Oprichting van een waardevolle Mimic de ziekte van Alzheimer in diermodel van het Rat door Intracerebroventricular injectie van luminantie bèta Amyloid proteïne

* These authors contributed equally
Behavior
 

Summary

Dit is een protocol om na te bootsen van de ziekte van Alzheimer bij ratten door evaluatie van ruimtelijke geheugen verzwakking, neuronale pathologische veranderingen, neuronale bèta amyloid proteïne (Aβ) lasten en neurofibrillary klitten aggregatie, geïnduceerd door de injectie van Aβ25-35 gecombineerd transformeren met aluminium titaantrichloride en recombinante menselijke groeifactor-β1.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Xiaoguang, W., Jianjun, C., Qinying, C., Hui, Z., Lukun, Y., Yazhen, S. Establishment of a Valuable Mimic of Alzheimer's Disease in Rat Animal Model by Intracerebroventricular Injection of Composited Amyloid Beta Protein. J. Vis. Exp. (137), e56157, doi:10.3791/56157 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

De ziekte van Alzheimer (AD) is een onomkeerbaar, progressieve hersenen ziekte die langzaam geheugen vernietigt en gaat vergezeld van neuron verlies en structuur wijzigen. Met de toename van AD patiënten wereldwijd, is de pathologie en behandeling van de ziekte een focus in de internationale farmaceutische industrie geworden. De oprichting van het dierlijk model na te bootsen AD in het laboratorium is dus van groot belang.

Hier beschrijven we een gedetailleerd protocol voor de vaststelling van een nabootsen van AD in een rat dier model al intracerebroventricular injectie van amyloid beta eiwit 25-35 (Aβ25-35) gecombineerd met aluminium titaantrichloride (AlCl3) en de thalamus nucleus anterodorsal injectie van recombinante menselijke groeifactor-β1 (RHTGF-β1) om ratten te transformeren. De verwante markeringen van AD werden gemeten, met inbegrip van: ruimtelijk geheugen, neuronale structuur en substructuur neuronale Aβ en neurofibrillary klitten (NFT) productie. Dit model rat toont ruimtelijke geheugen bijzondere waardevermindering, neuronale structuur en substructuur pathologische veranderingen neuron intracellulaire Aβ last en NFT aggregatie, en biedt een nauwe nabootsen van de neuronale structuur en functie wanorde die van klinische AD patiënten. Dus, de gepresenteerde AD rat modelprovides een waardevolle in vivo -instrument voor het verkennen van de neuronale functie, neuronale pathologie en drug screening van AD.

Introduction

Het is algemeen bekend dat AD een chronische en progressieve neurodegeneratieve ziekte, met geleidelijke geheugenverlies als de belangrijkste klinische syndroom is. In de algemene pathologie is er zenuwweefsel atrofie, neuron synapse verlies, alsmede neuronale subcellular structuur en functie aandoeningen, die allemaal bij de ontwikkeling en de klinische manifestatie van AD1,2 betrokken zijn. Het is gemeld dat wanneer dieren geïnjecteerd met Aβ intracerebroventricularly waren, sommige neurotoxische gebeurtenissen in de hersenen waarbij neuron verlies, verstoring van de calcium-homeostase, neuron apoptosis en reactieve zuurstof soorten overproductie3. Echter meerdere factoren betrokken zijn bij de pathogenese van AD en is daarom essentieel om een beter model van AD.

Een gedetailleerd protocol wordt hier beschreven voor de vaststelling van een in vivo mimic advertentie model door intracerebroventricular injectie van Aβ25-35 en AlCl3, gecombineerd met anterodorsal thalamus nucleus injectie van RHTGF-β1 ratten. Deze rat modelhighly bootst menselijke neuronale functie en histopathogenesis van advertentie, met inbegrip van geheugen bijzondere waardevermindering, neuron verlies en schade van de structuur, apoptosis, intracellulaire Aβ last en NFT aggregatie4,5,6 , 7 , 8 , 9. the AlCl3 de gedeponeerde Aβ voorkomt vorming van oplosbare Aβ, en de RHTGF-β1 kunt gedeponeerde Aβ productie te bevorderen en vergemakkelijken van AD voorval10. Deze aanval van verschillende factoren kan het neuron is in overeenstemming met de multi pathogenese van AD.

Het hele experiment overspannen 86 dagen: afbeelding 1 ziet u een tijdlijn van het experimentele ontwerp, met de punt van de tijd van dierlijke chirurgie, diermodel screening, dierlijke ruimtelijke geheugentest en bereiding van de monsters. Op de eerste dag van de operatie, was RHTGF-β1 microinjected in de anterodorsal thalamus nucleus. Op de tweede dag van de operatie, waren Aβ25-35 en AlCl3 microinjected in het laterale ventrikel dagelijks voor 14 opeenvolgende dagen in de ochtend en 5 opeenvolgende dagen in de middag, respectievelijk. Alle ratten mochten herstellen voor 45 dagen na de operatie. De Morris water maze werd gebruikt om het scherm voor succesvolle model ratten met geheugen bijzondere waardevermindering en te beoordelen van ratten ruimtelijke geheugen. De ratten onderging 4 opeenvolgende dagen van water maze training met 2 proeven per dag, en op dag 4 van de opleiding, de ratten werden geëvalueerd met de Morris water maze prestaties geheugen bijzondere waardevermindering heeft ondergaan. Alle ratten bleef 37 dagen na de screening diermodel worden gevoed. Het ruimtelijke geheugen van ratten werd getest in de Morris water maze meer dan 7 opeenvolgende dagen, vanaf dag 79 tot 85 dag na de operatie. Alle ratten werden opgeofferd door onthoofding op dag 86 voor de bereiding van de monsters van de hersenen.

Figure 1
Figuur 1. Tijdlijn van de proefopzet. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Protocol

Deze procedure was overeenkomstig de verordeningen of Experimental dier Administration afgegeven door het Braziliaanse Comité van wetenschap en technologie van China op 31 oktober 198811. Wetenschappers moeten richtsnoeren vastgesteld en goedgekeurd door hun institutionele en nationale dierlijke regelgevende organisaties.

Opmerking: Dier en regenten: vier-maand-oude mannelijke Sprague-Dawley ratten (300-350 g) voor dit experiment werden meegedeeld. Alle ratten werden gehuisvest in groepen (vier of vijf per kooi) bij een temperatuur van 23 ± 1 ° C met een 12-h licht-donker cyclus. Voedsel en water werden beschikbaar ad libitum. De ratten werden geacclimatiseerd aan de huisvestingsomstandigheden voor 7 dagen voordat de procedure werd uitgevoerd. Aβ25-35 werd ontbonden in een 1% DMSO zoutoplossing tot 1 mg/mL en sonicated gedurende 5 minuten in een ultrasone oscillator totdat volledig is opgelost. AlCl3 en RHTGF-β1 ontbonden in een zoutoplossing op 1% en 0,1 mg/mL, respectievelijk. Congo rood, zilvernitraat en andere chemische stoffen waren van p.a. en werden gekocht uit gewone commerciële bronnen.

1. de chirurgische Procedure

Opmerking: 20 mannelijke Sprague-Dawley ratten werden microinjected met luminantie Aβ in de laterale ventrikel en anterodorsal thalamus nucleus en uitgeroepen tot de luminantie Aβ-testgroep. Een ander 20 ratten werden onderworpen aan dezelfde bewerking maar 0,1% DMSO zoute microinjection ontvangen en uitgeroepen tot de groep van sham bediende.

  1. De ratten met 100% Isofluraan anaesthetize bij inademing en vervolgens beperken op een hersenen Stereotaxic apparaat.
  2. Scheren van de vacht op het hoekpunt van het hoofd met een chirurgische schaar en desinfecteren met iodophor. Dan dekken wegwerp chirurgische handdoek op het hoofd.
  3. Maak een incisie op de hoofdhuid langs de mediane longitudinale snuituil met chirurgische bistouries en schaar.
  4. Scheiden van het subcutane weefsel en fascia, veeg het schedel-calvarium met een steriele droge katoen om het bloeden te stoppen, en de bregma met een viltstift markeren.
  5. Verwijzen naar de Rat hersenen Stereotaxic kaart12; gezien de bregma als het punt van oorsprong, markeert de drie punten, de anterodorsal thalamus nucleus (ad) (posterior (P): 2.0 mm aan de bregma, laterale (L): 1.4 mm aan de middellijn) voor injecterende RHTGF-β1 en tot vaststelling van een schroef, de laterale ventrikel (LV) gebied ( posterior (P): 0.8 mm tot het bregma; laterale (L): 2.0 mm aan de middellijn) voor injecterende Aβ25-35 en AlCl3, en de tweede schroef vaststelling van plaats (Front (F): 2.0 mm aan de bregma, laterale (L): 1,5 mm aan de middellijn).
  6. Zachtjes boorgaten drie 1 mm doorsnede met een flexibele bot boor, aangewezen op de bovenstaande drie punten van schedel (1.5. stap). Schroef niet dieper dan nodig is om te voorkomen dat steken van het hersenweefsel.
  7. Stoppen met het bloeden en reinig het oppervlak van de schedel herhaaldelijk met steriele droge katoen.
  8. Invoegen van een naald die is gekoppeld aan de micro-injectie pomp, naar de hersenen op 4.6 mm diepte en zachtjes injecteren 1 μL RHTGF-β1 (10 ng) in het gebied van de advertentie. Naald 2 min blijven na injectie en langzaam Trek de naald (aanvullende bestand 1).
  9. De twee schroeven vast in de schedel, aangewezen in de punten van de advertentie en de tweede schroef tot vaststelling van de plaats van de schedel (die waren aangewezen op 1.5. stap) met een kleine schroevendraaier. Schroef niet dieper dan nodig is om te voorkomen dat steken van het hersenweefsel.
  10. Monteren van de canule implantatie systeem (aanvullende bestand 2), de dummy canule in de gids canule invoegen na desinfectie door hoge druk.
  11. Invoegen de canule gids roestvrij stalen buizen naar de hersenen bij 4.6 mm in LV gebied door het gat van de schedel (aanvullende bestand 3), met de hulp van de canule houder van ratten stereotaxic apparaat.
  12. Mix het gebit basismateriaal met gebit basis water op de verhouding van 1,5 g per 1 mL, zetten de pasta ter dekking van de gids canule kunststof voetstuk en de twee schroeven voor het immobilizing van de canule gids en tot dekking van de gehele huid incisie voor het vermijden van de huidinfectie.
  13. Anaesthetize op dag 2 van de operatie, de ratten met Isofluraan inhalatie met behulp van de kleine dier verdoving Machine. Trekken uit de dummy canule, de interne canule invoegen de canule gids en schroef de fixing schroef om de interne canule immobiliseren.
  14. De polyethyleen buis die de pomp microinjection is gekoppeld ingesteld op de interne canule en reguleren van de snelheid van de injectie tot 1 l/min. Microinject de Aβ25-35 of AlCl3 aan de LV.
  15. Microinject 4 μg (1 μL) Aβ25-35 daags gedurende 14 dagen in de ochtend en 3 μL AlCl3 (1%) daags gedurende 5 dagen in de middag onder Isofluraan verdoving.
  16. 5 min wachten na afwerking van de injectie, zachtjes trekken uit de interne canule en opnieuw invoegen van de dummy canule in de gids canule.
  17. Op dag 15 post ontmantelen chirurgie (die overeenkomt met de laatste dag van de injectie van Aβ25-35) de canule implantatie systeem. Zachtjes de basis materiële vaste gebit met een chirurgische schaar en pincet te verwijderen, draai de twee schroeven, trek de canule gids en ontsmetten van de wond met betadine. Vul het gat van de schedel met botcement en suture van de huid met een eenvoudige onderbroken hechtdraad methode.
  18. Uitvoeren van de dezelfde bewerking met de groep van sham bediende en microinject van 0,1% DMSO zoutoplossing.
  19. Postoperatieve verpleegkunde
    1. Huis 2 ratten per kooi na operatie en dienen als voedsel voor 30 dagen.
      Opmerking: 18 ratten in de groep sham bediende overleefd (90% slagingspercentage van operatie) en 19 ratten in de luminantie-Aβ testgroep overleefd (95% slagingspercentage van operatie).

2. screening voor succesvolle Model ratten en beoordeling van ruimtelijke geheugen met Morris Water Maze

  1. Morris water maze
    Opmerking: De Morris water maze werd gebruikt voor het beoordelen van de rat ruimtelijke geheugen13. De Morris water maze is een circulaire tank van roestvrij staal met diameter van 120 cm en 50 cm diepte. De water doolhof test werd uitgevoerd, op basis van het paradigma van de "gold standards" in Behavioral Neuroscience beschreven door J. Nunez14.
    1. Het zwembad water met enkele druppels voedselkleuring zwart.
    2. Handhaven van de diepte van het water bij 31.5 cm en de temperatuur van 23 ± 1 ° C.
    3. Het instellen van een platform van de circulaire transparant plexiglas 1,5 cm onder het wateroppervlak.
    4. Beweren dat alle ruimtelijke signalen rond het water labyrint onveranderlijk tijdens de water doolhof proeven.
    5. Verdeel het zwembad in 4 gelijke kwadranten door denkbeeldige lijnen voor beschrijvende gegevens collectie.
    6. Plaats de verborgen platform in het eerste Kwadrant (Q1) van water doolhof.
    7. De rat zwemmen gedrag (gemeten door de latency, traject of kruisingsgetal) vastleggen door middel van een videocamera, over het water labyrint gekoppeld aan een computer gebaseerde grafische analytische software.
  2. Screening voor succesvolle model ratten aan de luminantie Aβ-testgroep
    1. Op dag 45 van de operatie, voeren de Morris water maze training gedurende 4 opeenvolgende dagen scherm voor succesvolle model ratten met geheugen bijzondere waardevermindering te verzamelen van de screening verhouding (SR).
      Opmerking: De SR wordt gedefinieerd als de gemiddelde latentie van elke luminantie Aβ behandeld rat en de schijnvertoning bediende groep van ratten te vinden van de verborgen platform onder het water oppervlak op dag 4 van water doolhof van opleiding. "A" is de gemiddelde latentie van elke luminantie Aβ behandeld rat te vinden van de verborgen platform en "B" is de gemiddelde latentie van de sham bediende groep van ratten te vinden van de verborgen platform, op dag 4 van water maze opleiding, in de volgende vergelijking:
      Equation 1
      Toen SR groter dan 0,2 voor één luminantie Aβ behandeld rat was, werd de rat beschouwd als een succesmodel rat met verminderde geheugen van luminantie Aβ behandeld rat15. De intra-day geheugenprestaties werd berekend op de gegevens van 2 proeven door de gemiddelde waarde van ratten te vinden van de verborgen platform. Het proces van de Morris water maze test werd zodanig ontworpen dat de ratten werden toegestaan om te zwemmen in het waterreservoir doolhof en zoek naar de verborgen platform binnen 60 s. Als een rat kwam niet erachter de verborgen platform binnen 60 s, dan de rat werd gelegd op het platform met de hand van de experimentator. Wanneer een rat bereikt op het verborgen perron (zelfstandig of begeleid), de rat was laat blijven er voor 20 s. Vervolgens de rat werd verwijderd uit de tank en toegestaan een fysieke herstel voor 10 s tussen de 2 proeven.

3. neuron onderzoek

  1. Op dag 86 post chirurgie, onder Isofluraan verdoving, euthanaseren de ratten door onthoofding (Figuur 1).
  2. De hersenen zetten ijs en voorzichtig het scheiden van de twee hemisferen op de raphe. Neem de linker hemisfeer van de optiek chiasma en de moeilijke situatie in 4% formaldehyde voor lichte microcopy observatie van neuron haematoxyline en eosine (HE), Congo rood of zilvernitraat vlek (Zie secties 4-6). De rechter hersenhelft hippocampus CA1 gebied in 2,5% Glutaaraldehyde voor elektron microcopy observatie (afdeling 7) vast te stellen.
  3. De hersenen voor de licht/elektron microcopy bereiding van de monsters, als eerder beschreven16,17te verwerken.

4. neuron HE kleuring

  1. Deparaffinize elke dia (elk 20 min) met kleurovergang alcohol (100%, 95%, 90%, 80% en 70% alcohol) met gedestilleerd water in een zuurkast.
  2. Vlek voor 3 min met haematoxyline (0,5% m/v), en daarna spoelen met leidingwater de ongebonden kleurstof uit dia's verwijderen.
  3. Spoel met 0,1%-zoutzuur in alcohol voor 1 s tot het verwijderen van de kleur van onbevlekt kernen.
  4. Dompel onder in 0,5% ammoniakoplossing gedurende 2 min. tot de achtergrond draait licht blauw.
  5. Vlek voor 1 min met 1% eosine.
  6. Dehydrateren voor 5 min met kleurovergang alcohol (70%, 80%, 90%, 95% en 100% alcohol).
  7. Schakel in xyleen en mount met harsachtige montage medium.
  8. Observeren en tellen van de levende neuronen van de kleuring per 0,125 mm in de middelste CA1 van de hippocampus en per 0.0352 mm,2 in de hersenschors bij een vergroting van 400 x met een optische Microscoop door een persoon die aan de proefopzet verblind.

5. Congo rode kleuring voor keuring van Neuron Aβ last

  1. Deparaffinize elke dia (20 min) met kleurovergang alcohol (100%, 95%, 90%, 80% en 70% alcohol) met gedestilleerd water in een zuurkast.
  2. Vlek voor 20 min met Congo rood werkoplossing (0,5 g Congo rood, 80 mL methylalcohol, 20 mL glycerinum).
  3. Spoel in gedestilleerd water gedurende 5 minuten.
  4. Snel onderscheid met alkalische 80% alcohol (0.2 g alcohol per 100 mL kaliumhydroxideoplossing) voor 3 s.
  5. Spoel tweemaal, elk voor 5 min met gedestilleerd water.
  6. Counterstain in Gill Haematoxyline gedurende 3 minuten.
  7. Spoel in leidingwater gedurende 2 minuten.
  8. Duik in het water van ammoniak (Voeg een paar druppels ammoniumhydroxide leidingwater en meng goed) voor 30 s of totdat de secties blauw draaien.
  9. Spoel in leidingwater voor 5 min.
  10. Dehydrateren met kleurovergang alcohol (70%, 80%, 90%, 95% en 100% alcohol).
  11. Schakel in xyleen en mount met harsachtige montage medium.
  12. Observeren en tellen van de cellen gekleurd met Congo rood bij een vergroting van 400 x, met een optische Microscoop door een persoon die aan de proefopzet verblind.

6. zilvernitraat kleuring voor keuring van Neuron NFT vorming

  1. Deparaffinize elke dia (20 min) met kleurovergang alcohol (100%, 95%, 90%, 80% en 70% alcohol) met gedestilleerd water in een zuurkast.
  2. Dompel onder in de 20% zilvernitraat, oplossing en overkoepelende agent voor 20 min in het donker.
  3. Wassen in gedistilleerd water tweemaal, 5 min. voor elke keer.
  4. Dompel onder in zilveren ammoniumhydroxide-oplossing. Ammoniumhydroxide-oplossing vallen 20% zilvernitraat, oplossing, en voeg toe totdat de oplossing van turbiditeit tot verduidelijking gaat. Gelijktijdig, roer de oplossing om met een roerstaaf gedurende 15 minuten en zet dan in de 1% verdunde ammoniak hydroxide gedurende 2 minuten.
  5. Plaats de dia in de ontwikkelingslanden werkoplossing gedurende 3-7 minuten totdat het zwarte blok in het axon kan worden waargenomen.
  6. Onderdompelen in de 0,1% verdunde ammoniakoplossing voor 1 min en vervolgens spoel met water voor 1 min.
  7. Vervreemden met 5% natrium thiosulfate gedurende 2 minuten en dan afspoelen met water gedurende 5 minuten.
  8. Dehydrateren met kleurovergang alcohol (70%, 80%, 90%, 95% en 100% alcohol).
  9. Schakel in xyleen en mount met harsachtige montage medium.
  10. Observeren en registreren van de cel voor zilvernitraat vlek bij een vergroting van 400 x met een optische Microscoop door een persoon die aan de proefopzet verblind.

7. hippocampal Neuron ultrastructuur meting

  1. Snijd de rat hippocampus CA1 in verschillende kubussen (1 x 1 x 1 mm3) en plaatst u in 2,5% Glutaaraldehyde gedurende 2 uur bij 4 ° C.
  2. Spoel de kubussen met PBS drie keer (pH 7,2, 10 min. voor elke keer).
  3. Corrigeer de kubussen in 1% osmic zuur gedurende 2 uur bij 4 ° C.
  4. Spoel de kubussen in dubbel gedestilleerd water 3 x (10 min voor elke keer).
  5. Dehydrateren met kleurovergang alcohol 70%, 50% en 90% (10 min voor elk), 100% twee keer (15 min voor elke keer).
  6. Vervangen door propyleenoxide twee keer (15 min voor telkens), propyleen oxide: hars op 1:1 (60 min voor telkens bij kamertemperatuur) en propyleen oxide: hars 1:4 (60 min voor telkens bij kamertemperatuur). Geniet in hars (120 min, bij kamertemperatuur).
  7. Insluiten in EPON 812 en polymeriseren (5 h/35 ° C, 5 h/60 ° C, 5 h/80 ° C).
  8. Snij de semithin secties (1 µm), vlek door methyleenblauw en lokaliseren onder de Microscoop.
  9. Vlekken van de ultra-dunne secties (50 nm) met uranyl-o-acetaat en lead citraat.
  10. Onderzoeken onder een elektronenmicroscoop JEM-1400 en verzamelen beelden.

Representative Results

Alle gegevens worden gepresenteerd als gemiddelde ± SEM. SAS/STAT pakket werd gebruikt voor de berekening van de statistische analyse. De groep verschillen in latency te vinden van de verborgen platform in geheugen verwerving en opnieuw leren geheugentest werden geanalyseerd door twee-weg variantieanalyse (ANOVA) met herhaalde maatregelen. De groep verschillen in het aantal neuronen en sonde proef werden geanalyseerd door one-way ANOVA gevolgd door Duncan's meerdere-range test. p < 0.05 werd beschouwd als statistisch significant18.

Screening voor succesvolle Model ratten met geheugen waardevermindering voor de luminantie Aβ-testgroep:

De resultaten in Figuur 2AA1 en 2AA2 tonen aan dat de groep sham bediende van ratten zwom altijd vrij en de luminantie Aβ-testgroep rats (Figuur 2AB1, AB2) altijd zwom rond de omtrek van het zwembad in adaptieve zwemmen in de Morris water maze. De 4 dagen van screening voor geheugen bijzondere waardevermindering model ratten had alle ratten geleidelijk afnemende tijden te vinden van de verborgen platform (latentie) (Figuur 2B). Op dag 4 van de Morris water maze opleiding, als de SR meer dan 0,2 was (die was gebaseerd op de latentie van elke luminantie Aβ behandeld rat en de groep van sham bediende voor rats voor het vinden van de verborgen platform), dan de luminantie Aβ behandeld rat werd beschouwd als een succesvolle model rat met geheugen bijzondere waardevermindering. 18 van de 19 rats (94.70%) die overleefd de operatie voorbij het succesmodel screening. 6 ratten van elke groep werden gekozen voor de volgende experimenten.

Figure 2
Figuur 2 . Screening voor succesvolle model ratten met geheugen bijzondere waardeverminderingen in de luminantie Aβ - testgroep training met behulp van de Morris water maze. (A) de adaptieve zwemmen traject van ratten in de Morris water maze. (AA1-AA2) Sham bediende groep; (AB1-AB2) Luminantie Aβ-testgroep. (B) gemiddelde latentie te vinden van de verborgen platform voor 4 opeenvolgende dagen van het screening-proces in de Morris water maze opleiding voor de sham bediende-groep en de luminantie Aβ-testgroep.  Figuur is gewijzigd van referentie 4. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer. 

Luminantie Aβ veroorzaakt Rat geheugen verwerving en geheugen opnieuw leren waardeverminderingen:

De rat geheugen overname werd bepaald door het plaatsende proces van de navigatie op dag 1 en 2 van de Morris water maze test, die overeenkwam met dag 79 en 80 post chirurgie. Tijdens de 2 dagen van de geheugen-acquisitie proces tentoongesteld alle ratten geleidelijk afnemende latency vind je de verborgen platform. Zoals afgebeeld in Figuur 3, de latenties van de luminantie Aβ-testgroep voor het vinden van de verborgen platform waren 360.67% en 558.28% (F (1, 5) = 238.67, p < 0.01) groter is dan die van de groep van sham bediende op dag 1 en 2 van de Morris water doolhof test, respectievelijk. Dit geeft aan dat de luminantie Aβ geheugen overname bijzondere waardevermindering bij ratten kan veroorzaken.

De rat geheugen opnieuw leren werd bepaald door de omkering proef op dag 4, 5 en 6 van de Morris water maze test, die overeenkwam met dag 82, 83 en 84 post chirurgie. Zoals afgebeeld in Figuur 3, de latenties van de luminantie Aβ-testgroep voor het vinden van de verborgen platform waren 306.20% 650.16% en 936.92% langer dan die van de groep van sham bediende (F (1, 5) = 138.76, p < 0,01). Dit toont aan dat de luminantie Aβ kan verheffen het geheugen opnieuw leren bijzondere waardevermindering bij ratten (Figuur 3).

Figure 3
Figuur 3 . Luminantie Aβ veroorzaakt rat geheugen verwerving en geheugen opnieuw leren waardeverminderingen. Het plaatsende proces van navigatie werd gebruikt voor het evalueren van geheugen overname door 2 opeenvolgende dagen zwemmen prestatie op dag 1 en 2 in de Morris water maze test. Deze werden uitgevoerd op dag 79 en 80 post chirurgie. De omkering proef werd gebruikt voor het evalueren van geheugen opnieuw leren door 3 opeenvolgende dagen zwemmen score op dag 4, 5 en 6 in de Morris water maze test, die overeenkwam met dag 82, 83 en 84 van de operatie. De lijn grafiek percelen Toon de gemiddelde latentie te vinden van de verborgen platform voor elke groep op dag 1, 2, 4, 5 en 6 in de Morris water maze test. Gegevens werden geanalyseerd door two-way ANOVA (dag x groep) met herhaalde maatregelen. Bedoel ± SEM. n = 6. ** p < 0,01, vs. Sham bediende groep. Figuur is gewijzigd van referentie 4. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Luminantie Aβ Rat geheugen retentie bijzondere waardevermindering veroorzaakt:

De rat geheugen bewaring werd gemeten door het proces van de sonde op dag 3 van de Morris water maze test, die overeenkwam met dag 81 post chirurgie. In het 1 dag geheugen bewaren trial, nam de luminantie Aβ-testgroep minder tijd zwemmen, zwemmen afstand en kruisingsgetal in Q1 binnen 60 s, die overeenkwam met 32.14%, 30.11% en 78.95% (p < 0,01), respectievelijk, dan die van de Sham bediende groep (Figuur 4A, 4B). Deze resultaten tonen aan dat de luminantie Aβ geheugen retentie bijzondere waardevermindering bij ratten kan produceren.

Figure 4
Figuur 4 . Luminantie Aβ geproduceerd rat geheugen retentie waardevermindering. Het proces van de sonde werd gebruikt om te evalueren van geheugen bewaren door 1 dag zwemmen prestatie op dag 3 in de Morris water maze test, die werd uitgevoerd op dag 81 post chirurgie. (A) tijd zwemmen, zwemmen afstand en kruisingsgetal in Q1 binnen 60 s in het proces van de sonde (geen platform). Gegevens werden geanalyseerd door one-way ANOVA met de test meerdere-bereik. Bedoel ± SEM. n = 6. ** p < 0,01, vs. de Sham bediende groep. (B) het zwembad traject van ratten in het proces van de sonde. (A) Sham bediende groep, grotere zwemmen tijd en afstand in het doel-Kwadrant (Q1) tonen. (B) luminantie Aβ-testgroep, minder zwemmen tijd en afstand in doel Kwadrant (Q1) tonen. Figuur is gewijzigd van referentie 4. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Luminantie Aβ beïnvloed Rat zwemmen snelheid:

De rat zwemmen snelheid werd berekend door het proces zichtbaar platform op de dag 7 van Morris water maze test, die overeenkwam met dag 85 chirurgie post. De rat zwemmen snelheid, gebaseerd op de berekening van afstand en tijd aan stap op het platform, van elke groep in het zwembad zwemmen was niet significant verschillend. Daarom kunnen de individuele verschillen in rat zwemmen snelheid worden uitgesloten, hetgeen aangeeft dat de motivatie en motorische vaardigheden hoofdzakelijk intact in alle ratten (Figuur 5 waren).

Figure 5
Figuur 5 . Luminantie Aβ beïnvloed rat zwemmen snelheid. De rat zwemmen snelheid werd berekend door het proces zichtbaar platform op dag 7 van de Morris water maze test, die werd uitgevoerd op 85 dag na de operatie. De rat zwemmen snelheid van elke groep was niet significant verschillend. Gegevens werden geanalyseerd door one-way ANOVA met de test meerdere-bereik. Bedoel ± SEM. n = 6. Figuur is gewijzigd van referentie 4. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Luminantie Aβ veroorzaakt Rat neuronale morfologische verandering:

Alle ratten werden gedood door de onthoofding op dag 86 van chirurgie. De visuele controle gevonden dat een geel oppervlak of een dun of samengevouwen hersenschors in verschillende luminantie Aβ behandelde ratten verscheen. Vergeleken met de groep van sham bediende (figuur 6AA2), bevlekt optische microscopie observatie van de luminantie Aβ-testgroep door hij, pathologische veranderingen van hippocampal neuron, zoals neurofibrillary degeneratie, neuronophagia, gevonden nucleaire pyknosis en nucleaire margination (figuur 6AB2). Bovendien, het deel van de hersenschors in de luminantie Aβ-testgroep necrose van de typische colliquative, die werd gekenmerkt door een verstoorde celmembranen, gefragmenteerde kernen en uitgebreide ontstekingscellen infiltratie in de necrotische regio (onthuld Figuur 6A B3). Dit geeft aan dat de luminantie Aβ in neuronale structurele pathologische verwondingen bij ratten resulteren kan.

Naast de pathologische veranderingen van neuronale structuur, vergeleken met de schijnvertoning bediende groep, was het neuron graaf ook aanzienlijk daalde in de hippocampus en de hersenschors (met uitzondering van het colliquative necrose monster) van de luminantie Aβ-testgroep. Het aantal neuron bedroeg 63.86% (p < 0,01) lager is dan die van sham bediende groep in hippocampal CA1 secties van 0,125 mm, en 55.46% (p < 0,01) lager in de hersenschors secties van 0.0352 mm2 (figuur 6B), die suggereert dat de luminantie Aβ kan resulteren in een verminderde neuron telling.

Figure 6
Figuur 6 . Luminantie Aβ veroorzaakt rat neuronale morfologische verandering. (A) representatieve beelden van hippocampal en cerebrale corticale neuronen gekleurd met HE. (A1-B1) Hippocampus 40 x; (A2--B2) Hippocampus CA1 400 x; (A3-B3) 400 x van de cerebrale cortex. (A1--A3) Sham bediende groep; (B1-B3) Luminantie Aβ-testgroep; toont gemarkeerd neuron verlies, neurofibrillary degeneratie (→), neuronophagia (←), nucleaire pyknosis (↗), nucleaire margination (↙) in de hippocampus, typische colliquative necrose (★), verstoord cellulaire membranen, groot aantal ontstekingscellen geïnfiltreerd in de hersenschors binnendringt in een deel van de luminantie Aβ-testgroep. Schaal bar van A1, B1 = 10 µm; Schaal staaf-van- A2, A3, B2 en B3 = 100 µm. (B) getallen van neuronen met HE vlek in de hippocampus en de cerebrale cortex, die werden geteld onder een lichte Microscoop (400 x). Elk volume vertegenwoordigt gemiddelde ± SEM uit 9 visual velden van 3 onafhankelijke steekproeven (n = 3). ** p < 0,01, vs. Sham bediende groep.  Figuur is gewijzigd van referentie 4. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

De elektronenmicroscopie waargenomen de subcellular ultrastructuur van neuronen van de hippocampus. De onderbouw van de hippocampal neuronen in de luminantie Aβ-testgroep (figuur 7B1 – B4) aanzienlijk werden vernietigd, tonen van mitochondriale zwelling en cristae breuk, verhoogde mitochondrial elektronen dichtheid, uitgezet ruw endoplasmatisch reticulum, depolymerized polyribosomes en polymicrotubules, sommige postsynaptisch dichtheid (PSD), veel secundaire lysosomen en lipofuscin sediment in cytoplasma, in vergelijking tot de groep van sham bediende (figuur 7A1 – A4). Het kernmembraan was ruw en gezonken, de euchromatine was gecondenseerd en gedenatureerd, de myelineschede lagen waren losse of degeneratie, en interne axonen en vezels werden verzwakt.  Deze resultaten tonen aan dat de luminantie Aβ neuron sub structuur schade in ratten kan produceren.

Figure 7
Figuur 7 . Subcellular structuur van hippocampal neuron beoordeeld door elektronen microscopische observatie. A1 -A4: Sham bediende groep. Schaal staaf-van- A1 = 4 µm, 12, 000 x; Schaal staaf-van- A2 = 3 µm, 15 000 x; Schaal staaf-van- A3 = 5 µm, 10, 000 x; Schaal bar voor A4 = 1 µm, 35, 000 x. (B1--B4) Luminantie Aβ-testgroep. (B1) Neuron en nucleaire pyknosis (), euchromatine condensatie of degeneratie (#), Astrocyt voet deining (*), hoge elektronen dichtheid mitochondriën (▲), myelineschede lagen los of demping (→); (B2) Grotere GFAP hoge elektronen dichtheid mitochondriën (▲), myelineschede lagen los of (demping), grotere secundaire lysosomen (↑), pericytes pyknosis, pericytes euchromatine condensatie of degeneratie (☆), Astrocyt voet deining (*), hoge elektronen dichtheid mitochondriën (▲), lipofuscin (↓), myelineschede lagen los of meer demping (→). B4: meer excitatory neurotransmitter (#), hoge elektronen dichtheid of letsel membraan mitochondriën (▲), minder synapsis. Schaal bar van B1, B2 = 10 µm, 5, 000 x; Schaal bar van B3 = 5 µm, 8, 000 x; Schaal bar van B4 = 1 µm, 40, 000 x. Figuur is gewijzigd van referentie 4. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Luminantie Aβ veroorzaakt Aβ last in Rat neuronen:

Congo rode kleuring werd gebruikt voor het detecteren van Aβ te ontlasten neuronen. Uit de resultaten blijkt dat de luminantie Aβ met name de intracellulaire Aβ last in de rat hippocampus en de hersenschors (Figuur 8A) kan veroorzaken. De positieve aantal cellen met Aβ rood gekleurd door Congo rood in de hippocampus en de cerebrale cortex van de luminantie Aβ-testgroep zijn 8.05 - en 4.09 keer (p < 0,01) groter is dan die van de groep van sham bediende (Figuur 8B). Dit toont aan dat de luminantie Aβ neuron Aβ last in ratten kan verhogen.

Figure 8
Figuur 8 . Luminantie Aβ veroorzaakt Aβ last in rat neuronen. (A) representatieve beelden van positieve Aβ neuron gekleurd door Congo rood in de hippocampus en cerebrale corticale. (A1-B1) Hippocampus CA1 400 x; (A2--B2) 400 x van de cerebrale cortex. (A1-A2) Sham bediende groep; (B1--B2) Luminantie Aβ-testgroep, toont meer Aβ positieve cellen gekleurd door Congo rood. Schaal bar = 10 µm, 400 x. (B) positieve getallen van Aβ neuronen gekleurd door Congo rood in de hippocampus en de cerebrale cortex, die werden geteld onder een lichte Microscoop (400 x). Elk volume vertegenwoordigt gemiddelde ± SEM uit 9 visual velden van 3 onafhankelijke steekproeven (n = 3). ** p < 0,01, vs. Sham bediende groep. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Luminantie Aβ veroorzaakt NFT afzetting in Rat neuronen:

Zilvernitraat kleuring werd gebruikt voor het opsporen van de NFT afzetting in neuronen. Uit de resultaten blijkt dat luminantie Aβ merkbaar kan de intracellulaire NFT afzetting in de rat hippocampus en hersenschors (Figuur 9A). De positieve aantal cellen met NFT bruin gekleurd door zilvernitraat in de hippocampus en de cerebrale cortex van de luminantie Aβ-testgroep zijn 9,75 - en 4.82 keer (p < 0,01) groter is dan die van de groep van sham bediende (Figuur 9B ). Dit toont aan dat de luminantie Aβ de neuron NFT samenvoeging in ratten kan verhogen.

Figure 9
Figuur 9 . Luminantie Aβ veroorzaakt NFT aggregatie in rat neuronen. (A) representatieve beelden van positieve NFT neuronen gekleurd door zilvernitraat in de hippocampus en de hersenschors. (A1-B1) Hippocampus CA1 400 x; (A2--B2) 400 x van de cerebrale cortex. (A1-A2) Sham bediende groep; (B1--B2) Luminantie Aβ-testgroep. toont de meer NFT positieve cel gekleurd door zilvernitraat in luminantie-testgroep. Schaal bar = 10 µm, 400 x. (B) positieve NFT neuronen aantallen gekleurd door zilvernitraat in hippocampus en hersenschors, die werden geteld onder een lichte Microscoop (400 x). Elk volume vertegenwoordigt gemiddelde ± SEM uit 9 visual velden van 3 onafhankelijke steekproeven (n = 3). ** p < 0,01, vs. Sham bediende groep. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Discussion

Het is algemeen bekend dat het verlies van leren en geheugen zijn belangrijke klinische symptomen bij AD patiënten2. De hier beschreven procedure is een in vivo methode om te studeren van AD; We hebben het aangepast van een eerder gepubliceerde protocol dat een medicijn om te verlichten geheugen tekorten en neuronale verwondingen in een rat model4getest. Ons protocol biedt belangrijke informatie te verkrijgen van waardevolle gegevens, alsmede een hoog overlevingspercentage van dieren die met succes model werking, geheugen tekorten, neuron verwondingen, Aβ last en NFT depositie, om na te bootsen AD (in het huidige experiment, de overlevingskans en succesvolle model tarief van operatie zijn meer dan 90%). Deze succesvolle model ratten werden gebruikt voor het meten van hun ruimtelijk geheugen met de Morris water maze test. Het plaatsende proces van navigatie gevonden dat de luminantie Aβ rat geheugen overname waardevermindering; kan veroorzaken de sonde trial gevonden dat de luminantie Aβ rat geheugen bewaren afnemen kan; en de omkering trial gevonden dat de luminantie Aβ kan resulteren in rat opnieuw leren bijzondere waardevermindering. Deze Morris water maze testgegevens laten zien dat de luminantie Aβ rat ruimtelijke geheugen kan veroorzaken. Globaal, injecteren van ratten intracerebroventricularly met Aβ25-35 in combinatie met AlCl3 en TGF-β1 gemaakt een haalbaar en geloofwaardig in vivo AD-achtige diermodel voor het laboratorium.

Eerdere studies hebben aangetoond dat de hersenvolume in AD patiënten 10% lager is dan die van gezonde personen is. Verschillende atrophies kunnen worden gevonden in de cerebrale hemisfeer door visuele waarneming. De mate van atrofie van de corticale is positief gerelateerd aan de geheugen bijzondere waardevermindering19. In de histologie verstoren het grote aantal neuron verlies en ernstige morfologische pathologie direct de geheugenfunctie in AD patiënten20. In de huidige studie, licht/elektronen microscopische observatie gevonden dat de ratten microinjected met luminantie Aβ dramatische neuropathologische veranderingen, met inbegrip van neuron verlies en verstoring van de neuronale en subcellular structuur weergegeven. Dit resultaat bevestigt de rat ruimtelijke geheugen stoornis geïnduceerd door luminantie Aβ, en is vergelijkbaar met de staat van AD patiënten.

Het is algemeen bekend dat de hersenen Aβ lasten en NFT aggregatie worden beschouwd als de meest belangrijke eigenschappen van de histopathogenic in AD. Ze kunnen vernietigen de neuronale structuur, verstoren de neurale signalen verstoren de neuronale functie en resulteren in geavanceerde dementie17. De huidige diermodel gevonden Aβ last en NFT aggregatie in de hersenen, die eens met de AD-patiënt staat. Daarom kunnen de huidige neuron verwondingen bij ratten geïnduceerd door luminantie Aβ neuronale pathologie en behandeling strategie van advertentie te studeren als een model worden gebruikt.

Hieronder vindt u voorbeelden van het screenen van de effecten van de drug in AD rat modellen: Zhao et al., meldde dat beide flavonoïden uit Scutellaria stengels en bladeren (SSF) en Scutellaria barbata (SBF) verzachten kan rat geheugen waardevermindering en apoptosis geïnduceerd door luminantie Aβ8,-9. Guo et al., ook gemeld dat SBF kunt remmen NFT aggregatie en overmatige fosforylatie van tau eiwit aan Ser199, Ser214, Ser202, Ser404 en Thr231 kant, en verminderen van GSK-3β, CDK5 en PKA eiwit en mRNA uitdrukking in luminantie Aβ behandelde ratten21 . Gelijktijdig, Shang et al., ook gemeld dat SBF de Astrocyt en microglia proliferatie, en lagere Aβ1-40, Aβ1-42 onderdrukken kunt, en β-site APP enzym 1 (BACE1) splijten mRNA uitdrukking in de hersenen van luminantie Aβ22 ratten. Op basis van de bovenstaande resultaten, is onze diermodel voordelig over andere AD-achtig model, waarbij meer neuronale functie en structuur stoornis.

Met betrekking tot andere AD-achtig model, één intracerebroventricular injectie van Aβ ratten kan rat geheugen tekorten, neuron verlies en neurogliocyte proliferatie, maar kan of kan niet Aβ en NFT afzetting23. Ratten blootgesteld aan hoge dosis Al lijken te hebben een hoog slagingspercentage, mimic AD en een kosteneffectieve diermodel, met geheugen bijzondere waardevermindering, neuron verlies, neurogliocyte proliferatie, en seniele plaque (SP) en NFT aggregatie in de hersenen. Echter de hoge dosis Al rat lever verwondingen kan veroorzaken en anorexia, vergezeld met daalde gewicht24. De leeftijd rat is een ander AD-achtig model. De leeftijd ratten aantonen dat geheugen tekorten, pathologische veranderingen van de neuronale structuur/onderbouw, lipofuscin afzetting, maar zonder Aβ last en NFT aggregatie. Ratten van meer dan 24 maanden oud worden beschouwd als leeftijd voor dit model, en dus het vergt een langere periode van voeden en daarom de kosten hoger17,25. SAMP8 en APP transgene muizen zijn de dichtstbijzijnde mimic AD en ze zijn de meest ideale modellen voor het onderzoeken van AD. Maar beide dierlijke modellen zijn hoger geprijsd en zijn beperkt tot gebruik in de laboratorium26,27. Vergeleken met de bovenstaande diermodellen, heeft ons model voor luminantie Aβ behandeld diermodel een lagere kosten en hoge prestaties, waardoor het een ideaal hulpmiddel voor de studie van AD.

Kortom, intracerebroventricular injectie van Aβ25-35 gecombineerd met AlCl3 en TGF-β1 aan ratten biedt een waardevolle in vivo diermodel voor een beter begrip van het ruimtelijke geheugen bijzondere waardevermindering, neuronale verwondingen Aβ last en NFT depositie onderliggende AD. Dit model biedt een snelle en relatief eenvoudige experimenteel protocol met een hoge dier overleven tarief en hoge model succesvol tarief voor operatie, evenals een hoge mate van overlapping, waaruit bleek te zijn economischer. De huidige diermodel is een effectieve model om na te bootsen AD en zelf verder kunt valideren door wordt gebruikt om na te bootsen verschillende andere ziekten.

Disclosures

De auteurs hebben niets te onthullen.

Acknowledgments

Het project werd ondersteund door de Hebei provinciale Natural Science Foundation (nr. C2009001007, H2014406048), het provinciale bestuur van Hebei van traditionele Chinese geneeskunde (nr. 05027), en het belangrijkste onderwerp bouwproject van Hebei provinciaal College, China.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Sprague-Dawley rat Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd, China SCXK(Jing) 2012-0001 300–350 g
Morris water maze Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical Research Institute, China No
Movable small animal anesthesi RWD Life Science Co., Ltd. China R580
Brain Stereotaxic Apparatus RWD Life Science Co., Ltd. China 68001
Flexible bone drill Shanghai Soft Long Technology Development Co., Ltd. China BW-sD908
Transmission electron microscope Japan Co., Ltd. Japan JEM-1400
Two channel microinjection pump RWD Life Science Co., Ltd. China RWD202
EM microtome Hitachi Co., Ltd. China H-7650
Dummy cannula RWD Life Science Co., Ltd. China 62001 0.D.0.64×I.D.0.0.45mm/M3.5
http://www.rwdls.com/English/Product/3985102014.html
Guide cannula RWD Life Science Co., Ltd. China 62101 0.D.0.40mm/M3.5
Internal cannula RWD Life Science Co., Ltd. China 62201 0.D.0.41×I.D.0.25mm/SpecialM3.5
Tighten the nut RWD Life Science Co., Ltd. China 62501 0.D.5.5mm/L7.5mm/M3.5
Fixing screw RWD Life Science Co., Ltd. China 62514 M1.2×L2.0mm(100BAO)
The screwdriver RWD Life Science Co., Ltd. China 62999 45*1mm
PE Tubing RWD Life Science Co., Ltd. China 62302
Amyloid beta 25-35 Sigma Aldrich Co. USA SCP0002-5MG
Recombinant human transforming growth factor-β1 PeproTech Inc. USA 100-21
Aluminium trichloride Tianjin Kemiou Chemical Reagent Co., Ltd. China 3011080
Congo red Tianjin Kemiou Chemical Reagent Co., Ltd. China 3010016
Silver nitrate Sinopharm Chcmical Reagent Co., Ltd. China 20150720
Denture base material Shanghai New Century Dental Materials Co., Ltd. China 20170609

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Robinson, M., Lee, B. Y., Hane, F. T. Recent Progress in Alzheimer's Disease Research, Part 2: Genetics and Epidemiology. J. Alzheimers. Dis. (2017).
  2. Hane, F. T., Lee, B. Y., Leonenko, Z. Recent Progress in Alzheimer's Disease Research, Part 1: Pathology. J. Alzheimers Dis. (2017).
  3. Perl, D. P. Neuropathology of Alzheimer's disease. Mt. Sinai. J. Med. 77, 32-42 (2010).
  4. Wu, X. G., Wang, S. S., Miao, H., Cheng, J. J., Zhang, S. F., Shang, Y. Z. Scutellaria barbata flavonoids alleviate memory deficits and neuronal injuries induced by composited Aβ in rats. Behav. Brain Funct. 12, 33-43 (2016).
  5. Guo, K., Wu, X. G., Miao, H., Cheng, J. J., Cui, Y. D., Shang, Y. Z. Regulation and mechanism of Scutellaria bartata flavonoids on apopotosis of cortical neurons and cytochondriome induced by composited Aβ. Chin Hosp Pharm J. 35, 1994-1999 (2015).
  6. Guo, K., Miao, H., Wang, S. S., Cheng, J. J., Shang, Y. Z. Scutellaria barbata flavonoids inhibits NFT aggregation and regulatory mechanism in rats induced by composited Aβ. Chin. J. Pathophysio. 32, 2147-2156 (2016).
  7. Hou, X. C., et al. Scutellaria Barbata flavonoids inhibit the brain's Aβ and NFT abnormal generation and affect the related enzymes expression in rats induced by composited Aβ. Chin J New Drugs. Accepted (2017).
  8. Zhao, H. X., Guo, K., Cui, Y. D., Wu, X. G., Shang, Y. Z. Effect of Scutellaria barbata flavonoids on abnormal changes of Bcl-2, Bax, Bcl-xL and Bak protein expression in mitochondrial membrane induced by composite Aβ25-35. Chin J Pathophysiol. 30, 2262-2266 (2014).
  9. Cheng, J. J., et al. Flavonoid extract from Scutellaria stem and leaf attenuates composited Aβ- induced memory impairment and apoptosis in rats. Chin.J. New Drugs. 25, 2627-2636 (2016).
  10. Fang, F., Yan, Y., Feng, Z. H., Liu, X. Q., Wen, M., Huang, H. Study of Alzheimer's disease model induced multiple factors. Chongqing Med. 36, 146-151 (2007).
  11. Regulations for the Administration of Affairs Concerning Experimental Animals. The Ministry of Science and Technology of the People's Republic of China. 10-31 (1988).
  12. Bao, X. M., Shu, S. Y. The stereotaxic atlas of the rat brain. People's medical publishing house. (1991).
  13. Morris, R. Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rats. J. Neurosic. Methods. 11, 47-60 (1984).
  14. Nunez, J. Morris Water Maze Experiment. J. Vis. Exp. (19), e897 (2008).
  15. Yu, J. C., Liu, C. Z., Zhang, X. Z., Han, J. X. Acupuncture improved cognitive impairment caused by multi-infarct dementia in rats. Physiol. & Behav. 86, 434-441 (2005).
  16. Shang, Y. Z., Miao, H., Cheng, J. J., Qi, J. M. Effects of amelioration of total flavonoids from stems and leaves of Scutellaria baicalensis Georgi on cognitive deficits, neuronal damage and free radicals disorder induced by cerebral ischemia in rats. Biol. Pharm. Bull. 29, 805-810 (2006).
  17. Song, H. R., Cheng, J. J., Miao, H. J., Shang, Y. Z. Scutellaria flavonoid supplementation reverses ageing-related cognitive impairment and neuronal changes in aged rats. Brain Inj. 23, 146-153 (2009).
  18. Wang, M., et al. Novel RAS inhibitors Poricoic Acid ZG and Poricoic Acid ZH attenuate renal fibrosis via a Wnt/β-Catenin patheway and targeted phosphorylation of smad3 signaling. J Agric Food Chem. 66, 1828-1842 (2018).
  19. Pini, L., et al. Brain atrophy in Alzheimer's Disease and aging. Ageing Res. Rev. 30, 25-48 (2016).
  20. Ubhi, K., Masliah, E. Alzheimer's disease: recent advances and future perspectives. J. Alzheimers Dis. 33, 85-94 (2013).
  21. Guo, K. Scutellaria barbata flavonoids inhibite NFTs aggregation, tau protein phosphorylation and the regulated mechanism of related enzymes in rats induced by composited Aβ. Master's thesis (2016).
  22. Shang, Y. Z. Effects and Mechanism of Scutellaria Barbata Flavonoids on Rat's Memory Impairment Induced by Compound Aβ25-35. Doctoral Thesis (2013).
  23. Zussy, C., et al. Alzheimer's disease related markers, cellular toxicity and behavioral deficits induced six weeks after oligomeric amyloid-β peptide injection in rats. PLoS One. 8, 1-20 (2013).
  24. Walton, J. R. Aluminum involvement in the progression of Alzheimer's disease. J. Alzheimers Dis. 35, 7-43 (2013).
  25. Neils-Strunjas, J., Groves-Wright, K., Mashima, P., Harnish, S. Dysgraphia in Alzheimer's disease: a review for clinical and research purposes. J. Speech Lang Hear Res. 49, 1313-1330 (2006).
  26. Morley, J. E., Farr, S. A., Kumar, V. B., Armbrecht, H. J. The SAMP8 mouse: a model to develop therapeutic interventions for Alzheimer's disease. Curr Pharm Des. 18, 1123-1130 (2012).
  27. Puzzo, D., Gulisano, W., Palmeri, A., Arancio, O. Rodent models for Alzheimer's disease drug discovery. Expert Opin Drug Discov. 10, 703-711 (2015).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics