Balık davranış araştırmak için FishSim animasyon Toolchain kullanarak: Mate-seçim Sailfin molileri kopyalama üzerinde bir vaka çalışması

Behavior

Your institution must subscribe to JoVE's Behavior section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Roman FishSim animasyon Toolchain kullanarak, biz dostum-seçim sailfin molileri kopyalama bağlamında bir protokol için non-invaziv görsel işleme genel bilgi mevcut. FishSim Animasyon Toolchain bir kullanımı kolay çerçeve tasarımı, animasyon ve canlı test balık ile davranış deneyler için bilgisayar animasyon balık çekim gücü sunumunu sağlar.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Gierszewski, S., Baker, D., Müller, K., Hütwohl, J. M., Kuhnert, K. D., Witte, K. Using the FishSim Animation Toolchain to Investigate Fish Behavior: A Case Study on Mate-Choice Copying In Sailfin Mollies. J. Vis. Exp. (141), e58435, doi:10.3791/58435 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Son on yıl içinde hayvan davranış araştırma için bilgisayar animasyonlar istihdam invaziv olmayan görsel uyaranlara, canlı hayvan işleme için karşılaştırıldığında davranışını ve görünümünü değiştirmek için onun yetenek nedeniyle artmıştır. Burada, FishSim animasyon Toolchain, araştırmacılar olarak balık ile davranış deneyler 3D bilgisayar animasyon uygulamak için bir kullanımı kolay yöntem sağlamak için geliştirilen bir yazılım çerçeve mevcut. Toolchain beş farklı balık türlerinin sanal 3D uyaranlara oluşturmak için şablonlar sunar. Uyaranlara hem görünüm hem de canlı balık çekilen fotoğraflar üzerinde bağlı boyutu, özelleştirilebilir. Birden çok uyaranlara yolları bir video oyun denetleyicisi kullanarak sanal bir ortamda yüzme kaydederek hareketlendirilebilir. Simüle davranış standardizasyon artırmak için önceden kaydedilmiş yüzme yolu ile farklı uyaranlara replayed. Birden çok animasyon daha sonra çalma düzenlenen ve monitörde canlı balık ile deneyler sırasında sunulan.

Bir vaka çalışması sailfin molileri (Poecilia latipinna) ile FishSimile bir dostum-seçim kopyalama deneme yapmak nasıl bir protokol sağlar. Biz oluşturmak ve sanal ve sanal modeli erkek hareketlendirmek için bu yöntem kullanılmaktadır ve sonra bunlar odak kadın bir ikili seçim deneyde yaşamak için sundu. Bilgisayar animasyon kadın gravid noktalar rol kalite dostum-seçim kopyalama içinde bir modeli kadın için bir göstergesi olarak araştırmak için dostum-seçim kopyalama denemede sanal balık benzetimini yapmak için kullanılan bizim sonuçlar gösterilmektedir.

Bu yöntemi uygulayarak dostum-seçim kopyalama deneyler için sınırlı değildir ancak çeşitli Deneysel tasarımlar içinde kullanılabilir. Yine de, onun kullanılabilirlik çalışma türler görsel yeteneklerine bağlıdır ve ilk doğrulama gereksinimi vardır. Genel olarak, bilgisayar animasyonlar ve yüksek seviyede kontrol ve standardizasyon deneylerde sunuyoruz 'azaltmak' ve 'canlı uyarıcı hayvanlar de 'deneysel prosedürler rafine olarak ' yerine' potansiyeline ayı.

Introduction

Son zamanlarda, bilgisayar animasyonlar ve sanal gerçeklik gibi yapay uyarıcılara oluşturulması için modern teknikleri kullanarak araştırma1popülaritesi topladı vardır. Bu yöntemleri klasik deneysel yaklaşımlar canlı uyarıcı hayvanlar1,2ile karşılaştırıldığında birçok avantaj sağlar. Bilgisayar animasyonu non-invaziv görünüm (boyut, renk) manipülasyon ve deneylerde kullanılan sanal uyarıcı hayvanlar davranışını etkinleştirir. Örneğin, bir sonraki çalışmada bu tür4bilgisayar animasyon kullanarak kılıç erkek yeşil kılıç kuyruklar (Xiphophorus helleridostum tercihleri dişiler3 ' te test etmek için) içinde cerrahi olarak çıkarılması gereksiz hale oldu. Ayrıca, bilgisayar animasyonları doğa5' te nadiren karşılaşılan fenotipleri oluşturabilirsiniz. Sanal hayvan morfolojik özellikleri bile bu tür4doğal aralığının ötesine değişmiş olabilir. Özellikle, çünkü canlı hayvan6,7ile neredeyse imkansız mümkün sistematik işleme davranışının bilgisayar animasyon, bir büyük avantaj sağlıyor.

Bilgisayar animasyonlar oluşturmak için tarih için çeşitli teknikler vardır. Basit iki boyutlu (2D) animasyonları genellikle yalnızca iki boyutlu olarak hareketli bir uyarıcı bir resmini elde ve MS PowerPoint8 veya Adobe After Effects9gibi ortak yazılım oluşturulabilir. Daha sofistike 3D grafik yazılım modelleme gerektiren, üç boyutlu (3D) animasyonlar üç-boyutlu, gerçekçi ve karmaşık fiziksel hareket6,7 için olanaklar artan taşınacak uyarıcı etkinleştirin , 10 , 11 , 12. bile sanal gerçeklik nerede canlı hayvan gezinmek bir 3D ortamı simüle tasarımlar kullanılan13,14olmuştur. İçinde son gözden am-Thuly vd. 2 bu teknikler teker teker tartışmak ve avantajları ve dezavantajları uygulanışını araştırmada, özellikle çalışma kapsamı ve test hayvan görsel kapasiteleri bağlıdır üzerinde vurgulamak ("Tartışma" konusuna bakın). Ayrıca, Powell ve Rosenthal15 tavsiyelerde uygun deneysel tasarım ve hangi soruları hayvan davranış araştırma yapay uyarıcılara istihdam ederek ele.

Bilgisayar animasyon oluşturma zor ve zaman alıcı olabilir beri yazılım kolaylaştırmak ve animasyon tasarım sürecini standartlaştırmak için ihtiyaç ortaya çıktı. Bu çalışmada, biz özgür ve açık kaynak FishSim animasyon Toolchain16 tanıtmak (kısa: FishSim; https://Bitbucket.org/EZLS/fish_animation_toolchain/), bu ihtiyaçlarını karşılamak için biyoloji ve bilgisayar bilimleri birleştiren bir multidisipliner yaklaşım. Benzer şekilde daha önce yayımlanmış aracı anyFish17,18, toolchain geliştirilmesi hedef olarak balık ile deneyler animasyonlu 3D uyaranlara uygulamak için bir kullanımı kolay yöntemi ile araştırmacılar sağlamak için takip ettim. Bizim yazılım kullanılabilir araçlar kümesi oluşur: (1) oluşturmak 3D sanal balık (FishCreator), (2) animasyon video oyun denetleyicisi (FishSteering) ve (3) ile sanal balık yüzme yollarını düzenlemek ve sunmak önceden kaydedilmiş animasyonlar odak balık (FishPlayer) live monitörde. Bizim toolchain bir ikili seçim durumda test için özellikle yararlıdır ama da diğer Deneysel tasarımlar için uygun olan çeşitli özellikler sağlar. Ayrıca, iki veya daha fazla sanal balık mümkün animasyon shoaling veya Kur simülasyonu sağlar. Animasyonlar için belirli bir uyarıcı bağlı değildir ama bir uyarıcı görünümünü değiştirmek ama davranışının sabit tutmak mümkün hale diğer uyaranlara yeniden. Sistemin yüksek modüler sağlamak ve dış geribildirim cihazlar dahil etmek için neredeyse sonsuz olanaklar sunmaktadır toolchain yanı sıra robot operasyon sistemde ROS (www.ros.org), temel gerçeği açık kaynak niteliği (denetleyici olarak veya bir izleme sistemi) ve araç zinciri araştırma kendi ihtiyaçlarına adapte. Sailfin molly ek olarak, dört diğer türler Şu anda kullanılabilir: Atlantic molly Poecilia mexicana, guppy Poecilia reticulata, üç - spined stickleback Gasterosteus aculeatus ve bir Çiklit Haplochromis spp. Yeni tür bir 3D grafik aracı (Örneğin, Blender, www.blender.org) modelleme oluşturulabilir. FishSim akışıyla örneklemek ve bilgisayar animasyonu ile bir dostum-seçim kopyalama deneme yapmak nasıl bir protokol sağlar için bir örnek çalışma sailfin molileri ile gerçekleştirilen.

Dostum seçim hayvanlar onların hayat hikayesinde en önemli kararların biridir. Hayvanlar ortakları çiftleşme en iyi bulmak için farklı stratejiler geliştirmişlerdir. Onlar potansiyel ortakları bağımsız olarak, muhtemelen bir belirli fenotipik özellik19,20için önceden belirlenmiş genetik tercihlerine göre çiftleşme değerlendirirken hakkında kişisel bilgi güveniyor olabilir. Ancak, onlar ayrıca conspecifics eş seçiminde dikkat ve böylece genel bilgi21kullanmak. Gözlemci sonra aynı arkadaş (veya aynı fenotip) gözlenen conspecific seçmek karar verirse — "model" — daha önce seçilmiş, bu dostum-seçim (bundan sonra mm kısaltılır) kopyalama22,23olarak adlandırılır. Dostum-seçim kopyalama sosyal öğrenme şeklinde olduğunu ve bu nedenle, her iki omurgalı25,26,27,28gözlenen, bir sigara bağımsız dostum-seçim stratejisi24, 29 ve omurgasızlar30,31,32. Şimdiye kadar mm balık ağırlıklı olarak incelenmiş ve laboratuvar koşulları33,34,35,36,37,38 altında hem de bulundu vahşi39,40,41,42. Dostum-seçim kopyalama özellikle değerli bir birey için iki veya daha çok potansiyel çiftleşme ortak kalite ve bir "iyi" dostum seçim görünüşte benzer — fitness en üst düzeye çıkarma açısından —43yapmak zordur. Odak kadın onun seçim veya değil44,45,46,47kopyalamak isteyip kendini manken kadın kalitesini etkileyebilir. Sırasıyla, "iyi" ya da "kötü" modeli kadın kalite onu daha az ya da eş seçiminde, örneğin boyutu ve yaş44,45,46ile ilgili olarak, ya da onun bir conspecific varlık tarafından yaşanıyor için sanılıyor ya da bir heterospecific47. Conspecifics39,48,49,50,51eş seçimi kopyalayın sailfin molileri içinde odak kadın bile bir erkek52 ret kopya bulundu . MM fenotipik özellikleri yanı sıra türleşme ve hibridizasyon21,23,53,54, kopyalama sonuçlarını gelişiminde önemli bir rol oynamak için kabul edilir beri bir " yanlış"seçim copier55fitness azaltılmasında çok büyük olabilir. Bireysel, gözlenen modeli bilgi, modeli kendisini de deneyimli dostum onu ya da onun olması nedeniyle "iyi" bir seçim yapıyor Yani, güvenilir bir kaynak ise değerlendirmek önemlidir başka bir seçimi kopyalamak tek bir karar verirse seçim. Burada soru ortaya çıkıyor: görsel özellikleri sailfin molly dişi içinde kopyalamak için güvenilir bir model karakterize?

Gravid nokta kadın sailfin molileri ve diğer Poeciliids farklı bir görsel özelliğidir (olarak da bilinen 'anal nokta', 'damızlık patch' veya 'gebelik spot'). Onların anal bölge Koyu pigmentli bu alanda yumurtalık sac56astar doku melanization türetilmiştir. Gravid nokta varlığı ve boyutu değişken arasında conspecific kadın vardır ve daha fazla tek tek yumurtalık döngüleri56,57ilerleme sırasında değişebilir. Gravid noktalar erkekler çekmek ve gonopodial yönlendirme için iç döllenme58 veya doğurganlık59,60reklam aracı olarak hizmet verebilir. Gravid nokta ve bir dişinin üreme durum arasındaki bağlantıyı göz önüne alındığında, tahmin ettiğimiz gravid nokta odak kadın gözlemlemek için Şu anki üreme haline üzerinde bilgi sağlayarak modeli kadın kalite belirtisi olarak sunmaktadır. Biz iki alternatif hipotezler araştırdık. İlk olarak, gravid nokta vade olarak Farr ve Travis59tarafından tahmin için genel bir işareti ise muhtemelen güvenilir ve deneyimli modeli (spot) olmadan olgunlaşmamış modeline göre gösterir. Burada, odak kadın bir nokta ile bir modeli seçimi ama bunun bir model bir nokta olmadan kopyalamak daha yüksektir. Gravid işaretleri algılama sigara nedeniyle zaten broods olarak tahmin Sumner vd tarafından geliştirme ise ikinci alıcı olmayan dişiler daha az titiz olarak düşünülebilir beri 60, modelin muhtemelen daha az güvenilir olduğunu. Bu durumda, odak kadın kendi seçtikleri ama bu nokta olmadan modellerin kopyalamaz. Şimdiye kadar mm için gravid yerde sailfin molly kadın rolü asla test, ne de deneysel olarak manipüle.

Biz FishSim canlı uyarıcı ve klasik deneysel işlemin49yılında,50 kullanılan modeli balık kullanmak yerine bilgisayar monitörleri üzerinde sanal uyarıcı ve sanal modeli erkek sunarak mm deney gerçekleştirmek için kullanılan ,51,61. Bizim yazılım genel kullanılabilirlik daha önce sailfin molileri12' dostum seçim hakkında hipotezler test etmek için doğrulandı. Buraya, devamsızlık veya sanal modeli kadın gravid bir yerde varlığı canlı odak kadın gözlemleme dostum seçim etkiler olup olmadığını test ettik. İlk test tankı (Şekil 1.1) alışmana ve onlara iki farklı sanal uyarıcı erkek ikinci kaptan seçmeli testte (Şekil 1.2) arasında seçim odak kadın izin verdik. Daha sonra gözlem süresi boyunca, bir sanal modeli erkek (Şekil 1.3) ile birlikte önceki tercih edilmeyen sanal erkek sunuldu. Bir sonraki ikinci eş seçmeli test, odak kadın yine aynı erkek (Şekil 1.4) arasında açmadı. Odak kadın dostum-seçim kararını birinci ve ikinci eş seçmeli test karşılaştırarak gözlenen modeli erkek arkadaş seçiminde kopyalanan olup olmadığını analiz ettik. Biz hangi biz görsel olarak sanal modeli erkek kalitesini manipüle iki farklı deneysel tedaviler uygulandı. Gözlem süresi boyunca, biz de önceki tercih edilmeyen sanal erkek (1) ile birlikte bir sanal modeli erkek olan bir gravid yeri ("spot" tedavi); sundu veya (2) ile birlikte sanal modeli erkek gravid nokta ("spot" tedavi) olmadan. Ayrıca, odak kadın sürekli ne zaman genel bilgi sağlanan açmadı olup olmadığını herhangi bir model erkek olmadan kontrol, test ettik.

Figure 1
Şekil 1. En önemli deneysel adımlar sanal balık uyaranlara kullanarak bir mm deney için genel bakış. (1) iklimlendirme dönemi. İkinci Kaptan seçmeli test (2) : canlı odak erkek arasındaki sanal uyarıcı erkekler seçer. (3) gözlem süresi: fokal erkek saatler önceden tercih edilmeyen erkek bir sanal modeli erkek gravid nokta ile birlikte. (4) ikinci eş seçmeli test: fokal erkek tekrar sanal uyarıcı erkekler arasında seçer. Bu örnekte, o modeli seçimi kopyalar. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Gerçekleştirilen deneyler ve balık işleme Alman hayvan refah teşri (Deutsches Tierschutzgesetz) ile uyumlu olduğunu ve iç hayvan refah görevlisi Dr. Urs Gießelmann, Siegen Üniversitesi ve bölgesel yetkililer (tarafından onaylanmış Kreisveterinäramt Siegen-Wittgenstein; İzni numarası: 53.6 55 05).

1. sanal balık tasarım

Not: Gerekli donanım ve yazılım listesi ek materyalleri listesinde bulun. Ayrıntılı bir açıklama FishSim ve ek ipuçları ve hileler genel işlevlerin Kullanım Kılavuzu (https://bitbucket.org/EZLS/fish_animation_toolchain/) bulunabilir.

  1. Kadın vücut dokuları ve gravid nokta olmadan hazırlanması
    1. GIMP başlatmak ve dosyasını tıklatın >> açık kadın vücut doku görüntü "PLF_body_6. açmak için png"Dizin"fishsim_animation_toolchain"içinde klasör modelleri . Bu resim gravid nokta ile tüm yeni oluşturulan kadın bedeni dokular için referans olarak kullanın. Özgür seçim aracı ile referans resim karanlık gravid spot alanı seçin ve onu kesin ('ı tıklatın düzenleme >> kesme).
      Not: GIMP (www.gimp.org kullanılabilir) ücretsiz bir resim düzenleme aracı, dijital fotoğraf ve grafik işlemek için kullanılan Adobe Photoshop için benzer olduğunu.
    2. GIMP (Örneğin, "PLF_body_7.png") ikinci bir kadın vücut doku dosyasını açın ve spot alan ikinci vücut doku üzerine ekleyerek transfer (düzenleme >> Yapıştır ') yer alan yeni bir yüzen tabaka olarak önceden kesilmiş. Tıklatarak gravid spot ikinci resim ve birleştirme katmanlarındaki konumunu ayarla Katman >> bağlantı katmanı.
      Not: Gravid yer alan aynı boyutta ve her sanal modeli erkek (Şekil 2) aynı konumda olduğundan emin olun!
    3. İhracat (düzenleme >> Dışa Farklı Aktar) yeni bir adla (Örneğin, PLF_body_7_S. png) modelleri klasör içinde yeni "nokta" doku. Tüm GIMP resim pencerelerini kapatın.
      Not: Değişiklikler (Örneğin, ölçekleme) özellikle daha sonra olmak üzere düzenlenen bu yana dosya 3D balık eşlenen doku yapmayın.
    4. (Örneğin, "PLF_body_7.png") ikinci kez aynı orijinal kadın vücut doku dosyasını kullanarak gravid bir yer olmadan ikinci bir vücut doku oluşturmak. Özgün dosyanın GIMP yardımıyla zaten varolan gravid noktalar koruyun.
    5. Kadın vücut doku GIMP açın ve klonlama aracıseçin. Ctrl + sol tıklayın basarak karın çevresi (olmadan karanlık pigmentasyon) kalıbı seçin ve varolan karanlık pigmentasyon boyayarak üzerinden klonlama aracı (Şekil 2) ile karşılamak için bu seçimi kullanın.
    6. Yeni oluşturulan verme "hayır nokta" doku yeni bir adla (Örneğin, PLF_body_7_NS.png) modelleri klasör içinde. GIMP kapatın.

Figure 2
Şekil 2: kadın bedeni suret resimleri dokular (orijinal) önce ve sonra "spot" ve "nokta" tedavi için düzenleme resim düzenleme kullanarak aracı GIMP. Noktalı çember manipüle edildi alanını işaretler. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

  1. Bakış açısı ayarlama ve "sahne" animasyon için ayarlama
    1. FishSim Masaüstü. sol tarafındaki launcher FishSim simgesini seçerek başlayın Çözünürlük sunu monitörler için yapılandırmak ve Başlat' ı tıklatın.
      Not: Duvarda duran sunum ekranında aşağıdaki ayarlamalar (adımları 1.2.2\u20121.2.4) yapmak için tavsiye edilir (monitör boyutları ve çözümleri farklı Eğer).
    2. Düzenleme modu (ile ilgilenen ve tekrar tekrar F1tuşuna basarak düzenleme modu arasında geçiş yap) moduna görüntülemesini değiştirmek için klavyedeki F1'e basın.
      Not: Düzenleme moduna geçiş penceresinin en üstündeki düzenleme araç çubuğu sağlar. Görüntüleme modunda görüldüğü gibi sahne ne deneyler sırasında ekranda sunulacak gösteriyor.
    3. Kamera açısını ayarlayarak sunu monitörler boyutlarla eşleşecek şekilde bakış açısı ayarlayın. Sol fare düğmesini basılı tutarak kamerayı Döndür ve ele alalım. Sağ fare düğmesini basılı tutup imleci hareket kamera pan. Orta fare (veya iki fare tuşu) basılı tutup imleci hareket vınlamak içinde ve dışarı.
    4. Kamera ayarlarını düzenleme araç çubuğu (kamera simgesi) tıklatın ve bakış açısına ayarlamak için statik kam için Kopyala ' yı tıklatın. ' I tıklatın Dosya >> yeni varsayılan sahne ayarlanan olay kaydetmek için sahne kaydedin . Bu, geçersiz kılmak için FishSim dizinin sahneleri klasöründe "default_scene.scene" dosyası.
      Not: Varsayılan sahne FishSim ve FishPlayerbaşlangıç sahnesinde her başında görünecektir. FishPlayer içinde varsayılan sahne Ayrıca deneyler sırasında (Şekil 3A) bir duraklama hizmet vermektedir. Sahne ayarlama yalnızca bir kez yapılması gerekiyor.

Figure 3
Resim 3: bir sahnede ekran FishSim. (A) bir balık, (B) bir erkek yalnız, (C) bir nokta olan bir modeli dişi ve (D) ile birlikte aynı o erkek aynı erkek ve kadın aynı modeli gösteren bir sahne gösterilen bir sahne gösterilen bir sahne olmadan boş varsayılan sahne bir nokta. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

  1. Sunu sırasında dostum seçmeli testler için sanal bir erkek çekim gücü tasarımını
    Not: Daha sonra animasyon ve odak kadın dostum seçmeli testler sırasında yaşamak için sunulan sanal erkek uyaranlara hazırlayın.
    1. Olmazsa zaten açın, FishSimbaşlar. Düzenleme moduna girmek için F1 tuşuna basın.
    2. ' I tıklatın Dosya >> Balık model yükleme --dan belgili tanımlık damla-aşağı yemek listesi ve yük "klasöründen seçerek varsayılan erkek sailfin molly şablondefault_PLM.x" modelleri.
    3. Sol dolu balık seçmek için çift tıklatın. Bir kafes içinde vurgulanır. Balık araç kümesi açmak için araç dişli simgesini tıklatın. Bir kutu sanal erkek özelleştirmek için kullanılan düzenleme seçenekleri ile açılır. Kafes göstermek balık daha iyi görebilmek için işaretini kaldırın.
    4. Adı erkekiçin değiştirin.
      Not: Erkek adı önemlidir ve "daha sonra animasyon sırasında oynayacak rolü" temsil eder. Bu adı daha sonra deneyler sırasında kullanılacak olan her yeni oluşturulan sanal erkek için aynı olması gerekir.
    5. Ölçek (boyutlar) erkek x, değerlerini değiştirerek alter y ve z, gerekli ve Uygula' yı tıklatın.
    6. Erkeğin doku dokular Düzenle araçkutusunda tıklatarak düzenleyebilirsiniz. Balık (gövde, sırt, kaudal) değiştirmek için bir özellik olarak'ı tıklatın.
      Not: Bir doku için seçim kutusunu dokular kullanılabilir tüm .png dosyaları ile açılır. Dokular modelleri klasör adlarında belirli olarak görünür.
    7. (Sağ) listesinde görüntülenen bir doku tıklayın, ve doğrudan görünür ve balık önceki doku değiştirin.
    8. İstenen erkek oluşturulduğunda, Config Düzenle araç kutusualtında Uygula ' yı tıklatın ve balık diske kaydet' i tıklatın. Yeni erkek modelleri klasör "Male_A.fish" olarak kaydedin.
    9. Ayrıca, tüm sahneyi kaydedin (Dosya >> sahne kaydet) o bir erkek sahneleri klasöründe dahil. Burada, adı "Male_A_alone.scene" kullanmak için tavsiye edilir (şekil 3B).
    10. ' I tıklatın Dosya >> yük sahne boş varsayılan sahne yük ve adımları gerektiği gibi birçok farklı sanal erkek oluşturmak ve kaydetmek için 1.3.2-1.3.9 her yeni oluşturulan erkek modeller klasöründe ve yeni bir .scene dosyası olarak benzersiz bir adla tekrar sahne klasör.
  2. Gözlem süresi boyunca sunu için sanal modeli kadın balık tasarım
    1. ' I tıklatın Dosya >> yük sahne varsayılan sahne yüklemek için. Adım 1.3.1 izleyin ve'ı tıklatın Dosya >> Balık model yükleme varsayılan kadın şablon "default_PLF.x" modelleri klasörden yüklemek için.
    2. Sol seçin ve balık araç kümesi açmak için yüklü erkek üzerinde çift tıklatın. Adı "kadın" olarak değiştirin. Dişi 1.3.5 adımda anlatıldığı gibi gerekirse çap.
      Not: Adı ve ölçekleme bu deneme amaçlı bütün kadınlar için aynı olması gerekir.
    3. Varsayılan kadın vücut doku ile önceden oluşturulmuş "spot" yerine-vücut (sağ taraftaki kutuya listelenir) doku 1.3.6-1.3.7 adımlarda açıklandığı gibi.
    4. Config Düzenle araç kutusualtında Uygula ' yı tıklatın, sonra Kaydet tıklayarak ve yaratmak a eğe "Female_1S.fish" Balık kaydet (S = nokta).
    5. ' I tıklatın Dosya >> yük sahne varsayılan sahne yüklemek için. 1.4.1-1.4.4 en az bir tane oluşturmak için adımları tekrarlayın (ya da en çok ihtiyaç duyulan) aynı modeli kadın ama gravid olmadan spot ve "Female_1NS.fish" adını (NS hiçbir nokta =). . Klasör modelleri her balık Kaydet
      Not: MM deney gözlem süresince oluşturulan ve kaydedilen bir erkek ve bir kadın da dahil olmak üzere sahneleri var.
    6. ' I tıklatın Dosya >> yük sahne boş varsayılan sahne yüklemek için. ' I tıklatın Dosya >> Balık model yükleme sanal bir erkek "Male_A.fish" modelleri klasör eklemek için. ' I tıklatın Dosya >> Balık model yükleme tekrar sanal eklemek yerine kadın "Female_1S.fish" modeli. Böylece bedenlerini çakışmadığından onların x, y ve z-koordinatlarının değiştirerek her balık konumunu değiştirin.
      Not: Bir balık olay yerinden üzerinde çift tıklatıp silmek üstünde klavye tuşuna basarak silin.
    7. Kaydet tıklayarak erkek ve kadın modeli dahil sahne Dosya >> kaydetmek sahne "Male_A_with_Female_1S.scene" (Şekil 3 c) olarak.
    8. 1.4.6-1.4.7 için üç ek sahne oluşturmak için adımları yineleyin: (1) Male_A (bkz: şekil 3D) Female_1NS, Female_1S ile Male_B (2) ve (3) Male_B ile Female_1NS.

2. sanal balık uyaranlara animasyon

Not: Her tür bir deney için gerekli animasyon yalnızca bir kez bir örnek teşkil eden erkek sahne ve bir örnek gözlem sahne (erkek ve dişi birlikte animasyon) kullanılarak hazırlanması gerekir. Adı aynı olduğu sürece animasyon işlemi sırasında hangi daha sonra herhangi bir balık tarafından replayed yüzme yol her balık için oluşturulur (bkz. Adım 1.3.4).

  1. Sunu sırasında dostum seçmeli testler için sanal erkek animasyonlar
    Not: Sanal bir erkek iki animasyon hazırlamak: (1) bir yüzme yol 7.5 dakika süreli ve 5 dk süre ile (2) bir yüzme yol.
    1. Oyun denetleyicisi (Örneğin, Sony Play Station 3) çalışma bilgisayarın USB portuna takın.
    2. FishSim açıp'ı Dosya >> yük sahne bir erkek sahne klasör sahneleri, Örneğin, "Male_A_alone.scene" yüklemek için. FishSteering FishSteering ikonuna tıklayarak başlatın.
    3. Ayrı bir pencerede denetleyicisi ayarlarını yapılandırın.
      Not: FishSim ve FishSteering aynı anda çalıştırın ve balık da olabilir, deneyler sırasında gösterildiği gibi görüntüleme veya düzenleme modunda F1tuşuna basarak yönlendirdim.
    4. (Erkek) balık hareketlendirmek için direksiyon panelinin açılır menüsünden seçin. Modeli adları burada karşılık gelen Araç kutusu Düzenle kutusunda verilen adla (bkz. Adım 1.3.4).
    5. Yerleştirerek Başlat ' ı tıklatın ve denetleyici sanal tank içinde başlangıç herhangi bir pozisyonda balık eklemenizi sağlar. Yerleştirerek durdur' u tıklatın.
    6. . Kaydetmeye başlamaktıklayarak Balık'ın yüzme yolu kaydetmeye başlama Denetleyicinin balık sahne etrafında taşımak için kullanın.
      Not: Kayıt süresi direksiyon panelinin sağ alt köşesinde verilir.
    7. . Kaydı Durdur' u tıklatın Üstünde belgili tanımlık götürmek (Örneğin, Masaüstü) Yüzme yolun bir .bag dosyası olarak (bir "kayıt") kaydetmek için Kaydet ' i tıklatın. Örneğin, "7_30_min_male_alone.bag" kayıt süresi temsil etmek için dosya adını seçin.
      Not: Bir kez kayıt durdurulduktan sonra toplam süresi yeniden düzenlemek mümkün değil.
    8. Erkeğin sırt yüzgeci dostum seçmeli testler sırasında erkek Kur davranışı taklit etmek için hareket eklemek için kayıt düzenleyin. Sırt yüzgeci düzenleme özelliği açılır menüden seçin (yalnızca bir özellik bir anda düzenlenebilir).
    9. Select Başlat düzenleme ve tam yüzme yolu replayed. Sırt yüzgeci belirli noktalarda zamanında yükseltmek için denetleyicisinde L1 düğmesine basın. Yeni bir . yüzme yolu düzenlenmiş sürümünü kaydetmek için Kaydet ' i tıklatın çanta-dosya.
    10. 2.1.8 2.1.9 aygıtlarından ama onun hareket eklemek için gonopodium seçin. Final sürümü daha sonra kullanmak için FishPlayerkaydedin. Yakın FishSteering.
      Not: Bu çanta-dosyalarını düzenleme her adım benzersiz bir ad altında kaydetmek için tavsiye edilir. Bu, her zaman bir düzenleme işleminde sorun çıkarsa animasyon daha önceki bir sürüme dönmek mümkündür.
  2. Gözlem süresi boyunca tanıtımı için sanal erkek ve model kadın animasyon
    Not: Kur, böylece cinsel etkileşim ile her diğer, 10 min Toplam süresi olan bir sanal ve sanal modeli erkek ile bir animasyon hazırlamak.
    1. Açık FishSim. Düzenleme moduna girin ve'ı tıklatın F1 tuşuna basarak Dosya >> yük sahne bir sahne ile erkek ve dişi, Örneğin, "Male_A_with_Female_1S.scene" yüklemek için. Başlangıç FishSteering.
    2. Erkek ve dişi dönüşümlü olarak yer onları ( Start/Stop yerleştirerektıklatarak) sanal tankında seçin.
    3. Kaydı, dişi balık önce direksiyon panelinin açılır menüsünden seçin ve aşağıdaki adımları 2.1.5-2.1.6 10 dk süresi olan bir yüzme yol oluşturun.
      Not: Bir defada yalnızca bir balık yüzme yolunu kaydedilebilir. İlk balık hareketlendirme sonra ikinci balık yüzme yolunu daha önce steered balık yanında animasyonun tüm süresi için replayed Edit işlevini kullanarak dahil edilebilir.
    4. Kaydı durdurmak ve yüzme yol sürücü, Örneğin, "10_00_min_male_with_female.bag" olarak Kaydet ' i tıklatın. Sonra art arda erkeğin yüzme yolu, sırt yüzgeci hareketi ve 2.1.8 2.1.10 adımlarda açıklandığı gibi gonopodium hareketi düzenleyin. Kaydetmek final sürümü FishPlayerdaha sonra kullanmak için.

3. animasyon çalma mm denemeye hazırlık

Not: FishPlayer animasyonlar odak kadın yaşamak için iki monitörde göstermek için kullanın. Ayrı ayrı mm deney (Şekil 1) yordamı benzetimini yapmak her monitör için çalma listesi düzenlemek. Kayıt listesi her monitör (Şekil 4) ve ayrı animasyon penceresi için gösterilen her sunu monitör için bir ana penceresinin araç oluşur.

  1. Genel işlevler ve sahneleri ve kayıtları düzenleme
    1. Tüm pencereleri kapatın ve FishPlayer karşılık gelen simgeyi tıklatarak açın. İki monitör için sunum (sol ve sağ) ile kullanım için kurulumu yapılandırabilir ve Başlat' ı tıklatın.
      Not: ( Scenes/default_scene.scenekaydedilmiş) 1.2.4. adımda oluşturduğunuz varsayılan sahne her zaman yüklü ve başlangıç sahne olarak ve Duraklat komutunu sırasında her iki monitörde görüntülenen.
    2. Girişleri ayrı ayrı her monitör için çalma listesine ekleyin. Örneğin, erkek A, sahne FishSim dizininde sahneleri klasörüne eklemek için Ekle yük sahne ' ı tıklatın. Sürücüden, Örneğin, yalnız bir erkek 7.5 dak bilgin bir kayıt eklemek için Ekle oyun kayıt'ı tıklatın.
      Not: Sahne ve sonraki sonra yazılım tarafından bağlanır ve sahnede tasvir sanal erkek karşılık gelen kayıt içinde tanımlandığı gibi animasyonlu.
    3. Balık olmadan varsayılan sahne arası kayıtlar işleme balık için bir fırsat olarak gösterilen bir Duraklat komutunu, belirli bir süreyi (dakika/saniye) eklemek için Ekle Duraklat ' ı tıklatın.
      Not: Duraklama süresi genellikle balık işleme için gereken süreyi üzerinde bağımlı olmalıdır. Bir girişi tıklatın ve listedeki kendi sırasını değiştirmek için sürükleyin. Seçilen girişleri kırmızı olarak işaretlenir. Çalma listesinden girdiyi seçip'ı tıklatarak bir girdiyi silmek Sil seçimi.
    4. Bir sunusunu başlatma ve durdurma için Yürüt/Durdur ' u tıklatın. Durdurmak her zaman tam listesi tamamlanır, Örneğin, orada bir kez çalışan bir çalma listesinin orta duraklatmak için bir yol yoktur.
      Not: Çalma listeleri her zaman ilk girdiden başlamak ve yukarıdan aşağıya doğru koşmak. Bu nedenle, tüm kayıtların doğru sırada deneme önce vardır ve daha sonra sunuyu durdurmadan değiştirilemez. Bir Zamanlayıcı penceresinin altındaki süresi ve geçerli çalma fiili süreyi gösterir.
  2. İki tedavi ve mm deney kontrolünü için çalma listesi düzenleme
    Not: Giriş düzenlemesi açısından mm deney iki bölüme ayrılır: (1) ikinci kaptan seçmeli test ve (2 gözlem süre ikinci eş seçmeli test tarafından. Bu nedenle, her tedavi ve kontrol için çalma listeleri içinde iki farklı sipariş düzenlenmiş olması gerekir.
    1. İlk olarak, deneme çalıştırırken, bir çalma listesi ikinci kaptan seçmeli test için hazırlamak.
    2. İkinci olarak, çalışan deneme sürecinde, sonraki gözlem süresi ve göre sanal erkek ikinci kaptan seçmeli test odak kadın tarafından tercih ikinci eş seçmeli test için çalma listesi düzenleme değiştirin.
  3. "Nokta" tedavi için belirli çalma listesi düzenleme
    1. Tedavi 1 ikinci kaptan seçmeli test için çalma listesi tam olarak Şekil içinde tasvir gibi sipariş
    2. İkinci Kaptan seçmeli testten sonra hangi sanal erkek tercih edilen hesaplamak için mola (bkz. Adım 5,9 aşağıda). Daha sonra çalma listelerini hangi odak erkek önceki tercih edilmeyen erkek modeli erkek birlikte göstererek genel bilgiler sağlanır gözlem dönemin yeniden düzenleyin.
    3. Gözlem ve Şekil 5göre aşağıdaki ikinci dostum seçmeli test için çalma listesini düzenleyin.
    4. Gözlem süresi için tercih edilen rahip yalnız erkek gösterilen bir sahne ile 10 dk kayıt (erkek ve model erkek birlikte) bağlama.
      Not: Bu durumda, yalnızca yüzme yolu erkek-ecek var olmak göstermek ve sahnede eksik olduğundan, sanal modeli erkek yok olacak.
    5. Tercih edilmeyen erkek featuring çalma için önceki tercih edilmeyen erkek modeli erkek birlikte dahil sahneye 10dk kaydını ilişkilendirme. Bu tedavi için gravid bir yer (ler) olan bir modeli dişi de dahil olmak üzere sahneler.
      Not: 3.3.2, aksine burada, aynı kaydı replayed ama şimdi modeli erkek görülür.

Figure 4
Şekil 4: FishPlayer çalma listeleri mm deney ilk bölümünde (ı. e., ikinci kaptan seçmeli test) sol ve sağ monitörler için gösterilen ekran. Çalma listesi girdileri tedavi 1 ikinci kaptan seçmeli test için gerektiği gibi sıralanır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 5
Şekil 5: FishPlayer çalma listeleri mm deney ikinci bölümünde (gözlem süresi ve ikinci eş seçmeli test) sol ve sağ monitörler için gösterilen ekran. Çalma listesi girdileri gözlem süresi ve tedavi 1 ikinci eş seçmeli test için gerektiği gibi sıralanır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

  1. "Hiçbir yer" tedavi için belirli çalma listesi düzenleme
    1. Tedavi 2, çalma listeleri için tedavi 1 (Şekil 4 ve 5) açıklandığı gibi sipariş ama bunun yerine sanal modeli erkek gravid nokta (NS) olmadan gözlem sırasında dahil sahne kullanın.
  2. Seçim tutarlılık denetimi için belirli çalma listesi düzenleme
    Not: Denetim seçim tutarlılık için çalma listesi girdileri dostum seçmeli test için tedaviler 1 ve 2 (Şekil 4) aynıdır. Gözlem süresi içinde ancak, genel bilgi odak kadın için sağlanan, bu nedenle, hiçbir modeli kadın da görünür.
    1. Şekil 5 ' te gösterildiği gibi çalma listelerini sipariş ama perdenin her erkek 10-min kaydı ile birlikte yalnız için birleştirmek.
      Not: Bu durumda, sadece erkek balık yüzme yolu görüntülenir ve modeli erkek-ecek var olmak yok sahnede eksik olduğu için her iki tarafta.

4. deneysel Kur

  1. Her bir test tankı ters ucunda yer iki bilgisayar ekranlarında. Ekranları test tankı cam duvarları en kapsayacak şekilde ve ekranları ve tank duvarlar arasındaki boşluğu 1,5 cm için ayarlayın. Yukarıdan tank için aydınlatma sağlar.
  2. Çakıl ince bir tabaka ile tank alt kapak ve canlı balık için uygun ekranlar yüksekliğe su ile doldurun. Seçim bölgesi tank dışındaki her ucundan 20 cm derinlikte dikey bir çizgi ile işaretler. Bir akrilik cam silindir ve iki kronometreleri el altında var.
  3. Monitör güç kaynağı ve en az 1 m testi deposu, Örneğin, küçük bir tablo (Şekil 6) üzerinde uzak yerleştirilen çalışma bilgisayar bağlayın.

Figure 6
Şekil 6: bilgisayar animasyon ile mm deneme için deneysel Kur. Çalışma bilgisayar animasyonları odak kadın test tankı içinde yaşamak için yeniden yürütme iki sunu monitör (monitör 1 ve 2) bağlanır. Gösterim amacıyla, her iki LCD monitörler animasyonlu bir sahne gösterisi için açılı olan. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

5. mm deneme gerçekleştirme

Not: Deneysel tedavi 1, tedavi 2 veya denetimin mm deney bir canlı odak kadın kullanarak bir deneme gerçekleştirmek için aşağıdaki yordamı izleyin (bkz. Şekil 1).

  1. FishPlayer çalışma bilgisayarda açabilir ve olarak tedavi 1 (Şekil 4) açıklanan Örneğin, ikinci kaptan seçmeli test için çalma listelerini düzenlemek. Sunum için monitörler çalışan ve bu boş varsayılan sahne gösteriyorlar onay.
  2. Canlı bir odak kadın test tankı yerleştirin. Serbestçe yüzmek ve tank ve boş tankları her iki monitörde sunuyu 20 dk süreyle alışmana izin.
  3. Sonra iklimlendirme, her ikisi için eşit uzaklıkta sağlamak ve çalma listelerini her iki monitörde aynı anda ikinci kaptan-seçimi ile başlayan oyun, tıklatarak çalıştırmak için test tankı ortasında bir açık akrilik silindir odak dişi koyun test.
    Not: Odak erkek üzerinden her iki sanal uyarıcı erkekler için yaklaşık 2.5 min silindir içinde izlemek için izin verilir.
  4. Zamanlayıcıyı 0230: ulaşmadan min, yavaş yavaş deneysel deposuna gidip silindir gelen odak dişi yavaşça düz dışarı su, Örneğin, 02:15 yukarı kaldırarak tarafından min.
    Not: Burada, çalışma bilgisayardan Uzaklik test tankı tam zamanlama bağlıdır ve önceden test çalışmaları sırasında tespit edilmelidir. Yavaş yavaş hareket ve yavaşça balık vurgulayarak önlemek önemlidir. Balık çok hızlı hareket edebilir beri zaten doğrudan Derneği süre ölçümünü başlatmak için erkek serbest bırakılırken bir kronometre el altında olması tavsiye edilir (bkz. Adım 6.1).
  5. Çalışma bilgisayara takarak. Odak erkek gözlemlemek ve iki kronometreleri Ölçü Derneği zaman her sanal uyarıcı erkek ile eldeki var (bkz. Adım 6.1).
    Not: Odak erkek serbestçe yüzmek ve 5 min için her iki erkek arasında seçim izin verilir.
  6. Zamanlayıcıyı 07:30 ulaştığında Derneği süre ölçümünü durdurmak min. İşlem süresi için tekrar, silindir içinde odak erkek yerleştirin ve bir veri sayfasında her sanal erkek süre yazmak gibi Duraklat giriş daha sonra 1,5 dk. kullanım pause için çalışacaktır.
    Not: Duraklamadan sonra ikinci 07:30 dakika giriş başlayacak ve odak erkek her iki erkek 02:30 dakika boyunca izleyebilirsiniz. Erkek konum şimdi (bkz. Adım 6.3) bir olası yan önyargı odak dişilerde için denetime sağ ve sol arasında anahtarlanır.
  7. 11:30 zamanlayıcıyı ulaşmadan önce min, fokal erkek silindir üzerinden yayın. Ölçü Derneği saat sonraki 5 min için.
  8. Zamanlayıcıyı 16:30 ulaştığında Derneği süre ölçümünü durdurmak min. Duraklat giriş silindir içinde odak erkek yerleştirmek için bu işlem süresi 1 dk. kullanım için çalışır.
  9. Dernek kez ikinci ölçüm için yazın. Her erkek için ikinci kaptan seçmeli test her iki yarısının Derneği kez (önce ve erkek geçtikten sonra) toplamı. Odak erkek tarafı önyargı olup olmadığı ve hangi erkek odak kadın tarafından tercih hesaplamak (6.1-6.3 adımlara bakın).
    Not: Sonraki adıma geçmeden sonuna ulaşmak ve durdurmak için çalma ihtiyacı hesaplama ettirmeden önce duraklama tamamlandıysa hiç sorun değil.
  10. Çalma listelerini yeniden düzenleme (yapmak değil FishPlayerkapatın!) böylece erkek animasyon yalnız gözlem süresi ve önceki tercih edilmeyen erkek sırasında önceden tercih (bağlı olarak güncel tedavi) Şekil 5 ' te gösterildiği gibi kadın sanal modeli ile birlikte animasyon.
    Not: Çalma listeleri için yapılan değişiklikler için odak erkek görünür değildir.
  11. Deneme ve girişleri ikinci bölümü 10dk gözlem dönemiile başlayan yukarıdan aşağıya doğru gelen replayed devam etmek için çal ' ı tıklatın.
    Not: Gözlem süresi içinde odak erkek silindir içinde kalır, ancak her iki sunuyu izlemek mümkün.
  12. Gözlem süresi sonra bir duraklama 0,5 dk başlar. 10:30 zamanlayıcıyı ulaşmadan önce min, fokal erkek silindir üzerinden yayın ve ikinci eş seçmeli test her erkek 5-dak bilgin ile başlayın. Dernek kez sonraki 5 min için ölçmek.
  13. Zamanlayıcıyı 15:30 ulaştığında Derneği süre ölçümünü durdurmak min. Duraklat giriş sonra 1,5 dk. yer silindir içinde odak erkek için çalışacak ve sanal her erkek için ölçülen süreyi yazın.
    Not: Duraklatma, sonraki 7:30 dk giriş-ecek başlamak ve odak erkek sonra 2.5 min için her iki erkek (kimin pozisyonu tekrar sol ve sağ arasında geçirdi) izleyebilirsiniz.
  14. Zamanlayıcıyı 1930: ulaşmadan min, fokal erkek silindir üzerinden yayın ve son 5 min için dernek süre ölçebilir.
  15. Zamanlayıcıyı 24:30 ulaştığında Derneği süre ölçümünü durdurmak min ve deney sona erdirmek. Dernek kez her iki sanal erkekler için yazmak ve analizi ile devam edin.

6. veri ölçüm

  1. İlk ve ikinci bölümü sırasında Derneği süre ölçebilir (rahip ve sonra bir çekim gücü açık) odak kadın iki erkek arasında seçmek için izin zaman her dostum seçmeli test.
    Not: Dişi geçerek onun baş ve operculum ile seçim bölgesi hapsetmesi çizgisine zaman ölçümünü başlatmak. Onun baş ve operculum seçim bölgesi dışında olduğunuzda ölçme işlemini durdurmak.
  2. Her erkek bir eş seçmeli test birinci ve ikinci kısmında için ölçülen Derneği süresi toplamı ve hangi erkek tercih edilen belirlemek.
    Not: Tercih edilen erkek biri olarak odak erkek her iki seçim bölgelerinde bir dostum seçmeli test içinde harcanan toplam zaman % 50'den fazla harcanan belirlenir. Analiz için dernek zaman sık sık tercih puanları çevrilir (göreli dostum-seçim değeri), hangi odak bir erkek harcanan zaman o harcanan her iki erkek arkadaşı-seçim bölgelerinde bölü bir erkek ile süre olarak tanımlanır.
  3. Odak dişi bir yan önyargı ikinci kaptan seçmeli test sırasında göstermek ve önyargılı kadın son çözümleme dışı bırakmak hesaplayın.
    Not: Odak kadın yan bile erkek pozisyon geçtikten sonra aynı seçim alanında fazla % 90 toplam zaman (ikinci kaptan seçmeli test iki yarısını) ayırsan önyargılı olarak kabul edilir. Bir erkek için onu seçim sonra önyargılı yan kabul edilir ve deneme sonlandırıldı.
  4. Her odak dişinin standart uzunluğu (SL) ölçmek.
    Not: Deneyler sırasında vurguladı balık önlemek için ölçümler her zaman deneysel bir deneme sona erdirilmesi sonra alınır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Protokolü Sanal sailfin molly erkek ve kadın bilgisayar animasyonlar oluşturmak için FishSim kullanılır. Daha fazla araç zinciri mm deney göre açıklanan Şekil 1 ve adım 5 Protokolü'nün deneysel bir işlem gerçekleştirmek için bir ikili seçim durumda odak kadın yaşamak için animasyonlar sunmak için kullanılan.

Odak kadın sanal modeli erkek seçimi kopyalanmış olup olmadığını belirlemek için biz odak bir dişinin Derneği süre içinde birinci ve ikinci eş seçmeli test her erkek için deneyler sırasında ölçülür. Birkaç parametre genellikle ilk ve ikinci eş seçmeli test her tedavi için ve seçim tutarlılık denetimi elde Derneği zaman kullanarak analiz edilir. Veriler nasıl analiz belirli bir istatistiksel test için değil bağlı ama (Örneğin, parametrik/parametrik olmayan testler, tekrarlanan ölçüler ANOVA, istatistiksel modeller) çeşitli şekillerde yapılabilir ve son veri yapısına bağlı olabilir. Bizim veri çözümlemesi için biz R 3.2.2 kullanılan62. Biz biz elde deneyimiz hem de biz Figshare bizim analiz için kullanılan R-kodu ham veri yükledi (DOI: 10.6084/m9.figshare.6792347).

Mevcut çalışmada, biz 15 farklı sanal model kadın ile gravid bir yer için tedavi 1 ve bir nokta olmadan aynı 15 modeli kadın tedavi 2 için oluşturdu. Tüm modeli kadın 50 mm için sanal bir standart uzunluğu (SL) vardı. Göreli gravid yer alan bütün kadınlar tedavi 1 (ImageJ v1.51j8 ile ölçülen yüzgeçleri; hariç) toplam vücut yüzeyinin % 4.7 içindi. Ayrıca, biz 15 benzersiz erkek uyaranlara eşlendirme için izin dostum seçmeli testler sırasında sunulan 30 farklı sanal uyarıcı erkekler oluşturdu. Uyarıcı erkekler 41-45 mm arasında sanal bir SL vardı. Her tedavi ve seçim tutarlılığını kontrol için 15 deneme yapılır. Toplam 55 canlı odak kadın soyundan gelen vahşi sailfin molileri Corpus Christi, TX, USA yakınındaki Mustang adada 2014 yılında yakalanan birkaç test ettik. Tüm odak kadın Olgun yetişkin olduğunu ve yalnızca bir kez test edildi. Test sırasında teknik sorunlar nedeniyle dışlanacak iki kadın vardı. Bir kadın o test durumu alışmana değil ve her iki seçim bölgesi girin çok korktum çünkü stres nedeniyle bırakıldı. Denetim yan fokal balık (iletişim kuralı adım 6.3) önyargı için biz daha fazla yedi dişi ikinci kaptan seçmeli test kendi yan eğilim nedeniyle son tahlilde üzerinden hariç gerekli. Özet olarak, analiz ettik n toplam 15 odak kadın her tedavi ve kontrol için =. Odak kadın tedavi 1, 33 ± 5 mm tedavi 2 ve 33 ± seçim tutarlılığı denetiminde 3 mm 32 ± 5 mm SL ortalaması vardı. Biz tedaviler ve SL tedaviler ve denetim arasında farklı değil bağımsız veri ifşa için bir Kruskal Wallis rank sum testi kullanarak denetim odak kadın standart uzunluğu (SL) göre (Kruskal Wallis rank sum testi: n = 45, df = 2, χ2 0,329, p = 0.848 =).

MM deney ölçülen en önemli parametre her erkek (iletişim kuralı adım 6.1) fokal dişinin Derneği zamanı. Derneği kadın dostum tercih balık63,64,65,66 olarak dolaylı bir ölçüsü ve doğrudan temas olduğunda sailfin molileri eş seçiminde belirlemek için köklü bir ölçü zamanı 12,48,61,67,68sağlanan. Her tedavi ve kontrol için biz ilk seçimi motivasyon dostum seçmeli testler arasında farklılık olup olmadığını çözümlemek için Derneği zaman kullanılır. Seçme motivasyon odak bir erkek bir eş seçmeli test her iki seçim bölgeleri harcanan toplam süre olarak tanımlanır. Ancak, motivasyon seçiminde bir değişiklik ya da erkek için tercih değişikliği yansıtmayabilir. Motivasyon seçme iki dostum seçmeli testler arasında önemli ölçüde farklı olması durumunda daha fazla analiz içinde ve arasında (bkz. iletişim kuralı adım 6.2 tedaviler karşılaştırılabilir emin olmak mutlak Derneği zaman yerine tercih puanları kullanmak zorunludur ). Bizim çalışmada, önce ve sonra bir sanal modeli erkek cinsel bir erkek ile etkileşim gözlenmesi motivasyon odak kadın seçme farklı değildir tedavi 1 ' (Wilcoxon rank testi imzaladı: n 15, V = 44, p = 0.379 =) ve denetimde seçim tutarlılık () için Wilcoxon rank testi imzaladı: n 15, V = 42, p = 0,33 =). Ancak, motivasyon seçme anlamlı olarak daha yüksek bir sanal modeli erkek gözlemden sonra gravid nokta cinsel tedavi 2 erkek ile etkileşim olmadan (Wilcoxon rank testi imzaladı: n = 15, V = 22, p = 0,03).

MM oluşup en önemli belirleyici zaman geçirdim/tercih puanları ilk önce tercih edilmeyen erkek için önemli bir artış olduğunu ikinci eş seçimi için22sınayın. Doğal bir durum için transfer, tercih edilmeyen önceki erkek ile harcanan süre artış sonuç olarak bu erkek ile bir kadın dostum olasılığını artırır. Bu nedenle, ana analiz mutlak kez ya da iki dostum seçmeli testler arasındaki önceki tercih edilmeyen erkek için tercih puanları karşılaştırıldığında. Bu analiz her tedavi ve kontrol için ayrı ayrı yapılması gerekiyor. Bizim çalışmada, seçimi motivasyon tedavi 2'farklılık beri biz tercih puanları için başlangıçta tercih edilmeyen uyarıcı erkek, mutlak Derneği zaman, yerine bu sınavların birinci ve ikinci dostum-seçim arasında değişip belirlemek için kullanılan genel bilgi sağlandığında, genel bilgi yoktu kontrol tedavi karşılaştırıldığında sınayın.

Bunun için biz bağımlı değişken tercih puanı önceden tercih edilmeyen erkek (pref_NP) için olan 'nlme' paketi69 lme işlevinden doğrusal karma etkisi (LME) modeliyle uygun. Dostum seçmeli test dahil (Mtest: M1, M2) ve tedavi (tedavi: spot, spot, kontrol) sabit faktörler hem de odak dişinin standart uzunluğu (SL) bir covariate olarak. Tekrarlanan ölçüler tasarımı için hesap için odak kadın kimlik (ID) rastgele bir faktör olarak dahil edildi. Dostum seçmeli test etkisi tedaviler arasında farklı içinde özellikle ilgilenmişlerdir; Bu nedenle, bizim modelde dostum seçmeli test ve tedavi arasında bir etkileşim dahil. Biz "işlevi tezat70kullanarak tedavi" için iki dik karşılaştırmalar yapılmıştır. Biz modeli (1) denetim hangi sanal herhangi bir model tüm tedavilerin erkek sunuldu gözlem sırasında ortalama karşı karşılaştırmak için tezat ayarlamak [kontrol >> (nokta, hiçbir nokta)] ve (2) sanal manken kadın ile gösterilen tedavi karşılaştırmak için bir nokta olmadan buna karşı nokta (nokta >> hiçbir nokta). Standart kalanlar bir faktör monte değerleri karşı bir komplo heteroscedasticity "Mtest" için kalan farklarını ortaya koydu. Bu nedenle, biz bir ağırlık işlevi "Mtest"71,72her düzey için farklı: Varyanslar için izin vermek için varIdent sınıfının lme işlevinin kullanımı dahil. Biz R paket 'güzel'73 Holm-Bonferroni düzeltmesi önemli bir etkileşimde terimlerin post hoc analizi için kullanılır. Tüm modelleri için görsel olarak74model varsayımlar (Q/Q-araziler, artıklar, artıklar monte değerleri karşı) denetlenir. Biz daha fazla kalanlar bir normal dağılım Shapiro Wilk normallik testleri kullanarak karşı dağıtım göre. Verilen p değerleri önemli kabul edildi Eğer p ≤ 0,05.

Bu incelemenin sonuçlarını verilir Şekil 7A ve Tablo 1 ve 2. M2 ve kontrast arasında önemli bir etkileşim bulduk "[kontrol >> (nokta, hiçbir nokta)]" tercih puanları önceden tercih edilmeyen erkek için (LME: df = 42, t-2.74, p = 0,009 =). Ancak, tercih puanları odak kadın SL tarafından etkilenen değil. Daha fazla post hoc çözümleme etkileşim teriminin tedavi 1 M2 tercih puanları önceden tercih edilmeyen erkek önemli bir fark ortaya (spot: df = 1, χ2 = 30.986, p < 0.001) ve tedavi 2 (hiçbir nokta: df = 1, χ2 = 19.957, p < 0.001) ama denetim için (χ2-test: df = 1, χ2 2.747, p = 0.097 =). Burada, bizim sonuçlar, mm, odak kadın sanal modeli erkek simüle eş seçimi ile sunulmuştur ediyorum sonra M1 M2 için önemli ölçüde arttı önceki tercih edilmeyen sanal erkek için tercih puanları için tahmin ettiği gibi gösterilmektedir. Bu etki iki tedaviler ama denetim içinde seçim tutarlılık için bulduk. Bunun yerine, nerede yok modeli erkek gözlem süresince mevcut denetimde odak kadın bir erkek için kendi eş seçiminde tutarlı edildi.

Faktörler Daha düşük Tahmin Üst SE df t değeri p-değeri
(Müdahale) 0.046 0.339 0.632 0.145 42 2,336 0.024
M2 0,207 0.296 0.384 0.044 42 6.750 < 0,001
Kontrol → (nokta, hiçbir nokta) -0.041 -0.012 0.017 0.014 41 -0.852 0,4
→ hiçbir nokta nokta -0.093 -0.043 0.008 0,025 41 -1,715 0.094
SL -0.012 -0.003 0,006 0,004 41 -0.747 0.459
M2 x [Denetim → (nokta, hiçbir nokta)] -0.148 -0.085 -0.023 0.031 42 -2,743 0,009
M2 x (→ hiçbir nokta nokta) -0.067 0.042 0,15 0.054 42 0.777 0.441

Tablo 1. LME önceki tercih edilmeyen sanal erkek için tercih puanları üzerindeki etkileri için tahmin ediyor. Önceki tercih edilmeyen sanal erkek uyarıcı için tercih puan boyunca bağımlı değişken oldu. Verilen tahminler ± standart hata ve alt/üst güven aralıkları, serbestlik derecesi, t ve p-değerleri sabit her faktör için vardır. Kesme noktası tahminleri tüm tedaviler grand ortalamasını temsil eder. Tedavilerin ortogonal karşılaştırmaları verilmiştir. Tedaviler parantez içinde birleştirilir bu tedavilerin ortalama değerler karşılaştırma kullanılır. Kesme noktası referans faktör "M2" için "M1" kategorisidir. Önemli p-değerleri (p < 0,05) kalın olarak yazdırılır. M1 = ikinci kaptan seçmeli test, M2 = ikinci eş seçmeli test, SL = standart uzunluğu odak kadın. n 90 gözlemlerle tedavi başına 15 odak kadın =.

Rasgele faktör Varyans SD
Kimliği ((kesme noktası)) 1.464x10-10 1.21x10-5
Artık 1.859x10-2 0.1364

Tablo 2. LME varyans bileşenleri için odak kadın kimliği Varyans ve standart sapma "fokal kadın kimliği" ve fazlalıklar verilen rasgele etkisi için.

Figure 7
Şekil 7: sanal MCC sonuçları görsel yokluğu veya gravid bir nokta varlığı tarafından manipüle modeli kadın kalite deneme. (A) tercih puanları M1 ve M2 (önceki) tercih edilmeyen sanal uyarıcı erkek tedaviler ve denetim için. (Skor kopyalama) tercih M1 M2 önceki tercih edilmeyen sanal erkek için tedaviler ve denetimi (B) değişti. Noktalı çizgi tercih herhangi bir değişiklik gösteriyor, pozitif değerler tercih olarak bir artış gösteriyor ve negatif değerleri tercih bir düşüş gösterir. Gri nokta A ve B tasvir odak her erkek, ham veri. Her tedavi ve kontrol için dostum-seçimi ters m2 (C) sayısı. M1 = ikinci kaptan seçmeli test, M2 = ikinci eş seçmeli test, ns = önemli, değil * = p < 0,05, ** p < 0,01, = *** p < 0,001 =. N = 15 tedaviler ve denetim. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Kopyalama bir etkisi olup olmadığı ilgili tedavi bağlı olarak daha fazla veya daha az güçlü olabilir hakkında daha fazla bilgi edinmek için kopyalama puanları ve dostum-seçim devreden arasında farklı tedaviler ve denetim sayısı arasında bir karşılaştırma yapıldı. yürütülen. İster kopyalama puanları önceden tercih edilmeyen erkek için tedaviler arasında farklı olduğunu bu nedenle, biz daha fazla analiz edildi. Bir erkek için kopyalama puanı ilk gelen bir erkek için kadın tercih değişikliği açıklar ikinci eş seçmeli test etmek için. Kopyalama puanı eksi puan ikinci eş seçimi testinde bir erkek o aynı erkek ikinci kaptan seçmeli test tercih puana göre tanımlanır. Kopyalama -1 ile + 1 arasında değişir ve ya pozitif veya negatif değerleri içinde negatif değerler, tercih ve pozitif değerler bir düşüş o erkek için tercih bir artış tanımlar olabilirsin. Burada, biz ile kopya bir LME uygun (copy_NP) bağımlı değişken, sabit bir faktör, bir covariate olarak odak kadın SL ve odak dişinin spot alan rasgele bir faktör olarak tedavi olarak puan edinildi. Burada, "yukarıda açıklandığı gibi tedavi" için aynı iki dik karşılaştırmalar yapılmıştır.

Biz göstermek gibi Şekil 7B ve tablo 3 ve 4, Biz bulundu önemli ölçüde daha yüksek skor önceden tercih edilmeyen erkek için denetime göre sanal modeli erkek ile tedavilerde kopyalama (LME: df = 20, t-2.833, p = 0,01 =) ama Hayır önemli tedaviler arasındaki fark (LME: df = 20, t 0,618, p = 0.544 =). Kopyalama puanları odak kadın SL tarafından etkilenen değil.

Sabit faktörler Daha düşük Tahmin Üst SE df t değeri p-değeri
(Müdahale) -0.889 -0.081 0.727 0.389 21 -0.208 0.837
Kontrol → (nokta, hiçbir nokta) -0.153 -0.088 -0.023 0.031 20 -2.833 0,01
→ hiçbir nokta nokta -0.079 0.033 0.146 0.054 20 0,618 0.544
SL -0.013 0.011 0.035 0.011 20 0.991 0.333

Tablo 3. LME puanları önceden tercih edilmeyen sanal erkek için kopyalama üzerinde etkileri için tahmin ediyor. Önceki tercih edilmeyen sanal erkek uyarıcı için kopyalama puan boyunca bağımlı değişken oldu. Verilen tahminler ± standart hata ve alt/üst güven aralıkları, serbestlik derecesi, t ve p-değerleri sabit her faktör için vardır. Kesme noktası tahminleri tüm tedaviler grand ortalamasını temsil eder. Tedavilerin ortogonal karşılaştırmaları verilmiştir. Tedaviler parantez içinde birleştirilir bu tedavilerin ortalama değerler karşılaştırma kullanılır. Önemli p-değerleri (p ≤ 0,05) kalın olarak yazdırılır. SL = standart uzunluğu odak kadın. n 45 gözlemlerle tedavi başına 15 odak kadın =.

Rasgele faktör Varyans SD
spot_area ((kesme noktası)) 0.028 0.166
Artık 0.075 0.275

Tablo 4. LME varyans bileşenleri odak kadın spot alan için. Varyans ve standart sapma rasgele etkisi "spot_area" ve fazlalıklar için verilmiştir.

Onların ilk dostum tercih M2 olarak ters odak kadın sayısı tedaviler arasında farklılık olup olmadığını Ayrıca, test ettik. Dostum-seçimi ters olup tanımlanan bir değişiklik ('dan daha az % 50'den fazla % 50 zaman olarak her iki seçim bölgeleri) bir erkek için ilk tercihi ikinci eş seçmeli test etmek için. Dostum-seçimi ters "Evet" olarak sayılır (bir erkek için tercih değişti) ya da "Hayır" (bir erkek için tercih değişmedi). Burada, biz bir post hoc ikili gerçekleştirilen G-test R kullanarak birden çok testleri için düzeltme ile 'RVAideMemoire'75 paket. Şekil 7Cgösterdiği gibi 11 dışarı-in 15 odak kadın dostum seçtikleri tedavi 1 ters ve 10 kadın dostum seçtikleri tedavi 2 ters. Öte yandan, sadece iki ters denetimde gözlendi. Böylece, ilk dostum seçtikleri m2 önceki tercih edilmeyen erkek lehine ters odak kadın sayısı önemli ölçüde daha büyük denetime göre her iki tedavisine (post hoc ikili G-test: Spot vs. kontrolü, p = 0,002; hiçbir nokta vs. kontrolü, p = 0,003) ama tedaviler 1 ve 2 arasında önemli ölçüde farklı değil (Post-hoc ikili G-test: vs hiçbir nokta, p spot 0,69 =).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Gravid nokta sailfin molly dişilerde daha önce doğru conspecific erkek59,60bereket reklam aracı olarak hizmet etmek için tanımlanmıştır. Olup gravid bir yer de dostum seçim bağlamında conspecific kadın için bilgi sağlayabilir defa test değil. Mevcut durumda çalışmada, biz gravid bir nokta potansiyel rolü bir conspecific dişilerini mm bağlamında gözlemlemek için genel bilgi kaynağı olarak araştırdık. Bizim çalışma gravid nokta bir işaret için canlı odak kadın modeli kadın kalite sanal bir erkek için bir sanal modeli erkek arkadaş Seçimi kopyalamak karar verirken değil gibi görünüyor olduğunu gösterir. Odak kadın sanal modeli erkek modeli erkek gravid bir yer ya da değil miydi ne olursa olsun bir önceki tercih edilmeyen sanal erkek seçimi kopyalar. Puanları ne de dostum-seçimi ters kopyalama etkisi de modeli erkek gravid bir yer ya da değil miydi eşit derecede güçlü olduğunu belirten iki tedaviler arasında sayısı kopyalama yok fark bulduk. Genel bilgi denetiminde (mevcut hiçbir modeli erkek) sağlandığında, odak kadın dostum seçtikleri tutarlı edildi. Bu tercih tedaviler içinde gözlenen değişiklik diğerleri eş seçimi kopyalamak için yeterli genel bilgilerinizi yalnızca, sanal modeli erkek varlığı ile açıklanabilir destekler.

Genel durum ve ölçüde gravid spot kadın üreme döngüsüne bağlantılı olarak kabul edilir olsa da, ile spot Doğum öncesinde ve en küçük büyük veya doğumdan sonra60, sistematik görsel gözlemleri yok geliştirme bireysel kadın gravid noktalar hala kayıp. Ayrıca, değişim gravid nokta boyutu yüksek noktalar da tamamen yok olma ile bireysel kadın arasında olabilir Olgun, gravid kadın60. Sailfin molly kadın en anlayışlı kısa Doğum59,76sonra olsa bile, onlar için birkaç ay57sperm depolamak mümkündür. Bu nedenle, kadın her zaman en iyi kalite eş için titiz olmalıdır. MM ve test hipotezler bizim case study açısından, biz gravid bir yer conspecific kadın gözlemlemek için kadın kalite modeli geçerli bir göstergesi olabilir sonucuna. Gözlem bir kadın muhtemelen elde edebilecek bir model erkek üreme durumu hakkında bilgi karar onun seçimi ya da değil, en az sailfin molileri arasında kopyalamak için önemli değil gibi görünüyor.

Özellikle, bizim çalışma yüksek standart bir prosedür için genel bilgi bilgisayar animasyon balık kullanarak mm deneylerde sağlanan görsel işleme gösterir. Kim canlı balık gravid noktalar işlemek için dövme mürekkebi ile enjekte, Benson77, önceki bir çalışmayla aksine bizim Yöntem tamamen non-invaziv bir alternatif için görsel işleme sağlar. Biz yordamı oluşturmak ve sanal sailfin molileri FishSimiçinde animasyon konusunda ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Biz daha fazla bilgisayar animasyon deneysel işlemin mm deney ile sanal balık için sunuyu canlı test balık bir ikili seçim durumda doğru bir klasik benimsemeye nasıl kullanılabileceğini gösterdi.

Protokolü bizim araç zinciri doğru işlenmesi ve deney başarısı sağlamak için özel dikkat etmeniz gereken birkaç önemli adımları tanımlar. Bilgisayar animasyon oluşturulur ve bilgisayar ve bilgisayar monitörleri gibi görüntü aygıtları kullanarak sunulan beri teknik ekipman her zaman genel iş akışı düzgün işlenmesini ve en önemlisi, kayıttan yürütülmesini sağlamak yeterli olmalıdır Animasyon (adım 2, 3 ve 5). İki veya daha fazla monitör uyaranlara tanıtımı için kullanırken, onların teknik özellikleri aynı olması gerekir. Yazılımımızı kullanırken, küme monitör çözünürlüğü her zaman bu sununun olmalıdır (bkz. Adım 1.2.1.) monitörler. Sahne (adım 1.2.) yanı sıra tasarım ayarlama (1.3 adımlar. ve 1.4.) ve animasyon (adım 2) sanal uyaranların her zaman yapılması gereken daha sonra uyarıcı sunu deneyler sırasında doğru boyutları sağlamak için kullanılan bir monitörde.

Bu protokol için biz balık uyaranların bir küme oluşturmak için gerekli adımları konsantre (1.3 adımlar. ve 1.4.) kullanılmak üzere (5. adım) tedavinin bir deneme. Burada, biz dışarı birkaç farklı balık uyaranlara ve/veya animasyonlar için hangi verileri olası yorumlayabilmek etkiler pseudoreplication15,78,79 için hesap oluşturmak önemlidir istiyorum deneyler sırasında elde. Bizim araç zinciri ile uyaranlara benzersiz bir kümesi için deneysel her deneme sürümünü kullanmak için olanaklar sunan çeşitli balık uyaranlara oluşturmak kolaydır. Genel olarak gerekli uyaranların toplam sayısı her tedavi (bizim örnek çalışma hakkında bilgi için "Temsilcisi sonuçları" bölümüne bakın) için hedeflenen örnek boyutuna bağlıdır.

Bizim araç zinciri ile bir video oyun denetleyicisi (adım 2) kullanarak hızlı ve kolay oluşturmak animasyon işlemi sağlamak istedim. Böylece, sanal balık genel yüzme davranışını otomatik olarak, canlı sailfin molileri80yüzme videoları temel alınarak oluşturulur. Yüzme davranış (palet ve gonopodium hareketi de dahil olmak üzere) bu nedenle, sanal uyaranlara sailfin molileri belirli ve canlı taşıyan balık ile kullanılacak genel olarak ayarlanan. Canlı taşıyan balık dışında üç - spined stickleback için ek bir şablonu yetiştirme/düşürücü dorsal ve ventral omurgalar, gibi species-specific hareketi için ek işlevler sağlar.

Şu anda bizim araç zinciri tarafından sağlanan animasyon işlevleri her davranış desen ve balık türleri için yeterli olmayabilir. Bu, ancak, en fazla Kullanıcı ve test araştırma soru üzerine bağlıdır. Ayrıca, FishSteering (adım 2) ile animasyon oyun denetleyicisi işlevleri için alışık almak için küçük bir uygulama önceden ihtiyacı var. Bu nedenle, animasyon işlemi muhtemelen Protokolü'nün en zaman alıcı adımdır. Bir denetleyicisi farklı bir marka burada kullanılabilir ama işlevselliği bu düzgün olmayabilir ve düğme işlevleri (olarak verilen kullanım kılavuzunda)-ebilmek var olmak farklı ya da tamamen yok. Animasyon işlemi sırasında sanal bir uyarıcı (Örneğin, konum, palet, gonopodium) özelliklerinden yalnızca biri bir anda animasyon. İlk olarak, yüzme hareketi (pozisyon) ve daha sonra ek özellikler (Örneğin, palet) bağımsız olarak eklenebilir. Biz her adımı ayrı ayrı kaydetmenizi tavsiye ederiz. Bu örneğin Yüzme yolu sabit tutmak ama bir önceki sürüme göre sırt yüzgeci hareketi değişen Kullanıcı belirli bir özelliği değiştirmek için animasyon daha önceki bir sürüme geri dönmek olasılığı vardır avantajı sunuyor. Özellikle birden fazla balık (adım 2.2.) animasyon zaman, hangi balık uyaranlara animasyon düzeni çok önemlidir ve önceden belirlenmesi gerekiyor. Burada, test bu tür biyoloji için başvurmak yararlı olabilir. Bizim örnek çalışma bir erkek genellikle kadın81izliyor sailfin molileri Kur davranışını simüle. Bu nedenle, biz ilk sanal erkek yüzme yolunu oluşturulup sanal erkek yolunu dişi takip ederek eklenir.

Deneysel işlemin (5. adım) çalışırken zaman deney başarısı için çok önemlidir. Kez / süreleri biz'de belirtilen şekilde sailfin molileri ile önceki çalışmalarda elde Protokolü (5. adım). Öneri olarak kabul edilmelidir ve deneysel genel başarı için yükümlü değil ama yine de, sıkı bir şekilde işlem sırasında takip edilmesi gereken. İklimlendirme zaman balık türleri ve hatta tek tek kişilerin arasında değişiklik gösterebilir ve genellikle tüm testi tank keşfetmek ve yeni çevresini alışmana odak balık ihtiyacı olduğu kadar uzun olmalıdır. Deneysel işlemin uygun duraklama süresi uzunluğu eğitim ishal belirlenir. Duraklat en az zaman silindir balıktan serbest bırakmak için silindir ile balık yakalamak, hem de yürüyüş için ve test tankı ve çalışır durumda bir bilgisayar için gerekli kadar uzun olmalıdır. Burada, kez muhtemelen her laboratuvar ve test edilmiş balık türleri belirli deneysel durumda bağlı olarak değişir. Her durumda, deneyci tek tek kez değişebilir / ya tarafından farklı bir zaman FishPlayer içinde ayarlama süreleri (bkz. Adım 3.1. 3.) veya animasyon dizileri ile farklı uzunlukta oluşturarak (bkz. Adım 2.1).

Deneyci gerçek zamanlı izleme kapasitesine sahip olmak gerekir rağmen Derneği zaman her dostum seçmeli test için bir otomatik izleme sistemi uygulayarak ölçme artırabilirsiniz. Burada, biz de kör bir gözlemci sahip bir olasılık olduğunu işaret etmek istiyorum ve bu nedenle, ne zaman mm sınama yordamı takip analiz kör. Deneyci hangi sanal bilemeyiz erkek uyarıcı test önce fokal kadın tarafından tercih edilen, o odak balık 's seçimi (3.2 ve 5.10 adımlara bakın) buna göre animasyon dizilerini sırasını yeniden düzenlemek için farkında olması gerekir.

Biz burada tarif Protokolü sailfin molileri bizim çalışma tasarımında mm üzerinde özeldir. Ancak, araç zinciri de diğer Deneysel tasarımlar ile birlikte dört monitör ile tanıtımı için kullanılabilir. Genel olarak, bilgisayar animasyon araçları dostum gibi balık davranış ilgili çeşitli soruları çalışmaya çözümleri çok çeşitli teklif seçim, kararlar veya avcı-av algılama, yapay görsel uyaranlara kullanarak shoaling. Genel Teknik ve kavramsal konuları kullanım için bilgisayar animasyon hayvan davranış araştırma deneyler2,15dakika içinde kullanmadan önce dikkatli bir şekilde değerlendirilmelidir. En önemli karar için bilgisayar animasyon yaklaşımlar araştırmada uygulanan test edilmiş balık türleri ve olup bu doğal olarak monitör ekranlar üzerinde sunulan sanal uyaranlara karşı yanıt görsel özellikleri açısından. Özellikle, renkli yönleri etkisini test ederken bu monitör ekranlar sadece renkleri RGB değerleri olarak tasvir ve bu engel veya RGB renkli çıktı gerçekten olabilir rağmen araştırma olanakları, sınırı82düzeltilmiş olması gerekmektedir. Bazı balık türleri için monitör UV dalgaları yayarlar değil ya da öte yandan, bazı monitör türleri son derece hangi-ebilmek var olmak bir sınırlama balık duyarlı sorular örneğin polarize ışık ile polarize, kesinlikle bir sınırlama olabilir seçim83dostum. Bu nedenle, bilgisayar animasyonlar olarak sunulan uyaranların etkinliği için bir doğrulama herhangi bir hipotez2,12,15,84,85test etmeden önce gerekli değildir.

Gelecekte, yeni gelişmeler hayvan izleme ve eylem tanıma'interaktif sanal uyaranlara tepki gerçek zamanlı olarak oluşturmak mümkün yapabilir doğru canlı balık ve kitlesel balık gözlemlemek için gerçekçilik artırmak için karşılık gelen davranışı benzetimi 86. Kullanıcı yeterli programlama becerileri sahip olması koşuluyla temel ROS modülerlik sayesinde, kamera gibi harici cihazlar toolchain entegre edilebilir. İlk başarılı bir girişim FishSim genellikle etkileşim sanal balık uyaranlara benzetimini yapmak için gerçek zamanlı bir 3D uzantısı tarafından kullanılabileceğini gösterdi sistemi87,88,89izleme. Bilim iletişim olay sırasında "Molly en iyisini bilir" (https://virtualfishproject.wixsite.com/em2016-fisch-orakel), biz başardık sanal balık canlı odak balık izleyin ve Kur davranış gerçekleştirmek için programlanmış olabilir göstermek önceden tanımlanmış bir algoritma göre. Ayrıca, bu tür gerçek zamanlı izleme sistemleri otomatik olarak deneysel işlemin geliştirmek için dernek zamanı ölçmek için kullanılabilir. Bu özellik henüz FishSim geçerli sürümünde bulunmaz ancak gelecekteki gelişme tabidir.

Sonuç olarak, hayvan davranışları araştırma bilgisayar animasyon kullanımı, geleneksel yöntemlerle bir görsel özelliği ya da davranışsal desen ifade işlemek için canlı hayvanların invaziv tedavi gerektirecek ne zaman umut verici bir yaklaşımdır. Bilgisayar animasyon düzenleme denetimi ve standardizasyon da çok sınırlı veya bile imkansız canlı balık davranışlar işlemek için çözümler sunar beri canlı test balık, özellikle, kullanarak göre yüksek düzeyde sağlar. Ayrıca, 3Rs-ilke ve hayvan araştırma ve90,91öğretim kullanımı için benzer kuralları doğrultusunda 'azaltmak' ve 'canlı test hayvanları de rafine' deneysel olarak ' yerine' potansiyeline bu tekniği taşımaktadır yordamlar araştırma.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgments

Bu eser Deutsche Forschungsgemeinschaft DFG (WI 1531/12-1 KW ve SG) ve KU 689/11-1 KDK, KM ve JMH tarafından desteklenmiştir. Biz içtenlikle ve Lisans Araştırma Staj SG ve DB arasında organize etmek için DAAD RISE Almanya program teşekkür (finansman-ID: 57346313). DB artış-Globalink araştırma staj Ödülü (FR21213) ile finansmanı için Mitacs için minnettarız. Biz lütfen Aaron FishSim Jüpiter okuyucu tanıtmak için çağırdığınız için Berard ve Alisha DSouza yanı sıra değerli görüşlerini için üç adsız yorumcular el yazması önceki bir sürümü üzerinde teşekkür ederiz.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hardware
2x 19" Belinea LCD displays Belinea GmbH, Germany Model 1970 S1-P 1280 x 1024 pixels resolution
1x 24" Fujitsu LCD display Fujitsu Technology Solutions GmbH, Germany Model B24-8 TS Pro 1920 x 1080 pixels resolution
Computer Intel Core 2 Quad CPU Q9400 @ 2.66GHz x 4, GeForce GTX 750 Ti/PCIe/SSE2, 7.8 GiB memory, 64-bit, 1TB; keyboard and mouse
SONY Playstation 3 Wireless Controller Sony Computer Entertainment Inc., Japan Model No. CECHZC2E USB-cable for connection to computer
Glass aquarium 100 cm x 40 cm x 40 cm (L x H x W)
Plexiglass cylinder custom-made 49.5 cm height, 0.5 cm thickness, 12 cm diameter; eight small holes (approx. 5 mm diameter) drillt close to the end of the cylinder lower the amount of water disturbance while releasing the fish
Gravel
2x OSRAM L58W/965 OSRAM GmbH, Germany Illumination of the experimental setup
2x Stopwatches
Name Company Catalog Number Comments
Software
ubuntu 16.04 LTS Computer operating system; Download from: https://www.ubuntu.com/
FishSim Animation Toolchain v.0.9 Software download and user manual (PDF) from: https://bitbucket.org/EZLS/fish_animation_toolchain
GIMP Gnu Image Manipulation Program (version 2.8.22) Download from: https://www.gimp.org/

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Witte, K., Gierszewski, S., Chouinard-Thuly, L. Virtual is the new reality. Current Zoology. 63, (1), 1-4 (2017).
  2. Chouinard-Thuly, L., et al. Technical and conceptual considerations for using animated stimuli in studies of animal behavior. Current Zoology. 63, (1), 5-19 (2017).
  3. Basolo, A. L. Female preference for male sword length in the green swordtail, Xiphophorus helleri (Pisces: Poeciliidae). Animal Behaviour. 40, (2), 332-338 (1990).
  4. Rosenthal, G. G., Evans, C. S. Female preference for swords in Xiphophorus helleri reflects a bias for large apparent size. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95, (8), 4431-4436 (1998).
  5. Schlupp, I., Waschulewski, M., Ryan, M. J. Female preferences for naturally-occurring novel male traits. Behaviour. 136, (4), 519-527 (1999).
  6. Campbell, M. W., Carter, J. D., Proctor, D., Eisenberg, M. L., de Waal, F. B. M. Computer animations stimulate contagious yawning in chimpanzees. Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 276, (1676), 4255-4259 (2009).
  7. Woo, K. L., Rieucau, G. The importance of syntax in a dynamic visual signal: recognition of jacky dragon displays depends upon sequence. Acta Ethologica. 18, (3), 255-263 (2015).
  8. Balzarini, V., Taborsky, M., Villa, F., Frommen, J. G. Computer animations of colour markings reveal the function of visual threat signals in Neolamprologus pulcher. Current Zoology. 63, (1), 45-54 (2017).
  9. Tedore, C., Johnsen, S. Visual mutual assessment of size in male Lyssomanes viridis jumping spider contests. Behavioral Ecology. 26, (2), 510-518 (2015).
  10. Watanabe, S., Troje, N. F. Towards a “virtual pigeon”: a new technique for investigating avian social perception. Animal Cognition. 9, (4), 271-279 (2006).
  11. Culumber, Z. W., Rosenthal, G. G. Mating preferences do not maintain the tailspot polymorphism in the platyfish Xiphophorus variatus. Behavioral Ecology. 24, (6), 1286-1291 (2013).
  12. Gierszewski, S., Müller, K., Smielik, I., Hütwohl, J. -M., Kuhnert, K. -D., Witte, K. The virtual lover: variable and easily guided 3D fish animations as an innovative tool in mate-choice experiments with sailfin mollies - II. Validation. Current Zoology. 63, (1), 65-74 (2017).
  13. Thurley, K., Ayaz, A. Virtual reality systems for rodents. Current Zoology. 63, (1), 109-119 (2017).
  14. Stowers, J. R., et al. Virtual reality for freely moving animals. Nature. 14, (10), 995 (2017).
  15. Powell, D. L., Rosenthal, G. G. What artifice can and cannot tell us about animal behavior. Current Zoology. 63, (1), 21-26 (2017).
  16. Müller, K., Smielik, I., Hütwohl, J. -M., Gierszewski, S., Witte, K., Kuhnert, K. -D. The virtual lover: variable and easily guided 3D fish animations as an innovative tool in mate-choice experiments with sailfin mollies-I. Design and implementation. Current Zoology. 63, (1), 55-64 (2017).
  17. Veen, T., et al. anyFish: an open- source software to generate animated fish models for behavioural studies. Evolutionary Ecology Research. 15, (3), 361-375 (2013).
  18. Ingley, S. J., et al. anyFish 2. 0: An open-source software platform to generate and share animated fish models to study behavior. SoftwareX. 3, 13-21 (2015).
  19. Bakker, T. C. M., Pomiankowski, A. The genetic basis of female mate preferences. The Journal of Evolutionary Biology. 8, (2), 129-171 (1995).
  20. Andersson, M., Simmons, L. W. Sexual selection and mate choice. Trends in Ecology & Evolution. 21, (6), 296-302 (2006).
  21. Danchin, É, Giraldeau, L. -A., Valone, T. J., Wagner, R. H. Public information: From nosy neighbors to cultural evolution. Science. 305, (5683), 487-491 (2004).
  22. Pruett-Jones, S. Independent Versus Nonindependent Mate Choice: Do Females Copy Each Other? The American Naturalist. 140, (6), 1000-1009 (1992).
  23. Witte, K., Kniel, N., Kureck, I. M. Mate-choice copying: Status quo and where to go. Current Zoology. 61, (6), 1073-1081 (2015).
  24. Witte, K., Nöbel, S. Learning and Mate Choice. Fish Cognition and Behavior. Brown, C., Laland, K. N., Krause, J. Blackwell Publishing Ltd. 81-107 (2011).
  25. Waynforth, D. Mate Choice Copying in Humans. Human nature. 18, (3), 264-271 (2007).
  26. Galef, B. G., White, D. J. Evidence of social effects on mate choice in vertebrates. Behavioural Processes. 51, (1-3), 167-175 (2000).
  27. Kniel, N., Dürler, C., Hecht, I., Heinbach, V., Zimmermann, L., Witte, K. Novel mate preference through mate-choice copying in zebra finches: sexes differ. Behavioral Ecology. 26, (2), 647-655 (2015).
  28. Kniel, N., Schmitz, J., Witte, K. Quality of public information matters in mate-choice copying in female zebra finches. Frontiers in Zoology. 12, 26 (2015).
  29. Kniel, N., Müller, K., Witte, K. The role of the model in mate-choice copying in female zebra finches. Ethology. 123, (6-7), 412-418 (2017).
  30. Mery, F., et al. Public Versus Personal Information for Mate Copying in an Invertebrate. Current Biology. 19, (9), 730-734 (2009).
  31. Dagaeff, A. -C., Pocheville, A., Nöbel, S., Loyau, A., Isabel, G., Danchin, E. Drosophila mate copying correlates with atmospheric pressure in a speed learning situation. Animal Behaviour. 121, 163-174 (2016).
  32. Monier, M., Nöbel, S., Isabel, G., Danchin, E. Effects of a sex ratio gradient on female mate-copying and choosiness in Drosophila melanogaster. Current Zoology. 64, (2), 251-258 (2018).
  33. Dugatkin, L. A., Godin, J. -G. J. Reversal of female mate choice by copying in the guppy (Poecilia reticulata). Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 249, 179-184 (1992).
  34. Widemo, M. S. Male but not female pipefish copy mate choice. Behavioral Ecology. 17, (2), 255-259 (2006).
  35. Heubel, K. U., Hornhardt, K., Ollmann, T., Parzefall, J., Ryan, M. J., Schlupp, I. Geographic variation in female mate-copying in the species complex of a unisexual fish, Poecilia formosa. Behaviour. 145, (8), 1041-1064 (2008).
  36. Bierbach, D., et al. Male fish use prior knowledge about rivals to adjust their mate choice. Biology Letters. 7, (3), 349-351 (2011).
  37. Munger, L., Cruz, A., Applebaum, S. Mate choice copying in female humpback limia (Limia nigrofasciata, family Poeciliidae). Ethology. 110, (7), 563-573 (2004).
  38. Frommen, J. G., Rahn, A. K., Schroth, S. H., Waltschyk, N., Bakker, T. C. M. Mate-choice copying when both sexes face high costs of reproduction. Evol Ecol. 23, (3), 435-446 (2009).
  39. Witte, K., Ryan, M. J. Mate choice copying in the sailfin molly, Poecilia latipinna, in the wild. Animal Behaviour. 63, (5), 943-949 (2002).
  40. Goulet, D., Goulet, T. L. Nonindependent mating in a coral reef damselfish: evidence of mate choice copying in the wild. Behavioral Ecology. 17, (6), 998-1003 (2006).
  41. Alonzo, S. H. Female mate choice copying affects sexual selection in wild populations of the ocellated wrasse. Animal Behaviour. 75, (5), 1715-1723 (2008).
  42. Godin, J. -G. J., Hair, K. P. E. Mate-choice copying in free-ranging Trinidadian guppies (Poecilia reticulata). Behaviour. 146, 1443-1461 (2009).
  43. Nordell, S. E., Valone, T. J. Mate choice copying as public information. Ecology Letters. 1, (2), 74-76 (1998).
  44. Vukomanovic, J., Rodd, F. H. Size-Dependent Female Mate Copying in the Guppy (Poecilia reticulata): Large Females are Role Models but Small Ones are not. Ethology. 113, (6), 579-586 (2007).
  45. Dugatkin, L. A., Godin, J. -G. J. Female mate copying in the guppy (Poecilia reticulata): age-dependent effects. Behavioral Ecology. 4, 289-292 (1993).
  46. Amlacher, J., Dugatkin, L. A. Preference for older over younger models during mate-choice copying in young guppies. Ethology Ecology & Evolution. 17, (2), 161-169 (2005).
  47. Hill, S. E., Ryan, M. J. The role of model female quality in the mate choice copying behaviour of sailfin mollies. Biology Letters. 2, (2), 203-205 (2006).
  48. Gierszewski, S., Keil, M., Witte, K. Mate-choice copying in sailfin molly females: public information use from long-distance interactions. Behavioral Ecology and Sociobiology. 72, (2), 26 (2018).
  49. Schlupp, I., Marler, C., Ryan, M. J. Benefit to male sailfin mollies of mating with heterospecific females. Science. 263, (5145), 373-374 (1994).
  50. Schlupp, I., Ryan, M. J. Male sailfin mollies (Poecilia latipinna) copy the mate choice of other males. Behavioral Ecology. 8, (1), 104-107 (1997).
  51. Witte, K., Ryan, M. J. Male body length influences mate-choice copying in the sailfin molly Poecilia latipinna. Behavioral Ecology. 9, (5), 534-539 (1998).
  52. Witte, K., Ueding, K. Sailfin molly females (Poecilia latipinna) copy the rejection of a male. Behavioral Ecology. 14, (3), 389-395 (2003).
  53. Verzijden, M. N., ten Cate, C., Servedio, M. R., Kozak, G. M., Boughman, J. W., Svensson, E. I. The impact of learning on sexual selection and speciation. Trends in Ecology & Evolution. 27, (9), 511-519 (2012).
  54. Varela, S. A. M., Matos, M., Schlupp, I. The role of mate-choice copying in speciation and hybridization. Biological Reviews. 93, (2), 1304-1322 (2018).
  55. Nöbel, S., Danchin, E., Isabel, G. Mate-copying for a costly variant in Drosophila melanogaster females. Behavioral Ecology. ary095 (2018).
  56. Norazmi-Lokman, N. H., Purser, G. J., Patil, J. G. Gravid Spot Predicts Developmental Progress and Reproductive Output in a Livebearing Fish, Gambusia holbrooki. PLoS One. 11, (1), e0147711 (2016).
  57. Constantz, G. D. Reproductive biology of poeciliid fishes. Ecology and Evolution of livebearing fishes (Poeciliidae). Meffe, G. K., Snelson, F. F. Prentice Hall. 33-50 (1989).
  58. Peden, A. E. Variation in Anal Spot Expression of Gambusiin Females and Its Effect on Male Courtship. Copeia. 1973, (2), 250-263 (1973).
  59. Farr, J. A., Travis, J. Fertility Advertisement by Female Sailfin Mollies, Poecilia latipinna (Pisces: Poeciliidae). Copeia. 1986, (2), 467-472 (1986).
  60. Sumner, I. T., Travis, J., Johnson, C. D. Methods of Female Fertility Advertisement and Variation among Males in Responsiveness in the Sailfin Molly (Poecilia latipinna). Copeia. 1994, (1), 27-34 (1994).
  61. Witte, K., Noltemeier, B. The role of information in mate-choice copying in female sailfin mollies (Poecilia latipinna). Behavioral Ecology and Sociobiology. 52, (3), 194-202 (2002).
  62. R Development Core Team. R: a language and environment for statistical computing. Available from: http://www.r-project.org (2015).
  63. Bischoff, R. J., Gould, J. L., Rubenstein, D. I. Tail size and female choice in the guppy (Poecilia reticulata). Behavioral Ecology and Sociobiology. 17, (3), 253-255 (1985).
  64. Forsgren, E. Predation Risk Affects Mate Choice in a Gobiid Fish. The American Naturalist. 140, (6), 1041-1049 (1992).
  65. Berglund, A. Risky sex: male pipefishes mate at random in the presence of a predator. Animal Behaviour. 46, (1), 169-175 (1993).
  66. Kodric-Brown, A. Female choice of multiple male criteria in guppies: interacting effects of dominance, coloration and courtship. Behavioral Ecology and Sociobiology. 32, (6), 415-420 (1993).
  67. Witte, K., Klink, K. B. No pre-existing bias in sailfin molly females, Poecilia latipinna, for a sword in males. Behaviour. 142, (3), 283-303 (2005).
  68. Nöbel, S., Witte, K. Public Information Influences Sperm Transfer to Females in Sailfin Molly Males. PLoS One. 8, (1), e53865 (2013).
  69. Pinheiro, J., Bates, D., DebRoy, S., Sarkar, D., Team, R. C. nlme: Linear and Nonlinear Mixed Effects Models. Available from: http://cran.r-project.org/package=nlme (2015).
  70. Crawley, M. J. The R Book. John Wiley & Sons, Ltd. (2007).
  71. Pinheiro, J. C., Bates, D. M. Mixed-Effects Models in S and S-PLUS. Springer-Verlag. New York. (2000).
  72. Zuur, A., Ieno, E. N., Walker, N., Saveliev, A. A., Smith, G. M. Mixed Effects Models and Extensions in Ecology with R. Springer. New York. (2009).
  73. De Rosario-Martinez, H. phia: Post-Hoc Interaction Analysis. Available from: https://cran.r-project.org/web/packages/RVAideMemoire (2015).
  74. Korner-Nievergelt, F., Roth, T., von Felten, S., Guélat, J., Almasi, B., Korner-Nievergelt, P. Bayesian Data Analysis in Ecology Using Linear Models with R, BUGS, and Stan. Elsevier Science. (2015).
  75. Hervé, M. RVAideMemoire: Testing and Plotting Procedures for Biostatistics. Available from: https://cran.r-project.org/package=RVAideMemoire%0A (2017).
  76. Travis, J. Ecological genetics of life history traits in poeciliid fishes. Ecology and Evolution of livebearing fishes (Poeciliidae). Meffe, G. K., Snelson, F. F. Prentice Hall. 185-200 (1989).
  77. Benson, K. E. Enhanced Female Brood Patch Size Stimulates Male Courtship in Xiphophorus helleri. Copeia. 2007, (1), 212-217 (2007).
  78. Hurlbert, S. H. Pseudoreplication and the design of ecological field experiments. Ecological Monographs. 54, (2), 187-211 (1984).
  79. McGregor, P. K. Playback experiments: design and analysis. Acta Ethologica. 3, (1), 3-8 (2000).
  80. Smielik, I., Müller, K., Kuhnert, K. D. Fish motion simulation. ESM 2015-European Simulation and Modelling (EUROSIS) Conference Proc. 392-396 (2015).
  81. Baird, R. C. Aspects of social behavior in Poecilia latipinna (Lesueur). Revista de Biología Tropical. 21, (2), 399-416 (1974).
  82. Tedore, C., Johnsen, S. Using RGB displays to portray color realistic imagery to animal eyes. Current Zoology. 63, (1), 27-34 (2017).
  83. Calabrese, G. M., Brady, P. C., Gruev, V., Cummings, M. E. Polarization signaling in swordtails alters female mate preference. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111, (37), 13397-13402 (2014).
  84. Qin, M., Wong, A., Seguin, D., Gerlai, R. Induction of social behavior in zebrafish: live versus computer animated fish as stimuli. Zebrafish. 11, (3), 185-197 (2014).
  85. Scherer, U., Godin, J. -G. J., Schuett, W. Validation of 2D-animated pictures as an investigative tool in the behavioural sciences A case study with a West African cichlid fish, Pelvicachromis pulcher. Ethology. 123, (8), 560-570 (2017).
  86. Butkowski, T., Yan, W., Gray, A. M., Cui, R., Verzijden, M. N., Rosenthal, G. G. Automated interactive video playback for studies of animal communication. The Journal of Visualized Experiments. (48), 2374 (2011).
  87. Müller, K., Gierszewski, S., Witte, K., Kuhnert, K. -D. Where is my mate? Real-time 3-D fish tracking for interactive mate-choice experiments. ICPR 2016-23rd International Conference for Pattern Recognition; VAIB 2016, Proc. 1-5 (2016).
  88. Müller, K., Schlemper, J., Kuhnert, L., Kuhnert, K. -D. Calibration and 3D ground truth data generation with orthogonal camera-setup and refraction compensation for aquaria in real-time. IEEE 2014 International Conference on Computer Vision Theory and Applications (VISAPP). 3, 626-634 (2014).
  89. Müller, K., Hütwohl, J. M., Gierszewski, S., Witte, K., Kuhnert, K. D. Fish Motion Capture with Refraction Synthesis. Journal of WSCG. In press (2018).
  90. ASAB Guidelines for the treatment of animals in behavioural research and teaching. Animal Behaviour. 135, I-X (2018).
  91. Russell, W. M. S., Burch, R. L. The Principles of Humane Experimental Technique. Methuen and Co. Ltd. London. (1959).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics