استخراج وتحليل للتايوانيين دنج الأخضر

JoVE Journal
Biochemistry

Your institution must subscribe to JoVE's Biochemistry section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

نقدم بروتوكول لاستخدام الإيثانول كمذيب لاستخراج وتميز التايوانية دنج الأخضر الذي يسلك النشاط المضاد للبكتيريا.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Chen, C. T., Chien, Y. H., Yu, Y. H., Chen, Y. W. Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis. J. Vis. Exp. (143), e58743, doi:10.3791/58743 (2019).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

دنج الأخضر التايوانية غنية في الفلافونويدات برينيلاتيد ومعارض طائفة واسعة من الأنشطة البيولوجية، مثل مضادات الأكسدة، مضاد للجراثيم، ومنها السرطان. أن المركبات النشطة بيولوجيا من دنج الأخضر التايوانية بروبولينس، إلا وهي جيم ودال، وواو، وزاي تركيز بروبولينس في دنج الأخضر التايوانية تختلف حسب الموسم والموقع الجغرافي. وهكذا، من المهم لوضع إجراءات موحدة وقابلة للتكرار لتحديد نوعية دنج الأخضر التايوانية. نقدم هنا، هو بروتوكول يستخدم كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء، المستندة إلى الإيثانول استخراج وتحليل نشاط المضاد للبكتيريا لتوصيف نوعية دنج الأخضر التايوانية. هذا الأسلوب يشير إلى أن استخراج الإيثانول 95% و 99.5% تحقيق محصول المادة الجافة كحد أقصى من التايوانيين دنج الأخضر، مما تسفر عن تركيزات أعلى من بروبولينس التي لها خصائص مضادة للجراثيم. ووفقا لهذه النتائج، يعتبر هذا البروتوكول يمكن الاعتماد عليها وقابلة للتكرار لتحديد نوعية دنج الأخضر التايوانية.

Introduction

دنج خليط راتنجية طبيعية التي تنتجها أنواع النحل Apis mellifera. دنج قد استخدمت على نطاق واسع منذ العصور القديمة في الأدوية الشعبية. وأفادت دراسة مؤخرا أن دنج مفيد للوقاية من العدوى الميكروبية والالتهاب1. وقد أثبتت دراسات عديدة أن المركبات الحيوية النشطة الرئيسية في دنج هي الفلافونويد، استرات الأحماض الفينولية، برينيلاتيد فكوماريك الأحماض والأحماض ديتيربينيك2،3. وحتى الآن، تم تحديد 10 مشتقات فلافانوني برينيلاتيد من دنج الأخضر التايوانية من خلال كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء ([هبلك])4،5،،من67. هي الأكثر وفرة من بين هذه بروبولينس جيم ودال، واو، وزاي5،7. آثار دنج الأخضر التايوانية بيولوجية كبيرة ترتبط بمحتواه العالي من بروبولينس8.

تركيزات المركبات النشطة بيولوجيا في دنج تختلف اختلافاً كبيرا تبعاً للموسم والموقع الجغرافي التي يتم الحصول عليها في دنج. ويتضمن دنج الأوروبية أساسا الفلافونويد aglycone والفينوليه الأحماض9. المركبات الحيوية النشطة الرئيسية في دنج من البرازيل هي برينيلاتيد فكوماريك الأحماض، مثل artepillin جيم10. أظهرت دراسة أن هذا الموسم عامل حاسم لتحديد المحتوى الإجمالي بروبولين في دنج الأخضر التايوانية11. المحتوى بروبولين في دنج الأخضر التايوانية أعلى في الصيف (أيار/مايو-تموز/يوليه)، وأدنى في فصل الشتاء11. خاصية مضادة للجراثيم دنج اعتبرت على نطاق واسع أن يكون مؤشرا على النشاط البيولوجي. وبصفة عامة، أظهرت عينات دنج جمعت من مختلف مناطق خاصية المضادة للبكتيريا مماثلة؛ على سبيل المثال، وهي عموما فعالة ضد تقريبا جميع البكتيريا إيجابية ويسلك تأثير محدود للبكتيريا ضد البكتيريا سلبية الغرام10،،من1213. التفاعلات التآزر بين الفلافونويدات في دنج أظهرت أن تأثير البكتيريا14. وبالمثل، أبلغ دنج الأخضر التايوانية ليكون لها تأثير مضادات الميكروبات ضد البكتيريا إيجابية15. وعلاوة على ذلك، كما حددت دراسة تأثير مضادات الميكروبات من التفاعلات بين بروبولينس في دنج الأخضر التايوانية8.

من الصعب وصف المركبات النشطة بيولوجيا في دنج نظراً لتكوينها الكيميائي يمكن أن تختلف وفقا لمصدرها الأصلي. ولذلك، من الضروري وضع طريقة مجدية وقابلة للتكرار لتحديد نوعية دنج الأخضر التايوانية. ومع ذلك، أنشئ لا الإجراء القياسي لاستخراج دنج الأخضر التايوانية والتحليل الوظيفي اللاحقة. واقترحت عدة طرق مختلفة تطبيق المذيبات العضوية وغير العضوية دنج استخراج16،،من1718،،من1920. لأن دنج خليط محبتين، بينت الدراسات أن استخراج العضوية أفضل من الاستخراج غير العضوية8،،من1819. تركيز مجموع بروبولين في دنج الأخضر التايوانية وخصائصه المضادة للبكتيريا هي المؤشرات الرئيسية لنوعية دنج الأخضر التايوانية. وهكذا، والغرض من هذه الدراسة تقديم بروتوكول لاستخدام الإيثانول كمذيب لاستخلاص وتوصيف خصائص مضادة للجراثيم دنج الأخضر التايوانية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1-إعداد المركبات الإيثانول المستخرج

  1. تزن 10 غم دنج الأخضر التايوانية المجمدة، التي تم جمعها من خلايا النحل في تايوان من أيار/مايو إلى تموز/يوليه، وطحن باستخدام مطحنة التوابل. تأكد من أن قطعة كاملة من دنج الأخضر التايوانية الأرض إلى مسحوق ناعم دون أي الجزيئات الكبيرة.
  2. إضافة 100 مل تركيزات مختلفة من الإيثانول (60% و 70%، 80%، 95% و 99.5%)، وفصل قوارير وخلط كل تركيز مع 10 جرام من دنج الأرض بالمياه.
  3. احتضان عند 25 درجة مئوية وهز قارورة 250 لفة في الدقيقة ح 48.
  4. تصفية مقتطفات الإيثانول عن طريق تصفية الورق بحجم مسام ميكرومتر 25.
  5. إعادة تشكيل فيلتراتيس بحجمها الأصلي (100 مل) مع الإيثانول 95% باستخدام دورق حجمي.
  6. تخزين مقتطفات الإيثانول في-20 درجة مئوية.
    ملاحظة: يمكن أن يكون مؤقتاً البروتوكول هنا.

2-إعداد مستخلصات الإيثانول [هبلك]

  1. التركيز 10 مل من الإيثانول مقتطفات من فراغ البخر عند 40 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
  2. خبز المادة الجافة في 45 درجة مئوية ح 24.
  3. إعادة تشكيل المادة الجافة مع 10 مل إيثانول 95%.
  4. تصفية 1 مل إيثانول استخراج باستخدام عامل تصفية المحاقن معقمة مع حجم مسام 0.45 ميكرومتر.
  5. ريفيلتير مقتطفات الإيثانول باستخدام عامل تصفية المحاقن معقمة مع حجم مسام 0.22 ميكرومتر. فيلتراتي التي يتم جمعها، ويمكن تحليلها مباشرة باستخدام [هبلك].

3-تحليل المحتوى بروبولين باستخدام [هبلك]

  1. إنشاء المنحنيات القياسية من بروبولينس
    1. تحضير 1 لتر المرحلة المتنقلة للحل الميثانول: المياه 88.8:11.2 (v/v).
    2. إعداد تخفيف المسلسل من بروبولين تركيزات (جيم ودال، واو، وزاي) القياسية (15.625 مغ/مل 31.25 ملغ/مل، 62.5 ملغ/مل و 125 ملغ/مل، على التوالي) باستخدام الحل المرحلة المتنقلة كمذيب.
    3. حقن 20 ميليلتر من تركيزات بروبولين القياسية في العمود عكس المرحلة، تسلسلياً من التركيز المنخفض إلى التركيز العالي.
    4. تعيين العمود [هبلك] في 30 درجة مئوية ومعدل التدفق إلى 1 مل/دقيقة.
    5. تعيين الطول الموجي لكشف الأشعة فوق البنفسجية إلى 280 نانومتر ومسجل الوقت إلى 20 دقيقة.
    6. تحليل معايير على الأقل 3 x.
    7. ارسم استجابة قياس المحور (ص) ضد تركيز محور (س) باستخدام حساب الورقة البرمجيات، وإنشاء منحنى قياسي مع المعادلة وقيمة R-ساحة.
  2. تحليل استخراج الإيثانول s
    1. حقن 20 ميليلتر من مقتطفات الإيثانول التي تم الحصول عليها من الخطوة 2، 5 في العمود عكس المرحلة.
    2. تعيين العمود [هبلك] في 30 درجة مئوية ومعدل التدفق إلى 1 مل/دقيقة.
    3. تعيين الطول الموجي لكشف الأشعة فوق البنفسجية إلى 280 نانومتر ومسجل الوقت إلى 20 دقيقة.
    4. تحليل معايير على الأقل 3 x.
    5. حساب تركيز بروبولين في استخراج الإيثانول، باستخدام المعادلة لمنحنى القياسية التي تم الحصول عليها من الخطوة 3.1.7 يستخدم منطقة الذروة لكل بروبولين.

4-الحد الأدنى من تركيز المثبطة والحد الأدنى من تحليل تركيز جراثيم

ملاحظة: يتم استخدام الأسلوب ميكروديلوشن تقييم فعالية المضادة للبكتيريا بروبولينس استخراج الإيثانول من دنج الأخضر التايوانية.

  1. التحضير لاختبار الكائنات الحية
    1. ذوبان الجليد السلالات البكتيرية، الإشريكيّة القولونية، و المكوّرات العنقودية الذهبية وثم الثقافة لهم في مرق الصويا تريبتيك ومرق المغذيات، على التوالي، في 37 درجة مئوية ح 24.
    2. ممر في المذهبة س. استخدام مرق الصويا تريبتيك و كولاي استخدام مرق المغذيات لجيلين، ومن ثم، حساب الوحدات المكونة للمستعمرة بالعد مستعمرات فردية على صفيحة أجار.
  2. إعداد الإيثانول مقتطفات عن اختبار النشاط المضاد للبكتيريا
    1. وتركز على مستخلصات الإيثانول التي تم الحصول عليها من الخطوة 1.5 بتبخر فراغ عند 40 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
    2. إعادة تشكيل المادة الجافة مع ثنائي ميثيل سلفوكسيد ([دمس])، وضبط تركيز الاستخراج إلى 12.8 ملغم/مل.
    3. جعل إضعاف مسلسل (تركيزات: 5، 10، 20، 40، 80، 160، 320 و 640 ميكروغرام/ملليلتر) من الإيثانول مقتطفات استخدام المرق.
  3. اختبارات تركيز المثبطة الدنيا
    1. إضافة 10 ميليلتر من مقتطفات الإيثانول المخفف تتراوح بين 0.156 640.0 ميكروغرام/مل في لوحة 96-جيدا.
    2. باستخدام مرق، ضبط مستوى الصوت إلى 100 ميليلتر، والحفاظ على [دمس] 5% في كافة تخفيف.
    3. تلقيح 100 ميليلتر من ثقافة البكتيرية (1 × 106/mL) في لوحة 96-جيدا.
    4. مقتطفات العدوى الثقافة التي تحتوي على تركيزات مختلفة من الإيثانول في 37 درجة مئوية ح 48.
    5. تحليل النمو البكتيري وفقا التعكر واستخدام الكثافة البصرية (القارئ الميكروسكوبية) في 590 نيوتن متر لتحديد تركيز الحد الأدنى المثبطة (MIC).
  4. الحد الأدنى من تركيز جراثيم الاختبارات
    1. تطعيم 10 ميليلتر من ثقافة السائل من كل بئر اختبار هيئة التصنيع العسكري التي أظهرت أي نمو على صفيحة أجار.
    2. احتضان في 37 درجة مئوية ح 24.
    3. تحديد النشاط جراثيم بتحديد أدنى تركيز التي كشفت عن لا النمو البكتيري مرئية. ويعتبر تركيز يقضي تماما على نمو الخلايا يكون تركيز البكتيرية الدنيا (أم بي سي).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

وترد في الجدول 1بيانات تمثيلية لاستخراج الإيثانول إيجابية. وكان محصول المادة الجافة من دنج الأخضر التايوانية ارتباطاً إيجابيا مع تركيز الإيثانول. وكان مقتطفات الإيثانول 95% و 99.5% المادة الجافة أعلى العائد من دنج الأخضر التايوانية. محصول المادة الجافة أقل من دنج الأخضر التايوانية وقعت عندما كان يستخدم الماء كمذيب الاستخراج. تشير هذه النتائج إلى أن ينفذ المذيبات عضوية، مثل الإيثانول، أفضل لاستخراج دنج الأخضر التايوانية. وتم تحديد الإشارة من القياسية بروبولينس جيم ودال، واو، وزاي وكمياً باستخدام [هبلك] (الشكل 1a). واتسمت إشارة بروبولينس في مقتطفات الإيثانول باستخدام معايير بروبولين الفردية و [هبلك] (الشكل 1b). عادة، يتم تركيز بروبولينس (جيم ودال، واو، وزاي) في دنج الأخضر التايوانية ارتباطاً إيجابيا مع تركيز الإيثانول أثناء استخراج (الجدول 1). وأنتج عائد أعلى من بروبولينس في دنج الأخضر التايوانية مقتطفات الإيثانول 95% و 99.5%.

تعرض بيانات تمثيلية إيجابية لتأثير مضاد مقتطفات الإيثانول في الجدول 2. وتم فحص النشاط المضاد للبكتيريا ضد س المذهبة و كولاي في مقتطفات الإيثانول. متوسط هيئة التصنيع العسكري وأم بي سي من مقتطفات الإيثانول المكوّرات س. كانت 10-20 ميكروغرام/مل و 20 ميكروغرام/مل، على التوالي (الجدول 2). مقتطفات المياه لم تكن الآثار المضادة للبكتيريا ضد المكوّرات س. (الجدول 2). لوحظ أي أثر للبكتيريا على كولاي أما مع الإيثانول أو استخراج المياه (الجدول 2).

Figure 1
رقم 1: تحديد بروبولينس في دنج الأخضر التايوانيين. إظهار هذه الألواح المعايير () بروبولينس و (ب) قياس بروبولينس في دنج الأخضر التايوانية استخدام [هبلك]. وقد تم تعديل هذا الرقم من تشن et al. 8- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

المذيبات * العائد (%) بروبولين (ج + د + و + ز)
(mg/mL)
99.5% EtOH 66.75 ± 0.5* * 36.73 ± 0.80
95% EtOH 66.25 ± 0.50 37.55 ± 1.29
80% EtOH 64.75 ± 0.96ب 34.25 ± 0.71ب
70% EtOH 63.25 ± 0.96ج 31.53 ± 0.31ج
60% EtOH 59.00 ± 1، 41د 29.34 ± 1.59د
المياه 7.00 ± 0.82ه وفيات المواليد * * *

الجدول 1: الجاف المسألة العائد (%) ومحتوى بروبولين (مغ/مل) في دنج الأخضر التايوانية المستخرجة باستخدام المذيبات المختلفة. * 10 غرام دنج تم استخراج باستخدام 100 مل مذيب، ومقتطفات تم تشكيلها أخيرا إلى 100 مل. * * أن القيم هي ± متوسط الانحراف المعياري (SD). أ ه يعني أن لا مرتفع المشتركة داخل عمود تختلف اختلافاً كبيرا (ف < 0.05). ND = غير المكتشفة. وقد تم تعديل هذا الجدول من تشن et al. 8.

استخراج المكوّرات العنقودية الذهبية الإشريكيّة القولونية
هيئة التصنيع العسكري (ميكروغرام/مل) أم بي سي (ميكروغرام/مل) هيئة التصنيع العسكري (ميكروغرام/مل)
99.5% EtOH 10 20 > 640
95% EtOH 10 20 > 640
80% EtOH 20 20 > 640
70% EtOH 10 20 > 640
60% EtOH 20 20 > 640
المياه وفيات المواليد وفيات المواليد وفيات المواليد

الجدول 2: هيئة التصنيع العسكري وأم بي سي (ميكروغرام/مل) من مقتطفات مختلفة ضد س. في المذهبة و كولاي. وقد تم تعديل هذا الجدول من تشن et al. 8.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

وأفادت دراسة أن تعطن، باستخدام تركيزات مختلفة من الإيثانول، يمكن أن تستخدم ل استخراج دنج البرازيلي17؛ ومع ذلك، هو العملية تستغرق وقتاً طويلاً17. استغرق 10 أيام على الأقل لاستخراج المركبات النشطة بيولوجيا، مثل محتوى الفينولية، من دنج البرازيلي17. واقترحت بدلاً من ذلك، تم استخراج الإيثانول في تركيبة مع تدفئة في 37 درجة مئوية أو 50 درجة مئوية، أو 70 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لاستخراج دنج البرازيلي19،،من2122. وتبين أن المركبات النشطة بيولوجيا في دنج البرازيلي يمكن استخراجها متفاوتاً تبعاً للنسبة المئوية من الإيثانول19. قد تختلف كفاءة الاستخراج من المركبات الحيوية النشطة في دنج بسبب التراكيب الكيميائية المختلفة من دنج البرازيلي والتايوانية دنج الأخضر. هنا، نحن نقدم بروتوكول يمكن الاعتماد عليها وقابلة للتكرار لاستخراج دنج الأخضر التايوانية. يمكن حصادها المركبات النشطة بيولوجيا في دنج الأخضر التايوانية خلال يومين، استخدام الإيثانول كمذيب. نتيجة مماثلة أيضا يدعم بروتوكول المعروضة هنا، وتقرر أنه يمكن استخلاص بروبولينس (جيم ودال، واو، وزاي) من دنج الأخضر التايوانية استخدام الإيثانول 95% في تركيبة مع استخراج يوم 323. أظهرت دراسة أخرى أن الإيثانول 95% في تركيبة مع ح 21 استخراج كانت قادرة على جني بروبولينس من دنج الأخضر التايوانية24. ومع ذلك، يجب التحقق من دقة تركيز بروبولينس بعد استخراج الإيثانول ح 21. وقد اقترح الباحثون أن عملية التدفئة يزيد من كفاءة استخراج دنج البرازيلي19،،من2122. يجب التحقيق في ما إذا كان يمكن استخراج بروبولينس من دنج الأخضر التايوانية بالتدفئة.

مقتطفات الإيثانول من دنج الأخضر التايوانية قد آثار مضادة للجراثيم ضد الجراثيم إيجابية. لأن دنج مسعور، وقد أثبتت الدراسات أن المذيبات عضوية مثل الإيثانول مذيب مناسب دنج استخراج8،،من1617،،من1819، 20. كما أظهرت الدراسات أن تركيز إيثانول زيادة يؤدي إلى أكثر المستخرجة من المركبات النشطة بيولوجيا8،،،من1718،20. في هذا البروتوكول، تستخرج المادة الجافة أقصى غلة دنج الأخضر التايوانية ولوحظت في الإيثانول 95% ونسبة 99.5 في المائة، فضلا عن تركيز أعلى من بروبولينس والنشاط المضاد للبكتيريا.

تم تصميم هذا البروتوكول لاستخراج دنج الأخضر التايوانية استخدام الإيثانول، وتقييم الجودة على أساس محتويات بروبولينس. ومع ذلك، بعض المركبات النشطة بيولوجيا تستعصي على الحل الإيثانول في دنج الأخضر التايوانية بشكل صحيح يمكن عزل استخدام هذا البروتوكول.

الجانب الأكثر أهمية من الأسلوب فيما يتعلق بالأساليب القائمة أن هذا الأسلوب يوفر الوقت بالنسبة إلى الأساليب المقترحة في17،دراسات أخرى23. وعلاوة على ذلك، أظهرت مقتطفات الإيثانول 95% ونسبة 99.5 في المائة من التايوانيين دنج الأخضر تركيزات عالية من النشاط بروبولينس والمضادة للبكتيريا.

وهذا النهج قد التطبيقات المباشرة لتميز المركبات الحيوية النشطة الأخرى القابلة للذوبان في الإيثانول غير معروف في دنج الأخضر التايوانية. بالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام مقتطفات الإيثانول الذي يحتوي على بروبولينس لتحديد بيواكتيفيتيس الأخرى.

أحد الإجراءات التجريبية الرئيسية هو ضمان اتساق دنج الأخضر التايوانية خلال طحن (الخطوة 1، 1 من البروتوكول). طحن غير مناسب للتايوانيين دنج الأخضر يمكن أن يؤدي إلى المادة الجافة منخفضة الغلة ومحتوى بروبولين. من الضروري استخدام جهاز طحن سليم، مثل التوابل ومطحنة، مطحنة النسيج أو الخالطون، والعناية أن دنج يصبح مسحوق ناعم دون أي الجزيئات الكبيرة المتبقية بعد الطحن.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بإعلان.

Acknowledgments

تم تحرير هذه المخطوطة عن طريق "تحرير والاس الأكاديمية".

Materials

Name Company Catalog Number Comments
ethanol Sigma-Aldrich E7023
Whatman no. 4 filter paper Sigma-Aldrich WHA1004125
methanol Sigma-Aldrich 34860
reverse phase RP-18 column Phenomenex Inc. 00G-0234-E0
Staphylococcus aureus ATCC BCRC 10780
Escherichia coli ATCC BCRC 10675
tryptic soy broth Sigma-Aldrich 22092
nutrient broth Sigma-Aldrich 70122
dimethyl sulfoxide Sigma-Aldrich D2650
spice grinder Waring WSG60K
microplate Reader Molecular Devices EMAX PLUS
HPLC system Agilent 1200 Series
vacuum evaporation BÜCHI Rotavapor R-215

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Zabaiou, N., et al. Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product. Chemistry and Physics of Lipids. 207, (Pt B), 214-222 (2017).
  2. Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin. Apidologie. 31, (1), 3-15 (2000).
  3. Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50, (9), 2502-2506 (2002).
  4. Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis. Journal of Natural Products. 66, (4), 503-506 (2003).
  5. Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources. Evidence-Based Complementary and Alternative. 1, (2), 175-185 (2004).
  6. Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis. Cancer Letters. 24, (1-2), 218-231 (2007).
  7. Huang, W. J., et al. Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55, (18), 7366-7376 (2007).
  8. Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis. Journal of Food and Drug Analysis. 26, (2), 761-768 (2018).
  9. Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis. Zeitschrift für Naturforschung. 55, (1-2), 70-75 (2000).
  10. Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity. Journal of Ethnopharmacology. 73, (1-2), 243-249 (2000).
  11. Chen, Y. W., et al. Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons. Journal of the Science of Food and Agriculture. 88, (3), 412-419 (2008).
  12. Grange, J. M., Davey, R. W. Antibacterial properties of propolis (bee glue). Journal of the Royal Society of Medicine. 83, (3), 159-160 (1990).
  13. Kujumgiev, A., et al. Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins. Journal of Ethnopharmacology. 64, (3), 235-240 (1999).
  14. Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus. Drug Research. 43, (5), 607-609 (1993).
  15. Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan. Journal of Food and Drug Analysis. 11, (4), 277-282 (2003).
  16. Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents. Phytotherapy Research. 10, (4), 335-336 (1996).
  17. Cunha, I. B. S., et al. Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts. Journal of the Brazilian Chemical Society. 15, (6), 964-970 (2004).
  18. Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. Extraction properties of propolis with ethanol concentration. Journal of Apicultural Research. 30, (3), 211-216 (2015).
  19. Park, Y. K., Ikegaki, M. Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62, (11), 2230-2232 (1998).
  20. Ramanauskienė, K., Inkėnienė, A. M. Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity. Natural Product Research. 25, (15), 1463-1468 (2011).
  21. Machado, B. A., et al. Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil. PLoS One. 11, (1), e0145954 (2016).
  22. Monroy, Y. M., et al. Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water. The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).
  23. Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan. Phytochemical Analysis. 21, (2), 186-191 (2010).
  24. Chen, L. H., et al. Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet. Nutrients. 10, (4), e503 (2018).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please sign in or create an account.

    Usage Statistics