פקקת ורידים עמוקה שנגזרות Stasis בעכברים המנוטרת על-ידי בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה

Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

בפרוטוקול הנוכחי מתאר את השלבים להשגת פקקת ורידים באמצעות מודל של ההקפאה. בנוסף, אנו משתמשים בשיטה לא פולשנית למדוד כגון היווצרות והרזולוציה לאורך זמן.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Rys, R. N., Blostein, M. D., Lemarié, C. A. Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography. J. Vis. Exp. (134), e57392, doi:10.3791/57392 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

פקקת ורידים היא מצב נפוץ המשפיעים על 1-2% של האוכלוסייה, עם שכיחות שנתי של 1 ב 500. פקקת ורידים יכולה להוביל למוות באמצעות תסחיף ריאתי או תוצאות התסמונת הפוסט-קדחת, המאופיינת על ידי כאב כרוני, נפיחות, כיבת, או כרונית יתר לחץ דם ריאתי וכתוצאה מכך משמעותיות כרוניות בדרכי הנשימה פשרה. זו היא המחלה הנפוצה ביותר לב וכלי דם לאחר אוטם שריר הלב, שבץ איסכמי והיא אתגר קליני עבור כל התחומים הרפואיים, כמו זה יכול לסבך את הקורס של הפרעות אחרות כגון סרטן, מחלות מערכתיות, ניתוח נזק גדול.

גרסאות ניסיוניות נחוצים לחקור מנגנונים אלה. המודל ההקפאה גורם עקבי כגון גודל וכמות לכימות של כגון. עם זאת, יש צורך בשיטתיות מאתרים ומפסיקים בצד סניפים של הכלילי התחתון כדי למנוע השתנות במידות כגון כל פרשנות הנתונים שגויים. פיתחנו שיטה לא פולשנית כדי למדוד את גודל כגון באמצעות בדיקת אולטרה סאונד. בעזרת טכניקה זו, שנוכל להעריך כגון פיתוח והרזולוציה לאורך זמן של אותה חיה. גישה זו מגבילה את מספר עכברים הנדרש על כימות של פקקת ורידים בקנה אחד עם עקרון ההחלפה, הפחתת ו עידון של בעלי חיים במחקר. הראו כי משקל כגון וניתוח היסטולוגית של כגון גודל לתאם עם מדידה שהושג עם בדיקת אולטרה סאונד. לפיכך, המחקר הנוכחי מתאר כיצד לגרום פקקת ורידים עמוקה בעכברים באמצעות מודל stasis הכלילי וכיצד לפקח עליו באמצעות אולטרסאונד בתדירות גבוהה.

Introduction

ורידי פקיקי (VTE), אשר מורכב של פקקת ורידים עמוקה (DVT), תסחיף ריאתי, הוא הגורם המוביל השלישי המוות לב וכלי דם לאחר אוטם שריר הלב ושבץ. . זה מצב שכיח המשפיעים על 1-2% של האוכלוסייה, עם שכיחות שנתי של 1 ב 5001... VTE יכול להוביל: 1) מוות תסחיף ריאתי; 2) תסמונת פוסט-קדחת, המאופיינת על ידי כאב כרוני, נפיחות, כיבי; או 3) לחץ דם ריאתי כרוני וכתוצאה מכך משמעותי כרונית פשרה בדרכי הנשימה. VTE היא מחלה רב העצרת, העלולות לנבוע ההקפאה של זרימת הדם, נזק כלי הדם ו/או hypercoagulable הברית עקב הפרעה של איזון בין את הקרישה ומערכות fibrinolytic, כפי שתיארנו זה לפני מאה שנה מאת וירכו וידוע בשם וירשאו.

כי ברוב המקרים זה אפשרי להשיג דגימות DVT אנושי, חוקרים פיתחו מודלים חייתיים ניסיוני של DVT. מספר בעלי חיים כולל עכברוש2, עכבר3, ארנב4, חזיר5, הכלב6ואנושיות הפרימטים7 שימשו. עכברים יכול להיות שונה גנטית, החיה שנמצאות בשימוש תכוף ביותר ללמוד DVT. עם זאת, כמו כל בעלי החיים, DVT ספונטנית הוא לא ציין בעכברים. לפיכך, שינויים פיזי או כימי החומה וריד משמשות ליצירת פקקת בעכברים. בעבר השתמשנו המודל הברזל ותחמוצת כלוריד לזירוז פקקת ב הכלילי התחתון (IVC) של עכברים8,9,10. מודל זה יש את היתרון של אמין בהפקת thrombi ריטלין תוך דקות והוא יכול לשמש כדי לחקור את התפקיד של אנטי מקריש ותרופות נגד טסיות בתקופת DVT חריפה. עם זאת, זה הליך מסוף. לפיכך, במחקר DVT אקוטי וכרוני, המודל stasis הוא מתאים יותר. במודל זה, כגון היווצרות הנגרמת על ידי ההפרעה מלאה של זרימת הדם ב- IVC, אחד הגורמים בטריאד וירשאו להתפתחות DVT. מודל זה ניתן ללמוד היווצרות DVT ו ברזולוציה, וזה יתרון לעומת ה3 דגם של FeCl11.

פיתחנו שיטה לא פולשנית לעקוב אחר כגון היווצרות והרזולוציה לאורך זמן באמצעות מערכת מיקרו-הדמיה סאונד בתדירות גבוהה12. בעבר הראו כי מדידה של פקקת ורידים על ידי אולטרסאונד להרכב בחיוב thrombi מתקבל באופן פתולוגי. יש לנו אישר ב שני מחקרים מאוחרים יותר כי מדידות שהושג עם אולטרסאונד לתאם עם כגון משקל, כגון אזור לכמת על ידי9,להסטולוגיה10. יותר חשוב, יש הראנו שסאונד בתדירות גבוהה הזה יכול לשמש כדי לפקח על היווצרות של פקקת ורידים עמוקה עכברים12. זה עשוי לשמש גם לכמת כגון רזולוציה בצורה לא פולשנית.

כאן נתאר את פרוטוקול המאפשר כגון היווצרות באמצעות המודל העכבר stasis-induced פקקת, כיצד כגון היווצרות ניתן לנטר בצורה לא-פולשנית לאורך זמן באמצעות אולטרסאונד בתדירות גבוהה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

כל ההליכים אושרו על-ידי בית קנדה חיה טיפול הוועדה של מקגיל אוניברסיטת מונטריאול, QC, מוסדיים. כל הציוד הנדרש רשום בטבלה אני.

1. מאתר (C57BL/6J) פרוטוקול Stasis IVC

  1. הכנה לניתוח
    הערה: זהו ניתוח הישרדות, לכן, טכניקה נכונה aseptic צריך להיות מלווה בכל עת. זה כולל מוודא שכל החומרים הם בהישג יד, ניקוי, לחיטוי מכשירים לפני ובין שימוש וקביעת אזור סטרילי על משטח העבודה עבור כל חומר סטרילי.
    1. לעקר כל מכשירי ניתוח והחומרים על ידי תא לחץ. מעקר חרוז זכוכית מספיקה לחטא כלי טיפים בין חיות, אם הליך אחד או יותר נעשה בבת אחת.
    2. עזים ומתנגד בשבוע 8-10 הישן C57Bl/6 עכברים זכרים עם תערובת של 100% חמצן ו- 2.5% איזופלוריין.
      הערה: להתאים את זרימת החמצן ואת איזופלוריין לפי הצורך.
    3. לאשר ההרדמה על ידי צובט הכפה האחורי של החיה בין האצבעות עם מלקחיים. אין תגובה מ בלחץ מציין שהחיה. הוא מורדם.
    4. לנהל שחרור איטי שיכוך כאב (הבופרנורפין) באמצעות הזרקה תת עורית. תן עכברים מינון של 1 מ ג של שיכוך כאב לכל 1 ק ג של משקל הגוף (1 מ ג/ק ג).
    5. במקום עין משחה על שתי העיניים של החיה כדי להבטיח אין לייבוש הקרנית משך ההליך.
    6. לנהל subcutaneously 0.2 - 0.5 מ ל נוזלים מול לכל 10 גרם של משקל הגוף.
    7. לתקן את החיה במקום על השולחן ניתוחים באמצעות הדבקה. מקם את החיה במצב פרקדן לחשוף את הבטן. לבצע ניתוח כרית החימום כדי למנוע היפותרמיה.
    8. להסיר שיער מהבטן של העכבר על-ידי יישום של הסרת שיער קרם במשך 1-2 דקות לנגב אזור הבטן לנקות עם גזה, מים מזוקקים, במידת הצורך.
    9. לחלופין, להסיר השיער מהבטן על ידי גילוח עם תער חשמלי קטן.
    10. לחטא את הבטן עם Baxedin (Chlorhexidine Gluconate BP פתרון) לפני קבלת כל החתכים. החל אתנול בקלילות עם גזה כדי למנוע איבוד חום מוגזם נגרם על-ידי האידוי של האלכוהול.
  2. חשיפת הכלילי התחתון (IVC)
    1. באמצעות מספריים כירורגיים, לבצע פתיחה של הבטן כדי לפתוח את חלל הבטן.
      1. הרם העור עם מלקחיים בחלק התחתון של הבטן, עושים חתך אנכי במקביל משני צידי linea alba. עשו את החתך הראשון משמאל או מימין את לינאה אלבה, בהתאם יד של המפעיל. החתך נעשה מן האמצע לסייע אולטראסאונד הדמיה בהמשך.
      2. עושים חתך השני, אופקית בחלק העליון של הבטן.
        הערה: לאחר חדירה לתוך הבטן, מערכת השרירים צריך להיות "אוהלים", ואז. חדר עם מספריים כירורגיים כדי למנוע נזק אברי הבטן.
      3. חזור על חתכים אופקיים ואנכיים ברובד שריר הבטן של החיה. הקפד האוהל את מערכת השרירים בזמן החדירה לתוך. חלל הבטן כדי לא לגרום נזק האיברים מתחת.
        התראה: הרם העור והשריר מן המעיים ואיברים פנימיים אחרים בעת ביצוע חתכים כדי לא לנקב אותם.
    2. מקפלים את העור והשרירים מן החתך כדי לחשוף את חלל הבטן.
    3. החל גזה, לחלח עם פתרון מול, אל צידי הפתח הפצע, להחצין את המעיים. הפעילו לחץ משני צידי הבטן כדי לסייע את הוצאתו של המעיים. השתמש בתנועות עדינות עם המוליך עצה כותנה כדי להזיז את המעיים. להשרות גזה בפתרון מול ומניחים אותו על המעיים המוחצנת.
      1. גזה צריך להיות לחלח מראש לפני השמה על רקמות.
    4. . זוז הצידה כל שומן הצפק, לחשוף את IVC בין הורידים כליות ו- iliac.
    5. הפוך זיהוי ראשוני של ברור בצד סניפים. ענף צדדי יופיעו גם קטנים יותר, אך משמעותי וריד שמסתעף מן IVC, בין כליות iliac הוורידים. להערכת משתנות בין עכברים. עכברים ייתכן בצד סניפים הנוכחי על אחד או משני צידי IVC.
  3. מצדו בצד סניפים
    הערה: אם בצד סניפים קיימים, ההליך הבא מלווה לכל אחד מהם. אם אינו קיים, המשך לצעד שלב 4: השמה תפר הראשונית תחת IVC. האתר מצדו של IVC יהיה מיד דיסטלי לוריד הכליה השמאלית, ללא קשר לנוכחות בצד סניפים.
    1. לבצע עמום בכל צד של הענף בצד. עמום הוא התהליך של שוב ושוב פתיחת מלקחיים קהה באמצעות לחץ עדין, כדי לפרוץ דרך fascia ללא פגיעה כלי שמסביב.
      התראה: הימנע תקר או פגיעה את הווריד.
    2. הרם את הענף, להעביר מקטע של 6-0 בתפר משי מתחת הווריד. תמיד יש להיזהר בעת הרמת או הזזת כלי. הכי טוב לתפוס את השומן סביב בכלי הדם, אחרת יש סכנה של פגיעה את כלי הקיבול.
    3. בעזרת מלקחיים התפירות, להפוך מצדו כירורגי סביב הענף בצד באמצעות קשר כירורגי סטנדרטי קושר את הטכניקה. מצדו מלאה נעשית כדי להבטיח 100% סגר של הווריד. להשתמש לפחות שלוש זריקות קשירה כדי להבטיח שמצדו הוא מאובטח.
    4. חזור על צעד 1.3 כל שנותר בצד סניפים.
  4. דיסקציה של אבי העורקים בבטן של IVC
    1. לבצע עמום בסביבה IVC דיסטלי מיד מן הווריד של הכליה השמאלית. . העורק הראשי מחובר של IVC ויה fascia, לכן לבצע הראשונית עמום סביב IVC והן העורק הראשי.
      התראה: להימנע תקר או פגיעה את הווריד. אין קרע או לנקב או כלי. . זה החלק הקריטי ביותר של ההליך, עם סיכון הגבוה ביותר עבור כלי נזק...
    2. להמשיך להפעיל לחץ עדין באמצעות עמום עד חלון ברור בין העורקים IVC.
  5. תפר והשמה IVC מצדו
    1. לעבור קטע של 6-0 בתפר משי מתחת IVC של העורק.
    2. אתר את התפר דרך החלון שנוצר בין IVC לבין אבי העורקים. להשתמש מלקחיים כדי למשוך את התפר. תתכונן בין העורק IVC. לשרשר את התפר באמצעות בזהירות, לא מנסה למשוך/ניקוב IVC של העורק.
    3. הופכים מצדו כירורגי בסביבה IVC עם מלקחיים התפירות, המבטיח של סגר מוחלט של הווריד. שוב, להפוך את מצדו מיד דיסטלי של וריד הכליה השמאלית.
    4. להפוך את שלוש זריקות התפר כדי לאבטח את מצדו.
      הערה: זה גם אפשרי לעבור את התפר מתחת IVC של אבי העורקים לפני המפריד בין שתיהן כאופציה חלופית. לחלופין, 7-0 Prolene התפרים יכול לשמש עבור מצדו של הענפים בצד, את IVC.
  6. סגירת הפצע וטיפול לאחר הניתוח
    1. ודא כי העורק נותרה ללא הפרעה כי יש כבר מאתרים כל בצד סניפים. IVC יופיעו מורחבים דיסטלי של האתר מצדו ואין דם זרימה יהיה גלוי.
    2. מקם כל השומן הצפק והמעיים לחזור בחלל הבטן.
    3. לסגור את הפצע באמצעות מלקחיים תפר בתפר משי 6-0. להשתמש בתפר רץ (פשוט רציף), להבטיח התפר לא יהיה חזק מדי. בתפר חזק יתבקע כאשר החיה מתעוררת נע סביב בכלוב.
      1. לחלופין, השתמש PDS, Ethilon, איחוי, Dexon או פלדת אל-חלד קליפים עבור סגירת הפצע.
    4. תפר השכבה של שריר הבטן הראשון באמצעות תפר המתאים קושר את הטכניקה.
    5. חזור על טכניקה התפר עבור העור ואמת סגירת הפצע מספיקה.
      הערה: אם משתמש את אותו תפר מחט וחוט לבעלי מרובים, לעקר את שניהם ב-70% אתנול לפני כל שימוש.
    6. להסיר את החיה של גז הרדמה, מקם אותם בתוך חממה 34 מעלות במשך 30 דקות לפחות.
    7. שוב, לנהל 0.2 - 0.5 מ ל נוזלים מול לכל 10 גרם של משקל הגוף subcutaneously. ניתן לתת נוזלים בימים הבאים כדי לשמור על משקל גוף שטרם-נותחו, במידת הצורך.
    8. נטר את החיה עד השחזור כדי להבטיח ניתוח מוצלח ולהעריך את הבריאות הכללית של החיה.
      התראה: מצפים שהתנוחה שפופות קלה עבור הליך פולשני כגון זה, אך החיה תתנהג כרגיל מוקדם ככל פוסט-פעולה 30 דקות.
    9. מקם את החיה בכלוב משלו, אל תמקם אותה עם חיות אחרות עד החלים לחלוטין.
    10. מחדש לנהל שיכוך כאב מדי יום עבור postop h עד 48.
    11. במקום מזון על רצפת הכלוב לזמן חיות בחדר התאוששות. בדרך כלל אין צורך אחרים טיפול מיוחד.
    12. בדוק את האתר הפצע אדמומיות, נפיחות, או פריקה, סימנים אחרים של זיהום.
    13. במידת הצורך, הסר את התפרים לאחר 7-10 ימים.
    14. לבצע המתת חסד באופן מיידי אם הניתוח לא הצליחה (למשל, כלי משמעותי נזק ו/או דם הפסד) או בעל חיים לא משתפרים עם טיפול לאחר הניתוח. המתת חסד מתבצע בדרך כלל על 48 שעות postop. לניסויים יותר, השתמש Prolene 7-0 כדי מאתרים ומפסיקים בצד סניפים של IVC ואת התפרים תפר נספג 5-0 כדי לסגור את חלל הבטן.
      1. לבצע המתת חסד על ידי ההרדמה של בעל החיים אינדוקציה כמתואר לעיל, למעט ב 5% איזופלוריין. זה מלווה חנק עם 100% CO2 בזמן מורדם.
      2. לאחר אישור של המתת חסד על ידי חנק (אובדן דופק ונשימה לא), לבצע פריקה צוואר הרחם כדי להבטיח מלאה המתת חסד.

2. פרוטוקול אולטרסאונד בתדירות גבוהה

הערה: פרוטוקול זה הוא ממאמרו של ליידי דיוויס המכון מכרסם Phenotyping הליבה הצוות עבור הדמיה סאונד בתדירות גבוהה. פרוטוקול זה מתבצע 24 שעות שלאחר הניתוח, אך ניתן לעשות זאת מוקדם ככל החיה מגיבה טוב הניתוח. הפרוטוקול יכול להתבצע בכל עת על עכברים בריאים, לעיתים קרובות נעשה כדי להשוות לפני ואחרי הניתוח.

  1. הכנה של חיה
    1. למקם את החיה תא אינדוקציה, עזים ומתנגד החיה עם תערובת של 100% חמצן ו- 2.5% איזופלוריין.
    2. הפעל צג טמפרטורה וקצב הלב. מיקום מנורת החימום מעל הטבלה כדי לחמם חיה במהלך הליך.
    3. הסר את החיה מן החדר אינדוקציה ולהחיל חומר סיכה העין כדי למנוע לייבוש הקרנית. מקם את החיה על פלטפורמת ניתוח, ולהצמיד את הצינור הרדמה הפה של החיה/באף.
    4. סאונד חם ג'ל 37 מעלות ומניחים את הג'ל על הבטן של החיה. הג'ל אולטרסאונד מחומם באמצעות מערכת לחימום מים משאבות לחמם מים דרך סלילי שהיה הן סביב הבקבוק של ג'ל.
    5. עבור מדידות קצב הלב (במידת הצורך), לשים ג'ל אלקטרודה האלקטרודות 4 של פלטפורמת ניתוח ולתקן את כפות רגליו של החיה אל האלקטרודות/הפלטפורמה עם הדבקה. מקם את החיה במצב פרקדן עבור הדמיה של IVC. באולטרסאונד מערכת הדמיה כוללת פלטפורמה ניתוח מחומם ומכיל אלקטרודות לניטור החיה.
    6. עבור מדידות טמפרטורה, לשים ג'ל אלקטרודה מדחום והכנס לתוך פי הטבעת של החיה.
    7. להתאים את מנורת החימום ואת איזופלוריין לפי הצורך להבטיח את החיה הזו נוחה, יש את הנשימה בין 30-70 bpm, ולא נשמרת ב 37 º C.
    8. במידת הצורך, לגלח את הבטן של חיה או להסיר שיער עם קרם להסרת שיער. למרוח 1-2 דקות, נגב ניקוי עם גזה ומים מזוקקים.
      הערה: מדי שיער יכול להשפיע על איכות התמונות.
    9. במקום גזה מתחת או לצד של החיה כדי לתפוס את כל הג'ל אולטרסאונד עודף.
  2. הדמיה של IVC כגון
    1. הפעל את תוכנת הדמיה ולהתחיל מחקר חדש.
    2. בחר את scanhead המתאים עבור הדמיה. Scanhead המשמש כאן מיועד אברי הבטן (תדר: 35 מגה-הרץ, אורך המוקד: 12.8 מ מ).
    3. להקליט מידע רלוונטי על החיה. זה עשוי לכלול חיה מזהה, מין, משקל, תאריך לידה, זן, וכו '.
    4. הנמך את scanhead למטה עד הוא נוגע הג'ל אולטרסאונד על החיה.
    5. להפעיל את המכשיר scanhead להתחיל בדו-ממד והדמיה של החיה. במצב זה, התמונות מוצגות כשתי תלת-ממדי, בגוונים שונים של אפור.
    6. אתר IVC של העורק הראשי על-ידי העברת פלטפורמת העכבר לאורך כל x - ו/או של y-המטוס, תוך כדי להעביר גם את scanhead דרך המישור z.
      הערה: דם כלי יופיע עם לבן קירות שלהם, הדם הזורם כמעט שחור. . העורק pulsate בעוצמה ויש קירות עבים, בזמן IVC יש קירות דקים, דחוס/הרחבה בקלות על תמונת מסך כאשר scanhead מועבר ולמטה. האתר מצדו תהיה נראית לעין, כמו הווריד להיות מורחבים, החומה וריד יגיע לנקודה. כל כגון נוצר בתוך יהיה מוצק תחת אולטראסאונד הדמיה, לא ידחס בקלות כמו החומה וריד. הווריד ידחס בלבד מעל מצדו, שבו אין כגון נוצר.
    7. בעת איתור של IVC ואתר מצדו, מרכז אותם על נקודת המוקד של האולטרסאונד, על מנת להשיג את התמונה המדויקת ביותר.
      1. אם התמונה היא. חשוך מדי בשביל לראות בבירור, להתאים את הג'ל ולהסיר כל בועות האוויר המוליך עצה כותנה.
      2. במידת הצורך, להטות את scanhead 45° שמאלה או ימינה והתאם את הפלטפורמה בעלי חיים כדי לראות בבירור את הווריד. זאת אם יש הפרעה scanhead. בתרחיש זה, צריך הווריד לדימות בזווית של הצד-כדי למנוע את התפר.
        הערה: תמונת התאבכות נגרם בדרך כלל על-ידי כתמים כהים בעור החיה, הפצע המסכן תפר השמה, או בועות הג'ל אולטרסאונד.
    8. באמצעות התוכנה, לצלם תמונות של כל מבנה הרצוי ולעשות מידות באמצעות כל כלי מדידה. המידות הנפוצות כוללות שטח חתך הרוחב של כגון או רוחב של אתר מצדו.
    9. שנה את מצב הדמיה הדופק-גל דופלר כדי לבצע מדידות זרימת דם. מצב זה מאפשר ההדמיה של זרימת הדם בכלי הדם, מדידת מהירות זרימה, בין משתנים אחרים.
    10. להטות את הפלטפורמה ניתוח להורדת בקצה האחורי של החיה.
    11. לשנות את הזווית/מיקום scanhead כך הוא ייצור קשר עם הג'ל בזווית של-30 מעלות מהקצה האחורי של החיה.
    12. למקם מחדש את פלטפורמת בעלי חיים ואת scanhead. להעביר את IVC ואת מצדו במידת הצורך.
    13. לבצע מדידות זרימת הדם סביב האתר מצדו לאשר stasis ולקחת את כל התמונות הרצוי. המידות הנפוצות של זרימת הדם לכלול מהירות ממוצעת, מהירות שיא מהירות החציוני.
    14. שמור כל המידות או מתמונות שצולמו.
  3. ניקוי ושחזור בבעלי חיים
    1. הרימו את scanhead אל המיקום îøõ ותמקם פלטפורמה חיות למיקומו הראשוני, גם כן.
    2. להסיר את עודף ג'ל את החיה עם גזה. עשה זאת בעדינות כדי לא להיות קרע את התפר הפצע.
    3. הסר את המדחום של הרקטום של החיה ולקחת את החיה את הפלטפורמה.
    4. למקם את החיה בכלוב של חממה 34 מעלות צלזיוס.
    5. נטר את החיה לפני התאוששות. הנוהל הוא קטן מאוד, לא פולשנית. החיה יתעורר במהירות. המשך ניטור חיה בימים הבאים לפי סעיף 1.6 של פרוטוקול זה.
    6. נקה פלטפורמת בעלי חיים עם גזה וחומר חיטוי.
    7. לנגב scanhead עם גזה ומים מזוקקים.
      התראה: לנקות את scanhead בעדינות ורקעם מים מזוקקים.
    8. חזור על שלב 2 עבור החיה הבאה.
      1. אם עשיתי עם כל הנושאים, ודא כי כל תמונות, הקלטות נשמרו. ואז לבטל את כל ציוד ותוכנות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Stasis פקקת ורידים מודל

במודל stasis, עכברים הם מרדימים, חתך לחשוף הכלילי התחתון (IVC). החתך נעשה בצד השמאלי או הימני של העכבר במקום פתיחה של קו האמצע הבטן באופן לא אפריע החללית אולטרסאונד. את שרירי הבטן ואת העור הם מקפלים לאחור כדי לחשוף את IVC (איור 1). ראשית, בצד סניפים מאתרים 6-0 בתפר משי (איור 2). לאחר מכן, IVC מופרדת מן העורקים באמצעות עמום, המשי ממוקם בסביבה IVC (איור 3 א). IVC זה מאתרים בתפר משי 6-0. הרחבה של IVC להלן האתר מצדו הוא מעיד על הפרעה מוצלחת של זרימת הדם (איור תלת-ממד). לבסוף, חלל הצפק, העור ומאחים בחזרה באופן רציף (איור 3E).

פיקוח על היווצרות כגון באמצעות בדיקת אולטרה סאונד

כפי שהראתי קודם לכן, אולטרסאונד בתדירות גבוהה, אשר משמש בדרך כלל כדי להעריך פקקת ורידים בהגדרות קלינית, ניתן למדוד כגון היווצרות והרזולוציה לאורך זמן במודל מאתר ניסיוני. השתמשנו עם מערכת מיקרו-הדמיה בתדר גבוה12. לפני מצדו, ניתן לזהות את IVC בתצוגה האורך. לאחר מצדו של הווריד, ניתן לאבחן את ההצלחה של הפרוצדורה. מצב PW-דופלר יכול לשמש כדי לקבוע את מהירות זרימת הדם לפני (34.8 מ מ/s) ואחרי (5.6 מ מ/s) מצדו. מכיוון thrombi הן ודחוסה יותר זורם דם, אנחנו יכלו להעריך את כגון בנוי בתוך IVC באמצעות בדיקת אולטרה סאונד, 24 שעות לאחר מצדו (איור 4A). בדיקת אולטרה סאונד מאפשר כימות של המהירות של זרימת הדם בכלי הדם באמצעות צבע דופלר. כפי שמוצג באיור 4B, אנו יכולים למדוד את זרימת בווריד לפני מצדו, מעריך את ההפרעה של הזרם לאחר מצדו, כאשר כגון נוצר. נתונים מהתוכנית מעבדה גודל כגון ממוצע של 0.22 מ מ ±2 4.85 ב 24 שעות ואת 5.05 0.47 מ מ ±2 ב 48 שעות (אומר ± SEM).

Figure 1
איור 1. הקפאה דגם: הליך לחשוף הכלילי התחתון. (א) הסרת שיער העכבר מהבטן באמצעות קרם להסרת שיער. (ב) חתך הראשון מתבצע בצד שמאל של הבטן, עם השני הגחון אחד (ג) משמאל לימין. (ד) מבט סטרילית רטובה משמש exteriorize המעיים ולחשוף את הכלילי (IVC) ואת סניף בצד (SB). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
באיור 2. הקפאה דגם: הליך מאתרים ומפסיקים את הענף בצד. (א) תערוכות של IVC, SB. (B) המיקום של המשי תפר מתחת SB. (ג) מצדו של אירוו SB.: וריד הכליה השמאלית. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3. הקפאה דגם: הליך מאתרים ומפסיקים הכלילי התחתון. (A-B) עמום להפריד את IVC אבי העורקים. (ג) השמה של המשי תפר מתחת IVC. (ד) מצדו של IVC. הרחבה של IVC הוא ציין. (ה) שרירי הבטן והעור סגורים בנפרד. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 4
באיור 4. פיקוח על היווצרות כגון באמצעות אולטראסאונד הדמיה- (א) אולטרסאונד נציג תמונות בעבר, מיד אחרי ו- 24 שעות לאחר מצדו של IVC. (ב) נציגים תמונות של הדם לזרום מהירות מתואר על ידי דופלר צבע באמצעות עיבוד צבע. קנה המידה של טווחים זרימת דם בצבע מאדום לצהוב כדי לתאר גבוה זרם נמוך. את החיות מחוברים היעדר זרימה מתואר בהעדרה של צבע. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

ישנם מספר צעדים קריטיים על היווצרות כגון ורידים מוצלח באמצעות מודל ההקפאה. אינדוקציה של פקקת ורידים הוא יותר מאתגרת בעכברים ישנים בשל הצטברות שומן סביב הכלילי התחתון של אבי העורקים. באופן אידיאלי, עכברים לעבור הליך זה צריך להיות 8 - בן-10 שבועות. נהדר להקפיד שלא לגרום נזק אנדותל IVC במהלך עמום, קשירה. בנוסף, זה הכרחי כדי לשמור את החיה בתוך חממה 34 מעלות צלזיוס במשך לפחות 30 דקות לאחר הניתוח וכדי להחזיר אותה החברה של חיה אחרת רק לאחר החלמה מלאה. כאשר הניתוח נעשה כראוי, בעלי החיים מתנהגים יפה להפליא במהלך הטיפול לאחר הניתוח. הם מציגים ללא תופעות לוואי חמורות כמו צליעה, paresis או בריחת שתן. הם עשוי להפגין תנועה מופחתת וטיפוח יציבה במקצת שפופות מיד לאחר הניתוח, אך זו לא נתפסת לעתים קרובות כל עוד שיכוך כאב יעיל וביצעו הניתוח כראוי.

המודל stasis מייצרת כגון גדול עם מדידות גודל לשחזור של עכבר אחד למשנהו. כמו אצל בני אדם, האנטומיה של מערכת ורידים משתנה בין עכברים, הנושא של IVC סניף הפרעה טופלה לאחרונה את היצרות ו הדגמים stasis DVT13,14. ברנדט. et al. הראה כגון היווצרות הנגרם על ידי הגבלת זרימת נמנעה כאשר הענפים צד היו ממוקמות < 1.5 מ מ של אתר מצדו IVC. עם זאת, היווצרות פקקת הנגרם על ידי הגבלת זרימת בעכברים לא הושפע לצד סניף מצדו13,15,16. כמו כן דווח כי ההשתנות של IVC בצד סניפים ב C57Bl6 העכבר למתח יש השפעה חשובה על היווצרות כגון שנגזרות מוחלטת מצדו של IVC14. התברר כי לא נבדק בצד מסתעף תוצאות ב גודל קריש קטן יותר מבחינה סטטיסטית לעומת שולט עם ענפים בצד מחוברים. המחקר שלנו מציע גם את מצדו של הצד סניפים המיוצר עקבי כגון היווצרות ואת גודל. אולם, הווריאציה אנטומי בתדירות הגבוהה ביותר ב- C57Bl/6 הוא שהנוכחות של 2 חזרה מסתעף (98% מהעכברים)14. הוכח כי מפריע סניפים האחורי יש את ההשפעה הגדולה ביותר על כגון גודל. המתודולוגיה הנוכחי לא התייחסו ההשפעה של ענפים האחורי, אשר יכול להיות מופרע באמצעות עט עורק דופן בית14טמפרטורה נמוכה. אולם, הפגנו הזה מצדו של IVC, בצד סניפים, גרמו כגון עקבי-צורה C57Bl/6. לבסוף, כמו בעבר הראו, מערכת סאונד בתדירות גבוהה מאפשרת את המדידה המדויקת של כגון גודל והוא יכול לשמש עבור מחקרים ארוכי טווח והתרגום של כגון היווצרות ורזולוציה12,13 ,15.

חיסרון מרכזי אחד של המודל stasis הוא חסימה מלאה של זרימת הדם, אשר מפחית את אפקט מקסימלי של סוכנים מנוהל דרך הווריד על הקיר כגון ואת הווריד. זה הופך להיות נושא חשוב כשאדם רוצה לבחון את ההשפעה של סוכן תרופתי. אם השפעת סמים ספציפי שצריך להיבדק, אחד מעדיף באמצעות מודל היצרות13 או ה electrolytic דגם17. שני הדגמים לייצר thrombi בנוכחות זרימת הדם רציפה, המאפשרות בדיקה של סוכנים אנטי מקריש חדשים עבור DVT ולמניעתה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי מענק של הלב ועל קו הבסיס של קנדה על ידי מוריס וקרן משפחת בלה Fainman. המחברים רוצה להודות ורוניק מישו עזרה טכנית עם מערכת הדמיה של סאונד VEVO770.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
6-0 perma-hand silk suture Ethicon 706G
Surgical Scissors Fine Science Tools 20830-00
Suture tying forceps Fine Science Tools 20830-00
blunt forceps (straight and curved) Fine Science Tools 20830-00
Needle Driver Fine Science Tools 13002-10
Moria Spring Scissors Fine Science Tools 15396-00
1ml syringes BD Biosciences
26G needles Becton Dickinson & Co.
VEVO 770 High Resolution Imaging System Visualsonics No longer sold
SR Buprenorphine ZooPharm Given to LDI by Vet
Surgery Microscope Leica Leica M651
Systan eye oinment Alcon 288/28062-0
2x2 sterile Gauze CDMV #104148
Cotton Tip Applicators from JGH
Transpore hypoallergenic surgical tape CDMV #7411
Ultrasound gel (Aquasonic-100) Dufort & Lavigne #AKEN4061
Incubator From JGH
Isoflurane Dispomed
Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment Dispomed
Hair remover Nair
Water heated hard pad Braintree Scientific, Inc. #HHP-2
Gaymar heater water pump TP500 MATVET Inc. #R-500305
Infra-red heating lamp electrimat inc. #1R175R-PAR
Mouse rectal temperature prope emkaTECHNOLOGIES
Sterile water From JGH

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review. Eur J Vasc Endovasc Surg. 25, (1), 1-5 (2003).
  2. McGuinness, C. L., et al. Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi. Thromb Haemost. 85, (6), 1018-1024 (2001).
  3. Singh, I., et al. Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells. Circulation. 107, (6), 869-875 (2003).
  4. Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits. Ann Nucl Med. 8, (3), 193-199 (1994).
  5. Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease. Thromb Haemost. 89, (2), 256-263 (2003).
  6. Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom. J Nucl Med. 41, (6), 1056-1064 (2000).
  7. Wakefield, T. W., et al. Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy. J Vasc Surg. 31, (2), 309-324 (2000).
  8. Robins, R. S., et al. Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice. Blood. 121, (4), 692-699 (2013).
  9. Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis. Blood. 127, (6), 769-777 (2016).
  10. Laurance, S., et al. Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. (2017).
  11. Diaz, J. A., et al. Critical review of mouse models of venous thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32, (3), 556-562 (2012).
  12. Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. In vivo monitoring of venous thrombosis in mice. J Thromb Haemost. 10, (3), 447-452 (2012).
  13. Brandt, M., et al. Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches. Clin Hemorheol Microcirc. 56, (2), 145-152 (2014).
  14. Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model. J Thromb Haemost. 13, (4), 660-664 (2015).
  15. Luther, N., et al. Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution. Circ Res. (2016).
  16. Subramaniam, S., et al. Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development. Blood. 129, (16), 2291-2302 (2017).
  17. Diaz, J. A., et al. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104, (2), 366-375 (2010).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics