उच्च-रिज़ॉल्यूशन ऑप्टिकल मैपिंग के साथ Murine Atria का Electrophysiological आकलन

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Summary

इस प्रोटोकॉल का वर्णन murine atria के electrophysiological मूल्यांकन एक उच्च लौकिक और स्थानिक संकल्प के साथ एक ऑप्टिकल मानचित्रण प्रणाली का उपयोग, झिल्ली वोल्टेज और Ca के दोहरी रिकॉर्डिंग सहित2 + क्षणिक के तहत क्रमादेशित एक विशेष इलेक्ट्रोड कैथेटर के माध्यम से उत्तेजना ।

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Ihara, K., Sugiyama, K., Takahashi, K., Yamazoe, M., Sasano, T., Furukawa, T. Electrophysiological Assessment of Murine Atria with High-Resolution Optical Mapping. J. Vis. Exp. (132), e56478, doi:10.3791/56478 (2018).

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Abstract

हाल ही में जीनोम-वाइड एसोसिएशन अध्ययन लक्ष्यीकरण अलिंद अलिंद (वायुसेना) phenotype में जीनोटाइप और electrophysiological atria के बीच एक मजबूत संघ का संकेत दिया है । कि हमें प्रोत्साहित करने के लिए एक आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल का उपयोग करने वायुसेना के तंत्र स्पष्ट । हालांकि, यह उनके छोटे आकार के कारण murine atria में electrophysiological गुणों का मूल्यांकन करने के लिए मुश्किल है । इस प्रोटोकॉल Langendorff perfused murine दिलों में एक उच्च लौकिक और स्थानिक संकल्प के साथ एक ऑप्टिकल मानचित्रण प्रणाली का उपयोग atria के electrophysiological मूल्यांकन का वर्णन करता है । ऑप्टिकल मानचित्रण प्रणाली दोहरी उच्च गति पूरक धातु ऑक्साइड अर्धचालक कैमरों और उच्च इज़ाफ़ा उद्देश्य लेंस के साथ इकट्ठे है, एक वोल्टेज के प्रति संवेदनशील डाई और सीए2 + संकेतक के प्रतिदीप्ति का पता लगाने के लिए । murine atria के आकलन पर ध् यान देने के लिए, ऑप्टिकल मानचित्रण 2 मिमी × 2 मिमी या 10 मिमी x 10 मिमी के एक क्षेत्र के साथ किया जाता है, एक १०० × १०० संकल्प के साथ (20 µm/पिक्सेल या १०० µm/पिक्सेल) और अधिकतम पर 10 kHz (०.१ ms) के लिए नमूना दर । एक 1-फ्रांसीसी आकार quadripolar इलेक्ट्रोड पेसिंग कैथेटर बेहतर वेना कावा के लिए किसी भी यांत्रिक क्षति से बचने के माध्यम से सही atrium में रखा गया है, और atrium उत्तेजना कैथेटर के माध्यम से दिया जाता है । एक electrophysiological अध्ययन लगातार पेसिंग, फट पेसिंग सहित क्रमादेशित उत्तेजना के साथ किया जाता है, और ट्रिपल extrastimuli पेसिंग तक । एक सहज या पेसिंग लय के तहत, ऑप्टिकल मानचित्रण कार्रवाई संभावित अवधि, सक्रियकरण नक्शा, आचरण वेग, और Ca2 + क्षणिक व्यक्तिगत रूप से सही और बाएं atria में दर्ज की गई । इसके अलावा, क्रमादेशित उत्तेजना भी अलिंद tachyarrhythmias के inducibility निर्धारित करता है । सटीक सक्रियकरण मैपिंग एक प्रेरित अलिंद tachyarrhythmia के दौरान atrium में उत्तेजना के प्रचार की पहचान करने के लिए किया जाता है । एक विशेष सेटिंग के साथ ऑप्टिकल मानचित्रण murine रोग मॉडल में atrium की एक पूरी तरह से electrophysiological मूल्यांकन सक्षम बनाता है ।

Introduction

दिल स्तनधारियों में 4 कक्षों के होते हैं । ऊपरी दो कक्ष atria हैं, और निचले लोगों निलय हैं । निलय प्रणालीगत या फेफड़े के संचलन के लिए रक्त बेदखल करने के लिए एक पंप के रूप में काम करते हैं । Atria प्रणालीगत या फेफड़े की नसों से लौट रक्त प्राप्त करते हैं, और निलय में रक्त परिवहन में सहायता करने के लिए एक कुशल कार्डियक पंप समारोह प्राप्त करते हैं । एक electrophysiological पहलू से, atria का महत्वपूर्ण कार्य दिल ताल को विनियमित करने के लिए है । विद्युत संकेतों बेहतर वेना कावा (SVC) और सही atrium (आरए) के बीच जंक्शन पर स्थित साइनस नोड से शुरू, तो रा और वाम atrium (LA) के लिए प्रचार, और अलिंदनिलय संबंधी ब्लॉक नोड के माध्यम से निलय के लिए आचरण और अपने-Purkinje आचरण प्रणाली ।

ताल विकारों, जो दिल ताल विकार हैं, उनके मूल के अनुसार अलिंद और वेंट्रिकुलर में वर्गीकृत कर रहे हैं । अलिंद अलिंद (वायुसेना) एक अतालता का सबसे आम निरंतर रूप है, atria की एक यादृच्छिक और तेजी से उत्तेजना की विशेषता । हाल ही में आनुवंशिक विश्लेषण और जीनोम-वाइड एसोसिएशन अध्ययन (GWAS) वायुसेना और आनुवंशिक उत्परिवर्तनों या monopolymorphisms1,2,3,4के बीच सहयोग से पता चला है । इन निष्कर्षों से संकेत मिलता है वायु सेना के एक आनुवंशिक कारण से जुड़ा हुआ है । इसलिए, यह एक आनुवंशिक रूप से इंजीनियर पशु मॉडल का उपयोग कर atria में जीनोटाइप-phenotype बातचीत का मूल्यांकन करने के लिए महत्वपूर्ण है । यह व्यापक रूप से स्वीकार किया है कि माउस आनुवंशिक संशोधन के लिए सबसे स्थापित स्तनधारियों है ।

हार्ट टिशू के उत्तेजना का मूल्यांकन करने के लिए ऑप्टिकल मैपिंग तकनीक विकसित की गई है । हालांकि, ऑप्टिकल मानचित्रण द्वारा murine atrium के प्रेक्षण अपने अपेक्षाकृत छोटे आकार से प्रभावित है । हम एक उच्च लौकिक और स्थानिक संकल्प के साथ murine atrium का एक विस्तृत मूल्यांकन प्राप्त करने का प्रयास ।

Protocol

इस जानवर प्रयोग को अनुमोदित किया गया और इसे संस्थागत पशु परिचर्या और दंत चिकित्सा विश्वविद्यालय की उपयोग समिति के विनियमन के तहत किया गया ।

1. तैयारी

  1. स्टॉक समाधान
    1. वोल्टेज के प्रति संवेदनशील रंजक (di-4-ANEPPS, और RH237) और Ca2 + संकेतक (Rhod-2 AM) के साथ १००% dimethyl sulfoxide (DMSO) स्टॉक समाधान करने के लिए 6 मिमी, 10 मिमी, और 10 मिमी, क्रमशः की सांद्रता के साथ भंग ।
    2. उत्तेजना-संकुचन (ई-सी) unयुग्मक, blebbistatin, ९०% DMSO के साथ एक ५० mM स्टॉक समाधान बनाने के लिए भंग ।
    3. Aliquot एक अंधेरे कमरे में ०.२ मिलीलीटर पीसीआर ट्यूब में स्टॉक समाधान है, और नाइट्रोजन गैस का उपयोग कर स्टॉक ट्यूब में हवा की जगह ऑक्सीकरण से बचने के लिए ।
    4. लपेटें एल्यूमीनियम पंनी में स्टॉक ट्यूबों व्यक्तिगत रूप से प्रकाश से सुरक्षा के लिए, और उंहें दुकान पर-20 ˚ सी ।
  2. कार्य समाधान
    1. (१३७ mm NaCl, २.७ mm KCl, ८.० मिमी न2HPO4, और १.५ मिमी KH2पीओ4, NaOH द्वारा समायोजित, पीएच ७.४० फॉस्फेट बफर खारा (पंजाब) के बिना सीए के 1 एल तैयार
    2. तैयार Tyrode के समाधान के 1 एल (१३५ mm NaCl, ५.४ mm KCl, १.८ mm CaCl2, ०.५३ mm MgCl2, ०.३३ mm णः2PO4, ५.५ mm D-ग्लूकोज, और ५.० mm HEPES, पीएच ७.४० NaOH द्वारा समायोजित) ।
    3. एक ०.२२ µm बोतल शीर्ष फिल्टर के साथ फिल्टर Tyrode के समाधान और यह अच्छी तरह से बुलबुला वातन द्वारा aerate एक एयर स्टोन का उपयोग कर एक ओ2 गैस सिलेंडर से जुड़ा है ।

2. Langendorff-perfused दिलों में ऑप्टिकल मैपिंग

  1. दो पूरक धातु ऑक्साइड अर्धचालक (CMOS) कैमरों (चित्र 1aऔर बी) का उपयोग कर ऑप्टिकल मानचित्रण प्रणाली को इकट्ठा
    1. CMOS कैमरा, बीम अलगानेवाला, उद्देश्य लेंस, लेंस रिवाल्वर, प्रकाश स्रोत, dichroic दर्पण, फिल्टर, और ऑप्टिकल मानचित्रण प्रणाली में अंय भागों को इकट्ठा के रूप में चित्र 1aऔर बीमें दिखाया गया है ।
    2. एक बुर्ज में उद्देश्य लेंस बदलकर आवर्धन का चयन करें, विभिंन आवर्धन (1.6 x और 5x) से सुसज्जित ।
      नोट: CMOS संवेदक के आकार 10 मिमी × 10 मिमी है, एक १०० × १०० संकल्प के साथ, जिसका अर्थ है, 5x उद्देश्य लेंस के साथ, इस प्रणाली को एक 20 µm स्थानिक संकल्प प्रदान करता है ।
    3. एक प्रकाश उत्सर्जक डायोड का उपयोग कर उत्तेजना प्रकाश सेट करें (एलईडी) दीपक ५३० एनएम के एक केंद्र तरंग दैर्ध्य के साथ, एक बैंड के माध्यम से पारित फ़िल्टर (520/35 एनएम), और एक dichroic मिरर (५६० एनएम) के साथ परिलक्षित ।
    4. एक अलगानेवाला (६६५ एनएम) द्वारा विभाजित उत्सर्जन संकेत रिकॉर्ड, जिसमें एक लंबे पास फिल्टर के साथ कैमरा 1 सेटिंग (697/75 एनएम) एक झिल्ली वोल्टेज के प्रति संवेदनशील डाई का उपयोग कर प्रतिदीप्ति का पता लगाता है (di 4-ANEPPS या RH237), और एक बैंड के साथ कैमरा 2-पास फिल्टर (572/28 एनएम) का पता लगाता है Ca के संकेत2 + संकेतक (Rhod2-AM) ।
  2. Langendorff छिड़काव सर्किट इकट्ठा
    1. एक सिकुड़नेवाला पंप करने के लिए polyvinyl क्लोराइड (पीवीसी) ट्यूबों देते हैं ।
    2. १००% के साथ Tyrode समाधान वातित में पीवीसी ट्यूब के सेवन पक्ष रखो2 के रूप में चरण 1.2.3 में उल्लेख किया है ।
    3. एक हाथ से बनाया हवा जाल के लिए पीवीसी ट्यूब के निर्वहन की ओर कनेक्ट, तो 5 µm फिल्टर, तीन तरह stopcocks, दबाव transducer, हीटिंग कांच का तार, और 21 गेज कुंद सुई (सुई आकार महाधमनी आकार के अनुसार अस्थिर है) की व्यवस्था क्रमिक रूप से , अंय पीवीसी ट्यूबों का उपयोग कर ।
    4. Tyrode के सर्किट में किसी भी हवा में बुलबुले से बचने के समाधान के साथ छिड़काव सर्किट भरें, और जब तक दिल सर्किट से जुड़ा है प्रवाह को रोकने के ।
  3. Heparinization और संज्ञाहरण
    1. इंजेक्षन unfractionated हेपरिन (२०० IU, शरीर के वजन की परवाह किए बिना) एक 25 गेज सुई और 1 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग कर एक माउस में intraperitoneally.
    2. हेपरिन इंजेक्शन के बाद 10 मिनट pentobarbital (65mg/kg) के एक intraperitoneal इंजेक्शन द्वारा माउस Anesthetize ।
  4. Cannulation और छिड़काव
    1. माउस को लापरवाह स्थिति में रखें । जानवरों की पुष्टि करें पैर की अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी से anesthetized है । असिरूप प्रक्रिया स्तर के नीचे पेट की दीवार को कैंची का उपयोग करके खोलें । डायाफ्राम में एक अनुप्रस्थ चीरा बनाओ, दिल को किसी भी क्षति के बिना औसत दर्जे का कांख लाइन में पसलियों के दोनों किनारों में कटौती, और पूर्वकाल छाती दीवार ऊपर की ओर फ्लिप । दिल के पीछे वक्र संदंश अग्रिम, और उतरते महाधमनी, घेघा, और अवर वेना कावा पकड़ो । फिर, महाधमनी, फेफड़े, श्वासनली, घेघा, वसा ऊतकों, और थाइमस जैसे आसंन वाहिकाओं और ऊतक के साथ एक साथ तेजी से कैंची के साथ दिल एक्साइज ।
    2. एक पेट्री डिश में 10 मिलीलीटर बर्फ-ठंडी पंजाबियों के साथ दिल धो लें, और आसंन ऊतक निकालें ।
    3. छिड़काव सर्किट से जुड़े आरोही महाधमनी में 21 गेज कुंद सुई की नोक परिचय, और यह एक stereomicroscope के तहत धागे के साथ ठीक.
    4. १००% O2के साथ Tyrode के समाधान वातित के साथ 10 मिनट के लिए दिल को perfuse करना शुरू करें ।
    5. एम्पलीफायर और रिकॉर्डर से जुड़े दबाव transducer के साथ लगातार छिड़काव दबाव की निगरानी.
    6. 80-100 mmHg के बीच छिड़काव दबाव रखो (आमतौर पर इसी के प्रवाह की दर के लिए 2-5 मिलीलीटर/
    7. प्रारंभिक छिड़काव (step 2.4.4.) के दौरान, पतली पॉलीथीन (पीई) ट्यूब (बाहरी व्यास: ०.८ mm) को SVC में डालें, और इसे धागे से ठीक करें । फिर, दिल गर्म ग्लास चैंबर में जगह (आंकड़ा 1bऔर सी) ।
    8. atrium के लिए किसी भी क्षति से बचने के लिए वेंट्रिकुलर एपेक्स के माध्यम से बाएं वेंट्रिकुलर (LV) गुहा में एक 24 गेज का निवास सुई (बाहरी व्यास: ०.७ मिमी) पंचर, और LV में बाहरी प्रवेशनी छोड़ने भीतरी सुई को हटा दें ।
    9. SVC में पीई ट्यूब के माध्यम से एक 1-फ्रांसीसी आकार कस्टम बनाया इलेक्ट्रोड कैथेटर का परिचय आरए में विद्युत उत्तेजना प्रदर्शन करने के लिए । यदि आवश्यक हो, वेंट्रिकुलर पेसिंग के लिए सही निलय (RV) में कैथेटर अग्रिम ।
    10. वेंट्रिकुलर एपेक्स में एक पिन इलेक्ट्रोड डालने के लिए लगातार पिन इलेक्ट्रोड और आरोही महाधमनी में cannulation सुई (चित्रा 1c) के बीच द्विध्रुवी electrocardiograms (ईसीजी) रिकॉर्ड.
    11. पूरे अध्ययन के दौरान ईसीजी और छिड़काव दबाव की निगरानी जारी रखें ।
    12. प्रकाश बंद करें, और एक अंधेरे कमरे में निंनलिखित प्रयोग करते हैं ।
    13. चरण २.५ पर जाएं । झिल्ली वोल्टेज या २.६ की एक एकल रिकॉर्डिंग के लिए । झिल्ली वोल्टेज और Ca के एक दोहरी रिकॉर्डिंग के लिए2 + क्षणिक.
  5. झिल्ली वोल्टेज की एक एकल रिकॉर्डिंग के लिए धुंधला
    1. छिड़काव को बनाए रखने के समाधान ३७ ˚ सी पर इस दाग प्रोटोकॉल के दौरान झिल्ली वोल्टेज की एक रिकॉर्डिंग के लिए गरम ।
    2. पतला ८.३ µ एल के di-4-ANEPPS स्टॉक समाधान (6 मिमी) के साथ है Tyrode समाधान के 10 मिलीलीटर (अंतिम एकाग्रता है 5 µ m).
    3. 2-5 मिनट के लिए छिड़काव मार्ग के माध्यम से दिल में पतला di-4-ANEPPS समाधान के कुल मात्रा (10 मिलीलीटर), 5 मिनट के लिए Tyrode समाधान के साथ एक वॉशआउट द्वारा पीछा किया ।
    4. Tyrode समाधान (अंतिम एकाग्रता २५० µ मीटर है) के 1mL के साथ blebbistatin स्टॉक समाधान (५० मिमी) के 5 µ एल पतला ।
    5. छिड़काव मार्ग के माध्यम से पतला blebbistatin समाधान की कुल राशि प्रशासन ।
    6. चरण २.६ छोड़ें और वॉशआउट के लिए २.७ चरण पर जाएं ।
  6. झिल्ली वोल्टेज और Ca के एक दोहरी रिकॉर्डिंग के लिए धुंधला2 + क्षणिक
    1. कमरे के तापमान पर Tyrode का समाधान रखें ।
      नोट: तापमान की यह प्रारंभिक सेटिंग है कि झिल्ली वोल्टेज (चरण २.५.) के एक एकल रिकॉर्डिंग के लिए धुंधला में से अलग है ।
    2. blebbistatin में चरण 2.5.4 और 2.5.5 के रूप में एक ही तरीके से व्यवस्थापित ।
    3. मिश्रण 3 Rhod2AM स्टॉक समाधान के µ एल (10 मिमी) और polyoxyethylene के 30 µ एल-polyoxypropylene ब्लॉक copolymer एफ-१२७ (DMSO में 20%), तो Tyrode के समाधान के 10 मिलीलीटर के साथ मिश्रण पतला ।
    4. blebbistatin के रूप में एक ही मार्ग के माध्यम से 2-5 मिनट से अधिक Rhod2AM समाधान (3 µ m) की कुल राशि लोड ।
    5. RH237 शेयर समाधान के 7 µ एल पतला (10 मिमी) Tyrode के समाधान के 10 मिलीलीटर के साथ ।
    6. प्रशासन पतला RH237 समाधान की कुल राशि (7 µ m) 2-5 मिनट से अधिक है ।
    7. ऊपर प्रक्रिया के पूरा होने के बाद, ३७ ˚ सी पर है Tyrode समाधान गर्मी शुरू करते हैं ।
  7. वॉशआउट
    1. ३७ ˚ C पर Tyrode के समाधान का तापमान निम्न प्रयोग में रखें ।
    2. Perfuse के लिए Tyrode के समाधान के साथ दिल से कम 5 मिनट के लिए अत्यधिक रंजक बाहर धोने के लिए ।
      नोट: इस वॉश आउट चरण के दौरान प्रवाह दर बढ़ाने की कोई आवश्यकता नहीं है (चरण 2.4.6 को देखें.)
    3. संकुचन के कारण किसी भी गति विरूपण साक्ष्य के लापता होने की पुष्टि करें, और perfused दिल में सजातीय धुंधला ।
  8. नमूना और डेटा विश्लेषण
    1. perfused दिल पर कवर ग्लास (25 mm × ६० mm) रखो ध्यान से, बहुत अधिक यांत्रिक तनाव के बिना अलिंद सतह समतल, और समाधान के कंपन से प्रस्ताव विरूपण साक्ष्य को रोकने के । पुष्टि करें कि atrium कवर ग्लास को उचित रूप से संलग्न करता है ।
    2. एक नमूना दर के साथ CMOS कैमरों द्वारा प्रतिदीप्ति रिकॉर्ड अप करने के लिए ०.१ ms di 4 के लिए-ANEPPS, और RH237 और Rhod2AM धुंधला के लिए 1 ms.
    3. सॉफ्टवेयर के वास्तविक संचालन के लिए निर्माता के निर्देशों के अनुसार, विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग कर प्राप्त रिकॉर्डिंग का विश्लेषण करें ।
    4. ब्याज के क्षेत्र निकालने के बाद एक सक्रियकरण नक्शा और फिल्म बनाएं, बहाव हटाने, अस्थाई फ़िल्टरिंग, और 3 एक्स 3 बिन्नी5

3. Electrophysiological अध्ययन

  1. पेसिंग इलेक्ट्रोड और उत्तेजित करने की स्थापना
    1. प्रेरणा के लिए ऊतक को आरए में कस्टम-मेड पेसिंग इलेक्ट्रोड की नोक के संपर्क की पुष्टि करें (कदम 2.4.9 के लिए देखें.) ।
    2. पेसिंग कैथेटर से जुड़े प्रोग्राम उत्तेजित करने के लिए सभी पेसिंग उत्तेजनाओं उद्धार ।
  2. पेसिंग थ्रेशोल्ड का निर्धारण
    1. १०० और १५० ms के बीच पेसिंग अंतराल सेट करें (०.४ ms की नाड़ी चौड़ाई), पेसिंग दर outpacing किसी भी आंतरिक लय से परहेज ।
    2. एक स्थिर अलिंद पेसिंग प्राप्त करने के लिए कम से कम 20 धड़कता के लिए निरंतर पेसिंग उत्तेजना उद्धार ।
    3. 5 एमवी पर पेसिंग उत्पादन सेट करें, तो धीरे से वितरित पेसिंग atrium का ध्रुवीकरण करने में विफल रहता है जब तक इसे कम ।
    4. ईसीजी में P तरंगों की उपस्थिति द्वारा अलिंद उत्तेजना की पुष्टि करें, और/या ऑप्टिकल रिकॉर्डिंग द्वारा एक अलिंद उत्तेजना संकेत ।
    5. न्यूनतम पेसिंग उत्पादन है कि पेसिंग दहलीज के रूप में atrium ध्रुवीकरण करने में सक्षम है निर्धारित करें ।
    6. दो बार पेसिंग थ्रेशोल्ड पर निम्न अध्ययनों के लिए पेसिंग आउटपुट सेट करें ।
  3. लगातार और फट पेसिंग
    1. ९९ धड़कन के लिए लगातार पेसिंग उद्धार, एक पेसिंग १५० ms, या सबसे लंबे अंतराल है कि आंतरिक लय outpacing से बचने के अंतराल के साथ शुरू ।
    2. पेसिंग अंतराल उत्तरोत्तर 5 ms चरणों के साथ कम, ४० ms करने के लिए नीचे या अंतराल है कि atrium के 1:1 कैप्चर प्राप्त करने के लिए विफल रहता है तक पहुँचने तक.
  4. सिंगल extrastimulus पेसिंग
    1. १२० एमएस, १०० ms, और ८० ms करने के लिए मूल ड्राइव (एस एम सी) के पेसिंग चक्र की लंबाई निर्धारित करें जब तक आंतरिक लय मूल ड्राइव या पेसिंग के लिए 1:1 अलिंद उत्तेजना प्राप्त करने में विफल रहता है ।
    2. बुनियादी ड्राइव ट्रेन के लिए 10 धड़कता पेसिंग उत्तेजनाओं की संख्या निर्धारित करें ।
    3. बुनियादी चक्र लंबाई के लिए-10 ms के लिए पहली extrastimulus (S2) सेट करें ।
    4. मूल ड्राइव के अंतिम पेसिंग उत्तेजना के बाद S2 उद्धार ।
    5. 5 एमएस कदम के साथ उत्तरोत्तर s2 के युग्मन अंतराल को छोटा करें, जब तक s2 atrium का ध्रुवीकरण करने में विफल रहता है ।
    6. atrium का ध्रुवीकरण करने में विफल रहता है कि सबसे लंबे समय तक S2 अंतराल के रूप में प्रभावी दुर्दम्य अवधि (ईआरपी) का निर्धारण ।
    7. ईआरपी की दर अनुकूलन का आकलन करने के लिए कम से कम 3 अलग मूल चक्र लंबाई के साथ ईआरपी का मूल्यांकन करें ।
  5. डबल और ट्रिपल extrastimuli पेसिंग को प्रेरित अलिंद tachyarrhythmias
    1. एक बिंदु के लिए s2 के अंतराल को रीसेट 20 s2 के ईआरपी के बाहर ms अगर कोई ताल विकारों मनाया जाता है ।
    2. एक दूसरे extrastimulus (S3) जोड़ें, S2 के रूप में एक ही अंतराल के साथ शुरू ।
    3. S2 और s3 उत्तरोत्तर 5 ms चरणों के साथ के बीच युग्मन अंतराल जब तक s3 atrium का ध्रुवीकरण करने में विफल रहता है घटाएं ।
    4. एक बिंदु के लिए S2 के अंतराल 10 एमएस ईआरपी के बाहर रीसेट, तो कदम 3.5.3 दोहराने ।
    5. प्रत्येक ईआरपी के बाहर 20 ms अंक के लिए S2 और S3 अंतराल रीसेट करें ।
    6. S3 के रूप में एक ही अंतराल के साथ प्रारंभ कर रहा है, एक तीसरा extrastimulus (S4) जोड़ें ।
    7. 5 ms चरणों के साथ उत्तरोत्तर S3 और s4 के बीच युग्मन अंतराल को घटाएँ जब तक s4 atrium का ध्रुवीकरण करने में विफल रहता है.
    8. एक बिंदु के लिए S3 अंतराल रीसेट 10 ईआरपी के बाहर ms, तो दोहराएँ चरण 3.5.7.
    9. S2 और S3 अंतराल रीसेट करने के लिए ईआरपी के बाहर 10 ms अंक, तो दोहराएँ चरण 3.5.7.
    10. reproducible प्रेरण द्वारा इसी तरह क्रमादेशित उत्तेजनाओं का उपयोग करके अलिंद tachyarrhythmias के inducibility को परिभाषित करें ।
  6. अलिंद tachyarrhythmias के inducibility का मूल्यांकन
    1. लगातार सभी पेसिंग प्रोटोकॉल के दौरान ईसीजी रिकॉर्ड (चरण ३.३-३.५.).
    2. के दौरान और प्रत्येक उत्तेजना के बाद ऑप्टिकल रिकॉर्डिंग प्रदर्शन, किसी भी अलिंद क्षिप्रहृदयता की प्रेरण (पर) या दोहराव अलिंद प्रतिक्रिया (RAR) रिकॉर्ड करने के लिए ।
    3. एक ही पेसिंग प्रोटोकॉल जब वायुसेना या एक RAR प्रेरित है लागू करने के द्वारा reproducibility की पुष्टि करें ।

Representative Results

ऑप्टिकल मैपिंग प्रयोगों में चित्र 1aमें दिखाए गए अनुसार डिवाइस का उपयोग किया जाता है । ऑप्टिकल सिस्टम की स्कीमा चित्र 1bमें सचित्र है । प्रणाली atrium में झिल्ली की क्षमता और Ca2 + क्षणिक के एक उच्च संकल्प विश्लेषण प्रदान करता है ।

के रूप में चित्रा 1c और डीमें चित्रित, अलग दिल एक तापमान नियंत्रित चैंबर में तैनात है । एक 1-फ्रांसीसी आकार इलेक्ट्रोड कैथेटर SVC में डाला एक पीई ट्यूब के माध्यम से आरए में रखा गया है, और एक और आवास पीई ट्यूब दिल चैंबर पर अत्यधिक दबाव से बचने के लिए lv एपेक्स से lv गुहा में डाला जाता है । एक साथ ईसीजी रिकॉर्डिंग के लिए, कैथोड (ईसीजी लीड [-]) cannulation सुई से जुड़ा है, और anode (ईसीजी लीड [+]) पिन इलेक्ट्रोड वेंट्रिकुलर शीर्ष में सम्मिलित करने के लिए जुड़ा हुआ है । इस विधानसभा की सुविधा atria के लिए किसी भी यांत्रिक क्षति से बचने के लिए है ।

झिल्ली वोल्टेज के मूल्यांकन के लिए, di-4-ANEPPS का उपयोग कर प्रतिदीप्ति एक १०,००० फ्रेम करने के लिए के साथ दर्ज किया गया है/ सक्रियण मानचित्र आरए से वितरित लगातार पेसिंग के दौरान प्राप्त होता है । ठीक मानचित्रण छोटे murine atria में विस्तृत आचरण पैटर्न के विश्लेषण में सक्षम बनाता है ।

चित्रा 3 की झिल्ली वोल्टेज और सीए के प्रतिनिधि अंश दिखाता है ला में2 + क्षणिक RH237 और Rhod2AM का उपयोग कर रा से लगातार पेसिंग के दौरान । हम वर्तमान सेटिंग के साथ Rhod2AM संकेत का एक पर्याप्त संकेत/शोर अनुपात प्राप्त करने के लिए १००० फ़्रेम्स/s करने के लिए मैपिंग की नमूना दर को कम करें । हालांकि, सिस्टम क्रिया क्षमता और Ca2 + परिवर्तनीय के बीच संबंध का विश्लेषण करने के लिए पर्याप्त गुणवत्ता प्रदान करता है ।

हम तो एक रोग हालत के तहत चूहों का उपयोग कर क्रमादेशित उत्तेजना के साथ एक अलिंद tachyarrhythmia की प्रेरण प्रदर्शन करते हैं । चित्रा 4 एक murine atrium di-4-ANEPPS के साथ सना हुआ में पर एक प्रेरित के एक ऑप्टिकल रिकॉर्डिंग दर्शाती है । माउस एक अनुप्रस्थ महाधमनी कसना प्रक्रिया को लागू करने के लिए एक दबाव अधिभार atrium करने के लिए 10 दिन पहले प्रयोग6। हम ट्रिपल extrastimuli पेसिंग (120/100/100/80) द्वारा पर प्रेरित है, और रिप्रवेश सर्किट के प्रचार का निरीक्षण ।

Figure 1
चित्र 1. ऑप्टिकल मैपिंग सिस्टम । इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी/ऑप्टिकल मैपिंग सिस्टम की ए. जनरल असेंबली । b. ऑप्टिकल मैपिंग सिस्टम की संरचना की योजनाबद्ध: नीला तीर प्रकाश स्रोत द्वारा उत्पंन उत्तेजना प्रकाश को इंगित करता है । उद्देश्य लेंस बुर्ज के साथ विमर्श किया जा सकता है । सना हुआ दिल से उत्सर्जित प्रकाश कैमरा 1 और कैमरा 2 के बीच विभाजित है । कैमरा 1 झिल्ली वोल्टेज के लिए लंबी तरंग दैर्ध्य संकेतों का पता लगाता है, और कैमरा 2 रिकॉर्ड तरंग दैर्ध्य ५८० ± 20 एनएम के एक bandpass फ़िल्टर के साथ Ca के लिए2 + क्षणिक । प्रक्रिया के दौरान, ईसीजी और छिड़काव दबाव लगातार दर्ज कर रहे हैं, और ईसीजी संकेत भी एक साथ ऑप्टिकल मानचित्र रिकॉर्डिंग सॉफ्टवेयर में आयात किया जाता है । c. पृथक दिलों की तैयारी: दिलों को छिड़काव के लिए आरोही महाधमनी के जरिए एक कुंद सुई के साथ cannulated हैं. एक साथ ईसीजी रिकॉर्डिंग के लिए, कैथोड cannulation सुई से जुड़ा हुआ है, और पिन इलेक्ट्रोड के साथ anode वेंट्रिकुलर शीर्ष में सम्मिलित किया जाता है. घ. Cannulation ट्यूब और इलेक्ट्रोड: दिल छिड़काव (Cannulation सुई) के लिए एक 21 गेज कुंद सुई के साथ cannulated है । एक 1-फ्रांसीसी आकार उत्तेजक इलेक्ट्रोड (इलेक्ट्रोड) बेहतर वेना कावा में डाला एक पॉलीथीन ट्यूब के माध्यम से सही atrium में रखा गया है. चैंबर के गुहा में परिसंचारी गर्म पानी से ग्लास चैंबर ३७ ˚ सी पर गर्म है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्र 2. atrium में सक्रियण मानचित्र । a. प्रतिनिधि सक्रियकरण एक 5x उद्देश्य लेंस के साथ पूर्वकाल देखने में नक्शे, और बी । एक 1.6 x उद्देश्य लेंस के साथ पीछे देखने में । (बायां फलक) अलग दिल और atrium की योजनाबद्ध । (दायां फलक) बाईं atrium के सक्रियकरण नक्शा di-4-ANEPPS १०,००० फ्रेम पर धुंधला के साथ प्राप्त/ रिकॉर्डिंग उत्तेजक इलेक्ट्रोड सही atrium में रखा के साथ लगातार पेसिंग के तहत किया जाता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्र 3. कार्रवाई संभावित और Ca बाईं atrium में2 + क्षणिक की दोहरी रिकॉर्डिंग । ए अलग दिल की योजनाबद्ध । प्रतिदीप्ति बाईं atrium में RH237 की तीव्रता के प्रतिनिधि छवि झिल्ली वोल्टेज (वीएम) और Ca के लिए Rhod2AM के लिए उपयोग कर रहा है 2 + परिवर्तनीय । रिकॉर्डिंग १,००० फ्रेम में एक 5x उद्देश्य लेंस के साथ किया जाता है/ ईसीजी (ऊपर), RH237 संकेत (मध्यम), और Rhod2AM संकेत (नीचे), सही atrium में उत्तेजना इलेक्ट्रोड के साथ लगातार पेसिंग के दौरान की एक साथ रिकॉर्डिंग. काले तीर उत्तेजना spikes संकेत मिलता है, और पीले तीर वेंट्रिकुलर उत्तेजना । निलय से एक प्रकाश तितर बितर प्रभाव भी देखा जा सकता है (पीला ऐरोहेड) दोनों RH237 संकेत और Rhod2AM संकेत में । d. एक मर्ज किए गए RH237 और Rhod2AM ट्रेस । क्रिया क्षमता और परिवर्तनीय Ca2 + परिवर्तन एक साथ रिकॉर्ड किए गए हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 4
चित्र 4. अलिंद क्षिप्रहृदयता के दौरान सक्रियण मैपिंग. (बायां फलक) अलग दिल की योजनाबद्ध । मध्य फलक) एक अलिंद क्षिप्रहृदयता (पर) के दौरान सक्रियकरण नक्शा । पर ट्रिपल extrastimuli सही atrium से दिया पेसिंग द्वारा प्रेरित किया गया था । (दायां फलक) एक ही माउस दिल में साइनस लय के दौरान सक्रियण नक्शा. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

अनुपूरक फिल्म 1. atrium में झिल्ली क्षमता के प्रतिनिधि फिल्म di-4-ANEPPS के साथ धुंधला का उपयोग कर । इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए कृपया यहां क्लिक करें.

अनुपूरक फिल्म 2. अलिंद क्षिप्रहृदयता और साइनस लय के दौरान सक्रियण मानचित्रण के प्रतिनिधि फिल्में. इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए कृपया यहां क्लिक करें.

Discussion

ऑप्टिकल मानचित्रण कार्डियक इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी7का अध्ययन करने के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित पैंतरेबाज़ी है, और न केवल वेंट्रिकुलर अतालता8,9का आकलन करने के लिए एक काफी उपयोगी उपकरण है, लेकिन यह भी अलिंद लोगों को10,11 . transmembrane क्षमता और सीए2 + यात्रियों के एक साथ मानचित्रण दिल की विफलता और अन्य हृदय रोगों के संबंध में अतालता के अंतर्निहित तंत्र को समझने के लिए उपयोगी है12,13. जब अंय electrophysiological मूल्यांकन विधियों, जैसे उन एक एकल कक्ष या कक्ष पत्रक, perfused दिल में ऑप्टिकल मानचित्रण के निरपेक्ष श्रेष्ठताओं में से एक का उपयोग कर की तुलना बरकरार atrium में आचरण पैटर्न का आकलन है और निलय, न केवल साइनस लय के दौरान, लेकिन यह भी प्रेरित अतालता14के दौरान. एक प्रयास murine दिल का उपयोग करने के लिए, विशेष रूप से atrium, मानव के एक किराए के रूप में मुख्य रूप से उनके छोटे आकार के कारण कठिनाई का सामना करना पड़ा है, तथापि, माउस एक आनुवंशिक रूप से इंजीनियर पशु में मूल्यांकन के मामले में एक आकर्षक प्रयोगात्मक मॉडल है मॉडल, और इस समस्या को दूर किया जाना चाहिए । हमारा दृष्टिकोण इसे हल करने के लिए एक दिशा प्रदान करता है ।

हालांकि हमारे ऑप्टिकल मानचित्रण तंत्र मूल रूप से पूरे murine दिल के लिए पारंपरिक प्रणाली के समान था15, हमारे विधि यह करने के लिए कुछ संशोधनों के द्वारा murine atrium का आकलन करने का लाभ है । सबसे पहले, हम अप करने के लिए एक उच्च स्थानिक और लौकिक संकल्प प्राप्त करने के लिए ०.१ ms/फ़्रेम और 20 µm/पिक्सेल, और इस उच्च संकल्प मानचित्रण murine atrium में आचरण वेग और प्रचार पैटर्न का एक और अधिक सटीक माप के लिए योगदान दिया । दूसरा, किसी भी अनावश्यक यांत्रिक क्षति या atrium, जो electrophysiological गुणों को बदल सकता है की खिंचाव से बचने के लिए 16,17, एक निवास सुई सीधे LV में अंतर चैंबर दबाव को कम करने के लिए डाला जाता है, इसके बजाय ला के माध्यम से इसे डालने के रूप में पिछले अध्ययन में प्रदर्शन किया15। इसके अलावा, पेसिंग उत्तेजना के माध्यम से दिया जाता है एक कस्टम बनाया 1-फ्रेंच आकार इलेक्ट्रोड कैथेटर रा में रखा है, लेकिन एक सुई इलेक्ट्रोड द्वारा नहीं, जो atrium घायल हो सकता है. किसी भी पिन अलिंद संलग्न है, जो पिछले अध्ययन में इस्तेमाल किया गया था फिक्सिंग में बचा रहे हैं15. तीसरे, ताल विकारों के अंतर्निहित तंत्र के आकलन के संदर्भ में, एक क्रमादेशित उत्तेजना प्रोटोकॉल अलिंद tachyarrhythmias प्रेरित करने के लिए18,19महत्वपूर्ण है । हम नैदानिक electrophysiological अध्ययन, फट पेसिंग और ट्रिपल extrastimuli पेसिंग, माउस दिल के लिए पेसिंग अंतराल के एक संशोधन के साथ शामिल करने के लिए समान उत्तेजना क्रमादेशित करते हैं । इस प्रकार, आधारभूत मापन मापदंडों के अतिरिक्त, प्रोटोकॉल inducibility का मूल्यांकन कर सकता है. जरूरत पड़ने पर inducibility के isoproterenol या अन्य दवाओं का प्रशासन के साथ आकलन किया जाता है । हमारे अनुभव में, जंगली प्रकार के चूहे शायद ही कोई एटीएस एक पूर्ण उत्तेजना प्रोटोकॉल के बाद भी दिखा । इस प्रकार, inducibility के आनुवंशिक उत्परिवर्तनों, शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं, और दवाओं के प्रशासन के रूप में कई रोग स्थितियों के योगदान के मूल्यांकन के लिए महत्वपूर्ण जानकारी होनी चाहिए11. उन संशोधनों को बरकरार murine atrium में सटीक electrophysiological आकलन का अनुकूलन सकता है ।

इस विधि की भी कुछ सीमाएं हैं । सबसे पहले, एक 5x उद्देश्य लेंस के साथ एक अधिकतम स्थानिक संकल्प का उपयोग करना, देखने के क्षेत्र (FOV) atrium के एक भाग (यानीकेवल बाईं अलिंद संलग्न के रूप में चित्रा 2aमें दिखाया गया है) तक ही सीमित है । atrium का बड़ा FOV प्राप्त करने के लिए, एक 1.6 x उद्देश्य लेंस कभी-कभार बेहतर होता है (चित्र b) । दूसरा, पिन के साथ atrium फिक्सिंग के बिना, कई बार यह अलिंद आचरण गुणों को सही ढंग से मापने के लिए मुश्किल है, क्योंकि अलिंद सतह घुमावदार है । तो, हम इसके बजाय यह पिन से फिक्सिंग के समतल करने के लिए इसकी सतह पर कवर गिलास रखा । इस विधि समाधान के कंपन से गति विरूपण साक्ष्य को रोकने के लिए भी फायदेमंद है । तीसरा, हमारे विधि के साथ, यह बहुत मुश्किल है कि यह पूरी FOV प्राप्त करने के लिए, तो, पूर्वकाल और पीछे देखने का उपयोग करने के लिए ठीक से अंय दृष्टिकोण में अधिक से अधिक हमारे दृष्टिकोण में महत्वपूर्ण है के रूप में चित्रा 2में दिखाया गया है । पूर्वकाल देखने का लाभ रोग की स्थिति के मामले में फिर से प्रवेश के स्पष्ट अवलोकन होगा, विशेष रूप से संलग्न (चित्रा 4) । दूसरी ओर, पीछे देखने के अलिंद पीछे दीवार का एक अच्छा दृश्य प्राप्त करने का एक फायदा है, और रोधगलन आस्तीन से ट्रिगर गतिविधि की एक विस्तृत रिकॉर्डिंग हो सकता है । जब यह एक उचित दृश्य प्राप्त करने के लिए और हमारे विधि के साथ अपनी घुमावदार सतह समतल करने के लिए मुश्किल है, atrium पिन द्वारा न्यूनतम तनाव के साथ तय किया जा सकता है.

हमारे विधि के साथ, वहां रहे है 3 संभावित समस्याओं, धुंधला, पेसिंग, और अतालता प्रेरण की विफलता । धुंधला की विफलता के लिए, यदि कोई या मामूली प्रतिदीप्ति है, तो आप की जांच करनी चाहिए कि ऑप्टिकल मानचित्रण तंत्र सही ढंग से इकट्ठे है, और कि क्या एजेंट उचित और संग्रहीत किया जाता है । छिड़काव समाधान की स्थिति भी महत्वपूर्ण है, जो भी दिल के electrophysiological गुण ही प्रभावित कर सकते हैं, तो, पीएच, तापमान सहित समाधान की स्थिति है, और क्या वहां पर्याप्त था वातन करने के लिए सख्ती से निगरानी की है । दिल में किसी भी एयर emboli से बचना भी जरूरी है । पेसिंग विफलता के लिए, यदि पेसिंग उत्तेजनाओं atrium उत्तेजित नहीं कर सकते, शोधकर्ताओं की जांच करनी चाहिए कि तारों एक सर्किट परीक्षक का उपयोग सही है । जब पेसिंग उत्तेजनाओं सही ढंग से कर रहे हैं, समस्या ऊतक के साथ इलेक्ट्रोड के संपर्क है । इलेक्ट्रोड का जमाव समस्या को हल कर सकते हैं, और पेसिंग कैथेटर का उपयोग कर हमारे दृष्टिकोण यह आसान बनाता है. अतालता प्रेरण में कठिनाई के लिए, आर. वी. पेसिंग कुछ सीमित मामलों में एक पर प्रेरण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । एक quadripolar इलेक्ट्रोड कैथेटर का उपयोग करना जिसमें से बाहर दो इलेक्ट्रोड और समीपस्थ इलेक्ट्रोड rv और ra में स्थित हो सकते हैं, क्रमशः, यह पेसिंग साइट रा से rv करने के लिए परिवर्तित करने के लिए आसान है । यह कैथेटर भी वेंट्रिकुलर उत्तेजना स्थानांतरण के लिए उपयोगी है जब एक साथ वेंट्रिकुलर सक्रियण संकेत मास्क अलिंद उत्तेजना संकेत ।

इस विधि GWAS जैसे उपंयास अध्ययन द्वारा हाल ही में पाया वायुसेना संबंधित जीन में जीनोटाइप-phenotype बातचीत का आकलन करने में योगदान होगा, विशेष रूप से जीन जिसके साथ जांच के लिए उंहें अंय दृष्टिकोण से दिखाने में विफल रहे । उपकरणों और तकनीकों की प्रगति के साथ, फुफ्फुसीय नस आस्तीन के electrophysiological गुण, जो वायुसेना20का महत्वपूर्ण स्रोत है, इस दृष्टिकोण के साथ अक्षुण्ण हृदय में मूल्यांकन किया जा सकता है ।

Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgements

यह काम विज्ञान और प्रौद्योगिकी (एससीएफ) को बढ़ावा देने के लिए विशेष समंवय कोष से युवा शोधकर्ताओं के लिए अनुसंधान पर्यावरण के सुधार के लिए कार्यक्रम के द्वारा समर्थित है (T.S.), अनुदान में वैज्ञानिक अनुसंधान के लिए सहायता (no. 16K09494, T.S., नहीं २६२९३०५२ के लिए, to T.F.) जापान के शिक्षा, संस्कृति, खेल, विज्ञान और प्रौद्योगिकी (MEXT) मंत्रालय से । हम तकनीकी सहायता के लिए Brainvision और श्री केंजी Tsubokura की सराहना करते हैं, और हम भी उनकी भाषाई सहायता के लिए श्री जॉन मार्टिन की सराहना करते हैं ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
(-)-Blebbistatin SIGMA B0560-1MG E-C decoupler to eliminate motion artifact during optical mapping
RH237 Biotium 61018 Voltage-sensitive dye
Rhod2AM Biotium 50024 Ca indicator
Pluronic F-127 20% solution in DMSO Biotium #59000 To enhance the staining with Rhod2AM
Di-4-ANEPPS Wako 041-29111 Voltage-sensitive dye
Dimethyl sulfoxide Wako 046-21981 Solvent for reagents
Bottle top filter Corning 430513 For filtering Tyrode's solution
Haparin Sodium Mochida Pharmaceutical Co., Ltd N/A To avoid blood clots in the coronary artery
Air stone (φ8 mm x 10 mm) Tokyo Koshin Rikagaku Seisakusho N/A for aeration
Pentobarbital Kyoritsu Seiyaku Corporation N/A For an anesthesia
Programmable stimulator Fukuda Denshi BC-05 Fukuda Denshi kindly rented us.
Power Lab AD Instruments Powerlab 26/8SP To record blood pressure and electrocardiogram
Bio Amp AD Instruments ML132 Amprifier for electrocardiogram
BP Amp AD Instruments FE117 Amprifier for blood pressure
LabChart AD Instruments Version 7 Software to record and analyze blood pressure and electrocardiogram
Disposable BP transducer AD Instruments MLT0670 pressure transducer
1-Fr custom made electrode catheter Unique Medical N/A To pace right atrium
Polyethylene tube (OD: 0.8 mm, ID: 0.5 mm) Natume Seisakujo SP31 Put into superior vena cava to introduce electrode catheter
Millex-SV 5.00 μm Merk Millipore SLSV025LS To filter the circulating Tyrode
24-gauge indwelling needle TERUMO SR-FS2419 Introduced into left ventricle to reduce the pressure in chamber
21-gauge needle TERUMO SN-2170 We cut the tip of needle and blunted it by filing
25-guage needle TERUMO NN-2525R
1-ml syringe TERUMO SS-01T
PVC tube TERUMO SF-ET0525 for Langendorff's perfusion circuit
Three-way stopcock TERUMO TS-TL2K for Langendorff's perfusion circuit
Petri dish As one 3-1491-01
Custum made heating glass coil Motohashi Rika N/A to keep temperature of perfusion solution
Custum made warming glass chamber Motohashi Rika N/A to keep temperature of perfusion solution
Constant temperature circulating device Lauda E100 connected to heating coil and warming chamber
Cover glass (25 mm × 60 mm) Matsunami C025601 Put on the atria to flatten the recording area
Perista pump ATTO SJ-1211 peristaltic pump
Stemi DV4 Carl Zeiss N/A Stereomicroscope
MiCAM ULTIMA-L2 Brainvision Inc. UL-L2 Optical mapping System
BV_Ana Software Brainvision Inc. BV_Ana Data Analysis Software
THT Macroscope Brainvision Inc. THT-ZS Epi-Illumination Unit
LED Light Source Brainvision Inc. LEX2-G
Dichroic Mirror 560nm Brainvision Inc. DM560 Epi-Illuminatinon
Excitation Filter 520/35nm Semrock, Inc. FF01-520/35-25
Projection lens Plan S 1.0X Carl Zeiss 435200-0000-000
Focus Drive Carl Zeiss 435400-0000-000
Objective lens Revolver Carl Zeiss 435302-0000-000
Manual Focus Column Carl Zeiss 435400-0000-000
Macroscope Base Carl Zeiss 435430-9901-000
Straight Light Guide MORITEX Corporation MSG10-2200S Epi-Illuminatinon
Condenser Lens MORITEX Corporation ML-50
PLANAPO 5.0X Leica Microsystems 10447243 Objective Lens
PLANAPO 1.0X Leica Microsystems 10447157 Objective Lens
PLANAPO 1.6X Leica Microsystems 10447050 Objective Lens
Beam-Splitter Brainvision Inc. FLSP-2
Dichroic Mirror 665nm Brainvision Inc. DM665 Beam-Splitter
Emission Filter 572/28nm Edmund Optics #84-100 Rhod2-AM
Emission Filter 697/75nm Semrock, Inc. FF01-697/75-25 RH237 and Di-4-ANEPPS
0.2 mL PCR tube Greiner Bio-One 671201
aluminum foil Toyo alumi 0020

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References

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