Minimal invaziv transvers aort daralma farelerde sol ventrikül hipertrofisi indüksiyon için tekniği

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Bu iletişim kuralının amacı adım adım tarif etmektir minimal invaziv transvers aort daralma (TAC) farelerde tekniği. Entübasyon ve yaygın olarak kullanılan standart prosedür için zorunlu olan havalandırma ortadan kaldırılması, minimal invaziv TAC operatif prosedür basitleştirir ve hayvan koymak zorlanma azaltır.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Tavakoli, R., Nemska, S., Jamshidi, P., Gassmann, M., Frossard, N. Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy. J. Vis. Exp. (127), e56231, doi:10.3791/56231 (2017).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Transvers aort daralma (TAC) farelerde en sık kullanılan cerrahi teknikler basınç aşırı kaynaklı deneysel incelenmesi için kalp yetmezliği için sol ventrikül hipertrofisi (SVH) ve ilerlemesi biridir. Bildirilen araştırmalar çoğunluğu olarak, bu yordamı entübasyon ve havalandırma zorlu ve zaman alıcı işler ve hayvan için cerrahi yükü ekler hayvan ile gerçekleştirilir. Bu iletişim kuralının amacı olmadan entübasyon minimal invaziv TAC basitleştirilmiş bir teknik ve havalandırma farelerin tarif etmektir. Tekniğin önemli adımlar, amacıyla düşük mortalite ve SVH inducing içinde yüksek verim elde etmek için vurgulanmaktadır.

Erkek C57BL/6 fare (10 haftalık, 25-30 g, n = 60) ketamin ve xylazine karışımı tek bir mayi enjeksiyon ile anestezi. Bir nefes kendiliğinden hayvan 3-4 mm üst kısmi yöntemdir takip 6/0 ipek sütür ligasyonu yardım deliğinden dişli bir parçasını aort altında geçti ve körelmenin 27 lik bir iğne üzerinde bağlı. Sham işletilen hayvan aynı cerrahi hazırlık yapıldı ama aort daralma olmadan. SVH inducing içinde yordam etkinliğini kalp/beden ağırlık oranı önemli bir artış tarafından belgelendirilmiştir. Bu oran, 3, 7, 14 ve 28 gün ameliyat sonrası elde edilir (n = 6-10 her grup ve her zaman puan). Bizim tekniği kullanarak, 28 gün boyunca 7 gün üzerinden sahte hayvanlara göre Tac SVH görülmektedir. Operatif ve geç (28 gün içinde) Scotlan %1,7 çok düşük her ikisi de vardır.

Sonuç olarak, minimal invaziv TAC farelerde bizim düşük maliyetli tekniği çok düşük operatif ve ameliyat sonrası Scotlan taşır ve SVH inducing çok etkilidir. Operatif prosedür basitleştirir ve hayvan koymak zorlanma azaltır. Kolayca bu protokol için açıklanan kritik adımları izleyerek gerçekleştirilebilir.

Introduction

Son yıl içinde kalp yetmezliği çalışmanın içinde gerçekleştirilmiştir canlı hayvan modelleri1. Kalp yetmezliği büyük hayvan modellerle karşılaştırıldığında, küçük hayvan modelleri çok sayıda potansiyel avantajları vardır. Konut ve bakım daha düşük maliyetlerle, küçük hayvan modelleri daha az karmaşık gerekli İmkanlar2nedeniyle daha fazla araştırmacılar için erişilebilir.

Fare kalp yetmezliği modelleri çoğu fare modelleri aynı avantajları sunmaktadır. Ayrıca için indirimli konut maliyeti3, fare modelleri ilgili transgenik ve nakavt (KO) suşlar kullanılabilirliğini yarar. Hücre türüne özgü, indüklenebilir KO veya transgenik stratejileri olasılığı fare kalp yetmezliği patogenezi okumaya ve yeni tedavi rejimleri3tanımlamak denemek için paha biçilmez bir araç olun.

Fare arasında kalp yetmezliği modellerinin4kullanılmakta, hangi ilk Rockman5 tarafından tanımlanmıştır aort enine daralma (TAC) basınç aşırı kaynaklı sol ventrikül hipertrofisi (SVH)1 üretmek için tercih edilen bir modeldir , 3. bu modelin en büyük avantajı stratifikasyon SVH2izin yeteneğidir, ventrikül yaptı, ancak yanıt TAC olarak remodeling farklı fare suşları arasında değişkendir. Özellikle, C57BL/6 fare hızlı LV genişleme diğer suşların4,6,7ile ortaya çıkmaz TAC sonra geliştirmek.

TAC nedenleri ile elde hipertansiyon ani başlangıçlı bir hızla SVH4gelişimi oransal nişan farmakolojik veya moleküler müdahalelerin etkinliğini incelemek için izin yaklaşık % 50 artış LV kütle 2 hafta içinde. TAC tarafından şiddetli hipertansiyon akut indüksiyon tam olarak ilerici sol ventrikül hipertrofisi çoğaltmak ve remodeling aortik stenoz veya arteriyel hipertansiyon klinik ortamda gözlenen. Yine de, bu modeli tanımlamak ve kalp yetmezliği4roman tedavi hedeflerini değiştirmek için birçok müfettişler tarafından kullanılır.

TAC farelerde gerçekleştirme SVH ve sonraki kalp yetmezliği2ikna etmek için kullanılan diğer teknikleri istenenden daha fazla cerrahi uzmanlık gerektirir. Çoğu yazarlar entübasyonda ve bu yordamı daha zorlu ve zaman alıcı yapar ve hayvan için cerrahi yük ekler hayvan2,8, havalandırma tarafından bu yordamı gerçekleştirin. Sadece birkaç müfettişler yaptıkları çalışmada cerrahi işlem9,10,11kısa başvuru ile minimal invaziv TAC kullanmışlardır.

Bu iletişim kuralının amacı adım adım tarif etmektir kritik yordamının aşamalarını vurgulayarak farelerde minimal invaziv transvers aort daralma Basitleştirilmiş ve kullanıcı dostu tekniği. Anahtar adımları takip ederek, bir kolayca bu teknik gerçekleştirebilirsiniz.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

erkek C57BL/6J fareler (10 hafta, 25-30g, n = 60) Bu protokol için kullanılır. Hayvanlar Fransızca Bakanlığı tarım ve yüksek öğretim ve araştırma tarafından formüle yönergelere uygun olarak insana ilişkin bakım almak ve tüm yordamları 24 Kasım 1986 uygun olarak Avrupa Topluluğu Konsey Yönergesi gerçekleştirilir () 86/609/EEC) ve Fransız yasaları. Protokol tarafından kabul edildi " bölgesel Etik Komitesi hayvan deney CREMEAS için " (#2016092816207606).

1. cerrahi için hazırlık

  1. gıda (için ayrıntıları bakın malzemeler tablo) ile standart kafeslerde 12 h/12 h açık/koyu döngüsü üzerinde hayvan tesiste geldikten sonra bir hafta için fareler korumak ve su kullanılabilir reklam libitum.
  2. İşlem gününde fareler bireysel kafeslerde anestezi, indüksiyon öncesinde birkaç dakika hayvan için herhangi bir ek stres önlemek için yerleştirin. Ameliyattan önce gün tüm cerrahi aletler sterilize.
  3. İçi peritoneally ketamin (51.4 mg/kg) ve serum fizyolojik çözümde seyreltilmiş xylazine (3.3 mg/kg) karışımı tek bir doz enjekte (% 0.9 NaCl).
  4. Ayak geri çekilme refleks yokluğunda tarafından anestezi derinliği emin olun.
  5. Boyun ve göğüs hayvan satın alabileceğiniz bir ustura ile tıraş ve traş alanının % 70 alkol ile dezenfekte.
  6. Hayvan sırtüstü bir temiz cork çalışma defterinde yerleştirin ve pençeleri yapışkan bant ile düzeltmek.

2. Ameliyat

  1. steril cerrahi tekniğin yordamlarda kullanılan. Kendiliğinden nefes içinde hayvan, göğüs kemiği ( şekil 1) göstermek supra sternal çentik orta göğüs bir 11-bıçak bıçak ile bir boyuna servikal Ensizyon 10 mm gerçekleştirmek.
  2. Tiroid iğne bağı 4/0 monofilament polipropilen kalış dikiş Crile ahşap ile ileterek geri çekmek ve bu çalışma pedi için bant.
  3. Açık açık önceden trakeal kasları Trakea ortaya çıkarmak için mikro-cerrahi Forseps ile ayırın.
  4. Slayt hafifçe yumuşak uçlu kavisli Mikro cerrahi forseps kapalı jaws ile trakea ve göğüs kemiği arkasında.
  5. Tarafından dikkatle açılış ve kapanış düz uçlu eğri mikrocerrahi forseps çene altında önceden trakeal kasları ve plevra uzaklaşmaya göğüs kemiği arkasında bir künt diseksiyon gerçekleştirmek.
  6. Sağ supra-klavikular kasları düz uçlu düz Mikro cerrahi Forseps ile tutun ve hayvan göğsü yavaşça çekin.
  7. Kemik nipper göğüs kemiğinin altında alt çene slayt ve bir 3-4 mm üst kısmi yöntemdir ( Şekil 2) gerçekleştirin. Doğrudan alt kısmında biraz sola doğru mini yöntemdir.
  8. 7/0 monofilament polipropilen kalış dikiş üzerinden içinde için dışında bir mikro-cerrahi iğne bağı kullanarak mini yöntemdir her tarafında ikinci interkostal uzayda geçmektedir. İnterkostal ve internal torasik damarları veya plevra için yaralanmayı önlemek için costo sternal açı yakın kal.
  9. 7/0 monofilament polipropilen kalış dikiş her tarafında kullanarak göğüs kenarları yaymak ve bunları düzeltmek için çalışma pedi yapışkan bant ile.
  10. Yavaşça hareket bir kenara önceden trakeal kaslar, mediastinal yağlı ve yumuşak uçlu timus kullanarak eğri aort düşük güç büyütme (2-3 X) altında görselleştirmek için mikrocerrahi forseps ( şekil 3). Değil dokunma veya pnömotoraks gelişimini önlemek için parietal plevra zarar belirli kendine iyi bak.
  11. Aort altında yumuşak doku forseps ( şekil 4 A) bağlayarak açığa ve yavaşça onun jaws yayıldı. Aort altında yumuşak doku tünelde ikinci bağlama Forseps ile hafifçe açılış ve kapanış jaws yumuşak doku olarak hazırlayın.
  12. 6/0 ipek ip göz sol aort altında tutulan ligasyon yardım ( şekil 4 B) boyunca dişli bir parçasını geçmek ve sağ el kökeni arasında düzenlenen forseps bağlayarak geri almak Şu innominate ve sol ortak Karotid arter ( şekil 5).
  13. 5 mm uzunluğa 27'lik iğne kesmek ve Crile iğne bağı ile basarak her iki ucu künt. Düz uçlu düz Mikro cerrahi Forseps ile aort ( şekil 6) yanında körelmenin 27'lik iğne yerleştirin ve dikiş iğne ve aort damarı şu innominate ve sol ortak karotis arasında rahatça etrafında kravat iki bağlama forseps ( Şekil 7) kullanarak arterler. Rahatça dikişi bağlamak için bir ilk çift düğüm dört ek düğüm tarafından takip gerçekleştirin. Tüm deniz mili düz olduğundan emin olun.
  14. Sonra tüp ligasyonu, hızlı bir şekilde ama nazikçe 0.4 mm çap daralma elde etmek için iğne ve tekrarlanabilir enine 65-%70 aort daralma kaldırmak.
  15. Hemostazın aort sternal kenarları ve önceden trakeal kaslar etrafında yumuşak doku
  16. denetleyin. Her yerde kan sızmaya görülmektedir tekrar Emilebilen Kan durdurucu sargı gazlı bez koyun. 7/0 monofilament polipropilen kal sternal kenarları yaymak için kullanılan dikiş kaldır.
  17. Geçmek bir basit 6/0 monofilament polipropilen sütür ile bir mikro-cerrahi iğne bağı dışında için sol ikinci interkostal boşluk içinde ve o andan itibaren içinde için değil ikinci interkostal boşluk dışında. İnterkostal ve internal torasik damarları veya plevra için yaralanmayı önlemek için costo sternal açı yakın kal.
  18. Birlikte iğne bağı Crile ahşap ile 6/0 monofilament polipropilen sütür bağlayarak göğüs kenarları getirmek.
  19. Deri dikiş bir katmanda bir Crile ahşap ile iğne bağı çalıştıran bir 5/0 monofilament polipropilen ile yakın.
  20. Sham yordamı aynı daralma işlemi ama dikiş aort çevresinde ipe.

3. Ameliyat sonrası kurtarma

  1. hayvanlar çok yakından izlemek. fare için bireysel bir kafes aktarım ve yüzükoyun sígara yerleştirin.
  2. İzin ver bir ısınma ışık altında kadar tamamen kurtarmak için fareyi uyanık (az 1 anestezi inducing sonra h).
  3. Ameliyat sonrası analjezi için 0,1 mg/kg buprenorfin intraperitoneally enjekte. gösterildiği gibi ilk üç gün boyunca yineleyin Subkutan Enjeksiyon 0.1 mg/kg buprenorfin her 8 h.
  4. (Maksimum kafes 3 fare) ve en az 2 fareler kafesi başına standart kafeslerde işletilen fareler yer.

4. Kalp hasat

  1. fare ketamin bir çözüm ile analiz günü, ötenazi 300 mg/kg ve xylazine 20 mg/kg mayi enjeksiyonla serum içinde.
  2. İnferior vena kava kandan ilk hasat ve aynı hattı üzerinden 5 mL serum fizyolojik 2.6 mm EDTA çözeltisi enjekte.
  3. Kalp hasat, Kulakçık kaldırmak ve kalp (sol ve sağ ventrikül Kulakçık olmadan) ağırlık.
  4. Sola doğru ventr ayırmak.icle sol ventrikül bölümüne kalan septum ile. Her iki doku örnekleri tartmak ve onları sıvı azot içinde dondurma.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Operatif ve geç kalma
Operatif hayatta kalma çok yüksekti %98,3 (59 dışarı-in 60) için tüm diziyi mi (TAC ve sham çalışan hayvanlar). Sahte işlem için rendelenmiş bir fare kanayan bir komplikasyon nedeniyle sadece operatif ölüm oldu. %98,3 (59 58 dışarı) tarafından 28 gün gözlem süresi boyunca ameliyat sonrası hayatta kalma da mükemmeldi. Sadece geç ameliyat sonrası ölüm bir TAC fare muhtemelen kalp kökenli (D) 16, gününde meydana gelen.

Doğrulama tekniği
Sunulan çok güvenilir ve tekrarlanabilir bir tekniktir. Şu innominate ve sol ortak Karotid arter arasında dikiş doğru yerleşimini TAC geçiren tüm hayvanlarda doku hasat sırasında teyit edildi.

Sol ventrikül hipertrofisi ikna etmek için teknik etkinliğinin belirlenmesi kalp ağırlık/beden ağırlık oranları (HW/BW, mg/g) 3, 7, 14 ve 28 gün ameliyat sonrası tarafından doğrulandı. HW Kulakçık olmadan sol ve sağ ventrikül ağırlığıdır. HW/BW oranı anlamlı bir artış içinde şeritli ameliyat sonrası D7 sham gruplarına göre (4.9±0.2 karşı 4.1±0.05 mg/g, P < 0,01) açık ve önemli ölçüde daha yüksek D28 kadar kaldı (5.8±0.3 karşı 4.1±0.1 mg/g, P < 0.0001) Ameliyat sonrası (şekil 8). HW/BW oranı gözlenen artış beri tüm gözlem sırasında TAC ve sham çalışan hayvanlar arasında karşılaştırılabilir kaldı sağ ventrikül/vücut ağırlık oranı sadece sol ventrikül/beden ağırlık oranı (Şekil 9A) bir artış nedeniyle oldu dönem (9 şekilB).

Ayrıca, sol ventrikül dokusunda kalp hipertrofisi biyolojik mRNA ifadesi yukarıda açıklanan12olarak ölçülür. D14, mRNA ifade brain natriüretik protein (BNP), Atriyal natriüretik protein (ANP), Anjiyotensin dönüştürücü enzim (ACE), kollajen 1a1, (Col1a1) ve dönüştürme büyüme faktörü β (TGFß), aort bantlı önemli ölçüde daha yüksek karşılaştırıldığında Sham çalışan hayvanlar (şekil 10). Bu nedenle, gözlenen sol ventrikül hipertrofisi bizim TAC tekniği verimliliğini doğrular.

Ortalama ve standart hata ortalama değerlerden karşılaştırıldığında TAC ve sham arasında tek yönlü ANOVA eşleştirilmiş veri karşılaştırma için Bonferroni'nın post-hoc testi ardından kullanarak gruplandırır.

Figure 1
Resim 1 : Kesi.
Deri orta göğüs kemiği supra sternal çentik üzerinde 10 mm kazıma ve tiroid kalış dikiş ile geri çekildi. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 2
Resim 2 : Kemik nipper.
Bu araç için bir 3-4 mm üst kısmi üstün mini-yöntemdir kemik bir kısa ve hassas kesim sağlar. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3 : Pozlama.
7/0 ile sternal kenarlarının retraksiyon izleyen dikiş, aort şu innominate kal ve sol ortak Karotid arter nefes borusu ile birlikte sunulur. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 4
Şekil 4 : A. Tying forseps. Bu forseps nazik ve künt diseksiyon göğüs kemiği arkasında ve aort çevresinde gerçekleştirmek gereklidir. B. tüp ligasyonu yardım. Bu hassas ve Atravmatik geçit aort TAC ve sham çalışan fareler hem de altında fark için anahtar araçtır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 5
Şekil 5 : Aortik arch. altında geçiş
6/0 ipek ip bir parçasını ligasyonu yardımların kullanılması aort altında geçti ve şu innominate ve sol ortak Karotid arter arasında yerleştirilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 6
Şekil 6 : Birleştirmesini için hazırlık.
Kısa segment körelmenin 27'lik iğne 2-3 mm aort yerleştirilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 7
Şekil 7 : Transvers aort daralma.
İpek dikiş iğne ve aort bağlama forseps kullanarak şu innominate ve sol ortak Karotid arter arasında üzerinde bağlıdır. Düğüm daha iyi yapacak çünkü yerine polipropilen sütür ipek aort ligasyonu için tercih edilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 8
Şekil 8 : Transvers aort daralma doğrulanmasını.
Bizim minimal invaziv transvers aort daralma tarafından kalp hipertrofisi indüksiyon kalp ağırlık/beden ağırlık oranı şeritli (siyah çubuklar) içinde önemli artış işletilen sham (beyaz çubukları) fareler karşılaştırıldığında gösterilmiştir. Kalp hipertrofisi zaten ameliyattan sonra D7 var ve giderek D28 kadar zamanla artar (n = 6-10 başına grup. ** P < 0,01, *** P < 0,001, *** P < 0.0001). Veri ± SEM (hata çubukları) demek gibi sunulmaktadır. Savunmase, bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için burayı tıklatın.

Figure 9
Şekil 9 : Sol (A) ve (B) ventrikül sağ / vücut ağırlık oranı.
Sağ ventrikül/vücut ağırlık oranı Tac (siyah çubuklar) sham işletilen (beyaz çubukları) hayvanlar için karşılaştırıldığında benzer kalırken gözlem süresi boyunca, sol ventrikül/beden ağırlık oranı artar. Bu sol ventrikül hipertrofisi sağ ventrikül yapılmaksızın onaylar ve bizim teknik doğrulanmasını güçlendirir (n = 6-10 başına grup. ** P < 0,01, *** P < 0,001, *** P < 0.0001). Veri ± SEM (hata çubukları) demek gibi sunulmaktadır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 10
Şekil 10 : BNP-mRNA ifade.
beyin natriüretik protein (BNP), Atriyal natriüretik protein (ANP), Anjiyotensin dönüştürücü enzim (ACE), kollajen 1a1 mRNA ifade (Col1a1) ve dönüştürme büyüme faktörü β (TGFß), aort bantlı (siyah bar) kalp hipertrofisi için pozitif kontrol vs sham hayvanlar (beyaz çubuğu) (n = 6 grup başına) D14. İfade 2 olarak hesaplanan(-ΔCt) Kalibratör Gapdh referans gen mRNA düzeyini nerede. Veri ± SEM (hata çubukları) demek gibi sunulmaktadır. * P < 0,05, ** P < 0,01, *P < 0,001 sham grubuna göre (t-test). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Bu iletişim kuralının amacı farelerde minimal invaziv transvers aort daralma için cerrahi teknik bir adım adım örnek sunmaktır. Transvers aort daralma farelerde ayrıntılı teknik açıklama diğer yazarlar2,8tarafından bildirilmiştir. Ancak, bu müfettişler ameliyat entübasyon ve havalandırma hayvanların aşağıdaki. Entübasyon-havalandırma ek bir adım kullanımı karmaşıklık ve tüm prosedürü süresini artırır ve genel stres hayvan maruz kalmaktadır. Bu nedenlerden dolayı minimal invaziv transvers aort daralma kavramı biraz ilgi aldı. Farelerde minimal invaziv transvers aort daralma sol ventrikül hipertrofisi ve ilerlemesi için kalp yetmezliği9,10,11ikna etmek için kullanılır. Bu çalışmalar sol ventrikül hipertrofisi ve kalp yetmezliği genesis dahil yolları, ancak Cerrahi teknik9,10,11açıklaması odaklan.

Bu protokol için minimal invaziv TAC farelerde Basitleştirilmiş ve tekrarlanabilir tekniği ayrıntılarda rapor. Yetenekli bir cerrah daralma işlem 20 dakika içinde ve (olmadan sütür bağlama) sahte işlem 15 dakika içinde yapabilirsiniz. Bizim ilk teknik prova sırasında önemli bir araç, tüp ligasyonu yardım, çok düşük bir operatif mortalite % 1.7 izin giriş bulduk. Bu olumlu operatif mortalite % 4 tarafından Rockman rapor karşılaştırır et. al. 5, Liao tarafından %3.7 et al. 13 ve %2.7 Stansfield tarafından et al14. , Gözlem süresi kadar 28 gün için daha fazla, aynı zamanda bir çok düşük geç post-operatif mortalite % 1.7 gösterir. Yine, bu iyi tarafından Rockman rapor geç mortalite karşılaştırır et al (% 10)5, Liao et al (% 19)13 ya da Stansfield et al (% 2,6)14.

Aort altında geçiş tüm prosedürü en önemli adımdır. Bu adımın tekrarlanabilirlik Hu ve ev yapımı tel ile bir tuzak sonunda şu innominate ve sol ortak Karotid arter9arasında aort altında origin'i eskiden iş arkadaşları tarafından ne de konumlandırılmış Tarnavski tarafından açıklanmayan yapıldı. 7/0 ipek yakalamak için artan aort altında medial taraftan kıvrımlı pensler karşı tarafta dikiş at ve altında aort2taşıyın. Bizim teknikte kullanılan ligasyonu yardım aort yırtığını düşük riski ile standart ve tekrarlanabilir bir manevra sağlar.

Diğer belirleyici adım yordam için kravat verimli bir şekilde azaltmak için 27'lik iğne ve homojen aort Lümen üzerinde uygulanan gerilim olduğunu. Öncelikle, dikiş aort çevresinde düzgün ve tekrarlanabilir gerilim uygulayarak yardım bağlama forseps kullanın. Dikişi uygun yerleşimini kalp ve aort hasat sırasında doğrulanır. Andersen ve iş arkadaşlarınızla grup uygun yerleşimini Karotid arter Doppler sinyallerinin değerlendirilmesi önce ve sonra yerleşim aort grup11tarafından doğrulanmadı. Doppler hız oranı sağdan sola Karotid arter11iki katına zaman onların raporunda, yeterli bantlama kabul edildi. TAC verimliliğini tarafından indüklenen sol ventrikül hipertrofisi derecesini ölçmek seçtik bizim teknik olarak bantlı yordamı karşılaştırarak doğrulamak için sahte hayvanlar için karşılaştırıldığında, beri bu değil gerektiren yordamı herhangi bir artış süresi veya takıma giren anestezi hayvanlar. Bizim teknikte, sol ventrikül hipertrofisi ve bantlama uygun yerleşim derecesini deneme sonunda denetlenir. Bizim tekniği ile sol ventrikül hipertrofisi derecesini olumlu 3 hafta TAC fareler15dakika içinde takip diğer müfettişler tarafından rapor sonuçları ile karşılaştırır. Buna ek olarak, bizim şeritli hayvanlarda gözlenen vücut ağırlığı için kalp oranı düşük varyasyonu için kravat uygulanan gerilim düşük dalgalanma kanıtlıyor.

Sonuç olarak, entübasyon-havalandırma kaçınma bu protokol için sunulan bir güvenilir ve tekrarlanabilir model farelerde minimal invaziv TAC bizim tekniği sağlar. Bu model hayvanlar üzerinde koymak küresel zorlanma azaltır ve zaman ve maliyet tasarrufu için TAC entübasyon-havalandırma hayvanların kullanarak karşılaştırılır. Bu yordamı operatif ve geç mortalite oranları çok düşüktür ve bu teknik sol ventrikül hipertrofisi indüksiyon için seçim yöntemlerden birini farelerde olun.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar hiçbir ifşa etmek çıkar çatışması var.

Acknowledgements

Bu eser RT. için İsviçre kardiyovasküler Vakfı'nın hibe (N ° 32016) tarafından desteklenmiştir

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Surgical microscope Olympus SZX2-TR30
Razor Rowenta Nomad TN3650FO
Sutures:
Polypropylene 7/0 Ethicon BV-1X
Polypropylene 6/0 BBraun C0862061
Silk 6/0 ligature  FST 18020-60
Polypropylene 4/0 Ethicon 8683
Polypropylene 5/0 Ethicon Z303
Drugs:
Ketamin Merial Imalgène 1000, LBM154AD
Xylazine Bayer Rompun 2%, KP09PPC
Buprenorphine Ceva Vetergesic, 072013
Instruments: 
Bone nippers Fine Surgical Tools 16101-10
Ligation aid Fine Surgical Tools 18062-12
Tying forceps Fine Surgical Tools 18026-10
Needle holder Crile-Wood Fine Surgical Tools 12003-15
Microsurgery forceps  Fine Surgical Tools 11003-12
Microsurgery forceps  Fine Surgical Tools 11002-12
Tissue forceps Fine Surgical Tools 11021-12
Microsurgery needle holder Fine Surgical Tools 12076-12
Microsurgery scissors Fine Surgical Tools 91501-09
Mayo scissors Fine Surgical Tools 14511-15
11-blade knife Fine Surgical Tools 10011-00
RNA extraction and qPCR:
TriReagent Euromedex TR-118-200
Rneasy Mini kit Qiagen 74704
Qubit Fluorimetric RNA assay Fisher Scientific 10034622
RNA 6000 Nano kit Agilent 5067-1511
High Capacity cDNA kit Fisher Scientific 10400745
Taqman Master Mix Fisher Scientific 10157154
Taqman BNP primers Fisher Scientific Mm01255770_g1
Taqman ANP primers Fisher Scientific Mm01255747_g1 
Taqman ACE primers Fisher Scientific Mm00802048_m1
Taqman Col1a1 primers  Fisher Scientific Mm00801666_g1
Taqman TGFb primers Fisher Scientific Mm01178820_m1
Taqman Gapdh primers Fisher Scientific Mm99999915_g1
ABIPrism  Thermocycler Applied Biosystems 7000
Software:
GraphPad Prism GraphPad Prism 7
Animal food
Complete diet for adult rats/mice Safe UB220610R

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. Animal models of cardiac cachexia. Int. J. Cardiol. 219, (15), 105-110 (2016).
  2. Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).
  3. Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, R., et al. Transverse aortic constriction: a model to study heart failure in small animals. Manual of Research Techniques in Cardiovascular Medicine. Ardehali, H. Wiley, J., & Sons. 164-169 (2014).
  4. Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. Small animal models of heart failure. Development of novel therapies, past and present. Circ. Heart Fail. 2, (2), 138-144 (2009).
  5. Rockman, H. A., et al. Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88, (18), Erratum in: Proc. Natl. Acad. Sci. USA Page 9907 8277-8281 (1991).
  6. Barrick, C. J., Rojas, M., Schoonhoven, R., Smyth, S. S., Threadgill, D. W. Cardiac response to pressure overload in 129S1/SvImJ and C57BL/6J mice: temporal- and background-dependent development of concentric left ventricular hypertrophy. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, (5), 2119-2130 (2007).
  7. Deschepper, C. F., Olson, J. L., Otis, M., Gallo-Payet, N. Characterization of blood pressure and morphological traits in cardiovascular-related organs in 13 different inbred mouse strains. J. Appl. Physiol. 97, (1), 369-376 (2004).
  8. Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. T. Transverse aortic constriction in mice. J. Vis. Exp. (38), April 21 (2010).
  9. Hu, P., Zhang, D., Swenson, L., Chakrabarti, G., Abel, E. D., Litwin, S. E. Minimally invasive aortic banding in mice: effects of altered cardiomyocyte insulin signaling during pressure overload. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 285, (3), 1261-1269 (2003).
  10. Faerber, G., et al. Induction of heart failure by minimally invasive aortic constriction in mice: Reduced peroxisome proliferator-activated receptor ϒ coactivator levels and mitochondrial dysfunction. J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 141, (2), 492-500 (2011).
  11. Andersen, N. M., Tang, R., Li, L., Javan, H., Zhang, X. Q., Selzman, C. H. IKK-β inhibition prevents adaptive left ventricular hypertrophy. J. Surg. Res. 178, (1), 105-109 (2012).
  12. Nemska, S., Monassier, L., Gassmann, M., Frossard, N., Tavakoli, R. Kinetic mRNA profiling in a rat model of left ventricular hypertrophy reveals early expression of chemokines and their receptors. PLoS ONE. 11, (8), 0161273 (2016).
  13. Liao, Y., et al. Echocardiographic assessment of LV hypertrophy and function in aortic-banded mice: necropsy validation. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282, (5), 1703-1708 (2002).
  14. Stansfield, W. E., et al. Characterization of a model to independently study regression of ventricular hypertrophy. J. Surg. Res. 142, (2), 387-393 (2007).
  15. Beetz, N., et al. Ablation of biglycan attenuates cardiac hypertrophy and fibrosis after left ventricular pressure overload. J. Mol. Cell. Cardiol. 101, December 145-155 (2016).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics