En semantisk Priming Event-relaterede potentielle (ERP) opgave at studere Lexico-semantisk og Visuo-semantisk behandling i autisme spektrum Disorder

Behavior

Your institution must subscribe to JoVE's Behavior section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Dette papir beskriver en semantisk priming ERP opgave bruger inden for modalitet par billeder og ord til at undersøge semantisk behandling hos personer med autisme spektrum forstyrrelse (ASF).

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Coderre, E. L. A Semantic Priming Event-related Potential (ERP) Task to Study Lexico-semantic and Visuo-semantic Processing in Autism Spectrum Disorder. J. Vis. Exp. (134), e57217, doi:10.3791/57217 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Personer med autisme spektrum forstyrrelse (ASF) har karakteristiske underskud i at forstå betydningen af sprog eller semantisk behandling. Men nogle tyder på, at semantisk behandling af ikke-sproglige stimuli er intakt, tyder på, at semantisk underskud kan være sprogspecifikke. Passende kendetegner semantiske forarbejdning underskud hos personer med ASF, sammenligning af i-modalitet sproglige (fx skrevet ord) og ikke-sproglige (f.eks. billeder) stimuli er påkrævet. Dette papir beskriver en metode, der gør brug af en semantisk priming paradigme under samtidige optagelse af electroencephalographic (EEG) data. EEG giver en dynamisk måling af hjerneaktivitet, der er velegnet til at karakterisere subtile forskelle i semantisk behandling, der ikke kan iagttages på det adfærdsmæssige niveau. Den semantiske priming paradigme præsenterer en førsteklasses billede eller ordet (f.eks. hund) efterfulgt af et target billede eller ord, der er enten forbindelse (f.eks. kat) eller uafhængige (fx blyant) til prime. Dette paradigme kan således bruges til at evaluere semantisk behandling på tværs af forskellige modaliteter og sammenligne lexico-semantisk og visuo-semantisk behandling evner hos personer med ASF og hvordan de kan afvige fra TD individer. De specifikke trin involveret i oprettelse af stimuli, udfører EEG afprøvning og analyse af EEG data diskuteres. Repræsentative resultater illustrerer, hvordan komponenten N400 event-relaterede potentiale (ERP) er reduceret følgende semantisk relaterede prime-target par i forhold til ikke-forretningsmæssigt forbundne par. Sammenligninger af N400 mellem betingelser, modaliteter og grupper kan give et skøn over succesen af semantisk behandling, og kan dermed bruges til at karakterisere semantiske underskud hos personer med ASF eller andre kliniske populationer.

Introduction

Forskere i kognitiv psykologi har længe været interesseret i hvordan folk forstår betydningen af sprog. Sprogbehandling indebærer en sekvens af trin af stigende kompleksitet, fra brev og ordet anerkendelse, semantisk behandling, at syntaktiske parsing. Semantisk behandling vedrører adgang til betydningen af en stimulus, det være sig et ord, billede eller lyd. Efter tidlige trin af oprindelige ordet anerkendelse, adgang til en ord der betyder eller semantik, er et afgørende skridt i sprogbehandling. Semantiske integration refererer til processen med at integrere betydningen af stimuli til at forstå deres relationer og er afgørende for højere niveau sprog behandling såsom forståelse sætninger. Ikke blot gør betydningen af hvert ord i en sætning skal tilgås, men betydninger af hvert enkelt ord skal integreres for at danne en sammenhængende forståelse af sætning mening eller "kernen".

Personer med autisme spektrum forstyrrelse (ASF) har ofte betydelige underskud i sprog forståelse1. Der er nogle beviser for at disse vanskeligheder skyldes underskud i semantisk behandling og integration2,3,4. Men, andre undersøgelser har antydet, at personer med ASF ikke viser semantiske forarbejdning underskud når materialer er præsenteret i ikke-sproglige (fx, visuelle eller auditive) modaliteter3,5,6 . Disse resultater tyder på, at semantisk forarbejdning underskud i ASD kan begrænses til sproglige (dvs., skrevet eller talt) modaliteter. Som sådan kan tilgange som kontrast forskellige modaliteter giver indblik i omfang som semantisk forarbejdning underskud er domæne-specifikke eller tegn på en udbredt behandling stil. Formålet med dette papir er at beskrive en metode til sammenligning af semantisk behandling mellem forskellige modaliteter ved hjælp af en semantisk priming opgave under samtidige elektrofysiologiske optagelse.

Den semantiske priming paradigme har en lang historie i forskning undersøger hvordan semantisk behandling påvirkninger lavere niveau ordet anerkendelse7,8. I traditionelle semantiske priming opgaver, et førsteklasses ord er præsenteret (fx, kat) efterfulgt af et mål ord, der er enten semantisk relaterede (f.eks. hund) eller uafhængige (f.eks. bog) til prime. En sådan opgave sker ofte i forbindelse med en leksikalsk beslutning opgave, således at deltagerne bliver bedt om at afgøre, om målet ord er et rigtigt ord eller ikke. Andre paradigmer kan have deltagerne udføre en semantisk kategorisering opgave på target ordet, eller dømme, hvorvidt de to stimuli er relateret eller ej. Uanset den konkrete opgave, har årtiers beviser fastslået, at reaktionstider (RTs) er hurtigere til målet ord, der er semantisk relateret til prime i forhold til dem, der er uafhængige.

Denne "semantisk priming effekt" er blevet tilskrevet en række mekanismer i teoretisk konti7,8. En er, priming effekt skyldes automatisk sprede aktivering via den semantiske netværk, således at hentning af førsteklasses ordet betydningen aktiveres betydningen af andre semantisk relaterede ord, herunder target ordet. Dette reducerer derefter den nødvendige tid til semantisk aktivering af target ordet. En anden teoretisk mekanisme er, at deltagerne af forventede, som postulerer at ser prime ordet, generere en forventet sæt af potentielle mål. Målet ord, der er inkluderet i dette sæt er derefter anerkendt hurtigere. Endelig har andre postuleres eksistensen af en post leksikalsk mekanisme af semantiske matching, der fastslår eksistensen af en semantisk relation mellem premierminister og target ordet. Uanset de specifikke mekanisme bag virkningen, kan semantisk priming være et nyttigt indeks af semantisk behandling og integration. Dette paradigme er heller ikke begrænset til leksikale stimuli, og kan også bruges til at undersøge semantiske priming af ikke-sprog stimuli som billeder9 samt cross-modalitet semantiske priming (f.eks. mellem ord og billeder)3.

Semantiske priming effekter har været godt undersøgt i den psycholinguistic litteratur, og er blevet undersøgt med hensyn til typen af prime-mål forbindelserne, timingen af prime og mål præsentation og mange andre manipulationer8. De elektrofysiologiske korrelerer af denne effekt har også været godt karakteriseret10. Electroencefalografi (EEG) er en metode til registrering af neurale aktivitet via ændringer i elektriske aktivitet måles på hovedbunden. EEG er en nyttig valg af metode til en semantisk priming paradigme, fordi det har meget god tidsmæssige opløsning (størrelsesordenen millisekunder, ms) og kan dermed give subtile forskelle i semantisk behandling mellem betingelser eller grupper selv i mangel af adfærdsmæssige effekter eller svar.

Event-relaterede potentialer (ERPs) er tid-låst ændringer i EEG, som opstår som reaktion på et specifikt stimulus eller adfærd. Afhængigt af timing og polaritet af svaret er forskellige komponenter af ERP reflekterende af forskellige aspekter af kognitiv behandling. Komponenten til N400 er en veletableret markør for semantisk behandling og semantisk integration11,12 (selv om flere andre fortolkninger findes10,13). N400 amplitude er reduceret, når semantiske integration er lettere (såsom når prime og mål i en semantisk priming paradigme er semantisk relaterede) i forhold til når semantiske integrationen er vanskeligere (f.eks. når to ord er ikke-forretningsmæssigt forbundne). Vigtigere, er amplitude forskellen mellem beslægtede og ikke-forretningsmæssigt forbundne betingelser (dvs. "N400 effekten") ikke specifikke for sprog. N400 virkninger er også observeret i ikke-sprog modaliteter, som svar på par af semantisk relaterede og ikke-forretningsmæssigt forbundne billeder eller miljømæssige lyde14,15,16,17. N400 er således et nyttigt ERP komponent med henblik på den nuværende paradigme fordi det kan bruges som en modalitet-uafhængige skøn af semantisk behandling og integration evner.

Personer med ASD viser reduceret eller fraværende semantiske grunding og N400 virkninger i svar til sprog stimuli2,3,4, foreslår svækkelser i semantisk behandling. Sådanne virkninger er blevet fundet i svar til visuo-semantisk og audio-semantisk stimuli3,5,6, udlån støtte til påstanden om, at semantisk behandling er selektivt nedsat for sprog stimuli. Men de fleste tidligere undersøgelser sammenligner modaliteter har brugt cross-modalitet priming, således at prime-target par indeholder en leksikalsk stimulus. I betragtning af det forslag, at personer med ASF har underskud i semantisk behandling af sproget stimuli, kan sådan cross-modalitet stimuli have påvirket resultaterne. For at undersøge virkelig om semantisk behandling af sproget selektivt nedsat hos personer med ASF, skal inden for modalitet par af leksikalsk og ikke-leksikalsk stimuli bruges. I en nylig undersøgelse, Coderre et al. 6 fastsat den første direkte sammenligning af inden for modalitet ord og billede semantiske priming at undersøge semantiske forarbejdning underskud hos voksne (i alderen 18-68) med ASD. Deltagere med ASF og typisk udvikle (TD) deltagere set på par af billeder og ord og blev bedt om at vurdere, om stimuli var relateret eller ikke. Under denne semantiske priming opgave, blev deres hjerneaktivitet optaget ved hjælp af EEG. Ved at sammenligne N400 virkninger mellem grupper og modaliteter, forudsat dette paradigme indsigt i karakteren af semantisk behandling hos personer med ASF.

Formålet med dette papir er at beskrive den semantiske priming ERP metodologi af Coderre et al. 6. selv om dette paradigme blev i første omgang gennemføres for at studere semantisk behandling hos voksne med ASF, det kan være nyttigt for enhver der ønsker at udforske de neurale korrelerer lexico-semantisk og visuo-semantisk behandling, enten i TD eksperimentatorer enkeltpersoner eller i specifikke kliniske populationer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle metoder, der beskrives her blev godkendt af institutionelle Review Board af Johns Hopkins University, hvor den oprindelige undersøgelse6 blev udført.

1. oprettelse Stimuli

  1. Oprette en foreløbig liste over konkrete navneord som prime-target par vil blive gjort.
    1. En valgte corpus såsom Subtlex19, Vælg ca 500 konkrete navneord og opnå variabler af interesse (f.eks., frekvens, længde, konkrethed, imageability, etc.) for hvert ord.
      Bemærk: Andre corpuses, såsom medicinsk forskning Rådet (MRC) Psycholinguistic Database18 eller Corpus af moderne amerikansk engelsk20, kan også bruges. Subtlex blev brugt i den oprindelige undersøgelse, fordi denne database er bare et stort Excel-fil og derved nemt giver mulighed for at søge efter stimulus generation. Andre corpuses har forskellige grafiske grænseflader og kan forlange bruger hen til inddata en bestemt tekststreng i et inputfelt og kontrollere variablerne der anmodes om.
  2. Udføre latent semantisk analyse (LSA) mellem stimuli for at etablere semantiske slægtskab
    1. Vælg LSA metode eller værktøj. En nyttig online-værktøj er leveret af Colorado Universitet Boulder (http://lsa.colorado.edu/).
      1. Fra den vigtigste landing site, klik på Matrix sammenligning.
      2. Indtaste enkelte ord at sammenligne, adskilt af en tom linje.
      3. Klik på Indsend tekster.
    2. Bruger et regneark, oprette en matrix af LSA værdier mellem hvert ord og hver anden.
  3. Opdele stimuli i relaterede og ikke-forretningsmæssigt forbundne betingelser baseret på LSA (fig. 1A).
    1. Manuelt vælge 200 ord par med høje LSA værdier (ca 0,5 eller højere) for den "relaterede" tilstand.
    2. Manuelt vælge 200 ord par med lav LSA værdier (ca 0,1 eller lavere) for de "uafhængige" tilstand.
      Bemærk: Eksperimentatoren kan skal manuelt kontrollere word par for at sikre, at det semantiske forhold giver mening for kategorien. Nogle ord par kan have høje LSA ratings men den semantiske slægtskab kan ikke umiddelbart klart for deltagerne. Tilsvarende, nogle kan have lav LSA ratings men kan være semantisk relaterede på andre måder.
    3. Når du opretter par relaterede og ikke-forretningsmæssigt forbundne, manuelt match ord på frekvens, længde og andre variabler, der er konstateret for at være relevante i litteratur (fx retning af foreningen7,8) eller som er af interesse for den konkrete undersøgelse. Match ord så tæt som muligt på variabler af interesse (f.eks. inden for 1-2log10 frekvens enheder; inden for 1-2 breve eller stavelser).
  4. Opdele stimuli i ord og billede modaliteter (fig. 1A).
    1. Tilføje en anden kolonne i "tilstand" i filen stimulus i regnearket.
    2. I kolonnen "tilstand" mærke 100 af de relaterede par og 100 af de uafhængige par som "billede" tilstand. Mærke de anden resterende stimuli som "word" tilstand.
  5. Få billede stimuli.
    Bemærk: Billede stimuli kan opnås fra online-kilder (f.eks Google image søgninger) eller fra andre kilder til eksperimentatoren.
    1. Vælg 2-3 billeder til at repræsentere hver word.
    2. Udføre første pilot afprøvning af at have en eller flere uafhængige raters (fx studerende, videnskabelige assistenter, der ikke har været involveret i udvikling af stimulus) beslutte hvilke bedste billede repræsenterer konceptet.
      1. Åbne alle potentielle billedfiler på én gang ved hjælp af en photo viewer program, og derefter læse ordet højt og beder rater til at vælge de mest repræsentative billede. Registrere hver rater svar for hvert ord.
      2. For hvert ord, identificere billedet at størstedelen af raters valgt som bedste repræsenterer konceptet, og brug denne fil som stimulus for ordet. Hvis ingen flertal findes, Vælg en forskellige matrix af billeder og Gentag trin 1,5.
    3. Bruger GIMP (eller et andet fotoredigeringsprogram valg), være skala billeder til alle af samme størrelse (ca. 400 pixels eller 3 – 5 inches højde eller bredde).
      Bemærk: Den præcise størrelse af billederne kan variere afhængigt af størrelsen af skærmen stimuli vil blive præsenteret på. Vandret og visuelle vinkel af stimuli skal være mellem 7 og 13 °.
  6. Udfør pilot test
    1. Pilot test ord og billede par ved at spørge 3-4 uafhængige raters (fx studerende, videnskabelige assistenter, der ikke har været involveret i udvikling af stimulus) til sats hvert par som relaterede eller ikke-forretningsmæssigt forbundne.
      1. Programmere eksperiment i E-Prime (eller andre stimulus præsentationsprogram valg) at præsentere både ordene på skærmen på én gang, enten den ene over den anden eller side om side. Spørge deltagerne til at vurdere ord som relaterede eller ikke-forretningsmæssigt forbundne ved at trykke på en knap (f.eks. 1 for relaterede, 2 for uafhængige). Se E-Prime manuel21 for nærmere oplysninger om, hvordan at programmere et eksperiment i denne software-pakke.
        Bemærk: Pilot test kan finde sted i laboratoriet hvor eksperimentel afprøvning finder sted, eller på enhver computer, der kører programmet stimulus præsentation. Der kræves ingen særlige værelse.
      2. Gentag pilot test (med nye uafhængige raters, der ikke har set stimuli) indtil et sæt af ord og billeder er opnået med pålidelige vurderinger af beslægtede og ikke-forretningsmæssigt forbundne. Få alt 100 relaterede ord par, 100 ikke-forretningsmæssigt forbundne ord par, 100 relaterede billede par og 100 uafhængige billedet par.
        Bemærk: Det er antydet, at efterforskere ved hjælp af komponenten N400 for at undersøge kognition i kliniske populationer indsamle mindst 40 brugbar forsøg pr. retssag type til at fremkalde en pålidelig virkning22. Foregribelse af at nogle forsøg vil blive tabt under data rensning oparbejde, bør antallet af forsøg i paradigmet øges. I forudgående arbejde var ved hjælp af denne særlige paradigme 6, 100 forsøg pr. retssag type mere end nok til at sikre robuste N400 virkninger på både individ og gruppe grundlag. Fordi komponenten N400 er ens mellem ord og billeder10, anslået dette antal retssag typer anbefales at holdes konsekvent mellem modaliteter.
      3. Opbevare en yderligere 8 par (4 ord, 4 billeder) i en øvelsessession (Se trin 2.2.1below)

2. opgaven programmering

  1. Oprette stimuli lister.
    1. Fra det sidste sæt af stimuli, sortere stimuli i 8 blokke. Modalitet (billede/ord) bør være blokeret (4 blokke).
    2. Inden for hver blok, sikre et tilsvarende antal relaterede og ikke-forretningsmæssigt forbundne stimuli.
    3. Manuelt pseudo-randomisere præsentation lister inden for hver blok, så der er ikke mere end 5 relaterede eller ikke-forretningsmæssigt forbundne stimuli i træk, og par ved siden af hinanden er ikke semantisk relaterede. Undgå forsøg såsom "gulerod-broccoli", "æble-pære" umiddelbart ved siden af hinanden.
  2. Programmere opgaven ved hjælp af E-Prime eller andet stimulus præsentation software valg.
    Bemærk: Trinene beskrevet her er specifikke for E-Prime og NetStation, og vil afvige, hvis en anden stimulus præsentation eller EEG erhvervelse software bruges. Se venligst E-Prime manuel21 og E-Prime-udvidelser til NetStation tutorial23 til mere specifikke detaljer om hvordan man programmerer en EEG eksperiment i denne softwarepakke og hvordan du aktiverer kommunikation mellem E-Prime og NetStation.
    1. Programmet to øvelsessessioner for billede og ord blokke (4 par hver), der skal udføres før den eksperimentelle test begynder.
    2. Programmere en instruktion skærmen i begyndelsen af øvelse at læse: "vil du se to ord præsenteres på skærmen, ene efter den anden. Prøv at sidde som stadig som muligt og ikke blinke mens ordene præsenteres. Når parret er præsenteret, vil du se et sort kors på skærmen. Når du ser sort korset, skal du angive, om ordene var relateret eller ikke. Tryk på knappen 1, hvis ord er relateret. Tryk på knappen 2, hvis ordene ikke er beslægtede. Tryk på en tast for at starte øvelsessessionen."
    3. For hvert af ord stimuli, skal du dobbeltklikke på ikonerne TextDisplay i strukturen eksperiment. Klik på ikonet egenskaber øverst til venstre. Vælg Courier New skriftstørrelse 28 under fanen skrifttype. Under fanen Generelt skal du vælge ForeColor som sort og BackColor som hvid at præsentere ord med sort skrift på hvid baggrund.
      Bemærk: Specifikke skriftstørrelsen muligvis skal ændres afhængigt af størrelse og opløsning på skærmen bruges til præsentation. Vandrette visuelle vinkel af ord bør være mellem 1 og 6 °.
    4. For hvert billede stimuli, skal du dobbeltklikke på ikonerne dias i strukturen eksperiment. Klik på ikonet egenskaber øverst til venstre. Under fanen Generelt skal du vælge baggrundsfarve som hvid at præsentere billeder på en hvid baggrund.
    5. Programmere hver retssag at forelægge de følgende stimuli i denne rækkefølge: en rød forud for domsafsigelse fiksering cross (400 ms); stimulus 1 (1.000 ms); interstimulus interval (blank hvid skærm; 300 ms); stimulus 2 (1.000 ms); blank skærm (400 ms); intertrial interval (sort fiksering cross; tilfældigt rystede mellem 1.000-1.400 ms i 100 ms mellemrum, gennemsnitlig 1200 ms); Se figur 1B. Hvis du vil angive varigheder, skal du dobbeltklikke på ikonerne TextDisplay eller dias i strukturen eksperiment og ramte knappen egenskaber på øverst til venstre i vinduet. Angive varighed under fanen varighed/Input.
      Bemærk: Tom skærm er opført før intertrial intervallet til at give en visuel pause mellem den anden stimulus og sort korset, og at give en subtil prompt for den kommende semantiske slægtskab dom.
    6. Programmere en TextDisplay objekt kaldet "Pause" efter hver blok er afsluttet, siger "ende af blokken, bedes du tage en pause"
  3. Medtage parametre for kommunikation mellem E-Prime og NetStation. Se E-Prime-udvidelser til NetStation manuel23 specifikke instruktioner om, hvordan at medtage denne information.
    1. For hver "word1" eller "word2" visning af tekst objektet, skal du markere objektet i strukturen eksperiment. Under vinduet "Egenskaber" indstille Tag som "WRD1" eller "WRD2", henholdsvis.
    2. For hver "Billeder1" eller "billede2" Slide objekt, indstille Tag som "PIC1" eller "PIC2", henholdsvis.
    3. Under "uden reference E-objekter", oprette en ny liste, der kaldes "CellList". Indtast den celle numre som: 1 = billede relateret; 2 = billede uafhængige; 3 = ord relateret; 4 = ord relateret. Inden for listen retssag for hver blok omfatter en kolonne med navnet "CellNumber" og angive den tilsvarende celle tal for hvert forsøg efter tilstand og modalitet.

3. EEG test

Bemærk: De særlige procedurer beskrevet her er for en EGI system. Procedurer kan variere, hvis der anvendes andre systemer.

  1. Forberede EEG test.
    1. Mix 2 tsk (10 g) kaliumchlorid med 1 kvart (1 L) af vand og 1 spiseskefuld (15 mL) af baby shampoo i et klart plastik spand til at oprette elektrolytten løsning
    2. Mål omkredsen af deltagerens hoved, passerer gennem inion og nasion, til at fastlægge passende netto størrelse. Vælg den passende størrelse net efter deltagerens hovedomkreds.
    3. Fordyb elektroder i elektrolytten løsning, sikrer, at alle svampe er helt nedsænket, og lad blød i mindst 5 minutter.
  2. Anvende EEG net.
    1. Har deltager sidde komfortabelt i en stol, som står over for eksperimentatoren. Forklare deltageren, du vil være at sætte nettet nu, så vil justere det og tjekke signal før du begynder testen.
    2. Placer håndklæder omkring deltagerens skuldre. Instruere deltager Luk deres øjne og derefter anvende nettet til deltagerens hoved. Justere nettet og stramme bånd for at sikre en pasform til deltagerens hoved.
    3. Arbejde gennem alle elektroder til sæde dem mod hovedbunden. Brug en fejende bevægelse med elektrode til at flytte håret væk. Rewet svampe ved hjælp af en pipette, hvis nødvendigt.
    4. Når alle elektroder har siddet, tjek impedances. Genindsætter eller rewet enhver elektroder med impedances over 50 kiloohms (kΩ).
  3. Køre semantiske priming eksperiment under EEG optagelse.
    1. Når nettet er anvendt, impedances er blevet kontrolleret, og deltageren er klar til at begynde, start opgaven semantiske priming.
    2. Gentage vejledningen for at deltagerne før testning. Pålægge deltagerne at dømme om de ord eller billede stimuli er relateret eller uafhængige ved at trykke på en knap på et tastatur eller en knap-box. For at undgå motor artefakter confounding EEG-signalet, pålægge deltagerne at vente med at gøre deres svar, indtil en anden stimulus er forsvundet fra skærmen og sort korset har optrådt.
    3. Kør øvelsessession mindst én gang for at sikre, at deltagerne forstår opgaven.
    4. Efter hver 2 blokke i pausen, rewet elektroderne igen og igen impedances.

4. EEG forbehandling

  1. Åben NetStation værktøjer.
    Bemærk: Trinene beskrevet her er specifikke for forbehandling i NetStation 5. Se NetStation 5 brugervejledning24 for flere detaljer om hvordan man bruger NetStation værktøjer. Andre forbehandling pakker kan omfatte EEGlab, ERPlab, FieldTrip eller andre software eksperimentatorens valg. Bemærk at foretrukne rækkefølge af forbehandling trin kan variere mellem software-pakker. Observation af en N400 virkning ikke bør variere baseret på valg af analyse pakke.
  2. Filtrere data.
    1. I bunden af vinduet NetStation værktøjer, skal du oprette en ny filtrering værktøj ved at vælge "Filtrering" i rullemenuen 'Opret'. Omdøbe værktøjet korrekt.
    2. Sæt highpass filter til 0,1 Hertz (Hz) og lowpass filter til 50 Hz.
      Bemærk: Highpass filter kan være lavere end 0,1 Hz, men det anbefales ikke at overskride denne cutoff, for at undgå risikoen for at indføre falske effekter25. Et lowpass filter så lavt som 30 Hz kan bruges.
    3. Gem den værktøj, så træk den oprindelige EEG registrering fil i "Input filer"-boksen øverst til venstre i vinduet og hit "Run".
  3. Opdele dataene i forsøg.
    1. Skabe en ny "Segmentering" værktøj og benævne sig korrekt.
    2. Under "Kategorier at skabe", ramte plustegnet til at oprette en ny kategori og omdøbe det "billede relateret". Træk ikonet "Kode" i feltet "Opret kategori baseret på kriterier" og sæt den som "Kode er PIC1" til tiden-slusen til præsentation af stimulus 1. Træk ikonet "Nøglen kode" i feltet "Opret kategori" og indstille det som "nøglen kode cel # 's 1".
      1. Til at omfatte kun korrekte forsøg, trække en anden "nøglen kode" ikonet i feltet "Opret kategori" og indstille det som "Nøglen kode eval er 1".
    3. Indstille segment længde til "Udvid segment 100 ms før og 2.300 ms efter" nederst i vinduet.
      Bemærk: Segmenter kan være tid-låst til udbrud af enten den første eller anden stimulus. Hvis låst til den første stimulus, bør segmenter omfatte 100 ms før til 2300 ms efter (omfatter præsentation varigheden af begge stimuli (1.000 ms) plus Inter stimulus interval (ISI) tid (300 ms)). Hvis låst til den anden stimulus, bør segmenter udvide 100 ms før til 1000 ms efter.
    4. Klone kategorien ved at trykke på knappen "Klon" og omdøbe den "billede uafhængige". Angiv koden til PIC1 og den nøglen kode cel # 2.
    5. Klone kategorien og omdøbe det "ord relateret". Angiv koden til WRD1 og den nøglen kode cel # 3.
    6. Klone kategorien og omdøbe det "word uafhængige". Angiv koden til WRD1 og den nøglen kode cel # 4.
    7. Gemme værktøjet og derefter trække den seneste forhåndsbehandlede fil i "Input filer"-boksen øverst til venstre i vinduet og hit "Run".
  4. Udføre artefakt påvisning.
    1. Oprette en ny "Artefakt Detection" tool og benævne sig korrekt.
    2. Under "Artefakt registrering af indstillinger", ramte plustegnet nederst i vinduet for at tilføje en ny indstilling. Vælg "Dårlige kanaler" fra dropdown menuen under "Operation". Lade alle standardindstillinger (max-min > 200 µV (µV); Hele segment; Bevægeligt gennemsnit 80 MS).
    3. Tilføjer en ny indstilling, og vælg "Øjet blinker" fra "Operation" dropdown menu. Lade alle standardindstillinger (max-min > 140 µV; vinduesstørrelse 640 ms, glidende gennemsnit af 80 ms).
    4. Tilføje en ny indstilling, og vælg "Eye Movement" fra "Operation" dropdown menu. Lade alle standardindstillinger (max-min > 55 µV; vinduesstørrelse 640 ms, glidende gennemsnit af 80 ms).
    5. Gemme værktøjet og derefter trække den seneste forhåndsbehandlede fil i "Input filer"-boksen øverst til venstre i vinduet og hit "Run".
    6. Åbne den resulterende fil i NetStation Review og rulle gennem hver prøveversion ved at trykke på pileknapperne under menuen "Kategorier" på højre side-bar. Markere forsøg som gode eller dårlige ved at ramme den grønne eller røde cirkler, henholdsvis. Når du er færdig, luk filen for at gemme resultaterne.
  5. Udføre dårligt kanal udskiftning.
    1. Skabe en ny "Dårlig kanal udskiftning" værktøj og benævne sig korrekt. Ingen parametre skal indstilles af brugeren til dette værktøj, så spare værktøjet, og træk den seneste forhåndsbehandlede fil i "Input filer"-boksen øverst til venstre i vinduet og hit "Run".
  6. Udfør enkelt-emne gennemsnit for at skjule over forsøg.
    1. Skabe en ny "Gennemsnitsberegnings" værktøj og benævne sig korrekt. Under "Gennemsnit indstillinger", Vælg "håndtere kildefiler: sammen" og "håndtere emner: separat".
    2. Gemme værktøjet og derefter trække den seneste forhåndsbehandlede fil i "Input filer"-boksen øverst til venstre i vinduet og hit "Run".
  7. Referencedata til gennemsnitlige reference26.
    Bemærk: Den gennemsnitlige reference er anvendt her fordi EGI giver tætte-array EEG (128 og 256 kanaler). Det er blevet foreslået, at en gennemsnitlig reference bruges med tætte-array optagelse systemer26; andre semantiske priming ERP undersøgelser ved hjælp af 128-kanal eller 256-kanal net har brugt gennemsnitlige reference6,27,28. Andre reference valg omfatter gennemsnittet af højre og venstre mastoids, næsen eller øreflip29. Der er ikke optimale valg af referenceelektrode, og eksperimentatoren bør bemærke, at valget af referenceelektrode kan påvirke den resulterende ERP bølgeformer26,29.
    1. Skabe en ny "Montage operationer" værktøj og benævne sig korrekt.
    2. Vælg den passende net fra dropdown menuen under "Liste montager til Sensor Layout". Vælg "Gennemsnitlige Reference" og sørg for, at feltet "Udelukke dårlig kanaler fra reference" er markeret. Gemme værktøjet og derefter trække den seneste forhåndsbehandlede fil i "Input filer"-boksen øverst til venstre i vinduet og hit "Run".
  8. Udfør baseline korrektionen ved hjælp af de første 100 ms i segmentet10 , 28.
    Bemærk: En oprindelig periode på 200 ms kan også være brugt29.
    1. Skabe en ny "Baseline korrektion" værktøj og benævne sig korrekt.
    2. Under "Baseline korrektion indstillinger", Vælg "Vælg oprindelig del af segment", "Vælg baseline med hensyn til segmentet tid = 0", og "Baseline begynder 100 ms før tid nul og er 100 ms lang".
    3. Gemme værktøjet og derefter trække den seneste forhåndsbehandlede fil i "Input filer"-boksen øverst til venstre i vinduet og hit "Run".

Figure 1

Figur 1 : Eksperimenterende eksempler og tidslinjen. (A) eksempler på billedet og ordet stimuli. (B) tidslinje af stimulus præsentation. Dette tal er blevet genoptrykt med tilladelse fra Coderre et al. 6 Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Hvis stimuli har været hensigtsmæssigt sorteret i relaterede og ikke-forretningsmæssigt forbundne betingelser, bemærkes en N400 effekt for både ord og billede stimuli (figur 2). Dette kan identificeres som en større negativ amplitude i ikke-forretningsmæssigt forbundne betingelser i forhold til relaterede betingelser. For ordet stimuli, bør effekten opstår fra 300-500 ms over centrale eller centro-parietale hovedbunden6,10. Billede stimuli, effekten kan blive lidt ældre eller mere frontalt fordelt9,15,16.

Statistiske analyser kan teste betydningen af N400 virkningen ved at sammenligne den gennemsnitlige amplitude mellem beslægtede og ikke-forretningsmæssigt forbundne betingelser. Dette kan udføres på en enkelt elektrode eller over flere elektroder. Den rumlige udstrækning af effekten kan vurderes af herunder elektrode websted og/eller lateralitet i statistiske modeller. Masse inputområdet statistik (Se for eksempel Groppe et al. 30 for nærmere oplysninger) kan bruges til at vurdere den præcise timing af effekten eller at oprette tidsvinduer af interesse for yderligere analyser. (Bemærk, at hvis flere analyser er udført, vil resultaterne skal justeres for at korrigere for flere sammenligninger. Den masse inputområdet statistiske metode beskrevet af Groppe et al. 30 indeholder flere muligheder for sådanne rettelser.)

For efterforskerne ved hjælp af denne semantiske priming ERP paradigme for at studere semantisk behandling i kliniske populationer, er det vigtigt at også indsamle data fra en TD kontrolgruppe. Kontrolgruppen skal vise de beskrevne N400 virkninger for både billede og ord betingelser. Dog kliniske populationer kan vise reduceret eller fraværende N400 effekter til en eller begge betingelser (figur 3). For at afgøre, om størrelsen af N400 effekten er forskellig mellem kontrol og kliniske populationer, kan gruppe medtages som en mellem fag faktor i de statistiske modeller. En betydeligt mindre N400 effekt i en klinisk befolkning ville angive vanskeligheder med semantisk behandling. Forskelle i timing eller hovedbunden fordelingen af effekten kan også indikere forarbejdning forskelle mellem grupper.

Selv om de repræsentative resultater beskrevet ovenfor er på koncernniveau, i overensstemmelse med flertallet af forskning om N400 virkning, denne komponent er ganske robust og kan ofte observeres på en enkelt-emne niveau31,32. Især for kliniske populationer såsom personer med ASF være oplysninger om et enkelt individ semantisk behandling evner ønskeligt. Efterforskere bør dog være opmærksom på, at personer med ASF kan have i sagens natur mere støjende EEG data end TD enkeltpersoner33 (selv om Se reference34), som kan være til hinder pålidelige single-om virkningerne i visse deltagere. For efterforskerne interesseret i evaluering single-om virkningerne, kan permutation tests udføres for at vurdere statistiske signifikans af virkninger inden for et enkelt individ. Kort, i en sådan metode ville en udføre mange (fx 5.000) gentagelser i hvilken tilstand etiketter (relateret/relateret) er permuted mellem enkelte forsøg. For hver enkelt permutation sammenholdes betingelserne statistisk derefter. Statistik fra hver permutation bruges til at oprette en null distribution af test-statistikker, som den observerede Proevestatistikken er sammenlignet for at udlede en betydning resultatet.

Figure 2
Figur 2 : Repræsentant N400 effekter som reaktion på den anden stimulus i hvert par for (A) ordet betingelser og (B) billede betingelser. Data er i gennemsnit over en gruppe af 20 TD voksne (data fra Coderre et al. 6). Forbehandler blev udført ved hjælp af en gennemsnitlig reference. Top paneler: repræsentant ERP bølgeformer på elektrode Cz viser en større amplitude til ikke-forretningsmæssigt forbundne betingelser i forhold til beslægtede tilstande på ca 400 ms (negativ er afbildet op). Bund paneler: topografiske parceller af uafhængige-relaterede forskellen, i gennemsnit over et vindue fra 400 – 500 ms (præcis fordeling kan ændre med valg af reference). For topografisk parceller angiver toppen af tallet forreste del af hovedet. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3 : Repræsentativ gruppe forskellene i N400 virkninger for word betingelser på elektrode Cz. Data er i gennemsnit over en gruppe af 20 TD voksne og 20 voksne med ASF (data fra Coderre et al. 6). Forbehandler blev udført ved hjælp af en gennemsnitlig reference. Kliniske grupper, såsom personer med ASF, kan vise en mindre N400 effekt som svar på ord, hvilket tyder på problemer med lexico-semantisk behandling.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Den nuværende papir har rapporteret kritiske trin i udviklingen af en semantisk priming ERP paradigme med billede og ord stimuli for at udforske semantiske forarbejdning underskud hos personer med ASF. Store skridt omfatter oprettelse af stimuli, programmering opgaven og udfører EEG test og analyser. Den mest tidskrævende del af denne procedure er tilbøjelige til at være oprettelse af stimuli, da dette kræver omhyggelig matcher både mellem og inden for stimulus par, betingelserne og retningslinjerne på variabler såsom længde, hyppighed og semantisk slægtskab. Som sådan, vil en betydelig mængde af pilot-test sandsynligvis være nødvendigt at sikre, at den endelige stimulus er passende.

Selv om forslagene inkluderet her, og forudgående arbejde, denne metode er baseret ud af6, testet voksne med og uden ASD (aldre 18-68), kan dette paradigme nemt udvides til barn eller teenager populationer. Ja, andre undersøgelser har brugt lignende semantisk priming EEG paradigmer i børn med og uden ASD at sammenligne semantisk behandling på tværs af modaliteter3. Flere overvejelser skal tages i betragtning, når du ændrer til forskellige aldre og udviklingstrin. For eksempel kunne stimulus sæt begrænses til højere frekvens ord for at sikre, at alle børn kender betydninger af alle stimuli (se næste afsnit). Andre ændringer kan ske til den test paradigme til at sikre tilstrækkelig datakvalitet fra barn eller unge deltagere, herunder flere pauser, tilbyde incitamenter eller viser korte videoer efter afslutningen af en blok af stimuli.

Flere faktorer vedrørende metoden beskrevet her, og tidligere arbejde er vigtigt at bemærke. Forudgående arbejde6 blev uropført i en gruppe af voksne, der havde gennemsnit over gennemsnittet sprog og intellektuelle funktioner. En begrænsning af dette paradigme er, at det kun kan bruges med personer, der er fortrolig med ord eller billeder bliver præsenteret. Tidligere arbejde har vist, at N400 virkning ikke opstår hvis leksikalsk varen er uden for den enkeltes ordforråd udvalg32,35. Derfor er det vigtigt, at deltagerne enten har gennemsnitlige til over gennemsnittet verbal og læse evner, eller at pleje er taget til at sikre, at alle stimuli anvendes i forsøget falder inden for enkelt ordforråd rækkevidde. I sidstnævnte tilfælde kan dette indebære, administration af et ordforråd test efter EEG session test den enkeltes viden om alle de ord, der anvendes i forsøget. I forbindelse med ord, som enkelt ikke kender, kunne disse forsøg fjernes fra yderligere analyse. Desværre, fordi intellektuelle handicap og nedsat sprogfærdigheder er et fælles samtidig forekomst hos personer med ASF1,36, disse krav for sprog og læsning evner vil betyde, at personer, der også har intellektuelle handicap eller under gennemsnittet sprogfærdigheder vil ikke kunne deltage. Yderligere ændringer til det paradigme, der giver mulighed for afprøvning af disse mere alvorligt berørt individer bør overvejes i fremtiden.

Det er vigtigt at bemærke, at metoden beskrevet her ikke overveje forskellige typer af semantiske relationer mellem premierminister og mål. Nogle undersøgelser har fundet, at omfanget af den semantiske priming effekt moduleres af typen relation (fx associative kontra "ren", fremad vs bagud, medieret vs direkte)8. I den aktuelle metode anses disse forskellige typer af relationer, prime-målet ikke. Men for forskere interesseret i at udforske deres virkninger, kan dette være et yderligere skridt i stimulus skabelse.

Det er også bemærkelsesværdigt, at metoden beskrevet her instruerer deltagerne til at gøre en semantisk slægtskab dom i løbet af opgaven. Denne opgaves eksplicit karakter kan fremkalde strategier, der kan påvirke resultaterne. For eksempel, kunne spørger deltagerne at være opmærksomme på de semantiske relationer mellem stimuli afbøde gruppe effekter6. Fremtidig forskning ved hjælp af dette paradigme vil ændre det til at omfatte en implicit semantisk behandling design, for eksempel hvilke deltagere Tryk på en knap hver gang en animalsk ord er præsenteret eller blot se ord og billeder vises på skærmen. Semantiske priming N400 effekter observeret i mangel af udtrykkelige opgaver3, så denne form for manipulation bør stadig give observerbare effekter og kan også afsløre gruppe forskelle i implicitte semantiske priming.

Årtiers forskning har etableret den semantiske priming paradigme som en værdifuld måde at studere semantisk behandling. Pålideligheden af denne opgave på tværs af forskellige modaliteter gør det særligt værdifulde for at studere hvordan lexico-semantisk og visuo-semantisk behandling kan variere. En sådan mellem modalitet sammenligning er især nyttige i visse kliniske populationer såsom ASF, hvor semantisk priming underskud kan være begrænset til sprog domæner. Ved at sammenligne og kontrasterende semantiske grunding og N400 virkninger mellem grupper og modaliteter, kan efterforskere fastslå, om de påståede underskud i semantisk behandling i ASD er begrænset til de sproglige domæne eller er repræsentant for en mere globale semantiske dysfunktion.

Udvidelse af den semantiske priming paradigme til EEG også giver værdifuld indsigt i de underliggende semantisk behandling neurale mekanismer og kan give yderligere oplysninger, at adfærdsmæssige reaktioner ikke kan fange. På grund af mængden af rumlige og tidsmæssige oplysninger, der er opnået med EEG, kan denne metode afsløre mere subtile forskelle i semantisk behandling end ville blive overholdt med adfærdsmæssige reaktioner. For eksempel, i den tidligere undersøgelse ved hjælp af dette paradigme, Coderre et al. 6 findes der en N400 effekt fandt sted i gruppen ASD som svar på ordet stimuli, i modsætning til tidligere litteratur; dog foreslog subtile forskelle i timing og topografi af effekten, at de to grupper ved hjælp af forskellige kognitive mekanismer for semantisk behandling. I sum, kan en semantisk priming ERP opgave med ord og billeder være nyttigt for at studere domæne-general semantisk behandling, såvel i TD enkeltpersoner i kliniske populationer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatteren har intet at videregive.

Acknowledgments

Udviklingen af dette paradigme blev støttet af den terapeutiske kognitiv neurovidenskab fond og Benjamin og Torbens Miller familie indskudte om aldring og Alzheimers og autisme forskning.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
EEG system Electrical Geodesics, Inc. (EGI) Geodesic EEG system (GES) 400 system: Net Amps 400 amplifier, NetStation 5.3, 128-channel HydroCel Geodesic Sensor nets
Potassium chloride Electrical Geodesics, Inc. (EGI)
Plastic bucket Electrical Geodesics, Inc. (EGI) EGI provides a plastic bucket for mixing electrolyte but any clean container can be used
Baby shampoo Johnson's
GNU Image Manipulation Program (GIMP)

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Tager-Flusberg, H., Paul, R., Lord, C. Language and communication in autism. Handbook of Autism and Pervasive Developmental Disorders. 335-364 (2005).
  2. Kamio, Y., Robins, D., Kelley, E., Swainson, B., Fein, D. Atypical Lexical/Semantic Processing in High-Functioning Autism Spectrum Disorders without Early Language Delay. Journal of Autism and Developmental Disorders. 37, 1116-1122 (2007).
  3. McCleery, J. P., Ceponiene, R., Burner, K. M., Townsend, J., Kinnear, M., Schreibman, L. Neural correlates of verbal and nonverbal semantic integration in children with autism spectrum disorders. Journal of Child Psychology and Psychiatry. 51, (3), 277-286 (2010).
  4. Dunn, M. A., Gaughan, H. Jr, Kreuzer, J., Kurtzberg, D. Electrophysiologic correlates of semantic classification in autistic and normal children. Developmental Neuropsychology. 16, (1), 79-99 (1999).
  5. Kamio, Y., Toichi, M. Dual access to semantics in autism: is pictorial access superior to verbal access? Journal of Child Psychology and Psychiatry. 41, (7), 859-867 (2000).
  6. Coderre, E. L., Chernenok, M., Gordon, B., Ledoux, K. Linguistic and Non-Linguistic Semantic Processing in Individuals with Autism Spectrum Disorders: An ERP Study. Journal of Autism and Developmental Disorders. 47, (3), 795-812 (2017).
  7. Neely, J. H. Semantic priming effects in vidual word recognition: A selective review of current findings and theories. Basic processes in reading: Visual word recognition. 11, 264-336 (1991).
  8. McNamara, T. P. Semantic priming: Perspectives from memory and word recognition. (2005).
  9. McPherson, W. B., Holcomb, P. J. An electrophysiological investigation of semantic priming with pictures of real objects. Psychophysiology. 36, 53-65 (1999).
  10. Kutas, M., Federmeier, K. D. Thirty years and counting: Finding meaning in the N400 component of the event-related brain potential (ERP). Annual Review of Psychology. 62, 621-647 (2011).
  11. Kutas, M., Hillyard, S. Reading Senseless Sentences: Brain Potentials Reflect Semantic Incongruity. Science. 207, (4427), 203-205 (1980).
  12. Lau, E. F., Phillips, C., Poeppel, D. A cortical network for semantics: (de)constructing the N400. Nature Reviews Neuroscience. 9, (12), 920-933 (2008).
  13. Brouwer, H., Fitz, H., Hoeks, J. Getting real about Semantic Illusions: Rethinking the functional role of the P600 in language comprehension. Brain Research. 1446, 127-143 (2012).
  14. Barrett, S. E., Rugg, M. D. Event-Related Potentials and the Semantic Matching of Pictures. Brain and Cognition. 201-212 (1990).
  15. Hamm, J. P., Johnson, B. W., Kirk, I. J. Comparison of the N300 and N400 ERPs to picture stimuli in congruent and incongruent contexts. Clinical Neurophysiology. 212, 1339-1350 (2002).
  16. Ganis, G., Kutas, M., Sereno, M. I. The search for "common sense": an electrophysiological study of the comprehension of words and pictures in reading. Journal of Cognitive Neuroscience. 8, (2), 89-106 (1996).
  17. Nigam, A., Hoffman, J. E., Simons, R. F. N400 to Semantically Anomalous Pictures and Words. Journal of Cognitive Neuroscience. 4, (1), 15-22 (1992).
  18. Coltheart, M. The MRC psycholinguistic database. Quarterly Journal of Experimental Psychology. 33A, 497-505 (1981).
  19. Brysbaert, M., New, B. Moving beyond Kucera and Francis: A critical evaluation of current word frequency norms and the introduction of a new and improved word frequency measure for American English. Behavior Research Methods. 41, (4), 977-990 (2009).
  20. Davies, M. The Corpus of Contemporary American English: 450 million words, 1990-present. (2009).
  21. Zuccolotto, A. P., Roush, R. E., Eschman, A., Schneider, W. E-Prime 2.0 Getting Started Guide. (2012).
  22. Duncan, C. C., et al. Event-related potentials in clinical research: Guidelines for eliciting, recording, and quantifying mismatch negativity, P300, and N400. Clinical Neurophysiology. 120, (11), 1883-1908 (2009).
  23. Tools, P. S. E-Prime Extensions for Net Station 2.0 User Manual. (2014).
  24. Electrical Geodesics Inc. Net Station 5 User Manual. (2017).
  25. Tanner, D., Morgan-Short, K., Luck, S. J. How inappropriate high-pass filters can produce artifactual effects and incorrect conclusions in ERP studies of language and cognition. Psychophysiology. 52, (8), 997-1009 (2015).
  26. Dien, J. Issues in the application of the average reference: Review, critiques, and recommendation. Behavior Research Methods, Instruments, and Computers. 30, (1), 34-43 (1998).
  27. Dien, J., Franklin, M. S., May, C. J. Is "Blank" a suitable neutral prime for event-related potential experiments? Brain and Language. 97, 91-101 (2006).
  28. Franklin, M. S., Dien, J., Neely, J. H., Huber, E., Waterson, L. D. Semantic priming modulates the N400, N300, and N400RP. Clinical Neurophysiology. 118, (5), 1053-1068 (2007).
  29. Luck, S. J. An Introduction to the Event-Related Potential Technique. The MIT Press. Cambridge, Massachusetts. (2005).
  30. Groppe, D. M., Urbach, T. P., Kutas, M. Mass univariate analysis of event-related brain potentials/fields I: A critical tutorial review. Psychophysiology. 48, 1711-1725 (2011).
  31. Tanner, D., Van Hell, J. G. ERPs reveal individual differences in morphosyntactic processing. Neuropsychologia. 56, 289-301 (2014).
  32. D'Arcy, R. C. N., et al. Electrophysiological assessment of language function following stroke. Clinical Neurophysiology. 114, (4), 662-672 (2003).
  33. Pérez Velázquez, J. L., Galán, R. F. Information gain in the brain's resting state: A new perspective on autism. Frontiers in Neuroinformatics. 7, (37), 1-10 (2013).
  34. Davis, G., Plaisted-Grant, K. Low endogenous neural noise in autism. Autism. 19, (3), 351-362 (2015).
  35. Ledoux, K., Coderre, E. L., Bosley, L., Buz, E., Gangopadhyay, I., Gordon, B. The concurrent use of three implicit measures (eye movements, pupillometry, and event-related potentials) to assess receptive vocabulary knowledge in normal adults. Behavior Research Methods. 48, (1), 285-305 (2016).
  36. Matson, J. L., Shoemaker, M. Intellectual disability and its relationship to autism spectrum disorders. Research in Developmental Disabilities. 30, (6), 1107-1114 (2009).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics