Усовершенствованный метод для коллекции спинномозговой жидкости от наркотизированных мышей

Neuroscience

Your institution must subscribe to JoVE's Neuroscience section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

Этот протокол описывает улучшения техники для коллекции обильные цереброспинальной жидкости (ЦСЖ) с не загрязнение от крови. С большей выборки и чистоты больше анализов может выполняться с использованием ФГО для дальнейшего понимания болезней, которые влияют на мозг и спинной мозг.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Lim, N. K., Moestrup, V., Zhang, X., Wang, W. A., Møller, A., Huang, F. D. An Improved Method for Collection of Cerebrospinal Fluid from Anesthetized Mice. J. Vis. Exp. (133), e56774, doi:10.3791/56774 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Спинномозговой жидкости (СМЖ) является ценным жидкости тела для анализа в неврологии исследований. Он является одним из жидкости в ближайший контакт с центральной нервной системой и таким образом, может использоваться для анализа состояние больной головного или спинного мозга без прямого доступа к эти ткани. Однако мышей, которые трудно получить от Чистерна magna из-за его близости к кровеносных сосудов, которые часто загрязняют образцы. Области сбора ФГО в мышей также сложно рассекать на и часто лишь небольшие образцы получены (максимум 5-7 мкл или меньше). Этот протокол описывает подробно технику, которая улучшает на текущие методы сбора для сведения к минимуму загрязнения от крови и обильные коллекции спинномозговой жидкости (в среднем, собранные 10-15 мкл). Этот метод может использоваться с другими методами рассечение ткани коллекции от мышей, как она не оказывает влияния любых тканей во время извлечения CSF. Таким образом головного и спинного мозга с этой техникой не затрагиваются и остаются нетронутыми. С большей сбор образцов спинномозговой жидкости и чистоты больше анализов могут быть использованы с этой жидкости для дальнейшей помощи неврологии исследований и лучше понять заболеваний головного и спинного мозга.

Introduction

Спинномозговой жидкости является ценной жидкости тела для анализа в неврологии исследований. ФГО главным образом сделаны из плазмы крови, содержащий несколько клеток (нет красных кровяных клеток и только несколько белых кровяных клеток) и почти белка-бесплатно. Это один из жидкости в тесном контакте с центральной нервной системы (ЦНС) и он может передать многие электролитов из головного и спинного периферической системы. В организме человека, образцов спинномозговой жидкости могут быть собраны для помощи в диагностике болезней или для исследовательских целей в клинических испытаниях, как спинномозговой пункции (или поясничный прокол) несовершеннолетнего, инвазивные процедуры: CSF жидкости может отражать изменения в ЦНС без необходимости для прямого доступа к ним тканей. Таким образом в последние годы, для исследовательских целей в клинике, CSF образцы были получены от больных нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера и другими видами деменции1,2,3. Существует много биомаркер анализов, которые были разработаны с использованием образцов спинномозговой жидкости для потенциально помочь в диагностике заболеваний в клинике2,3. Однако есть много дебатов на надежность этих анализов результатов последовательным, чувствительных специально диагностировать болезни4,5. Таким образом существует большая потребность развития лучше анализов и целевых показателей, которые могут быть найдены в спинномозговой жидкости, чтобы помочь в производстве стандартный метод диагностики нейродегенеративных заболеваний с большей чувствительностью и специфичностью. Ввиду потенциальной важности человеческого образцов спинномозговой жидкости в болезни коллекция спинномозговой жидкости от грызунов в неврологии исследования также представляет интерес.

Мышей являются важными животных в биологических и медицинских исследованиях и позволяют для проверки потенциальных терапевтических соединений и доказательства в концепция исследования перед клинические испытания на человеке. Однако у мышей трудно получить образцов спинномозговой жидкости из-за его близости к мозгу в маленькое животное, как обычный метод коллекции ФГО в мышах для получения через Чистерна magna, открытие между дорсальной поверхности продолговатого мозга и мозжечке. Это вызывает трудности в сборе образцов спинномозговой жидкости, как трудно анализировать в этой области и в непосредственной близости от кровеносных сосудов, увеличивает риск заражения от клеток крови. Из-за эти трудности большинство исследователей могут получить только небольшое количество ЦСЖ для анализа (как правило, указывается как 5-7 мкл) и загрязнение образцов спинномозговой жидкости клетками крови является предметом главной озабоченности для анализа6,,78 , 9. загрязнение крови может скрывать результаты и не действительно отражают состояние центральной нервной системы. Кроме того, небольшая выборка собранных может повлиять исследований как обычная сумма собранных от мышей является достаточно только одного измерения (в двух экземплярах или экземплярах) с помощью энзим соединенный assay иммуносорбента (ELISA). Таким образом образцов спинномозговой жидкости, обычно пул из нескольких мышей для того чтобы иметь достаточно образца для запуска нескольких анализов. Разработка протокола для обильные, незагрязненный коллекция спинномозговой жидкости от мышей значительно желаемого и будет полезным в улучшение нейронауки исследование с помощью грызунов.

В этом протоколе, техника для обильные (в среднем 10-15 мкл) коллекция ликвора из наркотизированных мышей подробно описан и улучшает на в настоящее время известный метод коллекции ФГО для сведения к минимуму загрязнения от крови10. Надежный протокол для ФГО коллекции будет помощь в разработке на основе спинномозговой жидкости биомаркеров анализов, которые могут быть использованы для помощи в диагностике заболеваний, а так же улучшить исследования в рамках механизмов, которые лежат в основе болезней центральной нервной системы.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с политикой общества для неврологии (США) и Университет Фудань (Шанхай, Китай) этические комитетам. Эта процедура предназначена для хирургии-выживание.

1. Установка СМЖ коллекции аппарата

  1. Потяните стеклянные капиллярные (внутренний диаметр 0,75 мм, наружный диаметр 1,0 мм) с помощью съемника микропипеткой (как показано в Лю et al. 10; заостренный капиллярные показано на рис. 1).
  2. Место четкая стеклянный капилляр в капиллярной держатель твердо установленный на микроманипулятор (рис. 1A).
  3. Разорвать кончик заостренный капилляра пинцетом прямо под микроскопом рассечения, таким образом, чтобы внутренний диаметр сломанной кончик о 10-20 мкм (рис. 1 c).
  4. Прикрепите тонкую трубку и шприц в другой конец капиллярной владельца и подключить тонкая трубка и шприц с трехходовой клапан.
  5. Сдвиг трехходовой клапан открытия и окунуться шприц удар воздуха из шприца через трубку в стеклянный капилляр высылать любых загрязнений и создать положительное давление в капиллярной трубке.
  6. Повторите это несколько раз, дис подключения и повторного подключения шприц на трехходовой клапан и составление шприц ~ 100-200 мкл до последнего повторного подключения шприца с трехходовой клапан (рис. 1B).
  7. Переместите микроманипулятор с стеклянный капилляр в сторону, чтобы предотвратить повреждение во время вскрытия мыши.

Figure 1
Рисунок 1. Микроскоп, микроманипулятор и капиллярной установке. (A) микроскопа и микроманипулятор с капиллярной придает установки, а также ближе образ (B) подключенных шприц и трехходовой клапан открыть (показано ниже) или закрыть трубопровод и (C) непрерывной (справа) и сломанной (слева) капиллярные Совет готов к коллекции CSF. После сломанной, кончик капилляра должен иметь внутренний диаметр 0,75 мм, наружный диаметр 1,0 мм пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

2. рассечение мыши

  1. Анестезировать мышь.
    Примечание: для этого протокола, C57BL/6 и амилоид прекурсоров протеина/Пресенилин 1 (APP/PS1) трансгенных мышей (модель мыши болезни Альцгеймера) были использованы и наркозом с 4% хлораль гидрат (в dH20) на 10 мкл/g вес мыши через внутрибрюшинного инъекции.
  2. Когда полностью под наркозом, убедитесь, что мышь адекватно под наркозом. Вывода ответа до пят пинча, слегка расширяя задних конечностей и защемления пальцев и наблюдать для вывода ответа, выполняется для обеспечения адекватной анестезии. Проверить, щипать все четыре конечности; Если реакции нет мыши должным образом под наркозом. Вырезать и подстригать волосы на затылке мыши сверху глаз, между ушами в нижней части шеи, с использованием рассечения ножницы (рисунок 2A). Кроме того ножницы или депиляционный крем может использоваться для помощи в удалении волос.
  3. Закрепите головку мыши с помощью мыши адаптер (задней части головы вверх с носом указал вниз ~ 45 °, рис. 2A). Исправьте уха баров между ушами и глазами мыши и затянуть. Убедитесь, что голова не может двигаться и плотно крепится в адаптер, осторожно нажимая вниз на голову мыши.
  4. Повторная проверка вывода ответа до пят щепотку до принятия хирургический разрез и регулярно впоследствии обеспечить хирургические плоскости анестезии. Визуально отметить любое изменение частоты дыхания во время процедуры, чтобы указать изменения в плоскостях анестезии. Чистый, асептическая, техника может использоваться для этого короткого хирургии-выживание. С помощью ножниц и Изогнутый пинцет, прорваться через кожу и первый слой мышц до основания черепа подвергается лишь тонким слоем мышц.
    Примечание: Cut через кожу мыши через заднюю часть шеи, а затем вырезать кожу вниз в середине черепа между ушами и глазами мыши. Кожи и тканей может затем быть вытащил друг от друга и из области над Чистерна magna.
  5. Во время просмотра путем рассечения Микроскоп, тщательно анализировать прочь последний тонких слоев мышц над основания черепа с помощью щипцов и переместить эти слои мышц в сторону и из области интересов. Если есть кровотечение, использовать ватные палочки для удаления и помочь остановить кровотечение.
  6. После того, как дура над Чистерна magna подвергается (треугольной формы с обычно 1-2 крупных кровеносных сосудов работает через район; обе стороны или между кровеносных сосудов является оптимальным для капиллярной вставки и CSF коллекции, Рисунок 2B), используйте мокрой ватным тампоном протирать мембраны и затем использовать сухой ватной палочкой для сухой области.

Figure 2
Рисунок 2. Мыши и рассечение установки с представителя изображения капиллярного вставки для коллекции ФГО. Настройка мыши готовы для извлечения Ликвора с (A) бритая голова, зажат в месте рассечения и (B) подробные изображения (10 x вид) расчлененных мыши Дура, охватывающих Чистерна magna (пунктирная стрелка показывает кровеносный сосуд, проходит через области и твердых стрелка показывает область оптимального для капиллярной вставки). Детальные изображения (вид x 10) (C) заостренным кончиком стеклянный капилляр соответствие против Дура Чистерна magna, (D) точки на котором капилляра почти проколы Дура, с некоторым сопротивлением Дура и (E) капиллярной кончик постучал через Дура собирать CSF. Спинномозговой жидкости должна быть прозрачной жидкости, собранные в стеклянный капилляр (пунктирная стрелка). Все шкалы полосы на нижней правой части каждого изображения микроскопа указывают 100 мкм. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

3. CSF коллекции от наркотизированных мыши

  1. Совместите стеклянный капилляр в задней части головы мыши, таким образом, чтобы точка заостренный позади мембраны на ~ под углом 30-45 ° (рис. 2 c).
  2. Плунге шприц один раз или несколько раз и подготовки шприц ~ 100-200 мкл (чтобы убедиться, есть без загрязняющих веществ и отрицательное давление в стекла капилляров).
  3. С помощью микроманипулятор, переместить капилляра Совет ближе к мембране, до тех пор, пока можно увидеть сопротивление, но не проколов его (Рисунок 2D).
  4. После сопротивления видели между кончиком капилляра и мембраны, аккуратно коснитесь капиллярную трубку через мембрану, сбивая микроманипулятор элементов управления. Используйте Микроскоп, чтобы увидеть заостренный точки капиллярного прокол в Чистерна magna. CSF автоматически быть втянутыми в капиллярную трубку после прокола открытия (Рисунок 2E).
  5. Оставьте капиллярные медленно собирать CSF. Если CSF был остановлен, растягивая, нарисуйте шприцем вверх небольшой объем медленно (~ 50 мкл) для создания более отрицательное давление в капилляр для извлечения из спинномозговой жидкости.
    Примечание: в качестве альтернативы, капилляр может быть аккуратно и медленно вытащил мозга с помощью тонкой микроманипулятор элементов управления позволяет CSF течь в капилляр снова. Общее количество ~ 10-15 мкл ликвора (~ 3-4 см в капилляр) занимает ~ 10-30 мин и иногда 20 мкл и более могут быть собраны. Хотя не обязательно, рекомендуется использовать пусковую площадку тепла во время сбора CSF. CSF коллекция была выполнена при комнатной температуре (~ 23 ° C).
  6. После сбора количество желаемых ФГО, закройте трубку, сдвигая трехходовой клапан закрыть (чтобы остановить, растягивая ФГО).
  7. Вынуть шприц, подключенных к трубы и откройте и закройте трубы (для создания сравнял счет давления в капилляр, труб, а также область за пределами капилляра). Подключите шприц с трехходовой клапан, но не окунайте шприца.
  8. Осторожно выньте стеклянный капилляр из мыши, с помощью микроманипулятор.
  9. Место коллекции трубки (1,5 мл пробирок с 1 мкл 20 x ингибитор протеазы) под точкой заостренный стекла капилляров.
  10. Откройте трубы и аккуратно окунуться шприц: ФГО должны вытекать из капилляра и в коллекции трубку.
  11. После сбора, быстро центрифуги (импульсный счетчик для 5 s на максимальной скорости, используя мини-центрифуга) Ликвора смешать образца с ингибитором протеазы в нижней части трубки коллекции.
    Примечание: Образцов спинномозговой жидкости могут быть aliquoted и затем сохраняются для дальнейшего анализа на-80 ° C. Остальная часть мыши можно расчлененный для других тканей, таких как мозг и спинной мозг. Мышь на данном этапе все еще жив, и таким образом крови могут также быть собраны, при необходимости.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Используя описанную здесь (рис. 1 и рис. 2), спинномозговой жидкости, немедленно, собранных в капилляр должно быть ясно (Рисунок 2E), не розовый или красный. Если есть розовый с красным оттенком жидкости, собранные в капилляр, потом было загрязнение с кровью.

Как пример применения образца спинномозговой жидкости собираются с помощью этого метода, уровни белка амилоид-beta (значения) была измерена с помощью ИФА. Уровни значения в ЦСЖ обычно измеряется в болезнь Альцгеймера исследований7. ФГО в основном белок бесплатно. В мышиной модели болезни Альцгеймера (APP/PS1 мышей) значительно увеличили уровни человеческого значения42 , как эти мышей overexpress человека APP. Это можно наблюдать с образцов спинномозговой жидкости, собранные от 12-месячного мышей, используя описанные здесь методы (0 пг/мл в СМЖ мышах одичал тип (WT), по сравнению с 1,303 пг/мл Ликвора APP/PS1 мышей, рис. 3).

Figure 3
Рисунок 3. Представитель результаты для образца спинномозговой жидкости собранные. ИФА анализ образца спинномозговой жидкости собираются. В модели мыши болезни Альцгеймера (APP/PS1) существует значительное увеличение уровня человеческого значения42 в спинномозговой жидкости, как эти мышей overexpress человека значения42 (1,303 пг/мл). В одичал тип (WT) мышей там должно быть без человеческого значения42 обнаружено (0 пг/мл). Непарные t-тест был использован для измерения значимости, ** p < 0.01, погрешностей представлено как SEM, n = 3 и 4 мышей в возрасте 12 месяцев соответственно. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Этот протокол описывает подробно технику, которая улучшает текущие методы10 ФГО коллекции для сведения к минимуму загрязнения от крови и обильные коллекции ликвора (в среднем ~ можно получить 10-15 мкл) от мышей. Когда нарушение капиллярного кончик, кончик капилляра не должно быть слишком мал, (а затем ФГО будут извлечены очень медленно) или слишком большой (будет не хорошо достаточно, чтобы собирать спинномозговой жидкости и ткани могут застрять в капилляр). Следует позаботиться при рассекает области для ФГО коллекции: любое кровотечение должно быть прекращено и области для вставки стеклянный капилляр очищены от крови с dH20, чтобы избежать загрязнения с образцом. Анатомия каждого мышь отличается, но большинство мышей имеют 1-2 крупных кровеносных сосудов проходит через район, где капилляр необходимо быть вставлены для ФГО коллекции. Выбирая правильное место для вставки капилляр имеет важное значение, как вставить слишком близко к крупных кровеносных сосудов будут загрязнять Ликвора с кровью. Как показано на рисунке 2, площадью ясно кровеносных сосудов, таких как между или по обе стороны от крупных кровеносных сосудов, является оптимальным для капиллярной вставки избежать загрязнения. Если ФГО не вытекать на равномерной скоростью и останавливается через некоторое время, используя шприц немного (~ 50 мкл) может помочь возобновить поток спинномозговой жидкости в капилляр. Кроме того капиллярные, сама могут быть перемещены осторожно и медленно в или из мыши с микроманипулятор для перезапуска потока ЦСЖ добычи. Когда делать эти шаги как кровь может поступать в капилляр также необходимо соблюдать осторожность. Этот метод работает хорошо из-за различия в давления от мозга и стеклянный капилляр вытянуть Ликвора из мыши. Таким образом мышь может только проколов однажды, как после Капилляр вставляется в мышь и вынимают, происходит потеря давления в головном мозге и Ликвора больше не будет втягиваться в капилляр автоматически если он вставлен снова. Таким образом, практика будет совершенствовать эту технику, чтобы производить без примеси крови и получить адекватные ФГО коллекции на первой вставки капилляра в мышь (из опыта, практики мышей 10-20 будет достаточно, чтобы достичь этого этапа).

Этот протокол является улучшение и эффективный метод для извлечения спинномозговой жидкости от мышей и если все сделано правильно, сводит к минимуму загрязнение крови (рис. 1, рис. 2, рис. 3). Этот метод ограничен времени для спинномозговой жидкости должны быть собраны. Как правило, 30 минут необходимо собирать ~ 15 мкл или более из спинномозговой жидкости при комнатной температуре (~ 23 ° C). В это время мышь может быть теплым с хлопчатобумажной ваты или ткани, но без покрытия или тепла колодки, CSF можно по-прежнему успешно собраны. Добавление площадку тепла или потепления мыши перед процедура может улучшить эту технику, увеличивая поток спинномозговой жидкости из мозга и сократить время, необходимое для коллекции, как описано в других методов10,11. Но в протоколе, описанные здесь, был использован нет тепла pad или потепления мыши и между мышей не трудно размере спинномозговой жидкости, которые могут быть собраны. В качестве примера приложения, этот метод может использоваться для уровней человеческого значения42 были измерены с помощью ИФА. Значения известно для быть липким и может придерживаться стекла и коллекции трубок. В этом протоколе боросиликатного стекла капилляров и полипропиленовые трубы были использованы для сбора ФГО от мышей. Хотя некоторые значения могут придерживаться стеклянный капилляр и стены коллекции трубок, ELISA результаты показывают, что значения уровней может быть измерена (рис. 3). Тем не менее это возможность, что значения уровней, измеренная от спинномозговой жидкости, собранные в настоящем Протоколе меньше, чем это описано в других исследованиях, но стеклянные капилляры необходимо проколоть через Дура мыши, чтобы собирать спинномозговой жидкости. Помимо измерения значения, других протеинов интереса также может быть измерена с помощью собранных CSF.

Хотя метод ранее опубликованные ФГО коллекции, Лю et al. 10 была предназначена для непрерывного сбора Ликвора из жизни мышей, метод, описанный здесь является для коллекции спинномозговой жидкости от мышей в жертву ткани сбора и анализа. Таким образом, этот метод может использоваться вместе с другими рассечение методы сбора ткани мыши, он не влияет на мозг и спинной мозг, а после спинномозговой жидкости коллекции (т.е., после 10-30 мин на ~ 10-15 мкл CSF), мыши по-прежнему должно быть дыхание и под наркозом. Таким образом другие ткани, такие как кровь, головного мозга, спинного мозга и печени по-прежнему жизнеспособной для сбора и биохимического анализа. Хотя Лю и др. метод, собранных ФГО очень быстро (10 мин на мышь для 3-7 мкл ФГО), метод, описанный здесь занимает больше времени, но может собирать больше ФГО10. Другой метод для ФГО коллекции также был описан Майя и др. 11 как Лю и др. и Майя et al. методы описывают сбор спинномозговой жидкости от мышей, рука Холдинг стеклянные капилляры или гель погрузчик советы и проколов в Чистерна magna. Метод, описанный здесь отличается крепления капилляра для микроманипулятор. Это гарантирует, что капилляр удерживается неподвижно и уменьшает загрязнение от крови в спинномозговой жидкости коллекции. Микроманипулятор также позволяет для большей точности и аккуратности в проколов Чистерна magna для получения СМЖ. Хотя метод et al. майя также удалось получить 15-20 мкл ликвора на мышь, она требует, проколов Чистерна magna неоднократно вручную с гель погрузчик советы, которые могут увеличить риск заражения от крови или тканей. Кроме того майя, et al. метод может уменьшить давление в мозге с каждый последовательный проколов Чистерна magna, так что есть меньше и меньше ФГО собрали каждый раз. Метод, описанный здесь включает в себя только один прокол и оставляя капилляра в Чистерна magna далее собирать ФГО, как его заправки с ФГО, в то время как указатель мыши находится под наркозом. Таким образом протокол, описанные здесь непрерывно собирает Ликвора и минимизирует возможные загрязнения повторные пункции в Чистерна magna, а также нарушение окружающие ткани.

С большей сбор образцов спинномозговой жидкости и чистоты дополнительные анализы могут использоваться с этой жидкостью для дальнейшей помощи в неврологии исследований. Это хорошо известно среди исследователей, что коллекции ликвора из мышей может быть утомительным и только ограниченной выборке могут быть получены (обычно указывается как максимум 5-7 мкл6,,7,8,,9). В литературе, есть не так много подробные протоколы, опубликованных для извлечения Ликвора и этот протокол улучшает на ранее опубликованные метод10 для сведения к минимуму загрязнения от крови, при сохранении коллекции обильные спинномозговой жидкости. CSF имеет множество применений в неврологии исследований и как один из ближайших жидкостей в тканях ЦНС, это ценный образец для исследования. Ранее определила, что взрослый мышь имеет суммарный объем 40 мкл ФГО12. Таким образом этот протокол имеет возможность получить 25% и, возможно, больше общего количества Ликвора в взрослой мыши. Кроме мышей C57BL/6 и приложения/PS1 инбредных штаммов беспородных штамм импринтинга область элемента управления (ICR) мышей также использовались для успешного сбора ФГО, используя этот протокол. CSF от мышей разного возраста (4-18 месяцев) успешно собран, используя этот протокол. Таким образом должна существовать никаких трудностей в сборе Ликвора из различных штаммов или возрастов мышей с помощью этого метода. Этот подробный протокол надеюсь будет использоваться многими улучшить развитие ФГО анализов и других методов анализа для оказания помощи в исследованиях понять нейродегенеративных заболеваний, которые влияют на мозг и спинной мозг.

Важно, что глава мыши крепиться жестко, поэтому он не двигаться во время вскрытия и коллекции CSF (статья 3 протокола). Сайт для первоначального проколов в Чистерна magna имеет важное значение для получения обильные, незагрязненные CSF. Капилляр не должны быть включены слишком близко к любой кровеносные сосуды, чтобы избежать загрязнения образца собранной. Кроме того Регулировка капилляр имеет решающее значение для оптимальной ФГО коллекции. Использование микроманипулятор позволяет точную регулировку без значительно разрушая окружающие ткани и загрязняя спинномозговой жидкости. С помощью тонкой управления микроманипулятор, капилляр может быть медленно двинулась in или out для ФГО вытекать из мыши и в капилляр для коллекции.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторы не имеют ничего сообщать.

Acknowledgements

Эта работа была поддержана национальной естественных наук фонд Китая (81650110527, 81371400) и Национальный ключ базовых исследований программа Китая (2013CB530900).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Chloral hydrate (used as anesthetic) Sinopharm Chemicals Reagen Co. Ltd. 30037517 CAS number 302-17-0.
Dissecting scissors 66 vision technology 54002
Dissecting curved forceps 66 vision technology 53072
Dissecting straight forceps 66 vision technology 53070
Mouse adapter (with ear bars) Made in-house. N/A Similar equipment available from World Precision Instruments.
Dissecting microscope Meiji Labax Model 15381
Micromanipulator World Precision Instruments M3301
Magnetic base for micromanipulator Kanetec MB-K
Glass capillaries World Precision Instruments 1B100-4
Micropipette puller Sutter Instruments Model P-1000
Syringes (1ml) Tansoole 02024692 For 1ml.
Microtubes (1.5ml) Axygen MCT-150-C
Protease inhibitor Cocktail Set III EDTA-free Calbiochem 539134
Human Aβ42 ELISA kit Invitrogen KHB3441
Piping (teflon tubing) World Precision Instruments MMP-KIT Obtained from a microinjection kit and attached to the capillary holder and syringe.
Mini centrifuge Tiangen Biotech OSE-MC8
Cotton buds Obtained from any household store/pharmacy. N/A

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Anoop, A., Singh, P. K., Jacob, R. S., Maji, S. K. CSF Biomarkers for Alzheimer's Disease Diagnosis. Int. J. Alzheimers. Dis. 2010, 1-12 (2010).
  2. Blennow, K., Hampel, H., Weiner, M., Zetterberg, H. Cerebrospinal fluid and plasma biomarkers in Alzheimer disease. Nat. Rev. Neurol. 6, (3), 131-144 (2010).
  3. Schoonenboom, N. S. M., et al. Cerebrospinal fluid markers for differential dementia diagnosis in a large memory clinic cohort. Neurology. 78, (1), 47-54 (2012).
  4. Molinuevo, J. L., et al. The clinical use of cerebrospinal fluid biomarker testing for Alzheimer's disease diagnosis: A consensus paper from the Alzheimer's Biomarkers Standardization Initiative. Alzheimer's Dement. 10, (6), 808-817 (2014).
  5. Fagan, A. M. CSF biomarkers of Alzheimer's disease: impact on disease concept, diagnosis, and clinical trial design. Adv. Geriatr. 2014, 1-14 (2014).
  6. Ramautar, R., et al. Metabolic profiling of mouse cerebrospinal fluid by sheathless CE-MS. Anal. Bioanal. Chem. 404, (10), 2895-2900 (2012).
  7. Liu, L., Herukka, S., Minkeviciene, R., Vangreon, T., Tanila, H. Longitudinal observation on CSF Aβ42 levels in young to middle-aged amyloid precursor protein/presenilin-1 doubly transgenic mice. Neurobiol. Dis. 17, (3), 516-523 (2004).
  8. Schelle, J., et al. Prevention of tau increase in cerebrospinal fluid of APP transgenic mice suggests downstream effect of BACE1 inhibition. Alzheimer's Dement. (2016).
  9. You, J. -S., Gelfanova, V., Knierman, M. D., Witzmann, F. A., Wang, M., Hale, J. E. The impact of blood contamination on the proteome of cerebrospinal fluid. Proteomics. 5, (1), 290-296 (2005).
  10. Liu, L., Duff, K. A Technique for Serial Collection of Cerebrospinal Fluid from the Cisterna Magna in Mouse. J. Vis. Exp. (21), (2008).
  11. Maia, L. F., et al. Changes in amyloid-β and Tau in the cerebrospinal fluid of transgenic mice overexpressing amyloid precursor protein. Sci. Transl. Med. 5, (194), 194re2 (2013).
  12. Oshio, K. Reduced cerebrospinal fluid production and intracranial pressure in mice lacking choroid plexus water channel Aquaporin-1. FASEB J. (2004).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics