निष्कर्षण और ताइवान ग्रीन एक प्रकार का पौधा का विश्लेषण

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Biochemistry

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Summary

हम एक विलायक के रूप में इथेनॉल का उपयोग करने को निकालने और ताइवान हरे रंग का पौधा विशेषताएं है कि जीवाणुरोधी गतिविधि प्रदर्शित करने के लिए एक प्रोटोकॉल मौजूद ।

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Chen, C. T., Chien, Y. H., Yu, Y. H., Chen, Y. W. Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis. J. Vis. Exp. (143), e58743, doi:10.3791/58743 (2019).

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Abstract

ताइवानी ग्रीन पौधा prenylated flavonoids में समृद्ध है और जैविक गतिविधियों की एक व्यापक रेंज दर्शाती है, जैसे एंटीऑक्सीडेंट, जीवाणुरोधी, और विरोधी वाले. ताइवान हरे रंग का पौधा के propolins, अर्थात् सी, डी, एफ, और जी के सक्रिय यौगिकों हैं । ताइवानी हरे रंग का पौधा में propolins की एकाग्रता मौसम और भौगोलिक स्थान के आधार पर बदलती है । इस प्रकार, यह ताइवान हरी एक प्रकार का पौधा की गुणवत्ता का निर्धारण करने के लिए एक मानक और दोहराने की प्रक्रिया स्थापित करने के लिए महत्वपूर्ण है । यहां, हम एक प्रोटोकॉल है कि इथेनॉल आधारित निष्कर्षण, उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी, और एक जीवाणुरोधी गतिविधि विश्लेषण का उपयोग करता है ताइवानी ग्रीन पौधा गुणवत्ता की विशेषताएं प्रस्तुत करते हैं । इस विधि इंगित करता है कि ९५% और ९९.५% इथेनॉल निकालने ताइवान हरी एक प्रकार का पौधा से अधिकतम शुष्क बात पैदावार प्राप्त है, जिससे propolins के उच्चतम सांद्रता कि जीवाणुरोधी गुण है उपज । इन निष्कर्षों के अनुसार, वर्तमान प्रोटोकॉल ताइवान ग्रीन एक प्रकार का पौधा की गुणवत्ता का निर्धारण करने के लिए विश्वसनीय और दोहराया माना जाता है ।

Introduction

एक प्रकार का पौधा एक प्राकृतिक राल मधुमक्खी प्रजातियों एपीआई अफ्रिकनद्वारा उत्पादित मिश्रण है । एक प्रकार का पौधा व्यापक रूप से लोक दवाओं में प्राचीन काल से प्रयोग किया गया है । एक अध्ययन ने हाल ही में बताया कि एक प्रकार का पौधा माइक्रोबियल संक्रमण और सूजन को रोकने के लिए फायदेमंद है1. कई अध्ययनों का प्रदर्शन किया है कि मुख्य एक प्रकार का पौधा में सक्रिय यौगिकों flavonoids, phenolic एसिड एस्टर्स, prenylated पीcoumaric एसिड, और diterpenic एसिड2,3हैं । तिथि करने के लिए, ताइवान ग्रीन एक प्रकार का पौधा से 10 prenylated flavanone डेरिवेटिव उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (HPLC)4,5,6,7के माध्यम से पहचान की गई है । इन के बीच सबसे प्रचुर मात्रा में है propolins सी, डी, एफ, और जी5,7। ताइवान के हरे रंग का पौधा के काफी जैविक प्रभाव propolins8के अपने उच्च सामग्री के साथ संबंधित हैं ।

एक प्रकार का पौधा में सक्रिय यौगिकों की सांद्रता बहुत मौसम और भौगोलिक स्थान है जिसमें से एक प्रकार का पौधा प्राप्त है के आधार पर बदलती हैं । यूरोपीय एक प्रकार का पौधा मुख्य रूप से flavonoid aglycone और phenolic एसिड9शामिल हैं । ब्राजील से एक प्रकार का पौधा में प्रमुख रूप से सक्रिय यौगिकों prenylated पीcoumaric एसिड, जैसे artepillin सी10कर रहे हैं । एक अध्ययन का प्रदर्शन किया है कि मौसम ताइवानी ग्रीन एक प्रकार का पौधा11में कुल propolin सामग्री का निर्धारण करने के लिए एक महत्वपूर्ण कारक है । ताइवानी ग्रीन पौधा में propolin सामग्री गर्मियों में सबसे ज्यादा (मई-जुलाई) और सर्दियों में11में सबसे कम होती है । एक प्रकार का पौधा जीवाणुरोधी संपत्ति व्यापक रूप से जैविक गतिविधि का एक संकेतक माना गया है । आम तौर पर, विभिंन क्षेत्रों से एकत्र एक प्रकार का पौधा के नमूने एक समान जीवाणुरोधी संपत्ति का प्रदर्शन किया है; उदाहरण के लिए, यह आम तौर पर लगभग सभी ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया के खिलाफ प्रभावी है और ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया10,12,13के खिलाफ एक सीमित जीवाणुरोधी प्रभाव दर्शाती है । एक प्रकार का पौधा में flavonoids के बीच Synergistic बातचीत के लिए एक जीवाणुरोधी प्रभाव14का प्रदर्शन किया गया । इसी प्रकार, ताइवानी ग्रीन पौधा को ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया15के खिलाफ रोगाणुरोधी प्रभाव की सूचना दी गई थी । इसके अलावा, एक अध्ययन भी ताइवानी ग्रीन पौधा8में propolins की बातचीत से एक रोगाणुरोधी प्रभाव की पहचान की ।

एक प्रकार का पौधा में जैव सक्रिय यौगिकों के लक्षण वर्णन मुश्किल है क्योंकि इसकी रासायनिक संरचना मूल के अपने स्रोत के अनुसार भिन्न हो सकते हैं । इसलिए, यह ताइवानी ग्रीन पौधा की गुणवत्ता का निर्धारण करने के लिए एक व्यवहार्य और दोहराने विधि स्थापित करने के लिए आवश्यक है । हालांकि, कोई मानक प्रक्रिया ताइवानी ग्रीन एक प्रकार का पौधा निष्कर्षण और बाद में कार्यात्मक विश्लेषण के लिए स्थापित किया गया है । कई तरीकों कि विभिंन कार्बनिक और अकार्बनिक सॉल्वैंट्स लागू करने के लिए एक प्रकार का पौधा निष्कर्षण16,17, 18,19,20के लिए प्रस्तावित किया गया है । क्योंकि एक प्रकार का पौधा एक lipophilic मिश्रण है, अध्ययनों से प्रदर्शन किया है कि कार्बनिक निष्कर्षण अकार्बनिक निष्कर्षण से बेहतर है8,18,19। ताइवानी हरे रंग का पौधा और उसके जीवाणुरोधी गुणों में कुल propolin एकाग्रता ताइवानी हरी पौधा की गुणवत्ता के प्रमुख संकेतक हैं । इस प्रकार, इस अध्ययन के प्रयोजन के लिए एक विलायक के रूप में इथेनॉल का उपयोग करने के लिए निकालने और ताइवानी हरी पौधा की जीवाणुरोधी गुणों की विशेषता के लिए एक प्रोटोकॉल मौजूद है ।

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Protocol

1. इथेनॉल निकाले यौगिकों की तैयारी

  1. जमे हुए ताइवानी ग्रीन एक प्रकार का पौधा, जो ताइवान में मई से जुलाई तक के लिए छत्रक से एकत्र किया गया था की 10 जी, और मसाला चक्की का उपयोग कर पीस । की पुष्टि करें कि ताइवानी हरे रंग का पौधा के पूरे टुकड़े किसी भी बड़े कणों के बिना एक ठीक पाउडर में जमीन कर रहे हैं ।
  2. इथेनॉल के विभिन्न सांद्रता के १०० मिलीलीटर जोड़ें (६०%, ७०%, ८०%, ९५%, और ९९.५%) और पानी की कुप्पी को अलग करने के लिए और जमीन एक प्रकार का पौधा के 10 ग्राम के साथ प्रत्येक एकाग्रता मिश्रण.
  3. 25 डिग्री सेल्सियस पर मशीन और ४८ एच के लिए २५० rpm पर कुप्पी हिला ।
  4. फ़िल्टर कागज के माध्यम से एक 25 माइक्रोन ताकना आकार के साथ इथेनॉल अर्क फिल्टर ।
  5. एक volumetric कुप्पी का उपयोग ९५% इथेनॉल के साथ उनके मूल मात्रा (१०० एमएल) के लिए निस्पंदन का पुनर्गठन ।
  6. -20 डिग्री सेल्सियस पर इथेनॉल अर्क स्टोर ।
    नोट: प्रोटोकॉल यहां ठहराया जा सकता है ।

2. HPLC के लिए इथेनॉल अर्क की तैयारी

  1. 15 मिनट के लिए ४० ° c पर वैक्यूम वाष्पीकरण द्वारा इथेनॉल के अर्क के 10 मिलीलीटर ध्यान लगाओ ।
  2. 24 एच के लिए ४५ ° c पर शुष्क बात बनाओ ।
  3. ९५% इथेनॉल के 10 मिलीलीटर के साथ शुष्क पदार्थ का पुनर्गठन ।
  4. एक ०.४५ µm ताकना आकार के साथ एक बाँझ सिरिंज फिल्टर का उपयोग कर इथेनॉल के अर्क के फ़िल्टर 1 मिलीलीटर.
  5. इथेनॉल एक ०.२२ µm ताकना आकार के साथ एक बाँझ सिरिंज फिल्टर का उपयोग कर निष्कर्षों को फिर से फ़िल्टर. निस्पंदन एकत्र की है और सीधे HPLC का उपयोग कर विश्लेषण किया जा सकता है ।

3. HPLC का उपयोग कर Propolin सामग्री का विश्लेषण

  1. propolins के मानक curves की स्थापना
    1. 88.8 के मोबाइल चरण के 1 एल तैयार: 11.2 (v/v) मेथनॉल: जल समाधान ।
    2. propolin मानक के धारावाहिक कमजोर पड़ने तैयार (सी, डी, एफ, और जी) सांद्रता (१५.६२५ मिलीग्राम/एमएल, ३१.२५ मिलीग्राम/एमएल, ६२.५ मिलीग्राम/एमएल, और १२५ मिलीग्राम/एमएल, क्रमशः) एक विलायक के रूप में मोबाइल चरण समाधान का उपयोग कर ।
    3. उल्टे चरण कॉलम में propolin मानक सांद्रता के 20 µ एल इंजेक्षन, क्रमिक रूप से उच्च एकाग्रता के लिए कम एकाग्रता से.
    4. 30 डिग्री सेल्सियस पर HPLC कॉलम सेट और प्रवाह की दर 1 मिलीलीटर/
    5. २८० एनएम और रिकॉर्डर समय के लिए 20 मिनट के लिए यूवी डिटेक्टर की तरंग दैर्ध्य सेट करें ।
    6. मानकों का विश्लेषण कम से कम 3x ।
    7. माप प्रतिक्रिया (y-अक्ष) गणना पत्रक सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके एकाग्रता (x-अक्ष) के विरुद्ध प्लॉट करें, और समीकरण और R-वर्ग मान के साथ एक मानक वक्र बनाएँ ।
  2. का विश्लेषण इथेनॉल निकालने एस
    1. इथेनॉल के अर्क के 20 µ एल इंजेक्षन रिवर्स चरण कॉलम में २.५ कदम से प्राप्त की ।
    2. 30 डिग्री सेल्सियस पर HPLC कॉलम सेट और प्रवाह की दर 1 मिलीलीटर/
    3. २८० एनएम और रिकॉर्डर समय के लिए 20 मिनट के लिए यूवी डिटेक्टर की तरंग दैर्ध्य सेट करें ।
    4. मानकों का विश्लेषण कम से कम 3x ।
    5. इथेनॉल निकालने में propolin की एकाग्रता की गणना, मानक वक्र के लिए समीकरण का उपयोग कर कदम 3.1.7 है कि प्रत्येक propolin के लिए चोटी क्षेत्र का उपयोग करता है से प्राप्त की ।

4. न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता और न्यूनतम जीवाणुनाशक एकाग्रता विश्लेषण

नोट: microdilution विधि ताइवान ग्रीन एक प्रकार का पौधा से इथेनॉल निकाले propolins की जीवाणुरोधी प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए प्रयोग किया जाता है ।

  1. परीक्षण जीवों की तैयारी
    1. गल बैक्टीरियल उपभेदों, Staphylococcus aureus और ई कोलाई , और फिर, उंहें tryptic सोया शोरबा और पोषक तत्व शोरबा में संस्कृति, क्रमशः ३७ डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए ।
    2. बीतने एस. aureus tryptic सोया शोरबा और ई. कोलाई का उपयोग दो पीढ़ियों के लिए पोषक तत्व शोरबा का उपयोग कर और, फिर, कॉलोनी की गणना एक आगर प्लेट पर व्यक्तिगत कालोनियों की गिनती करके इकाइयों के गठन ।
  2. के लिए इथेनॉल निष्कर्षों की तैयारी जीवाणुरोधी गतिविधि परीक्षण
    1. इथेनॉल 15 मिनट के लिए ४० डिग्री सेल्सियस पर वैक्यूम वाष्पीकरण द्वारा कदम १.५ से प्राप्त अर्क ध्यान लगाओ ।
    2. dimethyl sulfoxide (DMSO) के साथ शुष्क पदार्थ का पुनर्गठन और १२.८ मिलीग्राम/एमएल के लिए निकालने की एकाग्रता को समायोजित ।
    3. एक धारावाहिक कमजोर पड़ने बनाओ (सांद्रता: 5, 10, 20, ४०, ८०, १६०, ३२०, और ६४० µ g/एमएल) इथेनॉल का उपयोग कर अर्क के शोरबा ।
  3. न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता परीक्षण
    1. पतला इथेनॉल अर्क के 10 µ एल जोड़ें ०.१५६ से ६४०.० µ g/एमएल एक ९६ अच्छी तरह से थाली में ।
    2. शोरबा का प्रयोग, १०० µ एल के लिए मात्रा को समायोजित, और बनाए रखने के 5% DMSO सभी कमजोर पड़ने में ।
    3. Inoculate १०० बैक्टीरियल संस्कृति के µ एल (1 x 106/mL) में ९६-अच्छी तरह से थाली ।
    4. ४८ एच के लिए ३७ ° c में इथेनॉल के अर्क के विभिंन सांद्रता युक्त संस्कृति इनोक्युलम
    5. turbidity के अनुसार बैक्टीरियल विकास का विश्लेषण और ५९० एनएम पर ऑप्टिकल घनत्व (microplate रीडर) का उपयोग करने के लिए ंयूनतम निरोधात्मक एकाग्रता (MIC) निर्धारित करते हैं ।
  4. न्यूनतम जीवाणुनाशक एकाग्रता परीक्षणों
    1. Inoculate 10 µ एल तरल संस्कृति के प्रत्येक अच्छी तरह से MIC परीक्षण है कि एक आगर प्लेट पर कोई वृद्धि प्रदर्शित की ।
    2. 24 घंटे के लिए ३७ ° c पर मशीन ।
    3. सबसे कम एकाग्रता है कि कोई दिखाई बैक्टीरियल विकास का पता चला द्वारा जीवाणुनाशक गतिविधि का निर्धारण । एकाग्रता है कि पूरी तरह से कोशिका वृद्धि को समाप्त करने के लिए ंयूनतम बैक्टीरियल एकाग्रता (अति पिछड़े वर्ग) माना जाता है ।

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Representative Results

इथेनॉल निष्कर्षण के लिए सकारात्मक प्रतिनिधि डेटा तालिका 1में प्रस्तुत कर रहे हैं । शुष्क बात ताइवान ग्रीन एक प्रकार का पौधा से उपज सकारात्मक इथेनॉल की एकाग्रता के साथ जुड़ा हुआ था । ९५% और ९९.५% इथेनॉल निष्कर्षों ताइवान हरी एक प्रकार का पौधा से सबसे अधिक शुष्क बात उपज था । ताइवान हरी एक प्रकार का पौधा से सबसे कम शुष्क बात उपज हुई जब पानी निष्कर्षण विलायक के रूप में इस्तेमाल किया गया था । इन परिणामों से संकेत मिलता है कि एक कार्बनिक विलायक, जैसे इथेनॉल, ताइवान हरी एक प्रकार का पौधा निष्कर्षण के लिए सबसे अच्छा प्रदर्शन । मानक propolins C, D, F, और G के संकेत को HPLC (figure 1a) का उपयोग करके पहचाना गया और quantified किया गया । इथेनॉल निष्कर्षों में propolins के संकेत व्यक्तिगत propolin मानकों और HPLC (आंकड़ा 1b) का उपयोग कर विशेषता थी । आम तौर पर, propolins की एकाग्रता (सी, डी, एफ, और जी) में ताइवानी हरे रंग का पौधा सकारात्मक निष्कर्षण के दौरान इथेनॉल एकाग्रता के साथ जुड़ा हुआ है (तालिका 1). ताइवान हरे रंग का पौधा में propolins की सबसे अधिक उपज ९५% और ९९.५% इथेनॉल के अर्क में उत्पादित किया गया था ।

इथेनॉल के अर्क के जीवाणुरोधी प्रभाव के लिए सकारात्मक प्रतिनिधि डेटा तालिका 2में प्रस्तुत कर रहे हैं । इथेनॉल के अर्क में एस aureus और ई. कोलाई के खिलाफ जीवाणुरोधी गतिविधि की जांच की गई । औसत MIC और अति पिछड़े वर्ग के लिए इथेनॉल के अर्क के aureus थे 10-20 µ g/एमएल और 20 µ g/ml, क्रमशः (तालिका 2) । पानी के अर्क एस aureus (तालिका 2) के खिलाफ जीवाणुरोधी प्रभाव नहीं था । ई. कोलाई पर कोई जीवाणुरोधी प्रभाव या तो इथेनॉल या पानी के अर्क (तालिका 2) के साथ मनाया गया था ।

Figure 1
चित्र 1: ताइवानी हरी पौधा में propolins की पहचान । इन पैनलों शो () propolins के मानकों और () HPLC का उपयोग कर ताइवानी ग्रीन पौधा में propolins की माप. यह आंकड़ा चेन एट अल से संशोधित किया गया है । 8. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

विलायक यील्ड (%) Propolin (C + D + F + G)
(mg/एमएल)
९९.५% ेतोः ६६.७५ ± ०.५एक* * ३६.७३ ± ०.८०
९५% ेतोः ६६.२५ ± ०.५० ३७.५५ ± १.२९
८०% ेतोः ६४.७५ ± ०.९६बी ३४.२५ ± ०.७१बी
७०% ेतोः ६३.२५ ± ०.९६c ३१.५३ ± ०.३१c
६०% ेतोः ५९.०० ± १.४१डी २९.३४ ± १.५९डी
पानी ७.०० ± ०.८२ एनडी * * *

तालिका 1: शुष्क बात उपज (%) और propolin सामग्री (mg/एमएल) ताइवानी हरे रंग का पौधा विभिन्न सॉल्वैंट्स का उपयोग कर निकाले में । * एक प्रकार का पौधा के 10 ग्राम विलायक के १०० मिलीलीटर का उपयोग कर निकाला गया था, और अर्क अंत में १०० मिलीलीटर को पुनर्गठन किया गया । * * मान मानक विचलन (SD) का अर्थ है ± । ए -ई किसी स्तंभ के भीतर इसका अर्थ है कि कोई सामांय सुपरस्क्रिप्ट नहीं है (P < ०.०५) । ND = नहीं पाया गया । इस टेबल को चेन एट अल से संशोधित किया गया है । 8.

निकालने Staphylococcus aureus ई कोलाई
MIC (µ g/एमएल) अति पिछड़ा वर्ग (µ g/ MIC (µ g/एमएल)
९९.५% ेतोः 10 20 > 640
९५% ेतोः 10 20 > 640
८०% ेतोः 20 20 > 640
७०% ेतोः 10 20 > 640
६०% ेतोः 20 20 > 640
पानी एन डी एन डी एन डी

तालिका 2: MIC और अति पिछड़े वर्ग (µ g/एमएल) के खिलाफ विभिंन निष्कर्षों की एस. aureus और ई. कोलाई इस टेबल को चेन एट अल से संशोधित किया गया है । 8.

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Discussion

एक अध्ययन में बताया गया है कि थकावट, इथेनॉल के विभिंन सांद्रता का उपयोग, ब्राजील के एक प्रकार का पौधा निष्कर्षण17के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है; हालांकि, प्रक्रिया समय लेने वाली17थी । यह ब्राजील के एक प्रकार का पौधा17से phenolic सामग्री के रूप में, इस तरह के रूप में सक्रिय यौगिकों, निकालने के लिए कम से कम 10 दिन लग गए । वैकल्पिक रूप से, ३७ डिग्री सेल्सियस, ५० डिग्री सेल्सियस, या ७० डिग्री सेल्सियस पर हीटिंग के साथ संयोजन में इथेनॉल निष्कर्षण 30 मिनट के लिए ब्राजील के एक पौधा19,21,22निकालने के लिए प्रस्तावित किया गया है । यह निर्धारित किया गया था कि ब्राजील के एक प्रकार का पौधा में सक्रिय यौगिकों अंतर19इथेनॉल के प्रतिशत के आधार पर निकाला जा सकता है । एक प्रकार का पौधा में जैव सक्रिय यौगिकों के निष्कर्षण दक्षता ब्राजील के एक प्रकार का पौधा और ताइवानी हरे रंग का पौधा के विभिन्न रासायनिक रचनाओं की वजह से भिन्न हो सकते हैं. यहां, हम ताइवान ग्रीन पौधा निकालने के लिए एक विश्वसनीय और दोहराने प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं । ताइवान हरे रंग का पौधा में सक्रिय यौगिकों 2 दिनों के भीतर काटा जा सकता है, एक विलायक के रूप में इथेनॉल का उपयोग कर । एक समान खोज भी यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल का समर्थन करता है और निर्धारित किया है कि propolins (सी, डी, एफ, और जी) ताइवानी हरे रंग का पौधा से एक 3 दिन निष्कर्षण23के साथ संयोजन में ९५% इथेनॉल का उपयोग कर निकाला जा सकता है । एक अंय अध्ययन का प्रदर्शन किया है कि एक 21 एच निष्कर्षण के साथ संयोजन में ९५% इथेनॉल ताइवान हरी एक प्रकार का पौधा24से propolins फसल में सक्षम था । हालांकि, 21 ज इथेनॉल निष्कर्षण के बाद propolins की सटीक एकाग्रता सत्यापित किया जाना चाहिए । शोधकर्ताओं ने प्रस्ताव दिया है कि हीटिंग प्रक्रिया ब्राजील के एक प्रकार का पौधा19,21,22के लिए निष्कर्षण दक्षता बढ़ जाती है । क्या ताइवान ग्रीन एक प्रकार का पौधा से propolins हीटिंग द्वारा निकाला जा सकता है जांच की जानी चाहिए ।

ताइवान के हरे रंग का पौधा से इथेनॉल अर्क ग्राम पॉजिटिव रोगजनकों के खिलाफ जीवाणुरोधी प्रभाव है । क्योंकि एकप्रकार का पौधा hydrophobic है, अध्ययनों से यह दिखा दिया है कि इथेनॉल के रूप में एक कार्बनिक विलायक एक प्रकार का पौधा निष्कर्षण के लिए एक उपयुक्त विलायक है8,16,17,18,19, 20। अध्ययनों से यह भी दिखा दिया है कि एक बढ़ी हुई इथेनॉल एकाग्रता और अधिक निकाले जाने वाले सक्रिय यौगिकों8,17,18,20की ओर जाता है । वर्तमान प्रोटोकॉल में, ताइवान हरे रंग का पौधा की अधिकतम शुष्क बात पैदावार ९५% और ९९.५% इथेनॉल निष्कर्षों में मनाया जाता है, साथ ही propolins और जीवाणुरोधी गतिविधि के उच्चतम एकाग्रता ।

वर्तमान प्रोटोकॉल ताइवानी हरे रंग का पौधा निष्कर्षण इथेनॉल का उपयोग करने के लिए बनाया गया है, और गुणवत्ता मूल्यांकन propolins की सामग्री के आधार पर किया जाता है । हालांकि, कुछ इथेनॉल में अघुलनशील गैर-घुलनशील सक्रिय यौगिकों के ताइवानी हरे रंग का पौधा ठीक से वर्तमान प्रोटोकॉल का उपयोग कर अलग नहीं किया जा सकता ।

मौजूदा विधियों के संबंध में विधि का सबसे महत्वपूर्ण पहलू यह है कि इस विधि के अंय अध्ययनों17,23में प्रस्तावित विधियों के सापेक्ष समय बचाता है । इसके अलावा, ९५% और ताइवानी ग्रीन पौधा के ९९.५% इथेनॉल निष्कर्षों propolins और जीवाणुरोधी गतिविधि के एक उच्च एकाग्रता का प्रदर्शन किया ।

यह दृष्टिकोण निस्र्पक अंय अज्ञात इथेनॉल के लिए सीधे आवेदन किया है, ताइवान हरे रंग का पौधा में घुलनशील सक्रिय यौगिकों । इसके अतिरिक्त, propolins युक्त इथेनॉल निष्कर्षों अंय गतिविधियों का निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।

प्रमुख प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं में से एक (प्रोटोकॉल कदम १.१) पीसने के दौरान ताइवान के हरे रंग का पौधा की एकरूपता सुनिश्चित है । ताइवान हरे रंग का पौधा के अनुपयुक्त पीसने कम शुष्क बात पैदावार और propolin सामग्री के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । यह एक मसाला चक्की, ऊतक चक्की, या homogenizer के रूप में एक उचित पीसने तंत्र, का उपयोग करने के लिए आवश्यक है, और एक प्रकार का पौधा पीसने के बाद शेष किसी भी बड़े कणों के बिना एक ठीक पाउडर बन जाता है कि ध्यान रखना ।

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Disclosures

लेखकों की घोषणा करने के लिए कुछ नहीं है.

Acknowledgments

इस पांडुलिपि वालेस अकादमिक संपादन द्वारा संपादित किया गया था ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
ethanol Sigma-Aldrich E7023
Whatman no. 4 filter paper Sigma-Aldrich WHA1004125
methanol Sigma-Aldrich 34860
reverse phase RP-18 column Phenomenex Inc. 00G-0234-E0
Staphylococcus aureus ATCC BCRC 10780
Escherichia coli ATCC BCRC 10675
tryptic soy broth Sigma-Aldrich 22092
nutrient broth Sigma-Aldrich 70122
dimethyl sulfoxide Sigma-Aldrich D2650
spice grinder Waring WSG60K
microplate Reader Molecular Devices EMAX PLUS
HPLC system Agilent 1200 Series
vacuum evaporation BÜCHI Rotavapor R-215

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References

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