प्रयोगशाला खरगोश पर कठिन टिक संक्रमण का एक बहुमुखी मॉडल

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Biology

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Summary

हम एक सरल और बहुमुखी प्रणाली विकसित की है प्रयोगशाला खरगोशों पर हार्ड टिक फ़ीड । हमारे गैर श्रमसाध्य प्रोटोकॉल आसानी से सुलभ सामग्री का उपयोग करता है और विभिन्न प्रयोगात्मक सेटिंग्स की आवश्यकताओं के आधार पर समायोजित किया जा सकता है । विधि की अनुमति देता है आरामदायक और पूरी खिला अवधि के दौरान ticks की निगरानी/

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Almazán, C., Bonnet, S., Cote, M., Slovák, M., Park, Y., Šimo, L. A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits. J. Vis. Exp. (140), e57994, doi:10.3791/57994 (2018).

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Abstract

टिक अनुसंधान में जीवित पशुओं का उपयोग प्रयोगशाला में हार्ड टिक कालोनियों के रखरखाव सहित प्रयोगात्मक प्रयोजनों के एक किस्म के लिए महत्वपूर्ण है । ticks में, सभी विकास के चरणों (अंडे को छोड़कर) hematophagous हैं, और जब उनके हड्डीवाला मेजबान से जुड़ी एक रक्त भोजन प्राप्त करने के अपने जीवन चक्र के सफल समापन के लिए आवश्यक है । यहाँ हम एक सरल तरीका है कि खरगोशों पर मुश्किल ticks के खिलाने के लिए आसानी से खुला कैप्सूल का उपयोग करता है का प्रदर्शन. प्रस्तावित विधि का लाभ अपनी सादगी, छोटी अवधि और सबसे महत्वपूर्ण प्रयोगात्मक आवश्यकताओं की जरूरतों के लिए बहुमुखी समायोजन शामिल हैं । विधि एक ही जानवर है, जो कई चरणों या विभिन्न प्रयोगात्मक समूहों की खिला परमिट जबकि समग्र पशु आवश्यकता को कम करने पर कई कक्षों (विभिन्न आकारों के) का उपयोग संभव बनाता है. गैर परेशान और आसानी से सुलभ सामग्री का इस्तेमाल किया जानवरों को असुविधा को कम करता है, जो आसानी से एक प्रयोग से बरामद किया जा सकता है और गोद लेने या फिर से इस्तेमाल किया अगर नैतिक प्रोटोकॉल यह अनुमति देता है के लिए की पेशकश की ।

Introduction

हार्ड ticks (Ixodidae) अच्छी तरह से धीमी गति से खिला arthropods के रूप में जाना जाता है और कई दिनों के लिए एक मेजबान पर संलग्न किया जा सकता है, या हफ्तों, प्रजातियों और विकास के चरण1पर निर्भर करता है । इन अनिवार्य hematophagous arthropods संक्रामक एजेंटों की एक विस्तृत विविधता के वैक्टर हैं, जैसे बैक्टीरिया, प्रोटोजोआ, और वायरस, और इस प्रकार मनुष्यों और पशु स्वास्थ्य के लिए एक महत्वपूर्ण जोखिम वर्तमान1। जब टिक जीवविज्ञान का अध्ययन या नए नियंत्रण विधियों का मूल्यांकन, एक प्रभावी टिक खिला प्रणाली की स्थापना के लिए प्रभावी ढंग से प्रयोग डिजाइन और अध्ययन के लक्ष्य (ओं) को पूरा करने के लिए महत्वपूर्ण है । हाल ही में, कई कृत्रिम टिक खिला सिस्टम (जीवित जानवरों के उपयोग से परहेज)2,3,4 विकसित किया गया है और वे जब भी संभव इस्तेमाल किया जाना चाहिए । हालांकि, इन प्रणालियों को पूरी तरह से जीवित पशुओं पर टिक खिला की जगह नहीं कर पाए हैं, और वे कई शारीरिक वैज्ञानिक अध्ययन के लिए आवश्यक शर्तों के लिए उपयुक्त विकल्प नहीं हैं । इसलिए, कुछ मामलों में, प्रयोगात्मक पशु मेजबान का उपयोग प्रयोगात्मक परिणामों की प्रासंगिकता की गारंटी के लिए महत्वपूर्ण है ।

प्रयोगशाला न्यूजीलैंड खरगोश कई ixodid टिक प्रजातियों के लिए सबसे उपयुक्त और सुलभ मेजबान होने के लिए दिखाया गया है5,6,7,8,9. खरगोश पर टिक खिला के दो आम रणनीतियों अक्सर इस्तेमाल किया गया है: एक) सूती कपड़े या मोजे के साथ कवर खरगोश कान पर खिला6,7, और ख) कपास बैग9में खिला, नायलॉन की बोतलें10 या neoprene मंडलों11 खरगोश की पीठ से चिपके हुए । खरगोश के कानों पर खिला एक सुरुचिपूर्ण प्रणाली नहीं है, क्योंकि ticks (विशेष रूप से प्रारंभिक अवस्था, लार्वा या अप्सरा) क्रॉल और कान नहर में गहरी संलग्न कर सकते हैं, जो जानवर के लिए असहज है और टिक खिला और/या engorged की वसूली की निगरानी करता है मुश्किल टिक पाता है । इस प्रणाली को भी पूरी तरह से अलिज़बेटन कॉलर द्वारा संरक्षित मोजे द्वारा कवर कान पर केवल दो टिक समूहों, पशु के लिए एक महत्वपूर्ण परेशानी का प्रतिनिधित्व करने के लिए सीमित है । अंय प्रणालियों9,10,11 निश्चित रूप से और अधिक उंनत और अच्छी तरह से हार्ड टिक कॉलोनी रखरखाव के लिए अनुकूल हैं । हालांकि, वे प्रायोगिक के रूप में अच्छी तरह से खरगोश पर रखा समूहों की संख्या में सीमित कर रहे है के रूप में के रूप में अच्छा भोजन कक्ष के संशोधित आकार/ इसके अलावा, इन प्रोटोकॉल अक्सर hobbling पीछे खरगोश पैर खरोंच से बचने के लिए और अलिज़बेटन कॉलर के उपयोग को रोकने के लिए दूल्हे की आवश्यकता है ।

इस के साथ साथ हम एक सरल, गैर श्रमसाध्य और बहुत प्रभावी विधि का प्रस्ताव को बंद कर दिया कक्षों में कठिन ticks के कई समूहों को खिलाने के लिए वापस खरगोश एक जैकेट द्वारा कवर किया, प्रयोग के दौरान अलिज़बेटन कॉलर या hobbling के लिए की जरूरत को नष्ट करने । विशेष रूप से, हमारे सिस्टम लोचदार एक ईथीलीन-vinyl एसीटेट से बने कैप्सूल का उपयोग करता है (ईवा) फोम की चादर मच्छर जाल द्वारा कवर और मुंडा खरगोश से चिपके वापस तेजी से जमना (3 मिनट) गैर परेशान लेटेक्स गोंद के साथ । इस तकनीक वांछित आकार या आकार के कई कैप्सूल के लगाव की अनुमति देता है, और कुछ हफ्तों के प्रयोग के बाद खरगोश पूरी तरह से बरामद कर रहे हैं । प्रणाली अप्सरा और वयस्क कठिन टिक चरणों के लिए मुख्य रूप से उपयुक्त है, लेकिन एक छोटे से संशोधन के साथ यह लार्वा के रूप में अच्छी तरह से खिला के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । ईवा फोम-हार्ड टिक फीडिंग के लिए आधारित तरीकों हड्डीवाला मेजबान के अंय प्रकार के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, उदाहरण के भेड़ के लिए (जो इस पत्र में विकल्पों में से एक के रूप में दिखाया गया है) ।

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Protocol

नोट: इस अध्ययन में, खरगोश खाद्य और पानी के साथ मानक पिंजरों में बनाए रखा गया भोजन के लिए फ्रेंच एजेंसी में विज्ञापन libitum की पेशकश की, पर्यावरण और व्यावसायिक स्वास्थ्य और सुरक्षा (ANSES) मांयता प्राप्त पशु Maisons-Alfort, फ्रांस में सुविधाएं । पशुओं को दो बार किसी भी असामांय त्वचा प्रतिक्रियाओं, स्वास्थ्य समस्याओं या जटिलताओं के लिए अनुभवी तकनीशियनों द्वारा निगरानी की गई । प्रयोगात्मक कक्ष डबल पक्षीय टेप के साथ द्वार के इंटीरियर तैयार करने के लिए ticks के आकस्मिक भागने से बचने के लिए सुरक्षित था । विधि सबसे अच्छा काम करता है अगर दो लोगों को एक टीम के रूप में काम करते हैं, लेकिन यह एक अनुभवी व्यक्ति द्वारा एक हाथ से पूरा संभव है । हालांकि सबसे खरगोश वश्य और शांत हैं, तनाव के लक्षण हेरफेर के दौरान हो सकता है । यह सुनिश्चित करने के लिए कि एक खरगोश ही संघर्ष से घायल नहीं करता है, मैनुअल संयम धीरे से एक हाथ में गर्दन के scruff के पकड़े द्वारा पूरा किया जा सकता है, जबकि दूसरे हाथ यह हिंद तिमाहियों का समर्थन । छह माह पुरानी, Rambouillet मादा भेड़ों को राष्ट्रीय पशु चिकित्सा स्कूल ऑफ Alfort (ENVA) में बायोमेडिकल रिसर्च (CRBM) सुविधाओं के लिए केंद्र में रखा गया था, जहां पानी और भोजन के विज्ञापन libitum की आपूर्ति की गई थी और इसे प्रतिदिन दो बार चेक किया गया था ।

नोट: हमारी प्रयोगशाला पशु प्रयोगों के लिए आचार समिति द्वारा टिक खिला के लिए खरगोशों और भेड़ों का उपयोग करने की अनुमति प्राप्त हुई है Anses/ENVA/UPEC, परमिट संख्या ०१७४१.०१ और 11/10/16-5B, क्रमशः । के बाद से हम केवल रोगज़नक़-मुक्त ticks हमारे प्रयोगों में इस्तेमाल किया, सभी इस अध्ययन में इस्तेमाल खरगोश सफेद खरगोश एसोसिएशन, पेरिस, फ्रांस के माध्यम से गोद लेने के लिए पेशकश की गई ।

1. कैप्सूल की तैयारी

  1. ईवा फोम शीट से कैप्सूल के वांछित आकार में कटौती (1 चित्राएक) । दौर बाहरी कोनों (चित्रा 1बी) कैप्सूल के आकस्मिक टुकड़ी को कम करने के लिए जब यह खरगोश त्वचा के लिए gluing.
    नोट: कैप्सूल की फ्रेम मोटाई करीब 8 मिमी होनी चाहिए. लार्वा, देवियां, और Ixodesजैसे छोटे टिक वयस्क प्रजातियों के लिए 5 मिमी मोटी फोम शीट का उपयोग करें । एक 1 cm मोटाई फोम शीट बड़े आकार के वयस्क के लिए उपयुक्त है जैसे Amblyomma सपा., Hyalomma sp., आदि । कैप्सूल का आकार प्रायोगिक आवश्यकताओं के आधार पर बदलता रहता है । उदाहरण के लिए, 20 Ixodes वयस्क जोड़ों, २०० देवियां या १,००० लार्वा के लिए, हम क्रमशः 5 x 5 सेमी2, 6 x 7 सेमी2 या 7 x 9 सेमी2, के भीतरी कैप्सूल आकार का उपयोग करते हैं ।
  2. स्वयं के 8 मिमी चौड़ी स्ट्रिप्स कट-चिपकने वाला हुक टेप ( सामग्री की तालिकादेखें) और उन्हें तैयार ईवा फोम फ्रेम करने के लिए छड़ी (चित्रा 1सी).
  3. स्वयं चिपकने वाला पाश टेप से एक ही आकार स्ट्रिप्स काटें ( सामग्री की तालिकादेखें) और उन्हें हुक ईवा-फोम फ्रेम करने के लिए संलग्न पक्षों को बांध (चित्रा 1डी).
  4. ईवा फोम फ्रेम के आकार के लिए ठीक मच्छर जाल (मेष आकार से कम ५० µm) के उचित आकार में कटौती और यह स्वयं चिपकने वाला पाश करने के लिए छड़ी (चित्रा 1E और 1F) । यदि आवश्यक हो तो फांसी को काट लें ।
    नोट: कैप्सूल के इस प्रकार के अप्सराओं और कठिन टिक प्रजातियों के वयस्कों फ़ीड करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, जबकि कैप्सूल के एक अलग सील प्रणाली लार्वा खिला (पूरक चित्रा 1) के लिए आवश्यक है के माध्यम से लार्वा के आकस्मिक भागने को रोकने के लिए बांधा हुक और पाश पक्ष ।

2. खरगोश की तैयारी से पहले टिक संक्रमण

  1. खरगोश पीठ और पक्षों के क्षेत्र के लिए कतरनी (चित्रा 2) के साथ इस्तेमाल किया जा दाढ़ी ।
  2. तैयार कैप्सूल की पूरी सतह पर गैर-परेशान लेटेक्स गोंद लागू करें और 1 मिनट (चित्रा 2बी) के लिए प्रतीक्षा करें ।
  3. त्वचा (विशेष रूप से कोनों पर) के बारे में 3 मिनट (चित्रा 2c और 2d) के लिए उंगलियों के साथ दबाकर गोंद कैप्सूल ।
    नोट: जब एक से अधिक कैप्सूल gluing हैं, तो उन्हें (फिगर 2E और 2F) के बीच कम-से-कम 5 एमएम का स्पेस रखना सुनिश्चित करें । हम आमतौर पर रीढ़ की हड्डी के क्षेत्र से बचने के लिए, लेकिन यह इस्तेमाल किया जा सकता है अगर जरूरत है ।
  4. थोड़ा कैप्सूल उठा नेत्रहीन त्वचा के लिए अपने लगाव की जांच करें । यदि गैर संलग्न क्षेत्रों पाया जाता है, एक और 3 मिनट के लिए एक रंग और प्रेस का उपयोग कर गोंद लागू होते हैं ।
  5. खरगोश के पीछे के पंजे के लिए सुरक्षात्मक टेप लागू करने के लिए जैकेट क्षति (चित्रा 2जी) को रोकने के ।
    नोट: यह कदम वैकल्पिक है और मुख्य रूप से जैकेट क्षति को रोकने के लिए, टिक कैप्सूल को नुकसान नहीं है ।
  6. खुले और गर्दन कस के माध्यम से सामने पैर रखकर खरगोश जैकेट पर रखो, यकीन है कि खरगोश श्वास आरामदायक बना रहता है । इस कदम पर लोचदार बाड़ों के माध्यम से पीछे पैर जगह नहीं है और ज़िप खुला (चित्रा 2एच) छोड़ दें ।

3. टिक संक्रमण

  1. एक प्लास्टिक सिरिंज (1 या 5 व्यक्तियों की संख्या के आधार पर मिलीलीटर) सुई अंत में कटौती के साथ और कपास (चित्रा 1जी) के साथ खामियों में ticks प्लेस । यदि एक छोटी राशि के ticks को प्रभावित किया जा करने के लिए कर रहे हैं, संदंश का उपयोग करें ।
    नोट: टिक कॉलोनी रखरखाव के लिए engorged टिक महिला (ओं) सिरिंज के अंदर बाद में सेने के साथ अंडे देना करने के लिए अनुमति दें (5 या 10 एमएल) मच्छर एक रबर बैंड12 से लिपटे द्वारा कवर के समय वे कर रहे हैं पर लार्वा के श्रमसाध्य हेरफेर से बचने के लिए होस्ट करने के लिए लागू किया गया (चित्रा 1एच) । इसके अलावा, नवजात के साथ खरगोश के प्रत्यक्ष संक्रमण के लिए सिरिंज (पूरक चित्रा 1I, 5 या 10 मिलीलीटर) में गलते करने के लिए पूरी तरह से engorged लार्वा की अनुमति दी जा सकती है ।
  2. सिरिंज को खुले कोने के माध्यम से कैप्सूल में रखें और सिरिंज गोताख़ोर को धकेलते हुए टिकरों को inoculate. धीरे खरगोश त्वचा की ओर गोताख़ोर मोड़ गोताख़ोर से जुड़ी शेष ticks को दूर करने के लिए और साथ ही इसे कैप्सूल से बाहर खींच (चित्रा 2मैं).
    नोट: यदि कुछ व्यक्तियों के कैप्सूल से बाहर क्रॉल, उंहें संदंश का उपयोग कर वापस ।
  3. हुक और लूप टेप refasten द्वारा कैप्सूल बंद करो ।
  4. खरगोश के पीछे के पैर जैकेट और ज़िप के पीछे लोचदार बाड़ों में जगह बंद ।
    नोट: बनाओ कि एक सूचकांक उंगली जैकेट और खरगोश की गर्दन के बीच आराम सुनिश्चित करने के लिए और भी जैकेट पर चबाने से बचने के लिए फिट कर सकते हैं ।
  5. पिंजरे में खरगोश लौटें (चित्रा 2जे) ।
    नोट: परिपूर्ण टिक के संग्रह के लिए संक्रमण से समय अलग टिक प्रजातियों और विकास के चरणों के बीच बदलती हैं । उदाहरण के लिए, Ixodes scapularis और Ixodes ricinusके लिए, वयस्कों, अप्सराओं और लार्वाों के लिए भोजन की अवधि क्रमशः ६-९, ३-४, और २-३ दिन होती है । प्रयोगशाला शर्तों के तहत 29 अलग कठिन टिक जीवन चक्र के लिए संदर्भ की एक सूची लेविन और Shumacher (२०१६)9में पाया जा सकता है ।

4. संग्रह और ticks की निगरानी

  1. पिंजरे से खरगोश बेंच करने के लिए ले लो और जैकेट खोलना ।
  2. धीरे से अपने हाथों से खरगोश को नियंत्रित । हुक और पाश टेप (चित्रा 2k और 2L) unfasten और engorged लार्वा ब्रश (पूरक चित्रा 1) या एक प्लास्टिक डिश के लिए और वयस्कों के लिए संदंश का उपयोग करके ticks इकट्ठा द्वारा कैप्सूल खोलें (चित्रा 2एल ). आंशिक रूप से खिलाया (नहीं परिपूर्ण) ticks की आवश्यकता है, तो उन्हें अलग करने के लिए एक टिक ट्विस्टर या संदंश का उपयोग करें.
    नोट: अगर टिक कालोनियों को बनाए रखने कृपया चरण ३.१ में नोट देखें । विशेष टिक प्रजातियों के अनुसार उपयुक्त आर्द्रता और तापमान की स्थिति में engorged ticks बनाए रखें ।
  3. यदि आवश्यक हो, तो हुक और लूप टेप के कैप्सूल बंद करने के लिए refasten ।

5. खरगोश की वसूली

  1. मच्छर जाल को पूरी तरह से कैप्सूल से निकालें और खरगोश (चित्रा 2एम) पर जैकेट छोड़ दें ।
  2. 3-4 सप्ताह प्रतीक्षा करें और धीरे कोनों (चित्रा 2एन) के एक ट्रिमिंग करके कैप्सूल को दूर करने की कोशिश । यदि कैप्सूल अभी भी मजबूती से जुड़ा हुआ है, एक सप्ताह बाद इस चरण को दोहराएँ.
  3. जैकेट निकालें और खरगोश पिंजरे में ठीक कर दो ।
    नोट: एक बार कैप्सूल बंद है, असामान्य प्रतिक्रियाओं के लिए खरगोश की त्वचा की जाँच करें । हालांकि आम तौर पर कोई इलाज की आवश्यकता है, एक एमॉलियेंट लोशन जलन के मामले में इस्तेमाल किया जा सकता है ।
  4. यदि प्रोटोकॉल और प्रयोगों की अनुमति, बरामद खरगोश (चित्रा 2) या फिर इस्तेमाल किया जा सकता है गोद लेने के लिए की पेशकश की ।
    नोट: खरगोशों एक बार दोहराया टिक संक्रमण13के संपर्क में टिक प्रतिरोध प्राप्त करने के लिए दिखाया गया है; इसलिए, reinfestations अनुशंसित नहीं है जब तक कि प्रयोग की आवश्यकता है ।

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Representative Results

यहां हम पहली बार कठिन ईवा फोम एक मुंडा खरगोश वापस करने के लिए आवेदन किया, एक जैकेट (चित्रा 1 और चित्रा 2) द्वारा कवर करने के लिए लागू की हार्ड टिक के कदम विधि द्वारा एक विस्तृत कदम के लिए प्रस्ताव । इस प्रोटोकॉल विभिंन प्रकार के प्रयोगों के लिए उपयुक्त है जब एक ही मेजबान पर अलग टिक समूहों की आवश्यकता है और यह भी मुश्किल ticks के बड़े पैमाने पर पालन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । प्रयोगशाला में टिक खिला सफलता ज्यादातर टिक व्यक्तियों और विशेष रूप से टिक प्रजातियों के लिए खरगोश मेजबान की उपयुक्तता की फिटनेस पर निर्भर करता है, बल्कि खुद तकनीक से । ईवा फोम वापस खरगोश से चिपके कैप्सूल का उपयोग कर हमारे सिस्टम के लिए अत्यधिक सफल हो गया है जब विभिन्न कठिन टिक प्रजातियों (तालिका 1) के विभिन्न विकासात्मक चरणों खिला और भी प्रयोगशाला मेजबान के अन्य प्रकार के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, ऐसे भेड़ के रूप में ( चित्रा 3) ।

इस विधि का मुख्य लाभ सादगी, आसानी से सुलभ सामग्री (सामग्री की तालिका) कर रहे हैं और सबसे महत्वपूर्ण बात, एक आरामदायक खुले बंद खिला के दौरान ticks की आसान निगरानी की अनुमति प्रणाली. इसके अलावा, इस बहुमुखी विधि के विभिन्न प्रयोगात्मक सेटिंग्स परिवर्तनीय संख्या, आकार, और मेजबान पर कैप्सूल की संरचना (चित्रा 2डी-एफ) के आधार पर की एक किस्म की संभावना प्रदान करता है, की चुनौतियों की बैठक विशेष अध्ययन । अत्यधिक प्रभावी, तेजी से सुखाने, और गैर परेशान लेटेक्स गोंद का उपयोग सुनिश्चित करता है कि कैप्सूल मजबूती से तीन मिनट में चिपके हुए है और कम से कम तीन सप्ताह के लिए संलग्न रहता है । यह प्रक्रिया भी (चित्रा 2) प्रयोगों के बाद खरगोश मेजबान की पूरी वसूली की अनुमति देता है ।

Figure 1
चित्रा 1 : ईवा फोम कैप्सूल और ticks की तैयारी । (A, B) ईवा फोम से कैप्सूल काटना. () स्वयं चिपकने वाला हुक टेप के स्ट्रिप्स को कैप्सूल में रखकर. () पाश पक्ष स्ट्रिप्स बाध्यकारी और फास्टनरों से टेप छीलने । (ङ, च) चिपकने वाला स्ट्रिप्स के लिए मच्छर जाल चिपके हुए । () सिरिंज के अंदर वयस्क हार्ड ticks का उदाहरण (5 मिलीलीटर) काट सुई के साथ कपास द्वारा कवर अंत. (एच) एक रबर बैंड द्वारा जगह में आयोजित मच्छर जाल से आच्छादित कट सुई अंत के साथ सिरिंज के अंदर ताजा हैच लार्वा का उदाहरण. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्रा 2 : Gluing खरगोश के लिए कैप्सूल, संक्रमण/उबरने और कैप्सूल हटाने टिक । () मुंडा खरगोश की पीठ । () तैयार ईवा फोम कैप्सूल के लिए गोंद के आवेदन । (सी, डी) खरगोश को अलग आकार कैप्सूल की कुर्की. (ङ, च) एक खरगोश के पृष्ठीय दृश्य दो या कई वापस, क्रमशः संलग्न कक्षों दिखा । () टेप रियर फीट के आसपास तैनात है । (एच) जैकेट सामने पैर और गर्दन से शुरू लागू है, और पीछे का हिस्सा खुला छोड़ दिया है । कैप्सूल के कॉर्नर को खोलना भी दिखाया गया है । (I) सिरिंज का उपयोग कर खुले कोने के माध्यम से कैप्सूल के लिए ticks रखने. (जंमू) जैकेट पूरी तरह से ज़िपित है और खरगोश पिंजरे में जगह है । (K) कैप्सूल खोलकर उनकी फीडिंग के दौरान टिक की निगरानी करते हैं. () संदंश का उपयोग करते हुए परिपूर्ण टिक का संग्रह करना. (M) खाली कैप्सूल के बाद टिक हटाने । (N) कैप्सूल की टुकड़ी (3-4 सप्ताह के बाद) खरगोश से । (हे) पूरी तरह से बरामद खरगोश कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्रा 3 : ईवा फोम प्रणाली भेड़ के लिए अनुकूलित । (एक) फोम कैप्सूल का एक मुंडा और वापस भेड़ के पार्श्व पक्ष में साफ क्षेत्र के लिए लगाव । () संक्रमण के बाद, संलग्न कैप्सूल एक पट्टी के साथ कवर कर रहे हैं (आर्थोपेडिक stockinette), के बजाय एक जैकेट. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

टिक प्रजाति engorged टिकरों की संख्या को प्रभावित करने वाले टिकरों की संख्या (%)
लार्वा Nymphs महिलाओं
Ixodes ricinus - 692/557 (८०.४९%) 670/592 (८८.३५%)
Ixodes scapularis - - 40/34 (८५%)
Dermacentor reticulatus 3550/3255 (९१.७%) 900/803 (८९.२२%) 323/305 (९४.४२%)
Rhipicephalus appendiculatus 3300/2822 (८५.५२%) 490/421 (८५.९१%) 370/362 (९७.८३%)
Rhipicephalus pulchelus - 1920/1831 (९५.३६%) 282/257 (९१.१३%)
Amblyomma variegatum 332/225 (६७.७७%) 404/308 (७६.२४%) 207/146 (७०.५३%)
Amblyomma americanum - 140/134 (९५.७१%) 31/27 (८७.१%)
Hyalomma excavatum १,००० * ५१० * (५८.८%) 380/313 (८२.३६%)

तालिका 1: ईवा-फोम कैप्सूल के अंदर खरगोश पर खिला मुश्किल टिक प्रजातियों के विभिन्न विकासात्मक चरणों की Engorgement दर । * एच. excavatum अपरिपक्व अवस्थाओं की तेज molting प्रक्रिया के कारण engorged लार्वा (डाटा नहीं दिखाया गया) को अप्सराओं में गलते करने के लिए छोड़ दिया गया जो बाद में उसी कैप्सूल में engorged.

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Discussion

इस पूरे प्रोटोकॉल में सबसे महत्वपूर्ण कदम को मजबूती से शेविंग त्वचा के लिए कैप्सूल गोंद है । इस कारण से, के लिए लगातार दबाव कम 3 मिनट महत्वपूर्ण है, विशेष रूप से कोनों पर । जब inoculating कैप्सूल में ticks, यह करने के लिए सील के दौरान टिक भागने से बचने के लिए एक खुले से विपरीत कोने में उन्हें गहरी लागू करने के लिए महत्वपूर्ण है. जब प्रयोग की योजना बना, सुनिश्चित करें कि सभी कैप्सूल जैकेट द्वारा कवर कर रहे है चबाने या खरोंच से नुकसान से बचने के । सुनिश्चित करें कि जैकेट की गर्दन क्षेत्र को चबाने को रोकने के लिए पर्याप्त तंग है, लेकिन पर्याप्त रूप से ढीला है कि खरगोश आरामदायक रहता है ।

वर्णित तकनीक का मुख्य लाभ में से एक अपनी सादगी और आकार और कैप्सूल की संख्या के मामले में संशोधनों का इस्तेमाल किया जा सकता है । हमारे प्रयोगों के दौरान, त्वचा से कैप्सूल की टुकड़ी नहीं देखा गया । हालांकि, जैकेट की सामयिक क्षति (लेकिन नहीं कैप्सूल) खरगोश द्वारा हो सकता है ।

खरगोशों में, हमने देखा है कि, कैप्सूल में, पूरी तरह से engorged-अलग ticks (मुख्य रूप से लार्वा और अप्सराओं के रूप में अपरिपक्व चरणों) खरगोश के तापमान के कारण तेजी से desiccate । इस कारण से, हम विशेष रूप से टिक प्रजातियों और मंच के खिला अवधि की अवधि का अनुमान लगाने के लिए सुझाव है, engorged टिक संग्रह की योजना के तुरंत बाद उनकी टुकड़ी । हालांकि हमारी प्रणाली विभिन्न हार्ड टिक प्रजातियों (तालिका 1) के खिलाने के लिए परीक्षण किया गया है, खरगोश सभी कठिन सही टिक प्रजातियों के लिए एक प्राकृतिक मेजबान नहीं है14. इस सीमा को एक विशेष कठिन टिक प्रजातियों के लिए उपयुक्त अंय पशु मेजबान के लिए इस प्रणाली को ढालने से दूर किया जा सकता है । यहाँ हम ईवा फोम प्रणाली के उपयोग की सूचना के लिए भेड़ के लिए अनुकूलित ricinus (चित्रा 3) के सभी विकासात्मक चरणों फ़ीड. इस विशेष मामले में, भेड़ और मुंडा की जरूरत है ७०% इथेनॉल के साथ गर्भवती त्वचा की सतह पर मौजूद तेल को खत्म करने के लिए कपास के साथ धोया । बाद में एक खरगोश के लिए वर्णित के रूप में एक ही प्रक्रिया के बाद किया गया था, लेकिन एक जैकेट के बजाय, एक कपास पट्टी के आसपास इस्तेमाल किया गया था के रूप में वापस चित्रा 3में दिखाया गया है ।

जब इस प्रणाली को विकसित करने, हम उपयोग सामग्री की मात्रा को कम करने के लिए विशेष ध्यान दिया और प्रक्रिया के कदम । अन्य तरीकों की तुलना में, हम संज्ञाहरण, खरगोश कॉलर, कान मोजे या रियर पैर5,6,7,8,9,10के hobbling का उपयोग नहीं करते । इसके अलावा, वर्तमान प्रोटोकॉल श्रमसाध्य नहीं है, और इस तकनीक से परिचित बनने के लिए कोई गहन प्रशिक्षण की आवश्यकता है । ईवा-फोम आधारित टिक खिला प्रणाली इस अध्ययन में विस्तृत है जब टिक जीवविज्ञान, मेजबान वेक्टर-रोगज़नक़ बातचीत, या acaricides या टीके की तरह अलग नियंत्रण उपायों का मूल्यांकन का अध्ययन विभिंन प्रयोगों की एक किस्म के लिए इस्तेमाल होने की उंमीद है । हमारे भविष्य की दिशा ईवा फोम कैप्सूल के लिए माउस मॉडल को खिला प्रणाली अनुकूल हो जाएगा मुश्किल ticks के अपरिपक्व चरणों फ़ीड ।

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

हम एवलिन le Naour, फ्रेंच राष्ट्रीय कृषि अनुसंधान संस्थान (इणरा), Alain Bernier (इणरा) और Océane le Bidel (ANSES) की तकनीकी सहायता स्वीकार करते हैं । Consuelo Almazán उत्कृष्टता की प्रयोगशाला, उभरते संक्रामक रोगों (LabEx IBEID), पाश्चर संस्थान के एकीकृत जीवविज्ञान से एक फैलोशिप द्वारा समर्थित था । खरगोश और भेड़ ANSES द्वारा खरीदा गया था । इस काम के भाग के स्वास्थ्य अनुदान RO1AI090062 के राष्ट्रीय संस्थानों द्वारा वित्त पोषित किया गया था Y. Park । डॉ Jeffrey एल ब्लेयर पांडुलिपि की समीक्षा करने के लिए स्वीकार किया है ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
New Zealand Rabbits (2.5-3.5 kg) Charles River  Strain Code 571
Rambouillet sheep Local provider-tick free farm Female 6 months old
EVA foam 5 mm thick  Cosplay Shop EVA-PE451kg (950mm x 450mm) 10 mm PE45 kg foam from the Cosplay Shop may be used for the large adult tick species
Foam Sheet 9" X 12" 6 mm-White Amazon FOAMSHT6-20 6 mm-EVA foam ca be ordered via Amazon as an alternative to the foam from Cosplay Shop
Full length rabbit jackets  Harvard Apparatus, Inc.  620077- medium, 6270078 - large 
Non-toxic latex glue  Tear mender  Fabric & Leather Adhesive
Tubular cotton orthopedic stockinette BSN Medical 9076 (12-15 cm wide)
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References

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