गैर शराबी स्टीटोहेपेटाइटिस (नैश) संकल्प का आकलन करने के लिए चूहों में एक जीवित जिगर बायोप्सी प्रक्रिया का समावेश

Medicine
 

Summary

नैदानिक सेटिंग्स में, एक जिगर बायोप्सी गैर शराबी स्टीटोहेपेटाइटिस के चरणों का आकलन करने के लिए प्रयोग किया जाता है (steatohepatitis, सूजन, hepatocyte गुब्बारों, और फाइब्रोसिस). यहां, हम चूहों में एक जीवित जिगर बायोप्सी वर्णन जो ऊतकीय विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है एक नैदानिक परीक्षणों के साथ और अधिक संरेखित तरीके से चिकित्सीय एजेंटों के आकलन को सक्षम करने के लिए ।

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Oldham, S., Rivera, C., Boland, M. L., Trevaskis, J. L. Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis (NASH) Resolution. J. Vis. Exp. (146), e59130, doi:10.3791/59130 (2019).

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Abstract

नैदानिक परीक्षण गैर के उपचार के लिए चिकित्सा का आकलन-शराबी स्टीटोहेपेटाइटिस (नैश) एक आधार रेखा और अध्ययन के अंत जिगर बायोप्सी, और रोग अंतिमबिंदु में सुधार का आकलन शामिल, अक्सर प्रत्येक उपचार हाथ के एक प्रतिशत के रूप में परिलक्षित है कि सुधार, बिगड़ गया या अपरिवर्तित रहा । पारंपरिक पूर्व नैदानिक कृंतक अध्ययन के लिए ख्यात नैश उपचार अक्सर जिगर की बीमारी के स्तर को जानने के नहीं द्वारा सीमित कर रहे है/चिकित्सकीय हस्तक्षेप के शुरू में मौजूद नैश, बजाय आसानी से मापने योग्य अंतिमबिंदु पर उपचार समूहों randomizing के रूप में शरीर का वजन, चयापचय की स्थिति या इसी तरह । यहां, हम एक आहार में एक जिगर बायोप्सी तकनीक का वर्णन नैश माउस मॉडल, आधारभूत जिगर की बीमारी के आकलन के लिए आदेश में चूहों कि फाइब्रोसिस प्रदर्शन नहीं है और समान रूप से उपचार समूहों के बीच समान फाइब्रोसिस के साथ जानवरों को वितरित करने के लिए बाहर करने के लिए । इन स्तरों तो वीवो औषधीय प्रभाव में की एक सच्ची समझ के लिए टर्मिनल, बाद के हस्तक्षेप के स्तर की तुलना में किया जा सकता है और इस तरह और अधिक सही नैदानिक परीक्षण डिजाइन रणनीतियों को प्रतिबिंबित । माउस को ठीक से ऊपर और बाँझ शर्तों का उपयोग कर सर्जरी के लिए तैयार है । एक छोटा सा चीरा पेट के ऊपरी हिस्से में किया जाता है और जिगर के बाईं पार्श्व पालि उजागर होता है । जिगर की एक कील शल्य चिकित्सा से हटा दिया है, और एक समान-अवशोषण जिलेटिन का टुकड़ा आकार अपनी जगह में डाल दिया है किसी भी रक्तस्राव को रोकने के लिए । माउस शल्य चिकित्सा से सिलाई है और बंद नत्थी और 1 दिन के भीतर सामांय करने के लिए वापस ठीक हो जाएगा । पूरी प्रक्रिया 5-10 मिनट प्रति माउस लेता है । यहां हम पूर्व अध्ययन बायोप्सी लाभ द्वारा इस प्रक्रिया की उपयोगिता उदाहरण के लिए ग्लूकागन के प्रभाव का आकलन पेप्टाइड की तरह-1 (जीएलपी-1) चूहों में नैश अंतिमबिंदु पर रिसेप्टर एगोनिस्ट liraglutide ।

Introduction

गैर शराबी स्टीटोहेपेटाइटिस (नैश) एक प्रगतिशील जिगर की बीमारी है, और nonalcoholic फैटी लीवर रोग (NAFLD), कि तेजी से मोटापे और टाइप 2 मधुमेह के साथ अपने सहयोग के कारण प्रचलित होता जा रहा है की एक अधिक गंभीर रूप है । वहां NAFLD के लिए कोई अनुमोदित उपचार/नैश, या बायोमार्कर को मंजूरी दी आसानी से रोग प्रगति का आकलन कर रहे हैं । नैश सूजन का आकलन करके histologically का निदान है, अतिरिक्त यकृत लिपिड (steatosis), हेपेटोसाइट गुब्बारों, और फाइब्रोसिस1,2,3,4। नैदानिक परीक्षणों में, इन अंतिमबिंदु एक जिगर नमूना बायोप्सी के माध्यम से एकत्र में अध्ययन करने से पहले मूल्यांकन कर रहे हैं, और एक निश्चित उपचार अवधि के बाद एक दूसरे जिगर बायोप्सी से. इस प्रकार, परीक्षण एजेंट की प्रभावशीलता पहले से पहचान के साथ विषयों में जिगर विकृति में परिवर्तन के माध्यम से मूल्यांकन किया जाता है/quantified (यानी, बायोप्सी-सिद्ध) नैश कि उपचार समूहों के लिए यादृच्छिक कर रहे हैं. ये एक ही ऊतकीय अंतिमबिंदु अक्सर पूर्व नैदानिक अध्ययन में संभावित नैश चिकित्सा विज्ञान का आकलन करने वाले रोडेंट मॉडल में उपयोग किया जाता है, लेकिन केवल euthanized चूहों से टर्मिनल के ऊतकों में और इस तरह आधार रेखा पर प्रभावकारिता की डिग्री की एक समझ के बिना और एक अक्षमता उपचार समूहों के बीच बेसलाइन रोग स्थिति में अंतर के लिए नियंत्रित करने के लिए ।

हालांकि nafld के साथ वयस्कों के 25% ऊंचा सीरम aminotransferase के स्तर के आधार पर नैश है माना जाता है, वहां कोई वैकल्पिक निश्चित तरीके है ऊतकीय सबूत4से अंय नैश की पुष्टि कर रहे हैं । इस तरह के रेडियोलॉजिकल तरीकों (अल्ट्रासाउंड, गणना टोमोग्राफी, और चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग) के रूप में नॉनइनवेसिव विधियों, यकृत steatosis का पता लगाने के लिए विकसित किया गया है, लेकिन उन तरीकों नैश निदान या फाइब्रोसिस की अवस्था का निर्धारण नहीं कर सकते । क्षणिक elastography जिगर कठोरता को मापने के लिए एक आशाजनक गैर इनवेसिव साधन प्रदान करता है । यह फिब्रोसिस चरणों फर्क में सटीक होना दिखाया गया है । हालांकि, सटीकता उच्च शरीर द्रव्यमान सूचकांक (बीएमआई) और वसा ऊतक के साथ कम हो जाती है । 5 यह समस्या का कारण है नाश के अधिकांश रोगियों मोटापे से ग्रस्त जा रहा है । इन दृष्टिकोणों की नैदानिक प्रासंगिकता के अलावा, इन पद्धतियों में से किसी को भी पूर्व नैदानिक अध्ययनों में उपयोग नहीं किया जाता है ।

इस पर काबू पाने के लिए, डॉ जोनाथन रोथ के अनुसंधान समूह amylin नैश (amln)6नैश,7,8के माउस मॉडल में एक जिगर बायोप्सी प्रक्रिया को लागू करने के लिए पहले थे । वे नैश रोग और चयापचय रोग के साथ संबंध की डिग्री के साथ बायोप्सी की भविष्यसूचक वैधता का वर्णन किया । यहां हम विस्तार से वर्णन NASH के AMLN मॉडल में जिगर बायोप्सी प्रक्रिया और एक चिकित्सीय सेटिंग में इसकी उपयोगिता, विशेष रूप से liraglutide की प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए ।

Protocol

सभी vivo प्रयोगों में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) MedImmune, LLC की नीतियों के अनुसार और देखभाल और प्रयोगशाला जानवरों, 8 वीं संस्करण (२०११) के उपयोग के लिए गाइड के साथ समझौते में आयोजित किया गया । पुरुष C57BL6J चूहों उच्च वसा, उच्च fructose, उच्च कोलेस्ट्रॉल AMLN आहार पर रखा गया था । जिगर बायोप्सी आहार पर 26 सप्ताह के बाद प्रदर्शन किया गया, 3 सप्ताह पहले औषधीय हस्तक्षेप की शुरुआत करने के लिए.

1. प्राप्त करें और शल्य सामग्री तैयार

  1. आटोक्लेव उपकरण (छोटे से कहा-टिप कैंची, कुंद टिप forceps, कपास swabs, धुंध चौकों, 7 मिमी स्टेपल्स/
  2. प्राप्त, पेट की दीवार बंद करने के लिए बाँझ सीवन (एक पीसी के साथ 5-0 लेपित अवशोषक सीवन-1 सुई उपयुक्त है), अवशोषक जिलेटिन संपीड़ित स्पंज (hemostatic प्रयोजनों के लिए इस्तेमाल किया जा करने के लिए), बाँझ पर्दे और दस्ताने, आयोडीन आधारित सफ़ाई और ७०% इथेनॉल swabs/ , buprenorphine (0.05-0.1 मिलीग्राम/किलो की खुराक प्रति माउस, कम से कम 3 खुराकों) और सर्जिकल आंख मरहम/
  3. आइसोफ्लूराणे के साथ भरकर संवेदनाहरण के लिए वाष्पकर्ता तैयार करें ।
  4. जानवरों के बीच त्वरित साधन नसबंदी के लिए, एक मनका स्टरलाइजर चालू करें ।
  5. एक वार्मिंग सतह या हीटिंग पैड पर बारी, पशु वसूली के लिए इस्तेमाल किया जा करने के लिए ।
  6. डॉन उपयुक्त व्यक्तिगत सुरक्षात्मक उपकरण (PPE) (यानी, मुखौटा, गाउन, बाल बोनट, दस्ताने) ।

2. प्री-सर्जिकल तैयारी

  1. 2-3% isoflurane प्रभाव के प्रवाह के साथ प्रेरण चैंबर में माउस प्लेस ।
  2. पैर की अंगुली की प्रतिक्रिया की कमी तक माउस का निरीक्षण-चुटकी संवेदनाहरण की गहराई की पुष्टि उचित है.
  3. संवेदनाहरण से जुड़े कॉर्निया के सूखापन को रोकने के लिए एक आँख मरहम का प्रयोग करें ।
  4. उपचर्म (0.05-0.1 मिलीग्राम/किग्रा) buprenorphine प्रशासन ।
  5. शल्य चिकित्सा साइट असिरूप प्रक्रिया के तुरंत पुच्छ दाढ़ी, पशु कतरनी का उपयोग कर ।
  6. शल्य साइट शेविंग के बाद एक गर्म सतह (३७ डिग्री सेल्सियस) के लिए माउस ले जाएं । ऐसे में माउस को इस तरह रखें कि पृष्ठीय सतह नीचे की तरफ हो, और पेट सामने आ जाए । 2-3% की एक प्रवाह दर पर isoflurane की डिलीवरी की सुविधा के लिए anस्थेसिया नाक शंकु में माउस की नाक डालें ।
  7. Betadine और ७०% इथेनॉल (3 बार) के swabs बारी के साथ सर्जिकल साइट साफ ।
  8. खुला और बाँझ शल्य चिकित्सा उपकरणों की स्थापना की ।
  9. दस्ताने निकालें और बाँझ सर्जिकल दस्ताने के साथ बदलें ।

3. सर्जिकल प्रक्रिया

  1. एक अनुदैर्ध्य चीरा कैंची (1-2 सेमी) के साथ, तुरंत असिरूप प्रक्रिया के पुच्छ और माउस की बाईं ओर थोड़ा, पेट की त्वचा में ।
  2. कुंद चमड़ी और कैंची का उपयोग कर पेट की दीवार से दूर त्वचा काटना ।
  3. पेट की दीवार का पर्दाफाश और जिगर के नीचे कल्पना ।
  4. एक बाँझ स्केलपेल ब्लेड का उपयोग कर एक चीरा (1-2 सेमी) पेट की दीवार में जिगर के बाईं पार्श्व पालि (LLL) कल्पना करने के लिए ।
    नोट: अध्ययन के दौरान सुसंगत होना । ब्याज की अंय आम lobes सही है-औसत दर्जे का पालि (आरएमएल) और बाएं औसत दर्जे का पालि (प्यार मेरे जीवन) ।
  5. चीरा के माध्यम से बाईं पार्श्व पालि Externalize ।
  6. विकल्प 1: हल्के से पेट की मालिश अंगूठे और तर्जनी के साथ LLL के एक हिस्से को बेनकाब करने के लिए उंगली ।
  7. विकल्प 2: LLL के नीचे एक बाँझ कपास झाड़ू जगह धीरे से एक हिस्से को उजागर करने के लिए बाहर खींचने के लिए ।
  8. एक बाँझ खारा-LLL नीचे धुंध का टुकड़ा जगह पर झूठ करने के लिए जिगर के लिए एक बाँझ और हाइड्रेटेड सतह की अनुमति देने के लिए ।
  9. बाँझ कैंची के साथ दो कटौती करके LLL से जिगर के एक कील के आकार का टुकड़ा काटें ।
    नोट: जिगर की अनुमानित आकार हटाया जा रहा है 30-50 मिलीग्राम (चूहों में जिगर का < 5%).
  10. जिगर की कील टुकड़ा करने के लिए आकार में इसी तरह के जिलेटिन स्पंज का एक टुकड़ा काटें । संदंश का उपयोग कर जिगर के कट भाग में स्पंज डालें ।
  11. संदंश के साथ जगह में स्पंज पकड़ो और जिगर के साथ संपर्क बनाए रखने जब तक यह जिगर की सतह का पालन करता है और रक्तता हासिल की है ।
  12. उपयुक्त ट्यूब में जिगर बायोप्सी टुकड़ा प्लेस (यानी जमे हुए, फिक्टिव, आदि) ।
  13. धीरे जिगर वापस उदर गुहा में जगह, स्पंज परेशान नहीं करने के लिए ध्यान में रखते हुए.
  14. 5-0 लेपित अवशोषक सीवन शुरू करने और एक पूर्ण वर्ग गांठ के साथ समाप्त होने के साथ पेट की दीवार सीवन ।
  15. 7 मिमी घाव क्लिप (या स्टेपल) के साथ त्वचा को बंद करें ।
  16. घाव क्लिप का निरीक्षण करने के लिए सुनिश्चित करें कि चीरा के एक पूर्ण बंद है ।
  17. नाक शंकु से माउस को निकालें और एक गर्म सतह पर एक साफ पिंजरे में जगह है ।
  18. 10-20 एस के लिए चूहों के बीच में मनका स्टरलाइजर में जगह उपकरणों सुनिश्चित करें कि सभी कार्बनिक सामग्री को कांच मनका स्टरलाइजर में रखने से पहले खारा का उपयोग कर उपकरणों से हटा दिया जाना चाहिए ।

4. पोस्ट ऑपरेटिव केयर

  1. माउस की निगरानी जब तक यह चेतना आएगा और सही ही कर सकते हैं ।
  2. पोस्ट-ऑपरेटिव टिप्पणियों को रिकॉर्ड करें और डेसिसेंस के लिए प्रतिदिन चूहों को जांचें ।
  3. Buprenorphine की एक दूसरी और तीसरी खुराक (0.05-0.1 मिलीग्राम/किग्रा) उपचर्म 6-8 एच के बाद सर्जरी और फिर से 24 एच सर्जरी के बाद ।
  4. 7-10 दिन सर्जरी के बाद घाव क्लिप निकालें ।

Representative Results

इस अध्ययन के लिए, चूहों उपचार समूहों (एन = 12/समूह) पूर्व अध्ययन बायोप्सी फाइब्रोसिस ग्रेड और शरीर के वजन के आधार पर यादृच्छिक थे । चूहों प्रशासित वाहन (पीबीएस) या ४२ दिन (वाहन या यौगिक प्रशासित 10 मिलीलीटर/किलो खुराक मात्रा के लिए 5 nmol/kg) के लिए किया गया था, subcutaneously, एक बार दैनिक). दिन ४२ पर, चूहों गैर fasted राज्य में (सह2 साँस लेना) के माध्यम से euthanized थे, और जिगर excised और ऊतक विज्ञान के लिए संसाधित.

बायोप्सी और टर्मिनल जिगर टुकड़े 10% formalin में रातोंरात तय किया गया, तो पैराफिन एंबेडेड और hematoxylin और eosin के लिए संसाधित है, और Sirius लाल, मानक प्रोटोकॉल9के माध्यम धुंधला । ऊतक वर्गों नैश गतिविधि स्कोरिंग (NAS) प्रणाली1,2के अनुसार एक रोगविज्ञानी द्वारा एक अंधा फैशन में मूल्यांकन किया गया । एनएएस steatosis के लिए रोग की डिग्री, लोबुलर सूजन और हीपैटोसाइट गुब्बारों को दर्शाता है (प्रत्येक पैरामीटर 0-3 का एक स्कोर दिया) के रूप में पहले से वर्णित9

इस अध्ययन के डिजाइन में एक जिगर बायोप्सी शामिल एक आधार रेखा (पूर्व बायोप्सी) फाइब्रोसिस स्कोर के लिए अनुमति दी । ११८ चूहों की कुल NASH आहार और जिगर फाइब्रोसिस और steatosis के 26 सप्ताह के बाद biopsied किया थे प्रत्येक बायोप्सी के लिए बनाए गए (चित्रा 1) । इन ११८ चूहों में से, ४९ चूहों कम फाइब्रोसिस (0 के स्कोर), उच्च फाइब्रोसिस (4 के स्कोर, जो असामान्य विकृति प्रदर्शित), और असामान्य वजन घटाने या घाव भरने के आधार पर बाहर रखा गया था । ये बहिष्करण ६९ चूहों के लिए अनुमति दी अध्ययन समूहों में आवंटित करने के लिए छोड़ दिया और उपचार के बाद नैश phenotype में सुधार के लिए देखो (चित्रा 1).

चूहों को 6 सप्ताह के लिए वाहन या जीएलपी-1R एगोनिस्ट लिरगलुटाइड (5 nmol/kg) के साथ इलाज किया गया । वाहन-इलाज समूह में, 1 माउस खराब फाइब्रोसिस का प्रदर्शन किया और 4 चूहों ने खराब NAS स्कोर (चित्रा 2A-B) दिखाया । लिरगलुटाइड उपचार फाइब्रोसिस (चित्र 2c) के एक समग्र सुधार के साथ जुड़ा हुआ था, उपचार समूह में सुधार के 17% और ८३% अपरिवर्तित शेष के साथ । इसी प्रकार, लिम्लुटाइड उपचार समग्र NAS स्कोर (आंकड़ा 2d) में सुधार हुआ, जिसमें बेहतर nas स्कोर और ३३% समूह के ६६% के साथ अपरिवर्तित रहा ।

इसके अतिरिक्त, लिरगल्यूटाइड उपचार में सुधार सूजन, समूह के ७५% के साथ एक कम सूजन स्कोर और 25% अपरिवर्तित रहे (चित्रा 3B) । वाहन उपचार बिगड़ा सूजन, एक उच्च सूजन स्कोर और ८३% होने समूह के 17% के साथ अपरिवर्तित बनी (चित्रा 3A) । Steatosis स्कोरिंग दोनों वाहन में अध्ययन के अंत करने के लिए आधार रेखा से अपरिवर्तित बने रहे और liraglutide-इलाज समूहों (चित्रा 3A, बी) । पूर्व बनाम पोस्ट-सूजन और गुब्बारों के मापदंडों पर व्यक्तिगत चूहों के लिए बायोप्सी तुलना भी दिखाई जाती है (चित्रा 3 सी-एफ) ।

Figure 1
चित्रा 1: पूर्व स्क्रीनिंग जिगर बायोप्सी फाइब्रोसिस और NAS स्कोर . () सभी ११८ चूहों कि फाइब्रोसिस के लिए जांच की गई, जिगर बायोप्सी के माध्यम से प्रतिनिधित्व । ( और ) पात्र चूहों के अध्ययन समूहों में छांटे जाने के बाद, क्रमशः बेसलाइन फाइब्रोसिस और एनएएस स्कोर को दर्शाइए । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: फाइब्रोसिस और NAS स्कोर, पूर्व बायोप्सी और बाद हस्तक्षेप । वाहन के लिए प्रतिशत उत्तरदाता विश्लेषण (ए, सी) या liraglutide इलाज (बी, डी) चूहों, के रूप में बेसलाइन जिगर बायोप्सी से मापा फाइब्रोसिस स्टेज के लिए अध्ययन जिगर नमूना के अंत (ए, बी) और एनएएस (सी, डी). प्रत्येक समूह के लिए, पूर्व अध्ययन से परिवर्तन के बाद अध्ययन बायोप्सी एक लाइन द्वारा संकेत दिया है । प्रत्येक स्कोरिंग कदम पर अंक थोड़ा जानवरों के दृश्य जुदाई की अनुमति के लिए स्थानांतरित कर दिया है, यह केवल दृश्य प्रयोजनों के लिए है और स्कोर में कोई अंतर को प्रतिबिंबित नहीं करता । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3: Steatosis, सूजन और गुब्बारों, पूर्व बायोप्सी और बाद हस्तक्षेप । वाहन के लिए प्रतिशत उत्तरदाता विश्लेषण (ए, सी, ई) या liraglutide इलाज (बी, डी, एफ) चूहों, के रूप में बेसलाइन जिगर बायोप्सी से मापा के लिए अध्ययन के अंत के लिए जिगर का नमूना Steatosis स्कोर (ए, बी), सूजन (सी, डी) और गुब्बारों (ई, एफ) । प्रत्येक समूह के लिए, पूर्व अध्ययन से परिवर्तन के बाद अध्ययन बायोप्सी एक लाइन द्वारा संकेत दिया है । प्रत्येक स्कोरिंग कदम पर अंक थोड़ा जानवरों के दृश्य जुदाई की अनुमति के लिए स्थानांतरित कर दिया है, यह केवल दृश्य प्रयोजनों के लिए है और स्कोर में कोई अंतर को प्रतिबिंबित नहीं करता । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Discussion

यहां हम विस्तार से माउस जिगर बायोप्सी प्रक्रिया पहले clapper एट अल.10द्वारा वर्णित वर्णन है, और नैश के एक माउस मॉडल में अपनी उपयोगिता उदाहरण के लिए, पिछले6रिपोर्टों के समान,9। जिगर बायोप्सी प्रक्रिया नैश phenotype पूर्व और बाद उपचार का आकलन करने के लिए एक मूल्यवान उपकरण है, एक तरह से नैदानिक चिकित्सीय परीक्षणों में प्रदर्शन के समान. बायोप्सी प्रत्येक विषय के लिए प्रत्यक्ष तुलना के लिए अनुमति देता है, यानी एक ही चूहों दोनों समय अंक के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. हम अपनी स्थानांतरीय क्षमता का भी प्रदर्शन करते हैं । बायोप्सी में एक नैदानिक परीक्षण में-सिद्ध नैश विषयों, liraglutide एक ३९% प्रतिक्रिया दर (सुधार के साथ रोगियों) NAS में हासिल, जबकि हमारे अध्ययन में हम सुधार nas के लिए एक ६६% उत्तरदाता दर मनाया । इसके अलावा, 26% रोगियों के साथ फाइब्रोसिस स्कोर में सुधार हुआ था 9% बिगड़ती, बनाम 14% और ३६% placebo बांह में, क्रमशः11। हमारे अध्ययन में, हम लिरगलुटाइड उपचार के साथ एक 17% सुधार दर मनाया । इन तुलना आधारभूत जिगर बायोप्सी की शक्ति पर प्रकाश डाला और संभावित शोधों समझ की पुष्टि, चिकित्सीय के इस वर्ग के लिए.

यह फसल के लिए महत्वपूर्ण है बायोप्सी प्रक्रिया के दौरान जिगर ऊतक का एक बड़ा टुकड़ा ठीक से ऊतकीय सुविधाओं का विश्लेषण करने के लिए, लेकिन यह भी जिगर के समारोह समझौता करने के लिए एक टुकड़ा के बहुत बड़े नहीं । हम इस सर्जरी के साथ एक शूंय मृत्यु दर मनाया, और पशुओं को पूरी तरह से सामांय खाने के व्यवहार की बहाली के साथ 1 दिन के भीतर बरामद दिखाई दिया । इस प्रकार, बायोप्सी और हस्तक्षेप अध्ययन की दीक्षा के बीच समय पशु वसूली द्वारा सीमित नहीं है, लेकिन नमूना प्रसंस्करण, विश्लेषण, और बाद randomization के लिए लिया समय से संभावना है ।

हस्तक्षेप से पहले फाइब्रोसिस की पुष्टि की एक विधि के रूप में जिगर बायोप्सी प्रक्रिया का उपयोग, हमारे अध्ययन में परिवर्तनशीलता को कम करने में मदद की, हमें चूहों कि पूरी तरह से अल्ली नैश का एक परिणाम के रूप में यकृत फाइब्रोसिस के कुछ डिग्री का विकास नहीं किया बाहर करने के लिए अनुमति-आहार inducing । इसके अलावा, यह हमारी क्षमता को बेहतर संभव नैश के प्रभाव को समझने के हस्तक्षेप में सुधार, के रूप में केवल एक टर्मिनल जिगर नमूना और नैश स्कोर होने का विरोध किया । जब तक नए गैर इनवेसिव तकनीकों और पता लगाया और व्यापक रूप से स्वीकार कर रहे हैं, जिगर बायोप्सी NASH निर्धारित करने के लिए ही सिद्ध तरीका है.

Disclosures

और सीआर वर्तमान कर्मचारियों और/या MedImmune/AstraZeneca के स्टॉकहोल्डरों हैं । जब ये प्रयोग किए गए थे, तब जेएलटी एक कर्मचारी था और यह MedImmune/AstraZeneca का अंशधारक था ।

Acknowledgments

लेखकों आभार ऊतक प्रसंस्करण और immunohistochemistry में विशेषज्ञता के लिए सैली ली और होली Koelkebeck की सहायता स्वीकार करते हैं । लेखकों को भी धंयवाद डोना Goldsteen और प्रयोगशाला पशु संसाधन स्टाफ (MedImmune, गैथर्सबर्ग, एमडी) तकनीकी प्रक्रियाओं और पशुपालन और देखभाल के साथ उनकी सहायता के लिए ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Isoflurane Henry Schein 29405
5-0 suture Ethicon J834G
7 mm Wound Clips Reflex 203-1000
Absorbable gelatin sponge (GelFoam) Pfizer 09-0353-01 Compressed, Any Size
Alcohol Prep Pad VWR 75856-902
Animal Clippers Oster 78005010002 Size 40 Blade
Artificial Tears Henry Schein 048272 Tube
Buprenorphine (Buprenex) Reckitt Benckiser  NDC 12496-0757-5
Iodine Prep Pads Nice Pak Products C12400
Sterile Drapes Stoelting 50981
Surgical Gloves Medline 54720

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References

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