İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Telli myograph teknik vasküler düz kas fonksiyonları ve ekran yeni ilaçlar araştırmak için kullanılır. Biz fare mezenterik arter izometrik contractility ölçme ve vasküler düz kas yeni gevşetici süzmek için detaylı bir protokol raporu.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Sun, J., Yang, G. M., Tao, T., Wei, L. S., Pan, Y., Zhu, M. S. Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography. J. Vis. Exp. (138), e58064, doi:10.3791/58064 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Telli myograph teknik vasküler düz kaslar yanıt-e doğru depolarization, GPCR agonistler/inhibitörleri ve uyuşturucu. contractility değerlendirmek için kullanılır Vasküler düz kas fizyolojik fonksiyonları, vasküler hastalıklar hipertansiyon gibi patogenezi ve düz kas gevşetici ilaçlar gelişimi üzerinde birçok çalışma yaygın olarak kullanılır. Yaygın olarak kullanılan model hayvan hastalık modelleri ve genetiği değiştirilmiş suşları büyük bir havuz faredir. Biz fare mezenterik arter ayrıntılı izometrik kasılma ölçmek için bu yöntem tanıttı. Fare mezenterik direnç arter 1.4 mm segmentinin izole ve onun Lümen ile iki çelik tel geçirerek myograph odası üzerinde monte edilmiş. Denge ve normalleştirme adımlardan sonra gemi kesimi tarafından iki kez önce daralma tahlil bir yüksek-K+ çözüm potentiated. Bu yöntemde ilaç geliştirme uygulama örneği, fare mezenterik bir Çin bitki, lotus tohum (Nelumbo nucifera Gaertn.) embriyolar izole bir roman doğal madde, neoliensinine, gevşetici etkisi ölçülen arterler. Myograph odası üzerinde monte edilmiş gemi kesimleri ile a yüksek-K+ eriyik teşvik. İstikrarlı bir sürekli faz güç gerilim ulaştığı zaman toplu neoliensinine doz odasına eklenmiştir. Biz o neoliensinine düz kas kasılması, bir doz bağımlı gevşetici etkisi vardı böylece hipertansiyon karşı potansiyel etkinlik ayılar düşündüren bulundu. Buna ek olarak, gemi segment montaj sonra en az 4 saat hayatta kalmak ve çoğu zaman, biz önermek için yüksek-K+ çözüm tarafından indüklenen contractility korumak gibi tel myograph sistem uyuşturucu tarama zaman alan işlem için kullanılabilir.

Introduction

Burada kullanılan küçük gemi myograph sistem ölçmek için küçük direniş damarlarının iç çapı 100 400 µm. izole küçük gemiler için (yaklaşık 2 mm uzun) arasında değişen izometrik kasılma iki 40-µm çapı kablo tarafından eklenmiş ve o zamanlar oldu mikrometre tarafı ve dönüştürücü tarafı jaws sıralı olarak monte edilmiş. Bu myograph teknik ilk 19721 ' önerdi ve öncelikle Mulvany ve onun meslektaşları2,3,4,5,6tarafından geliştirildi. Şimdi kararlı donanımları, kolay performans ve bir standart normalleştirme yordamı7,8,9ile olgun bir tekniktir. Biz bazı değişikliklerle bu yöntem için fare mezenterik arter ölçümlerde kullanılan.

Vasküler düz kas hemen hemen tüm kan damarlarının duvarlarında hatları. Temel işlevleri çeşitli uyaranlara yanıt olarak Kuvvetleri kasılması ile oluşturmaktır. Vasküler düz kas normal contractility için kan basıncı düzenleme esastır ve beslenme ek10. Anormal kan basıncı sonuçları hastalıkları, hipertansiyon, kalp yetmezliği ve iskemisi. de dahil olmak üzere çeşitli Yönetmeliği Çeşitli çalışmalarda anormal kan basıncı her zaman işlevsel olmayan vasküler düz kas contractility7,11,12,13ile ilişkili olduğunu düşündürmektedir. Myograph yöntemi izometrik contractility vasoconstrictors, inhibitörleri ve ilaçlar da dahil olmak üzere çeşitli uyaranlara tarafından indüklenen fare damarlarının incelenmesi sağlar. Başarılı ölçümleri daralma kan basıncı bakım ve yeni tedavi yaklaşımları keşfetmek için ve vasküler düz kas ilişkili hastalıkların patogenezinde mekanizmaları anlamamıza yardımcı olacaktır.

Birçok Çince otlar yaygın damar hastalıkları klinik tedavisi için kullanılmıştır; Ancak, onların etkili maddeler genellikle bilinmeyen kalır. Böylece, yalıtım ve etkili bileşenleri kimliği roman uyuşturucu gelişimi için çok önemli. Çoklu tel myograph teknoloji otlar aktif bileşenleri süzmek için basit bir yaklaşım sunmaktadır. Biz fare mezenterik arter daralma araştırmak için küçük gemi myograph sistemini kullanarak çeşitli çalışmalarda bildirdi ve doğal bileşikler ile Anti-hipertansiyon etkinlik12,13,14tespit. Burada, biz ayrıntılı tarif protokol için myograph yöntemi ve lotus tohum (Nelumbo nucifera Gaertn.) embriyolar izole neoliensinine gevşetici etkisini değerlendirmek 14.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Hayvan manipülasyonlar kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) modeli hayvan araştırma merkezi Nanjing Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.

1. çözüm hazırlık

  1. 137.0 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 mM D-glukoz ve 10 mM HEPES, kullanarak HEPES Tyrode solüsyonu (H-T) hazırlamak pH 7.3 7.4.
  2. Kalsiyum olmadan HEPES Tyrode çözüm hazırlamak (Ca2 +-H-T ücretsiz) 140.6 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 mM D-glukoz ve 10 mM HEPES, pH 7.3 7.4 kullanarak.
  3. 124 mM 15.7 mM NaCl, 124,0 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 mM D-glukoz ve 10 mM HEPES, pH kullanarak KCl (yüksek K+) kullanarak HEPES Tyrode solüsyonu hazırlayın 7.3 7.4.

2. deney hazırlık

  1. H-T ve 37 ° C su banyosu kullanarak yüksek-K+ çözümler onceden.
  2. Myograph sistem, veri edinme donanım ve bilgisayarı açın.
  3. Dikkatle tüm myograph odaları 5 mL H-T çözeltisi ile doldurun.
  4. Petri tabağı 4 ° C H-T ve Ca2 +20 mL ile doldurulması-H-T çözümleri, sırasıyla ücretsiz ve depolamak buzda.
  5. 10 cm boyalı Petri kabına 20 mL H-T çözeltisi ile doldurun ve oda sıcaklığında korumak.

3. fare mezenterik arter diseksiyonu

  1. 8-12-hafta-yaşlı C57BL/6J kadın ya da erkek fare tarafından servikal çıkığı ötenazi. Fare yukarı bakacak şekilde, karın ile pin.
  2. Karın % 70 etanol ile nemlendirin. O zaman, cilt makas ile ventral orta çizgi boyunca kasığından ve kesikler ilk kesik başından itibaren aşağıya doğru bacaklar her iki tarafta yapın. Cilt her iki tarafta çek; Karın zarını açmaya benzer insizyon olun.
  3. Makas kullanarak, özofagus, iki nokta üst üste ve tamamen damarlara vücuttan beslenme ile gastrointestinal sistem izole etmek için diğer bağ dokusu kesmek.
  4. Forseps ile izole segment kanı yıkamak için H-T 2.4 adımda hazırlanan ve yavaşça doku birkaç kez H-T çözümde Durulama soğuk içeren çanak içine taşıyın.
  5. İzole segment içine 2.5 adımda hazırlanan kuşe Petri kabına aktarmak ve mezenterik arter diseksiyonu oda sıcaklığında gerçekleştirin.
  6. Mide, değişir, ileum ve caecum yönünde düzeltmek ve mide ve caecum sırasıyla sol ve sağ tarafında, pin.
  7. Mezenterik damarlara yatak germek ve bağırsak disseke mezenterik arterler ortaya çıkarmak için pin ile düzeltin.
    Not: Bu koşullar altında üstüne damar damar vardır.
  8. Stereoskopik mikroskop iletim ışık kaynağında açmak ve arterler mikroskop altında incelemek. Tüm doku çözümde dalmış emin olun.
  9. Forseps ile arterlerin çevresinde yağ dokuları klamp ve diseksiyon makasla keserek bağ dokusu arterler yalıtmak. Damarların yaralanmasına kaçının.

4. arteryel montaj

  1. Aktarım ve mezenterik arter ağaç soğuk Ca2 +sokmak-ücretsiz (2.4 adımda hazırlanan) H-T çözüm forseps ile aşırı arterler sıkma tarafından.
  2. Arter 1.4 mm kısmı bir mezenterik arcade Bağırsak duvarına proksimal kesmek ve iki forseps bu arter parçasının her iki dikkatlice açın.
  3. Paslanmaz çelik tel 2,5 cm uzunluğunda iki kesimi hazırlamak ve onları aynı çanak yerleştirin.
  4. Forseps kullanarak atardamara bir ucunu yavaşça kelepçe ve dikkatlice iki tel, başka bir forseps yardımıyla tek tek arter lümen yerleştirin. Teller düz tutulur ve endotel dokunmayın emin olun.
  5. İki forseps kullanarak, iki çelik teller dişli geminin dışında aynı anda kelepçe ve dikkatle gemi daha önce H-T çözüm (adım 2.3) ile dolu bir myograph odasına Petri kabına aktarın.
  6. Jaws ayrı montaj için yer açmak için canı cehenneme. Her iki tarafında iki forseps kullanarak iki eklenen kablolardan biri klamp ve taşıyıcıyı çene boşluğu (Şekil 1A) koyun.
  7. Her iki vidayı mikrometre (Şekil 1B) bağlı çene etrafında klempe tel sarın.
  8. Sol taraftaki vidayı saat yönünde büküm tarafından tamir. Sağ forseps kullanarak Tel düzeltmek, daha sonra saat yönünde (Şekil 1 c) büküm sağ taraftaki vidayı düzeltmek. Gemi her zaman çene boşluğu içinde olduğundan emin olun, ama zarar görmemesi için çene dokunmayın.
  9. Mikrometre (Şekil 1 d) kullanarak iki jaws kapatın. Onlar birbirleriyle ve sabitlenmemiş tel üst kısmında sabit tel olduğunu dokunma ama bu iki jaws yeterince yakın olduğundan emin olun.
  10. Sağ taraftaki forseps kullanarak, dikkatle unscrewed Tel Dönüştürücü zorlamak için bağlı çene köşesinde katlayın ve sağdaki vida (Şekil 1E) etrafında saat yönünde kaydırmak. O zaman, vida saptamak. Tel sol tarafında bu adımı yineleyin ve sol taraftaki vidayı (Şekil 1F) düzeltin.
  11. Biraz ayrı jaws dikkatle mikrometre (Şekil 1G) döndürerek hareket ettirin. Gemi germe kaçının. Forseps tel tel dönüştürücü yan yatay düzlemde de mikrometre tarafından taşımak için kullanın. Dikkatle iki çene arasındaki boşluğu sadece iki kablo ağırlayacak mikrometre döndürür.
  12. Arterler diğer odaları üzerine takmak için 4.2-4.11 adımları yineleyin. Tüm odalar için RGB sinyali, odaları kapsar, % 100 oksijen kaynağı ve sıcaklık probu takın ve 37 ° C'ye ısınma başlangıç Grafik yazılımı açık ve kayıt işlemini başlatmak için Grafiği görünümü penceresinde Başlat düğmesine basın.
  13. Yaklaşık 20 dk equilibrate.

5. normalleştirme

Not: deneysel koşullar standartlaştırmak amacıyla ve gemilerin güvenilir fizyolojik yanıt elde etmek için bir normalleştirme yordam gerekli15' tir. Aktif güç ve geminin iç çevresi arasındaki ilişkiyi göre Tel myograph sistemi takılı gemi5,8iç çevresi (IC) değerlendirmek için bir standart normalleştirme program vardır, 9. Kısaca, IC (µm) hesapladığınızda, mikrometre okumak ve değeri X değeri ve dönüştürücü giriş çıkış için kuvvet, duvar gerilimi (mN/mm), dinlenme Yani, Y değeri olarak kullanılır. Program ile donatılmış bir eğri (x, Y) dönmek ve 100 mmHg (IC100) transmural basınç için karşılık gelen IC hesaplamak. Gemi normalleştirilmiş iç çevresi (IC1) için küme etkin yanıt maksimal ne zaman.

  1. Kuvvetleri tüm kanallar için sıfıra küme aygıtta ve başka bir 1-2 min için equilibrate.
  2. Normalleştirme ayarları seçin "DMT menüve parametreleri aşağıdaki gibi ayarlayın:
    Mercek kalibrasyon (mm/div): 0,36; Hedef basınç (kPa): 13,3; IC1/IC100: 0.9; Online ortalama süre (saniye): 2; Gecikme süresi (saniye): 60. DMT normalleştirme ayarları penceresini kapatmak için Tamam düğmesini tıklatın.
  3. Kanal ilgi DMT menü bir DMT normalleştirme karşılık gelen kanal penceresini seçin. Sabit değerleri penceresine aşağıdaki gibi girin: doku endpoints a1: 0.1; Doku endpoints a2: 4; Tel çapı (µm): 40. Pencerenin 1,40 mm hesaplanan gemi uzunluğu görüntüler.
  4. Uygun doku odası mikrometre okuyun. Mikrometre okuma kutusuna değer girin ve Noktası Ekle düğmesini tıklatın. Bu değer ilk (X0) X değeridir. Sonra 60 s gecikme süresi, kuvvet ve etkili basınç (ERTP) bu mikrometre değerine karşılık gelen pencerede görüntülenir. Aynı anda, mikrometre okuma kutusunu etkin hale gelir.
  5. Saat yönünün tersi yönde mikrometre çevirerek normalleştirilmiş gemi germek. Mikrometre değer mikrometre okuma kutusuna girin ve Noktası Ekle düğmesini tıklatın. 60 dinleme için bekleyin tekrar s.
  6. Adımları yineleyin 5.5, gemi germek ve pencere "onun IC1gemi germek için gereken hesaplanan mikrometre ayardır mikrometre X1" değerini görüntüler kadar ölçüm değerleri eklemek devam edin.
  7. Mikrometre X1 değeri ayarlayın.
    Not: Normalleştirilmiş gerilim genellikle 1-2 mN olduğunu.

6. arter daralma kayıt

Not: H-T ve yüksek-K+ çözüm bu bölümde kullanılan da dahil olmak üzere tüm çözümler adım 2.1 hazırlanmıştır.

  1. Normalleştirme sonra 15-20 dk odasında gemi equilibrate.
    Not: Bu çözüm bu adımda değiştirmenize gerek yoktur.
  2. Gemi yüksek-K+ çözüm ile iki kez meydan.
    1. Gemi meydan okumak için 5 mL daralma 10 dk, 3 - 4 kez 5 mL H-T çözeltisi ile yıkayarak takip için ikna etmek için yüksek-K+ çözeltisi ile H-T çözüm değiştirin.
      Not: Tipik daralma 3 mN ve 2.5 mN12etrafında sabit bir sürekli güç üzerinde bir maksimal kuvvet sahiptir. İlk challenge 2.5 mN aşağıda bir maksimal güç üretir veya sürekli gücü zamanla azalır veya ikinci sorun ilk doz daha daha daha düşük bir kuvvet oluşturur, gemi atılır ve daha fazla araştırma yapılması için kullanılmaz.
  3. 5 mL daralma ikna etmek için yüksek-K+ çözeltisi ile gemi meydan. 5 dk sonra 0.5 µL neoliensinine hisse senedi çözüm (DMSO 10 mM)14 gemi 1 µM neoliensinine son bir konsantrasyon, dinlenmek için odasına ekleyin.
  4. Kuvvet ne zaman istikrarlı (Bu genellikle birkaç dakika sürer), t oluşturmak için 4, 6, 8 ve 10 µM için konsantrasyonu artırmak için hisse senedi çözüm her zaman konsantrasyonu için 2 µM. eklemek 1 µL artırmak için odasına neoliensinine hisse senedi çözümü başka bir 0.5 µL Ekle o doz-yanıt eğrisi.
    Not: Stok ve çalışma konsantrasyonları ilaçlar arasında değişir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Biz bir çok tel myograph sistemi kullanarak fare mezenterik arter izometrik contractility ölçülen ve lotus tohum (Nelumbo nucifera Gaertn.) embriyo saf neoliensinine gevşetici etkisi değerlendirildi 14. fare mezenterik direnç arter izole, bağ dokuların temizlenmesi ve 1.4 mm parça halinde kesilmiş. Arter segment Ca2 +iki çelik teller tarafından eklenmiş-ücretsiz bir petri çözümde H-T ve sonra segment myograph odası (Şekil 2A) iki jaws monte edilmiştir. Segment takma sonra iki tel yakın birbirlerine (Şekil 2B) değil ama müessir paralel, olmak için ayarlandı. Kuvvet ölçüm önce gemi bölüt normalleştirilmiş ve gemi stabilize etmek için iki kez yüksek-K+ çözüm potentiated. Normalleştirme işlemi sırasında gemi birkaç kez IC100, değerini erişene dek gergin ve streç her döngüsü sağlam bir kasılma, hızlı gevşeme ve kuvvet bakım dahil 60 s (Şekil 3). Genellikle yüksek-K+ çözüm tarafından indüklenen vasküler düz kas kasılması iki aşamadan, sağlam bir faz ve sürekli faz (Şekil 3) gösterdi. Gemi segment olabilir yüksek-K+için daha fazla deneyler sadece eğer kullanılan-uyarılmış daralma görünür normal ve tekrarlanabilir. Neoliensinine ile tipik bir ölçüm Şekil 4' te gösterilir. Ne zaman kuvvet gerilimi yüksek-sürekli aşama ulaştı K tarafından+ indüklenen, toplu neoliensinine (1, 2, 4, 6, 8 ve 10 µM) deliklerden doz odası kapak eklenir. Dozları arttıkça, kuvvet bir doz bağımlı şekilde azalır. Sonuç o neoliensinine potansiyel bir aday Anti-hipertansiyon uyuşturucu14olarak davranan bir vasküler düz kas gevşetici madde belirtilir.

Figure 1
Şekil 1: yordam montaj arter şematik. Mavi çizgiler teller temsil ve kırmızı dikdörtgen arter temsil eder. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 2
Resim 2: bir fare mezenterik arter kesimi monte myograph odası. (A) bir fare mezenterik arter kesimi üzerinde iki jaws iki çelik teller kullanarak monte. Beyaz çubuğu 2 mm. (B) bir mikroskopik resim bağlı fare mezenterik arter segmentin paneli (A) =. Siyah bar = 0.5 mm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3: normalleştirme yordam ve kullanılmasının muhtemelen yüksek-K+ çözüm tarafından gösterilen temsilcisi orijinal tracings. Sonra ikinci yüksek-K+ stimülasyon, düzenli deneme yapılabilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 4
Şekil 4: yüksek tarafından sözleşmeli fare mezenterik arter temsilcisi izleme-K + çözüm ve birikmiş neoliensinine doz ekleyerek rahat. Dozları arttıkça, kuvvet azaltılmış doz bağımlı bir şekilde Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Hipertansiyon ciddi komplikasyonlar kardiyovasküler dahil olmak üzere ve böbrek hastalıkları16nedeniyle yaygın halk sağlığı mücadeledir. Hipertansiyon patogenezinde anlama ve keşfetmek daha fazla Anti-Hipertansif İlaçlar Bu alandaki acil bir görev haline gelmiştir. Kan basıncı oluşturulur ve dolaşım periferik direnç tarafından yapılmaktadır. Poiseuille'nın kanunen nispeten küçük arterlerin dolaşım direnci büyük bir kısmı oluşturmak ve kan basıncı3,10baskın yapımcısı olarak hizmet vermektedir. Böylece, büyük arter yerine küçük-direnç arterler ölçümü daha kan basıncı çalışmalar için uygundur. Tel myograph teknoloji küçük-direnç arterler fizyolojik fonksiyonları ve vasküler hastalıklar patogenezi okumaya en iyi yöntemleri biridir.

Küçük gemi tel myograph sistemi de diğer raporlarda belgelenmiş oldu ve sıçan mezenterik arterler8 ve fare arter aort9gibi daralma ölçmek için kullanılan. Genetik manipülasyon, çeşitli hastalık modelleri ve uyuşturucu tarama modelleri, fare yararlanarak çok alanda yaygın olarak kullanılan model hayvan haline gelmiştir. Bu nedenle, burada, biz bu yöntemi fare mezenterik arter daralma ölçümü için değiştirilmiş bir protokol sağladı. Bu raporda, başarıyla fare mezenterik arterler contractility değişiklikler temel arabellekleri ve montaj adımları ile ölçülür. Ex vivo vasocontractility ölçüm üzerinde birçok çalışma çözümleri NaHCO3, gibi Krebs çözümleri, içeren fizyolojik tuz solüsyonu taklit etmek için kullanılır. Ancak, bu tür arabellekleri CO2 CaCO3üretiminde kaynaklanan ölçüm boyunca pH değeri ayarlamanız gerekir. H-T çözüm tampon sistemi seçilen ve iyi çalıştı bulundu. SıcaklıkpKdeğeri HEPES üzerinde küçük bir etkisi beri çözüm pH değeri uygun oda sıcaklığında ayarlanır ve 37 ° C 17, değişmez. Buna ek olarak, kullandığımız Ca2 +-ücretsiz H-T çözüm olarak teller gemi daralma Ca2 +tarafından önlemek için gemi lümen aracılığıyla rehberlik. Bu iletişim kuralı içinde başka bir değişiklik montaj prosedürü olduğunu. Bazı raporlar8,9 ve aygıt el ile5 ilk teli çenene sabitleme sonra ikinci tel rehberlik öneririz. Bulduğumuz iki kablo bu yöntem dönüştürücü sınırlı odası alanı yüzünden olası hasar azaltmak çünkü gemi montaj önce gemi lümen yönlendirilir daha iyi çalışır.

Bu yöntem yüksek tekrarlanabilirlik rağmen bazı önemli adımlar daha fazla dikkat edelim. Forseps ve makas neden damarlarına zarar görmemesi için en önemli şey. Gemi diseksiyon sırasında operatör ve forseps hafifçe yağ dokusu uzanan zaman kullanmanız gereken bağ dokusu kesme dikkatle makas kullanın. Buna ek olarak, fiksasyon için gemi sıkma nazikçe yapılmalı ve endotel hasarı endotel hasar gemi anormal yanıt, e.gartış verecektir çünkü teller rehberlik zaman kaçınılmalıdır. normal gemi bir gevşetici etkisi gösterirken , hasarlı gemi belirgin güç gerilim stimülasyon ile asetilkolin, sonra gösterir. Bu fenomen için hasarlı endotel nitrik oksit düzgün üretemez açıklamadır. Not daralma endotel ile ilgili içeren denemede endotel durum güç ölçüm önce test edilmelidir. Dönüştürücü kolayca zor bir güçle uyguladıysanız zarar için buna ek olarak, biz de dikkatle gemi üzerinde jaws monte. Son olarak, biz genellikle sürekli artış değeri üzerinde mikrometre normalleştirme işlemi sırasında kullanmayın. Artış değeri 30 veya 20 µm başlangıçta ise ve 10 µm etkili basınç sonra 11-12 kPa ulaşır. Bu yöntem normalleştirme zamanı azaltabilir ve esneme, böylece gemi hasar inceltiyorum engel olabilir.

Her ne kadar bizim soruşturma fare mezenterik arterler üzerinde duruldu, bu yöntem de aort, bronşlar ve diğer böbrek de dahil olmak üzere küçük gemiler, beyin ve pulmoner arterler için kullanılabilir. Bu sistem dört kanal içerir, aynı anda dört paralel örnekleri ölçüm için uygun oldu. Buna ek olarak, tüm bir mezenterik vasküler yatağın en az dört arter kesimleri sağlayabilir, böylece farklı deneysel grupları tasarlamak çok kolaydır. Bizim deneyim göre her arter kesiminin en az 4 saat hayatta ve iyi yanıt-e doğru yüksek-K+ çözüm için en az 6 tekrar üzerinde tutar. Bu özellik çeşitli eklemeler çeşitli aday ilaçların etkileri ölçümleri için son derece yararlıdır. Ancak, aynı zamanda tel myograph sistemi için sınırlamalar vardır. Ex vivo tel myograph deneme sadece izometrik vasocontractility ölçmek mümkün, ancak genellikle gemi karmaşık analiz için diğer ölçümleri ile birleştirilmelidir.

Özetle, biz çok tel myograph sistemini kullanarak fare mezenterik arter isomeric contractility ölçülmesi için bir yöntem nitelendirdi. Bu yöntem vasküler düz kas ve düz kas gevşetici ekran işlevleri değerlendirmek için kullanılabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgments

Dr. Wei Qi He (Soochow Üniversitesi, Suzhou, Çin) ve Dr. Yan Ning Qiao (Shaanxi Normal Üniversitesi, Xi'an, Çin Halk Cumhuriyeti) Teknik yardım için teşekkür ederiz. Bu eser Ulusal Doğa Bilimleri Foundation of China (Grant 31272311, 81373295 ve 81473420) ve proje finanse öncelik Akademik Program geliştirme, Jiangsu Yükseköğretim kurumlarının (Grant No tarafından desteklenmiştir ysxk-2016).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Multi wire myograph system DMT 610-M
Stainless steel wire DMT 400447
Geuder dissection scissor DMT 400431
Dumont forceps DMT 300413
PowerLab/8SP ADInstruments ML785
Software ADInstruments LabChart 5
NaCl SigmaAldrich S5886
KCl SigmaAldrich P5405
CaCl2 SigmaAldrich C4901
MgCl2·6H2O SigmaAldrich M2393
D-Glucose SigmaAldrich G6152
HEPES Sangon Biotech A100511-0250
NaOH SigmaAldrich S8045
DMSO SigmaAldrich D2650

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bevan, J. A., Osher, J. V. A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro. Agents and Actions. 2, (5), 257-260 (1972).
  2. Mulvany, M. J., Halpern, W. Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ. Nature. 260, (5552), 617-619 (1976).
  3. Mulvany, M. J., Halpern, W. Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats. Circulation Research. 41, (1), 19-26 (1977).
  4. Mulvany, M. J., Nyborg, N. An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats. British Journal of Pharmacology. 71, (2), 585-596 (1980).
  5. Mulvany, M. J. Procedures for investigation of small vessels using small vessel myograph. Danish Myo Technology. Denmark. (2004).
  6. Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels. The Journal of Physiology. 275, 88-101 (1978).
  7. Michael, S. K., et al. High blood pressure arising from a defect in vascular function. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, (18), 6702-6707 (2008).
  8. Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography. Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).
  9. del Campo, L., Ferrer, M. Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries. Springer. New York. (2015).
  10. Fisher, S. A. Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function. Physiological Genomics. 42, (3), 169-187 (2010).
  11. Crowley, S. D., et al. Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system. The Journal of Clinical Investigation. 115, (4), 1092-1099 (2005).
  12. Qiao, Y. N., et al. Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure. The Journal of Biological Chemistry. 289, (32), 22512-22523 (2014).
  13. He, W. Q., et al. Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301, (2), H584-H591 (2011).
  14. Yang, G. M., et al. Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant. Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).
  15. Slezák, P., Waczulíková, I., Bališ, P., Púzserová, A. Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery. Physiological Research. 59, (6), 1033-1036 (2010).
  16. Kearney, P. M., et al. Global burden of hypertension: analysis of worldwide data. The Lancet. 365, (9455), 217-223 (2005).
  17. Good, N. E., et al. Hydrogen Ion Buffers for Biological Research. Biochemistry. 5, (2), 467-477 (1966).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics