラットのさまざまな場所から収集できます。尾静脈血サンプリング4の真向かいにあります。しかし、それは常にラットの薄いと低血流尾静脈から十分な血液量を得ることは容易。真空の血のコレクションのシステムは、日常臨床で患者から血液サンプルを収集するため通常用いられます。この真空の血のコレクション システムは長い時間8,9,10の患者および研究の動物の使用されています。このシステムは、シリコン コーティングされたインナー チューブ壁と蝶針、真空採血管で構成されます。真空負圧の原理に基づいていたでき、血液汚染と溶血11のチャンスを減らす効果もある血を収集、リスクなしの連続的に描画できます。カテーテル内の血液サンプルの体積は約 0.3 mL です。尾静脈から針を撤回した後真空による収集の真空管にカテーテルでブロックされて血液が流れます。このメソッドも小さい穿刺針の使用で 100 g 以下の重量を量るラットから採血のため可能です。

この血の収集方法には、いくつかの利点があります。この手順だけのラットに最小限の損傷の原因、血のコレクションには、麻酔薬を使用せず実行できる従って血液サンプルに及ぼすストレス応答と麻酔薬の影響を避けることができます。我々 の観察はラットはプロシージャの間にプラスチック製の拘束ホルダーで静かだったこれらの実験中に死亡がなかったことを示した。第二に、繰り返し採血ごとに 1 つまたは 2 日間は、様々 な研究目的のため適切なボリュームとは、血液の頻繁にサンプリングができます。最後に、このメソッドは、簡単に学ぶことは、簡単に習得された初心者によるショート (2 h) 学習期間の後と同様の成功率と本報告では実験と初心者のためのグループ間の穿刺時間によって示されるように。以前のレポートは、李はラット4の外側尾静脈からの血液をサンプリングする同様の方法を示した。本手法は、李によって報告されたより簡単4我々 は直接尾静脈とチューブのもう一方の端に穿刺針を挿入に直結真空管採血、余分な注射器の使用と血の手動の吸引との必要なしの ' ミルクing' 静脈血流を促進します。このクローズド システム採血血液汚染の可能性が減ります。プラスチック拘束ホルダーの使用はまたラットにストレスを軽減、尾の固定が容易になります。

次の 2 つの手順は、このメソッドの成功のアプリケーションのため重要です。1) 延長尾と尾輪の動きを避けるため2) ゆっくり静脈穿刺を避けるために、穿刺針を静脈において 20 ° の角度で静脈を穿刺します。

結論としては、ラットで採用された真空採血コレクション メソッドは、実行可能な安全で簡単に実践です。このメソッドは、非麻酔のラットから得られた十分な血液量と血の頻繁なサンプリングをできます。

Disclosures

著者がある何も開示するには

Acknowledgments

著者が確認するあります。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
a double-pointed needle Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China 22G  (0.7×25mm)
vacuum tubes Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China 2 ml
rat restraining holder  Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China 250g rat hoder model
normal salt diet for rats Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study
SPSS software for statistical analysis SPSS Inc,  Chicago; USA  Version 17.0. 

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References

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