Fare Distal kolostomi, C57BL/6 farelerde saptırma kolit roman modeli

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Fare distal kolostomi insan saptırma kolit, ağırlıklı olarak Lenfositik kolit dışkı akışından hariç iki nokta üst üste segmentinde için bir fare modeli sağlar.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Kleinwort, A., Döring, P., Hackbarth, C., Patrzyk, M., Heidecke, C. D., Schulze, T. Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice. J. Vis. Exp. (137), e57616, doi:10.3791/57616 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Saptırma kolit (DC) hastalarda aktarma enterostomy bir sonucu olarak dışkı akışından hariç barsak segmentleri ile meydana gelen sık bir klinik durumdur. Bu hastalığın etyolojisinde kötü tanımlanmış kalır ama bu klasik iltihabi bağırsak hastalıkları Crohn hastalığı ve ülseratif kolit gibi farklı görünüyor. Bu hastalık gelişimine lider patofizyolojik mekanizmaları çözmeye yönelik araştırma ciddi bir şekilde uygun bir fare modeli eksikliği tarafından engel olmuştur. Bu iletişim kuralı, bağışıklık sisteminin rolü ve microbiome DC geliştirilmesi ile etkileşimi kolaylaştırır DC fare modeli oluşturur. C57BL/6 hayvanlar kullanarak bu modelde, distal kolostomi oluşturma, hariç tutulan barsak segmentleri iltihap orta hafif gelişimi tetikleme ve hallmark lezyonlar insan üreme dışkı akışından distal kolon parçaları hariç tutulur DC ile ılımlı bir sistemik inflamatuar yanıt. Fare modeli aksine, genetik olarak değiştirilmiş fare modelleri C57BL/6 arka plan üzerinde çok sayıda kullanılabilir. Bu hayvanlar modelimiz ile kombinasyonu bireysel sitokinler, kemokinler veya (Örneğin, interlökin (IL) -17; biyoaktif moleküllerin reseptörleri potansiyel rolleri sağlar Il-10, kemokin CXCL13, kemokin reseptörleri CXCR5 ve CCR7 ve sphingosine-1-fosfat reseptör 4) DC patogenezinde değerlendirilmek için. Congenic fare suşları C57BL/6 arka plan üzerinde kullanılabilirliğini büyük ölçüde farklı hücre türleri içinde etyoloji dahil DC rolleri kurmak için transfer deneyler kolaylaştırır. Son olarak, model mukozal bağışıklık etkilenen ve etkilenmeyen barsak segmentleri üzerinde etkileri (Örneğin, yerel microbiome veya yerel anti-inflamatuar terapi modifikasyonu) yerel müdahalelerin değerlendirme imkanı sunmaktadır ve Tarih sistemik bağışıklık homeostazı.

Introduction

Son yıllarda klasik iltihabi bağırsak hastalıkları (IBDs; farklı olmayan bulaşıcı kolit varlıkların önemli bir sayı i.e., Crohn hastalığı veya kolit ulcerosa) klinik ve histopathologically insanlarda karakterize. Uygun hayvan modeller kıt olduğundan bu kolit formları gelişimine lider patofizyolojik mekanizmaları tamamen kısmen anlaşılır değil. Saptırma kolit son zamanlarda açıklanan bu varlıklar biridir. Her ne kadar terimi 1980 yılında Glotzer1tarafından icat edildi, benzer bir fenotip ilk açıklaması Morson2tarafından 1972 yılında verildi. Hastalık enterostomy aktarma ile hastaların % %50 91 olarak gelişir ve3,4klinik şiddeti değişir. Amerika Birleşik Devletleri yaklaşık 120.000 kolostomi hastalarda yıllık insidansı göz önüne alındığında, bu hastalık varlık bir önemli sağlık sorunu teşkil etmektedir.

Bu iletişim kuralı geliştirme genel amacı bu kolit tetikleyici içinde insan DC görülen benzer kullanır ve bu birincil histopatolojik özellikler insan hastalık üretir fare bir DC modeli sağlamaktı. Fare kolit modellerin aksine, genetiği değiştirilmiş hayvanlar (Örneğin, 7 Il-transgenik fareler, N-cadherin baskın olumsuz fareler veya TGFβ- / - fareler), kolit indüksiyon bizim modelindeki gerektirmez uygulanması kimyasal maddeler (Örneğin, dextran sülfat sodyum (DSS) - bağlı kolit veya trinitrobenzene sülfonik asit (TNBS) - bağlı kolit) veya belirli hücre popülasyonlarının (olduğu gibi CD45RByüksek aktarım bağışıklık eksik farelerde transferini rahatsız edici kolit model) (bir reklam için bkz:5). Modellerin aksine, bizim DC modelinin sağlam bağışıklık sistemi bağışıklık mekanizması değerlendirilmesi dahil DC geliştirme sağlar. Hariç tutulan barsak bölümüne mukozal inflamasyon sınırlandırılması onun yankısı değerlendirilmesi üzerinde bağırsak bağışıklık diğer bölmeleri bağışıklık homeostazı gastrointestinal sistem diğer bölgelerinde mukozal bağışıklık sağlar (Örneğin , Peyer's yamalar ve mesenteriale lenf bezleri) ve tüm organizmanın bağışıklık homeostazı. Son olarak, bizim model hem yerel microbiome hem de beslenme antijenleri için normal yerel ortamdaki değişikliklerden kaynaklanan yerel inflamatuar uyaranlara kontrol mekanizmaları araştıran için uygun bir araç teşkil etmektedir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Tüm yöntem tanımlamak burada hayvan hastalıklarıyla ilgili hükümet yetkilisi (Landesamt für Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit und Fischerei Mecklenburg-Vorpommern, (LALLF M-V)) tarafından onaylanmış olması.

1. ameliyat öncesi bakım ve hayvan hazırlanması

  1. Hayvan tesisi vardıklarında, hayvanlar (C57Bl/6) benzer boyutta gruplara ayırmak, her grup birlikte kafes ve gruplar deneyler sabit tutmak.
    Not: hayvanlar aynı cinsiyetten kullanın. Açıklanan sonuçlar erkek fare ile elde edilmiştir.
    Not: erkek hayvanlar, böylece bir hiyerarşi kurulan olduklarında 7 hafta-in yaş birlikte başlayan kafes grupları kullanılıyorsa, böylece deneyler sırasında saldırgan davranış riskini en aza.
  2. En az bir hafta önce ameliyat, yüksek bir enerji geçiş (> 14 MJ/kg) ve yüksek protein (> % 20) tüm temel eser elementler ve vitamin içeren yem (ayrıntılı bilgi için bkz: malzeme listesi).
    Not: tüm fareler tartmak en az 25 g ameliyat yapıldığında sizi temin ederim.
  3. Anestezi ve analjezi ketamin (87 mg/kg ı.p.) ve xylazine hidroklorür (13 mg/kg ı.p.) mayi enjeksiyonu ile ikna etmek. Mekanik stimülasyon, örneğin ayak adım, motor yanıt olmadan fare tahammül kadar bekleyin.
  4. Narcotized fareyi bantları istikrarlı işlemi sırasında konumlandırma ve ezici bir vücut ısı kaybı kaçınarak güvence altına alınması operasyon masasında konumlandırılmış bir ısı altlık üzerine sırtüstü pozisyonda güvenli.
    Not: Isı temelini yüzey sıcaklığı 36 ° c ile 40 ° C arasında olmalıdır; Ameliyathane sıcaklık 21 ° c olmalıdır

2. distal kolostomi işlemi

  1. Karın saç tıraş. Ameliyat başlamadan önce dezenfekte işlemi alanını kullanarak üç kez alkol % 70 ve bir iodophor. Aseptik koşullar için güvence altına almak için operasyon alanı asmak.
  2. Karın kasları ve linea boyunca karın zarını incising tarafından 15-mm medyan laparatomi gerçekleştirmek alba, böylece kan kaybını en aza.
  3. İki DeBakey atravmatik forseps kullanın, dikkatle çekum, terminal ileum ve artan ve enine kolon periton boşluğundan çek.
    Not: kesinlikle mezenterik yapıları için yaralanma önlemek için bağırsak mekanik işleme sınırlamak için dikkatli olun.
  4. Cecal pole, artan kolon ve ince bağırsak (Şekil 1a ve 1b) tanımlayın.
    Not: Doğru artan kolon kolostomi doğru yerleşimini temel tanımlamasıdır. İleocecal bölge anatomisi belirsiz olduğu durumlarda Peyer's yamalar varlığı bağırsağın tanımlar ve iki nokta üst üste kurulan dışkı varlığını karakterize.
  5. Gelecekteki kolostomi konumunu belirlemek için bir cetvel kullanın. Bu 20 mm distal ileocecal Vana distal kolostomi için yer almalıdır.
  6. Sağ üst kadranda Karın duvarındaki bir ikinci 3 mm kesi yapmak. Önceden tanımlanan iki nokta üst üste segment döngü bozmaya değil dikkatli olmak bir döngü oluşturmak için bu kesi yoluyla çek.
  7. Dikkatli bir 22'lik esnek IV Kanül mesocolon üzerinden geçmek. Mezenterik damar yapıları zarar vermemesi için dikkat ediniz.
  8. Bağırsak periton boşluğuna dönün.
  9. Basit dikiş ve tekrar emilebilen dikiş (Örneğin, polyglactin 910 veya polyfil 4-0 1/2 c) kullanarak cilt esnek tüp her iki ucunu düzeltmek.
  10. Laparotomi kapatmadan önce sıvı resüsitasyon mayi iğne 0,5 mL % 0,9 serum kullanarak gerçekleştirin.
  11. Karın zarını ve kas katmanı Tekrar Emilebilen dikiş (Örneğin, polyglactin 910 veya polyfil 4-0 1/2 c) kullanarak sürekli dikiş ile kapatın. Cilt Tekrar Emilebilen dikiş (örneğin, polyglactin 910 veya polyfil 4-0 1/2 c) kullanarak sürekli dikiş ile kapatın.
  12. Exteriorized kolon döngü iyi makas kullanarak bir alt toplam transeksiyon gerçekleştirerek açın. Bıçaklanmasından tüm yaralanma kaçının. İki nokta üst üste tamamen transect değil.
  13. Karın zarını için üç tek tam-kalınlık dikiş kullanarak her kolostomi açılış saptamak ve monofil, absorbe dikiş kullanarak cilt (Örneğin, polydioxanone veya monofil 6-0 3/8s). Fonksiyonel bir bitiş kolostomi olduğunu, afferent döngü ve müköz fistül olan efferent döngünün açıkça bu noktada (Şekil 1 c) ayrılır.
    Not: Operasyon süresi 20 dakikadan daha az sıvı, ısı kayıpları sınırlamak için olması gerekir.
  14. Sonra ameliyat, bitirme bir ultrasonik banyo üretici yönergelerine uygun bir dezenfeksiyon aldehit içermeyen çözüm kullanarak aletler dezenfekte.

3. sahte işlem (Colotomy)

  1. 1.1 adımları gerçekleştirin. 2.4.
  2. Gelecekteki colotomy konumu belirlemek için bir cetvel kullanın. Colotomy ileocecal Vana aynı mesafe kolostomi deneysel grubunda olarak yerleştirilmiş olmalıdır.
  3. İki nokta üst üste açık en az 2/3 iyi makas kullanarak onun çevresi.
  4. Yakın colotomy tek bir katman ile tam kalınlıkta bir kullanarak monofil, absorbe dikiş dikiş kesintiye (Örneğin, polydioxanone, monofil 6-0 3/8s).
    Not: Operasyon süresi 20 dakikadan daha az sıvı ve termal kayıp sınırlayan bir experimented cerrah olmalıdır.
  5. 2.10 adımları gerçekleştirin. , 2.11. ve 2.14.

4. ameliyat sonrası bakım

  1. Hayvanlar için onların kafes dönmek. 37 ° C (Örneğin, bir kızılötesi lamba ile) iyi bir atmosfer sağlar fare tam olarak uyanık olana. Daha sonra fareler bir sıcaklık ve nem düzenlenir ortamda (21 ° C; % 30 ± % 10 bağıl nem) tutmak. Yiyecek ve içme suyu ücretsiz erişim sağlar. Sıvı alımını kolaylaştırmak için suya batırılmış ek hayvan yemi sağlar.
  2. 0.1 mg/kg vücut ağırlığı buprenorfin enjekte edilerek ameliyat sonrası analjezi başlatmak hayvanlar mekanik stimülasyon yanıtı gösterdiğinizde SC. Solunum depresyon önlemek dikkatli olun.
  3. İçme suyu ile 1 mg/mL tramadol sürekli analjezi için ameliyat sonrası ilk haftasında ek.
  4. Hareketlilik nedeniyle azalan sıvı alımı için telafi etmek için azaltılmış, ameliyat sonrası ilk haftasında bir katı iç yastık içinde belgili tanımlık kafes kaynağı.
  5. İlk hafta, ilk ay kalan sırasında her iki günde ve üçüncü hergün Kleinwort vd içinde açıklanan hastalık şiddeti puanı kullanarak ayın ikinci sırasında günlük sırasında hayvanlar ve skor hayvan davranışları tartmak 6.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Cerrahi, hem deneysel (kolostomi) ve bunu sham (colotomy) iyi tolere edilir. Cerrahi ve perioperatif yönetimi doğru yapıldığında perioperatif mortalite % 10 fazla olmamalıdır. Ameliyat sonrası ilk haftasında her iki deneysel ve sahte gruplarında önemli kilo kaybı görülür. Sham grubunun hayvanlar onların ağırlık nadir genellikle dördüncü ameliyat sonrası gün doğru ulaşmak ama bir günde daha sonra deney grubu oluşur. Kilo kaybı daha ilk vücut ağırlığının % 21.7 ulaşan deney grubu telaffuz edilir. Buna ek olarak, sham hayvanlar onların ilk vücut ağırlığı (Şekil 2)6%10,8 kaybetmek. Ameliyat sonrası ilk hafta kilo nadir sonra vücut ağırlığı sürekli olarak deneysel her iki grup, ama daha yavaş eğimli deney grubu içinde yükselir. İşaretler ve belirtiler şiddetli bağırsak iltihabı (yani, kanlı akıntı veya sıvı barsak hareketleri ne deneysel ne de sahte grup6oluşur). İlk 60 gün boyunca toplam mortalite postoperatively kolostomi grubunda % 40 ve colotomy grubunda yaklaşık % 10 civarındadır. En fazla ölüm ilk ameliyat sonrası hafta (deneysel grubunda % 61, sham grubunda % 66) sırasında ortaya çıkar. Ölüm nedenleri Şekil 3' te gösterilmektedir.

Farelerde distal kolostomi ağırlıklı olarak Lenfositik kolit hallmark histolojik özellikler insan DC üreten gelişiminde sonuçlanır. Bu değişiklikler bağırsak hariç tutma süresi ile artırın. Crypt uzunluğu önemli ölçüde dışlanan bağırsak segmentlerinde kısaltılır. Bu kısalma istatistiksel anlamlılık dışkı saptırma (Şekil 3a) 14 gün sonra ulaşır. Goblet hücre taşıyan crypt uzunluğu hariç tutulan barsak segmentleri (Şekil 3b) 30 gün sonra azalır. Mutlak goblet hücre sayıları 14 ameliyat sonrası gün (Şekil 3 c) sonra kriptalarının dışlanan barsak segmentindeki içinde de önemli ölçüde azaltılır. DC, mukozasında, lenfoid folikül gelişimi hallmark lezyon dışkı sapma daha uzun bir süre gerektirir. Lenfoid folikül sayısının artmasına iki hafta gibi erken görülebilir rağmen farklılıklar iki ay sonra (rakamlar 5a-c) önemli çıkıyor. Daha önce açıklanan tüm histopatolojik değişiklikleri daha içinde belirgin dışlanan barsak segmentlerinin proksimal bölgelerde distal. Akut iltihap belirtisi olarak tipik bir nötrofilik infiltrat genellikle (rakamlar 5 d-e) gözlenen değil.

Yerel bağırsak iltihabı sistemik bir yankısı belirtisi olarak nötrofil sayısı önemli ölçüde kolostomi hayvanlarda ameliyattan sonra 14 gün kadar erken artmıştır. Bu fark (60 gün) gözlem döneminin sonuna kadar korunur. Trombosit sayımları biraz sonra 60 gün (Şekil 6) kolon saptırma ile hayvanlarda artmıştır. Hemoglobin düzeyi ve hematokrit 14 gün sonra kolostomi grubu operasyonda sahte grubuna kıyasla azalmıştır.

Vitamin eksikliği kemirgenler neden oluyor demek corpuscular birim (MCH) azaltılmış ve corpuscular hemoglobin (MCV) değerleri7demek gösterilmiştir. Bizim modelinde, her iki bu parametre ilk artışlar 14 ve 30 gün sonra görüyoruz. MCV ve MCH için normal değerler uzun takip (Şekil 7) sonra verir. Bu o distal kolostomi klinik olarak anlamlı vitamini eksikliği uzun süreli takip sırasında yol açmadığını gösterir.

Figure 1
Resim 1: cecal bölge ve cerrahi anatomisi. (a) ameliyat sonrası anatomi grafik gösterimi. (b) topografya cecal pol ve anatomik yapılar. kolostomi açıklıklar (c) grafik gösterimi. Şekil 1a Kleinwort vd.6' dan değiştirildi. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 2
Şekil 2: vücut ağırlığı geliştirme. Vücut ağırlığı preoperatif vücut ağırlığının yüzde olarak gösterilir. Vücut kolostomi eğrileri ağırlık ve ilk ameliyat sonrası kilo kaybı (p < 0.001) sham grubuna göre kolostomi grubunda daha yüksek (colotomy) hayvanlar ortaya sham. Değerleri arasında 21-26 hayvanlar grubu başına ortalama ± standart hataları anlamına gelir (21 hayvanlar alınan değiştirmem; 26 hayvanlar vardı sahte grup). Bu rakam Kleinwort vd.6' dan değiştirildi. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3: ölüm nedenleri. Komplikasyonlar all-neden ölüm oranının yüzde olarak gösterilir ve bir pasta grafiği (kolostomi (a) grubu, sham (b) grubu) gösterilmiştir. Ameliyat sonrası komplikasyonlar Ģunları Nekropsi tarafından belirlenmiştir. İsraf sendromu sürekli kilo kaybı ilk vücut ağırlığı ve no Nekropsi diğer bulgular % 33 daha büyük olarak tanımlanmıştır. Ileus ve anastomoz kaçağı Nekropsi tanısı konuldu. Stoma komplikasyonlar peristomal apse ve mukokutanöz ayırmalar tanımlanmış. Diğer komplikasyonlar yara yırtılması laparotomi çekum, iskemi, oluşan ve durumlarda Nekropsi belli değil. Ameliyat sonrası komplikasyonlar Ģunları dağılımında önemli farklılıklar gruplar arasında görüldü (p = 0.021, Fisher kesin testi için ilâ 6 × 6 acil durum tablo iki taraflı analizi kullanılarak analiz). Kolostomi grubunda 39 hayvanlar ve 29 sham grubunda vardı. Bu rakam Kleinwort vd.6' dan değiştirildi. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 4
Şekil 4: Crypt uzunluğu ve goblet hücre nüfus. Crypt uzunluğu ve goblet hücre sayıları periyodik asit Schiff boyama sonra rektum bölümlerini parafin kullanılarak belirlenmiştir. (a) crypt uzunluğu önemli ölçüde saptırma kolit (DC) hayvanlarla rektum azalma. (b) crypt goblet hücre taşıyan bölgenin uzunluğu ölçülür ve bir oranı tam crypt uzunluğa ayarlayın. 30 ve 60 gün postoperatively, DC grubunda crypt uzunluğu taşıyan goblet hücrelerinin yüzde azalma. (c) Goblet hücre sayıları DC hayvanlarda sham grubuna göre önemli ölçüde azaltıldı. Grafikler (a) ile (c) grubu başına 5-9 hayvanlar arasında anlamına gelir ve standart hataları göster (kolostomi 14 ve 30 gün, sham 14 gün: n = 8; kolostomi 60 gün: n = 5; 30 ve 60 gün sham: n = 9); ∗p < 0,05; ∗∗p < 0,01. Bu rakam Kleinwort vd.6' dan değiştirildi. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 5
Şekil 5: lenfoid follikül ve inflamatuar infiltratlar. (a) lenfoid folikül yönlendirilir iki nokta üst üste ve sham hayvanların Hematoksilen ve eozin ile lekeli rektum parafin bölümlerinde sayıldı. 5-9 hayvanlar grubu başına grafik anlamına gelir ve standart hataları gösterir (kolostomi 14 ve 30 gün, sham 14 gün: n = 8; kolostomi 60 gün: n = 5; 30 ve 60 gün kontrol: n = 9), ∗p < 0,05; ∗∗p < 0,01. (b) ve (c) temsilcisi örnek olarak rektum kolostomi (b) ve (c) sham hayvanların 60 gün bölümlerini postoperatively Hematoksilen ve eozin ile lekeli. Önemli bir lenfoid folikül (∗) kolostomi fare mukoza içinde mevcut. Ölçek çubukları temsil 100 µm. (d) ve (e) chloroacetate ile boyama esteraz tepki parafin bölümlerinde nötrofil granülosit algılamak için gerçekleştirildi. Yönlendirilir rektum kesit üzerinde bir akut enflamatuar nötrofilik infiltrat ne kolostomi grubunda (d) ne de sahte hayvanlarda (e) kadar 60 gün postoperatively gözlendi. Ölçek çubuklar 100 µm gösterir. Bu rakam Kleinwort vd.6' dan değiştirildi. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 6
Şekil 6: nötrofil ve trombosit sayımları. Kan sayımı venöz kan örneklerinin bir veteriner Hematoloji Çözümleyicisi tarafından belirlenmiştir. (a) nötrofil sayısı önemli ölçüde sahte hayvanlar için 60 gün postoperatively kadar karşılaştırıldığında kolostomi grubunda artış. (b) trombosit sayımları biraz kolostomi grubunda 60 gün postoperatively yüksek. 5-9 hayvanlar grubu başına grafik anlamına gelir ve standart hataları gösterir (kolostomi 14 ve 30 gün, sham 14 gün: n = 8; kolostomi 60 gün: n = 5; 30 ve 60 gün sham: n = 9), ∗p < 0,05; ∗∗p < 0,01. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 7
Şekil 7: kırmızı kan hücresi parametreleri. Kan sayımı venöz kan örneklerinin bir veteriner Hematoloji Çözümleyicisi tarafından belirlenmiştir. (a) hemoglobin ve hematokrit (b) önemli ölçüde sahte grubuna göre kolostomi grubunda azalma. (c) corpuscular birim (MCH) önemli ölçüde yükseltilmiş 14 ve 30 günde postoperatively kolostomi grup sham grubuna kıyasla ama 60 gün sonra normale döndü demek. (d) ortalama corpuscular hemoglobin (MCV) değerleri 30 gün sonra ama sonra artık postoperatively kolostomi grubunda 60 gün hayvanlar sham kıyasla yüksek. 5-9 hayvanlar grubu başına grafik anlamına gelir ve standart hataları gösterir (kolostomi 14 ve 30 gün, sham 14 gün: n = 8; kolostomi 60 gün: n = 5; 30 ve 60 gün sham: n = 9), ∗p < 0,05; ∗∗p < 0,01. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Bu protokol için güvenilir bir şekilde sunulan DC fare modeli insan DC (Örneğin, iltihaplı barsak segmentleri, crypt kısalma ve indirimleri submukoza içinde lenfoid folikül gelişimi de novo histopatolojik özellikler üretir goblet hücre sayıları). Bu avantaj, kenara bu model çok benzer bir tetikleyici faktör tarafından indüklenen ve en çok etkilenen insanlarda olduğu gibi klinik seyir için hafif önem derecesi Orta olarak sunar.

Tekrarlanabilir sonuçlar ve kabul edilebilir perioperatif ölümcül elde etmek için biraz pratik mikrocerrahi tekniklerinde gereklidir. Ancak, kolostomi ve sham işlem (colotomy) çok düşük perioperatif Scotlan ile gerçekleştirilebilir (< % 10). Büyük önem operasyonel bazı adımlar vardır: 1) kolon ve terminal ileum kimliğini tam olarak teşhis. Nerede ileocecal bölge anatomisi açık durumda, iki nokta üst üste terminal ileum ve kurulan dışkı varlığı tarafından Peyer's yamalar varlığı ile belirlenebilir. 2) zaman kolostomi döngü exteriorizing, bıçaklanmasından, böylece mezenterik iskemi ve mekanik Ileus kaçınarak kıvranan değil emin olun. 3) zaman bıçaklanmasından esnek tüp ile delinme, böylece kanama ve mezenterik iskemi engelleyen bir gemi-Alerjik sektör seçilir sizi temin ederim. 4) Karın duvarındaki küçük kesi oluşturma için yeterli hemostaz denetle. Gerekirse, Termo-koagülasyon kas gemileri kanamayı durdurmak için kullanın. 5) kolon döngü en az üçte onun çevresi açıktır ve posterior duvar yeterince, böylece tam tıkanma dışkı geçiş distal barsak segmentleri için garanti exteriorized olduğunu temin ederim. 6) iki kolostomi ucu açık bir pasaj dışkı akışı çıkılamıyor çünkü daha yüksek enfeksiyon riskleri bir mekanik Ileus sonuçlanabilecek periton boşluğuna önlemek için cilt için de sabitlenir sizi temin ederim. Normalde, tüm cerrahi işlemler Büyüteç gözlük veya cerrahi mikroskoplar yapılabilir. Genel olarak, bu cihazların kullanımı eğitim gerektirir.

Cerrahi işlemler karmaşıklığı sadece orta olduğunda bile, birçok temel operatif ve perioperatif sorunu başarılı bir şekilde tekrarlanabilir sonuçlar ile deneme sonlandırmak için dikkate alınması gereken vardır.

Fareler sağlam bir çekum var bir kalıcı kolostomi ile uzun vadeli hayatta kalmak için gereklidir. Bir deney grubu ile proksimal değiştirmem ileocecal Vana bitişik bir ölüm oranı % 100 geri dönüşü olmayan kilo kaybı (veri gösterilmez) nedeniyle ameliyat sonrası ilk haftasında gösterdi. Bu nedenle, kolostomi site en az 20 mm distal Bauhin'ın Vana dan seçmek için son derece önem taşıyor. Bu gözlem kemirgen Sindirim fizyolojisi nedeniyle olabilir. Retrograd proksimal kolon çekum için taşıma bu türler oluşur. Çekum nerede bakteriyel mikrofloranın occurs8 tarafından besin sentezi. Distal değiştirmem hayvanlarla önemli vitamin eksiklikleri muzdarip musunuz uzun takip sonuçları sırasında normal MCV ve MCH değerleri gösterir. Ayrıca, hoşlanıp kemirgenler doğal ortamlarında beslenme davranışını önemli bir parçasıdır. Model oluşturma, biz son derece ilgili kalıcı kolostomi varlığı sonucu olarak hoşlanıp perturbing neden olabilir ki beslenme eksikliği (Örneğin, B vitamini doğumlu) vardı. Bu koşullar altında bir sorun besin erişimin sınırlı nerede olsa da, ancak, bu daha önce o hoşlanıp ücretsiz aşırı su ve beslenme dengelenmiş gıda9 ile deneysel koşullar altında beslenme önemini kaybeder gösterilmiştir . Bizim deneysel koşullar altında ameliyat sonrası besin alımı şartları optimize etmek için önemlidir. Biz yüksek protein içeriği vardı, protein kalitesi en iyi duruma getirilmiş ve enerji yoğunluğu artan hayvan yemi kullanılır. Hayvanlar bu diyet için en az iki hafta önce ameliyat acclimatized. Postoperatively, suya batırılmış besleme reklam libidum kolaylaştırmak gıda ve sıvı alımı için teklif edildi.

Fareler aynı cinsiyetten deneysel ve sahte gruplar halinde kullanmak çok önemlidir. Seks önemli ölçüde ders sadece sistemik inflamasyon aynı zamanda çeşitli kimyasal kaynaklı kolit modelleri10,11,12bağırsak iltihabı etkisi olduğu gösterilmiştir. Genel olarak, Erkek hayvanlar büyük inflamasyon, daha fazla crypt zararı, daha az yeniden oluşturma işlemi, daha yüksek düzeyde pro-inflamatuar sitokinlerin ve ağırlık kaybı10dan daha yavaş iyileşme ile daha belirgin hastalık geliştirecektir. Erkek hayvanlar kullanmanın bir diğer avantajı daha iyi tazminat ilk ameliyat sonrası kilo kaybı dönemin önde gelen daha iyi yaş eşlemeli preoperatif vücut ağırlıkları olduğunu. Yine de, dişi fareler iletişim kuralında belirli þebekeniz veya soru (Örneğin, seks hormonları DC tezahürü vardır ele alınması etkisi. Erkek fare kullanarak kararlı konut koşullarını korumak daha fazla çaba gerektirir. Erkek farelerin daha Agresif etkileşimleri yaralanma ve ölüm önde gelen yatkındır. Erkek farelerin bir baskın erkek ile kurulan hiyerarşileri yaşıyoruz. Grup hiyerarşisinde kurulduktan sonra sürekli kavga daha az yaygın13,14yaşında. Bu nedenle, farelerin girişte deneysel grupları hayvan tesisimizde en az iki hafta önce ameliyat oluşturuldu ve deneyler sona kadar bu gruplar saklanır. Genel olarak, 5-7 hayvanlar deneysel grupları bir kafeste tutulmuştu. Kararlı sosyal ve koşullar konut bakım sadece deneysel hayvan saldırgan davranış en aza indirmek için çok önemli oldu. Konut koşulları kilo alımı gibi immünolojik parametreleri15,16,17etkisi gösterilmiştir.

Kimyasal kaynaklı ve genetiği değiştirilmiş kolit modelleri duyarlılık fare suşları18,19,20arasında önemli ölçüde değişir. Mevcut iletişim kuralı C57Bl/6 fare, fare gerilme ile iyi tanımlanmış genetik arka plan ve güçlü için ara gösterir iyi karakterize bağışıklık sistemi21,22,23 yılında kurulmuştur inflamatuar dextran yanıtta sodyum kaynaklı kolit model20 sülfat ve bir prototip Th1 zorlanma23olarak kabul edilir. Diğer fare suşları kullanımı daha şiddetli hastalık faaliyetleri veya Th2 çevre gerekli olduğunda kabul edilebilir.

Özet olarak, bizim iletişim kuralı çeşitli bağışıklık hücre tiplerinin, sitokinler, kemokinler ve diğer sinyalleme molekülleri DC patogenezinde rolü değerlendirmek için değerli bir araç teşkil etmektedir. Genetik olarak değiştirilmiş fare modelleri çok sayıda C57BL/6 arka plan ile kullanılabilir ve modelimiz ile birleştirilebilir (Örneğin, fare IL-17 için eksik IL-10, kemokin CXCL13, kemokin-reseptörleri CXCR5 ve CCR7 ve sphingosine-1-fosfat reseptör 4). Congenic fare suşları C57BL/6 arka plan üzerinde kullanılabilirliğini büyük ölçüde farklı hücre türleri içinde etyoloji dahil DC rolü kurmak için transfer deneyler kolaylaştırmak. Son olarak, model etkilenen ve etkilenmeyen barsak segmentleri mukozal bağışıklık ve sistemik (Örneğin, yerel microbiome ve yerel anti-inflamatuar terapi değişiklik) yerel müdahalelerin etkisi değerlendirme imkanı sunmaktadır bağışıklık homeostazı.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Tüm yazarlar onlar rakip hiçbir ilgi alanlarına sahip bildirin.

Acknowledgments

Hiçbiri

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Operation material
heat underlay, 6 watt ThermoLux, Witte + Sutor GmbH 461265
Ethanol 70% (with methylethylketon) Pharmacie of the University Hospital Greifswald
Wooden applicators, small cotton head onesided, wooden stick, 150 mm length Centramed GmbH, Germany 8308370 for disinfection of operation field
Scissor Aesculap (BRAUN) BC064R
Atraumatic DeBakey forceps Aesculap (BRAUN) OC021R
Needle holder Aesculap (BRAUN) BM012R
Vasofix Safety i.v. cannula 22G Braun Melsungen AG, Germany 4268091S-01
VICRYL Plus 4-0 violet braided; V-5 17 m 1/2c; 70 cm ETHICON, Inc. VCP994H
PDS II 6-0 monofil; V-18 13 mm 3/8c; 70 cm ETHICON, Inc. Z991H
BD Plastipak 1 mL (Syringes with needle with sterile interior) BD Medical 305501
Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin) ANTISEPTICA, Germany 18824-01 disinfection of surgical instruments in ultrasonic bath
Medications
ketamine 10%, 100 mg/mL (ketamine hydrochloride) selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH 9089.01.00 87 mg/kg i.p.
Xylasel, 20 mg/mL (xylazine hydrochloride) selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH 400300.00.00 13 mg/kg i.p.
NaCl 0.9% Braun Melsungen AG, Germany 6697366.00.00
Buprenovet 0.3 mg/mL (buprenorphine) Bayer, Germany PZN: 01498870 0.1 mg/kg s.c.
Tramal Drops, 100 mg/mL (tramadol hydrochloride) Grünenthal GmbH, Germany 10116838 1 mg/mL drinking water
Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxone)  Cephasaar GmbH, Germany PZN: 08844252 25 mg/kg body weight i.p.
metronidazole 5 mg/mL Braun Melsungen AG, Germany PZN: 05543515 12.5 mg/kg body weight i.p.
Food
ssniff M-Z Ereich ssniff, Germany  V1184-3
Solid Drink Dehyprev Vit BIO, pouches TripleATrading, the Netherlands SDSHPV-75
Equipment
Nikon Eclipse Ci-L Nikon Instruments Europe BV, Germany light microscopy
VetScan HM 5  Abaxis, USA 770-9000 Veterinary hematology analyzer of 50 µl venous EDTA-blood
Bandelin SONOREX (Ultrasonic bath) Bandelin electronics, Germany RK 100 H disinfection of surgical instruments
Software
NIS-Element BR4 software Nikon Instruments Europe BV, Germany
GraphPad Prism Version 6 GraphPad Software, Inc.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream. Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).
  2. Morson, B., Dawson, I. Gastrointestinal Pathology. Blackwell Scientific Publications. London. (1972).
  3. Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. Diversion colitis. A prospective study. Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).
  4. Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy. Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).
  5. Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues. Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).
  6. Kleinwort, A., Döring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis. Biomed Res Int. 2017, 13 (2017).
  7. Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice. J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).
  8. Soave, O., Brand, C. D. Coprophagy in animals: a review. Cornell Vet. 81, 357-364 (1991).
  9. Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice--is coprophagy beneficial on a balanced diet. Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).
  10. Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens. Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).
  11. Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer. J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).
  12. Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects. Virulence. 5, 12-19 (2013).
  13. Brown, R. Z. Social Behaviour, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L). Eccological Monographs. 23, 788-795 (1953).
  14. Poole, T. B., Morgan, H. D. R. Differences in aggressive behaviour betweeen male mice (Mus musculus L.) in colonies of different sizes. Animal Behaviour. 21, 788-795 (1973).
  15. Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice. Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).
  16. Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice. Stress. 20, 10-18 (2017).
  17. Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density. J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).
  18. Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions. Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).
  19. Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis. Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).
  20. Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).
  21. Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. Genetic differences among C57BL/6 substrains. Exp Anim. 58, 141-149 (2009).
  22. Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice. Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).
  23. Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm. J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics