הכליות Subcapsular ההשתלה של 2 '-Deoxyguanosine-התייחסו מורין מורנה בתימוס בעכברים ערומים

Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

אנו מספקים שיטה פשוטה ויעילה להשתלה 2 '-deoxyguanosine שטופלו E 29.7 בלוטת התימוס לתוך כמוסת הכליה של עכבר ערום. שיטה זו צריכה להיות מחקר של תפקוד שני תאים אפיתל הרתי והתבגרות תאים T.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Wang, J., Chen, G., Cui, Q., Song, E., Tao, W., Chen, W., Wang, C., Jia, S. Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice. J. Vis. Exp. (149), e59657, doi:10.3791/59657 (2019).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

התימוס הוא איבר החיסון המרכזי חשוב, אשר ממלא תפקיד חיוני בפיתוח והבידול של תאים T. השתלת התימוס היא שיטה חשובה לחקירת תפקוד התא האפיתל הרתי ו T התבגרות תאים ב vivo. כאן נתאר את השיטות הנסיוניות המשמשות בתוך המעבדה שלנו להשתלה 2 '-deoxyguanosine (כדי לרוקן לימפוציטים של התורם) שטופלו בתימוס מתחלקים לתוך קפסולת הכליה של עכבר עירום athymic. שיטה זו היא פשוטה ויעילה ואינה דורשת מיומנויות או מכשירים מיוחדים. התוצאות שהתקבלו באמצעות שיטה זו פשוטה הראה כי התימוס המושתלים יכול לתמוך ביעילות הייצור של תאי T של המטופל. בנוסף, מספר נקודות מפתח ביחס לפרוטוקול יהיה מובהר עוד יותר.

Introduction

התימוס הוא איבר החיסון המרכזי, בתוך thymocytes התימוס עוברים בחירה חיובית ושלילית, ולהיות תאים T בוגרים1,2. בחירה חיובית או שלילית לא תקין תוצאות כשל חיסוני או הפתווגיות אוטואימוניות בהתאמה3,4. לכן, השתלת איברים התימוס היא גישה חשובה ללמוד את התהליך של בחירת תאים T ב בלוטת התימוס של התורם. שיטה זו היא חיונית במיוחד כאשר ניתוח הרתי אפיתל בתיווך על ידי מוטציות גנים אשר לגרום פנוטיפים מעובריים קטלני כאשר מוטציה5.

כדי ללמוד את ההבשלה של תאים T של המטופל בתימוס המושתלים, דלדול לימפוציטים של התורם בתוך התימוס הוא הכרחי. למטרה זו, עובריים 14, 15 או 16 יום (E14, E15, E16) התימוס הוא בדרך כלל בחירה6,7. התימוס משלבים בוגרים יותר יכול להיות גם מרוקן בהצלחה של לימפוציטים של התורם על ידי טיפול עם 2 '-deoxyguanosine. עם זאת, פרוטוקול מפורט עבור לימפוציטים מכלה ושימוש של תרבות בלוטת התימוס הישנה לא תוארה קודם לכן8,9. בעוד פרוטוקולי ההשתלה הוכנסו על ידי מספר מחקרים10,11, שינוי נוסף ושיפור של פרוטוקולים אלה הוא הכרחי.

הפרוטוקול שלנו מופרד לשני חלקים: (i) המחסור של לימפוציטים T משלב התפתחותי מאוחר E 29.8 בלוטת התימוס על ידי תרבות ב 2 '-deoxyguanosine המכיל מדיה. (ii) השתלת התימוס התרבותי לתוך הנמענים. בהליך זה, פיתחנו דרך פשוטה לספק את הרקמה הגדולה (E 29.8 בלוטת התימוס) לתוך קפסולה כליות עם סיכוי מופחת של פציעה בכליות. בעוד ממוקד על בלוטת התימוס בשלב מאוחר יותר, הפרוטוקול שלנו יכול לשמש גם ישירות או עם שינויים עבור השתלת בלוטת התימוס בשלבים התפתחותיים שונים או רקמות בגודל דומה אחרים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

הפרוטוקול המוצג דבק בהנחיות של ועדת האתיקה של אוניברסיטת ג'ינאן לגבי טיפול בבעלי חיים.

הערה: החומרים הנמצאים בשימוש מפורטים ברשימת החומרים.

1. בידוד של התימוס העובריים

  1. לחיטוי כל כלי ניתוח לפני הניסוי, ולעקר את הספסל/המכסה עם 70% אתנול.
  2. באמצעות פחמן דו חמצני, מורדם והמתת חסד העכבר הנשי ההרה (18.5 ימים פוסט ההזדווגות מוצלחת). ואז לנגב את אזור הבטן עם 70% אתנול.
    הערה: כאן הזדווג Insm1+/lacz נקבות ו Insm1+/lacz זכרים. הזרקה תוך-לפנטוברביטל בוצעו לפני בידוד של עוברים מהרחם ועריפת ראש בוצעו עבור כל עובר.
  3. באמצעות מספריים, להפוך "V" בצורת לחתוך על הבטן החל שלפוחית השתן ופועל עד כל קרן של הרחם.
  4. באמצעות המספריים, לחתוך את meסומי trium ואת צוואר הרחם/הנרתיק, ולאסוף את הרחם. הניחו את הרחם בצלחת פטרי המכילה תמיסת מלח באגירה קרה (PBS) על הקרח. לאחר מכן, חשפו את העוברים שנמצאים בתוך האדם העוטף, על ידי חיתוך קיר הרחם הקדמי מקרן רחם אחת לשנייה. תוך שימוש בפינצטה משובחת, קלף לאחור את הרקמות העטופים וחתך את חבל הטבור כדי לשחרר את העוברים. הניחו את כל העוברים בצלחת פטרי חדשה על הקרח עד לבידוד התימוס.
  5. נגב עובר עם 70% אלכוהול ומניחים אותו בצלחת פטרי חדשה. משלב זה, ודא שנשמרים תנאים סטריליים.
  6. על ידי חיתוך קרוב הלסת התחתונה עם מספריים, להסיר את ראשו של העובר ולנקז את הדם עם מגבת נייר. הבא, לתקן את העובר על אותה צלחת פטרי במצב פרקדן.
    הערה: אנחנו חותכים פיסת זנב של כל עובר עבור Insm1 ו לקטהקלדה.
  7. באמצעות מספריים, חותכים את קיר החזה לרוחב אופקית לאורך החזית בדלת השחי, ולאחר מכן לחתוך את הסרעפת כדי לפתוח את החזה. התימוס צריך עכשיו להיות גלוי כמו שתי אונות לבנות הממוקם מול קנה הנשימה ובצמוד ללב.
  8. להניח מלקחיים מכופף עצה מאחורי התימוס ולאחר מכן למשוך את התימוס בעדינות. הקפידו לבדוק את שלמות התימוס כדי לאשר שהיא מכילה שתי אונות מתנוקת.
  9. לשטוף את התימוס עם 1x PBS ולקצץ את רקמות החיבור ואת כלי הדם תחת stereomicroscope.

2. תרבות של התימוס העובריים המבודדת

  1. הוסף 500 μL של התרבות בינונית (RPMI1640 + 15% סרום בפרה העובר (FBS) + 100 U/mL פניצילין ו 100 μg/mL סטרפטומיצין) לכל טוב של צלחת 24 הבאר. להעביר את הרתי נקי לתוך הבארות עם אחד בלוטת התימוס בכל. איור 1 מציג את התימוס המבודד במדיית התרבות.
  2. לכל בלוטת התימוס מכיל גם להוסיף 2 '-deoxygranosine לריכוז הסופי של 1.25 מ"מ.
  3. תרבות התימוס המבודד במשך שמונה ימים, מרעננת הן את מדיית התרבות והן את 2 '-deoxygranosine כל יומיים.

3. הקמת המרחב הsubcapsular בקפסולת הכליות

  1. כדי להכין את המחט ואת צינור האינפוזיה חתוכים (איור 2), לחתוך את המחט וריד הקרקפת על החלק הצינור בזווית 45 מעלות באמצעות מספריים.
  2. שוקלים את העכבר הערום ולאחר מכן מורדם אותו עם פנטוברביטל (1.5%) הזרקה (75 μg/g משקל הגוף).
  3. כאשר לא לצבוט רפלקס לאחר הבוהן הוא נצפתה, למקם את העכבר על שולחן ההפעלה במיקום לרוחב ימין.
  4. עם 0.5% povidone בספוגית יוד, לחטא את העור פעמיים באזור כירורגי מבפנים אל מחוץ לגוף.
  5. באמצעות מספריים, לעשות חיתוך עור של 5 – 9 מ"מ במקביל לעמוד השדרה באזור הכליה השמאלי (בין הצלע האחרונה ואת הציצה כסל). הבא, לפתוח את חלל הבטן על ידי חיתוך דרך הרקמה התת עורית ואת השריר לחשוף את הכליה.
  6. עם חשיפת הכליה, השתמשו בזוג מלקחיים ביד אחת כדי להרים את השריר ואת רקמת השומן מקצה החתך בצד השדרה. עם זאת, לסחוט בעדינות את הכליה החוצה (לחילופין, את הכליה ניתן לסחוט החוצה באמצעות אצבעות של שתי ידיים).
  7. כדי להבטיח כי קפסולה כליות לח במהלך הניתוח, להרטיב את פני השטח של הכליה עם תמיסת מלח (0.9% הנאל).
  8. ליצור ניק בקפסולה כליה, ובעדינות לשרוט את קפסולת הכליה בצד ימין התחתון באמצעות קצה מחט הכין בשלב 3.1. הגודל של הניק צריך להיות 1/2 – 2/3 רוחב של הכליה; . אל תשרוט את הכליה
  9. החלק את צינור האינפוזיה שהוכן בשלב 3.1 לתוך הניק על כמוסת הכליה. בעדינות הנתק את קפסולת הכליה עם הכליה לאורך הצד הארוך של הכליה עד שהגיע 3 – 4 מ"מ בתוך קפסולת הכליה. משוך לאחור את צינור העירוי; שטח subcapsular הכליה נוצר.

4. להשתלות התימוס מורטין העובריים

  1. לשטוף את התימוס תרבותי בשלב 2.3 פעמיים בתמיסת מלח כדי לרוקן את התקשורת התרבותית.
  2. חבר את צינור העירוי החתוך שהוכן בשלב 3.1 למזרק בממשק המחבר המזרק שלו. מעלים את התימוס המוכן. לתוך צינור האינפוזיה לאט
  3. הכנס בעדינות את צינור העירוי החתוך לתוך כמוסת הכליות והגיע לעמוד העליון. להעביר את התימוס לתוך קפסולת הכליה; למשוך את הצינור לאט ובמקביל דוחף את הבוכנה של המזרק בעדינות.
  4. באמצעות מנורת אלכוהול, מעט חום המחט הכין בשלב 3.1. לאחר להבטיח כי התימוס כולו נמצא בתוך החלל הsubcapsular, להשתמש במחט מחוממת לצרוב את הניק.
  5. לאחר הצרוב, לשחזר את הכליה בחלל הבטן. . תפר את הצפק והשריר
  6. שימוש שונה הופסק תפר אנכי המזרן, לסגור את חתך העור (לקשור לפחות שלושה קשרים ולחתוך כל חוט עודף).
  7. , בשימוש בספוגית יוד. חטא את החתך כדי להקל על הכאב, הזרקה תת עורית של flunixin (2 μg/g של משקל הגוף) בוצעה במהלך הניתוח ולאחר מכן עבור 3 ימים לאחר הניתוח.
  8. עד התאוששות מלאה מהרדמה, לשמור על העכבר חם תחת מנורת אינפרא אדום.
  9. לשמור על התימוס בקפסולה הכליה של המטופל במשך 8 שבועות לפני שהוא מבתר את התימוס המושתלים וביצוע ניתוח פנוטימית כמתואר בעבר5,8,9.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

כאן אנו מראים את מבודד E 29.8 בלוטת התימוס המכיל שתי אונות מלאה (איור 1). בנוסף, אנו מראים את המחט וריד הקרקפת כי היה מעוגל לטופס שיקוע על צינור אינפוזיה (איור 2). הבא, אנחנו גם מראים דמות ייצוגית של המיקום של התימוס כי היה מושתלים קפסולת הכליה (איור 3A) ואת התימוס לאחר 8 שבועות של צמיחה בתוך עכברי הנמען (איור 3a). כדי לקבוע אם התאים T יוצרו בעכברים עירום מושתלים עם בלוטת התימוס, הן בלוטת התימוס המושתלים ואת הדם ההיקפי, גילינו את אוכלוסיות התאים באמצעות CD4 ו CD8 נוגדן כתמים וזרימת cy try ניתוח. הדם ההיקפי נאסף מתוך סינוס מסלולית רטרו כפי שתוארה בעבר12. מצאנו את התאים T הופקו הן התימוס הושתל ואת הדם ההיקפי של עכברים ערומים מושתלים עם בלוטת התימוס. עם זאת, אין תאים T זוהו בדם היקפי של עכברים שאינם מושתלים העירום (איור 4). כדי לקבוע את המקור של תאי T, בדקנו Insm1 ו lacz גנים בתאי דם לבנים היקפיים באמצעות שיטות גנוהקלדה בשימוש שגרתי במעבדה שלנו תיאר בעבר13,14. מאז העובר התורם Insm1 הגן הוחלף על ידי הגן lacz באחד או שניהם alleles כאשר התאים T היו מושתלים עם בלוטת התימוס מן התורם, יכולנו לזהות את הגן lacz בגנום של תאי T שנאספו היקפי דם של המטופל, אשר מעיד על כך שהם הופקו על ידי התימוס התורם. בנוסף, כמו גן lacz לא היה נוכח, lacz לא יזוהו כאשר התאים T נוצרו מתאי המטפאות של הנמען. לא הצלחנו לזהות את הגנים של Lacz בתאי t היקפיים המציינים כי תאי t נוצרו מהנמען (איור 5).

Figure 1
איור 1: התימוס מבודד מ-e 29.8 עוברים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 2
איור 2: התימוס אספקת כלים עשוי המחט וריד הקרקפת. המחט וריד הקרקפת נחתך בחלק צינור העירוי קרוב המחט בזווית של 45 ° כדי ליצור מסגרת משופעת. הן המחט והן צינור העירוי שימשו בתהליך. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 3
איור 3: התימוס מושתלים לתוך קפסולת הכליה. (A) מושתלים טרי 29.8 בלוטת התימוס בקפסולה כליות. (ב) בלוטת התימוס בקפסולת הכליות לאחר צמיחה של 8 שבועות בנמען. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 4
איור 4: הזרימה cy, הניתוח של התאים T מבודדים התימוס המושתלים, דם של בלוטת התימוס מושתלים ועכברים עירום שאינם מושתלים. CD4 ו CD8α נוגדנים שימשו לצביעת תאים T. CD4+CD8+ תאים חיוביים כפולים, CD4+ חיובי יחיד, CD8 + חיובי יחיד וCD4-CD8-תאים שליליים כפולים מוצגים בכל אחד מהרביעים כפי שמצוין. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 5
איור 5: זיהוי מקור התאים ההיקפיים דם T ב בלוטת התימוס עכברים ערומים. הקלדה של גן Lacz ו- Insm1 gene בתאים לבנים דם היקפי מוצג. סולם: סמן ה-DNA, +: DNA בקרת חיובי,-: DNA שליטה שלילית, Anim1: DNA מן היקפי כדוריות הדם הלבנות של עכבר עירום מושתלים עם Insm1lacz/lacz התימוס, Anim2: DNA מן היקפי כדוריות הדם הלבנות של עכבר בעירום מושתלים עם בלוטת התימוס Insm1+/lacz . אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Subcapsular הכליות השתלת בלוטת התימוס העוברית היא שיטה חשובה ללמוד את התאים אפיתל הרתי בתפקוד ואת תהליך ההבשלה של תאים T ב vivo. למרות שיש מחקרים ניסיוניים מספר על תרבות הגוף מעובריים התימוס השתלת6,7, הפרוטוקול שלנו מספק הליך חלופי פשוט על תרבות התימוס מורנין עובריים subcapsular השתלת רקמת בלוטת התימוס הישנה.

הפרוטוקול שלנו משתפר בפרוטוקולים הקודמים על ידי שילוב מספר שינויים שונים 6,7,10,11. ראשון, במקום E14-E16 בלוטת התימוס, אנו מנוצל בלוטת התימוס מבודד E 29.8 להשתלה. היתרון הוא כי התימוס בשלב זה התפתחותי מאוחר יותר מכיל מבנים הרתי בוגרים יחסית ואוכלוסיות תאים אפיתל. למרות העכברים היילוד או מבוגרים הם מקור חלופי של בלוטת התימוס בוגרת, אם perinאטאל הקוד הקטלני מתרחשת כתוצאה של מניפולציה גנים, כגון מוטציות ב Jmjd6 או Insm1 גנים5,13, שיטה זו מספק חלופה קיימא למחקר של בלוטת התימוס בוגרת. השינוי השני הוא החיזיון של שיטת התרבות של בלוטת התימוס E18 לפני ההשתלה. בנוסף, שינוי שלישי מתרחשת בהליך השתלת, שבו השתמשנו בעצת המחט כדי ליצור ניק על קפסולת הכליה במקום לקטוף ולחתוך את קפסולת הכליה עם מספריים ומספרים. שינוי זה הפחית גם כמוסת כליות נזק ופציעה של הכליה. שינוי סופי אחד. נמצא בשלב התפר תפר שונה קטוע מזרן מבטלת את קו תפר מחוץ על העור ולכן מונע את הפתיחה של החתך עקב נשיכות.

בעוד פרוטוקול זה משמש עבור השתלת E 29.7 התימוס לתוך קפסולת הכליה, זה יכול להיות שונה עבור השתלת התימוס בשלבים התפתחותיים אחרים או עבור רקמות אחרות עם גדלים דומים. בנוסף, החומרים המשמשים ניתן לשנות בהתאם על ידי משתמשים שונים מאזורים שונים, במיוחד ביחס ריאגנטים הרדמה אשר עשויים להיות מוגבלים על ידי חוקים מקומיים. המינון של פנטוברביטל בשימוש בפרוטוקול שלנו הוא 75 μg/g משקל הגוף. עם זאת, המינון המקסימלי צריך להיות לא יותר מ 100 μg/g משקל גוף כדי למנוע מוות של בעלי חיים מורדם. למרות השתלת התימוס לתוך קפסולה כליות היא שיטה יעילה למחקר פונקציונלי של התימוס ב vivo, כמה מגבלות קיימות בשיטה המוצגת לעיל. מגבלות אלה כוללות את הסיכון של התימוס נשירה מתוך קפסולת הכליה במהלך 8 שבועות בתקופת הצמיחה vivo (1 ב 12). שנית מגבלה נוספת היא מותו של עכברים לאחר הניתוח (6 ב 30). עם זאת, מוות זה נגרם בעיקר על ידי מנת יתר של פנטוברביטל. ככאלה, ניתן להעסיק שיטות מורשות אחרות של הרדמה.

לסיכום, אנו מספקים פרוטוקול פשוט ויעיל כדי לבודד את התרבות E 29.8 בלוטת התימוס ולאחר מכן לאחר מכן להשתיל את התימוס לתוך קפסולת הכליה. זה מאפשר ניתוח של תאים אפיתל הרתי ואת תהליך ההבשלה של תאים T.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

אין קונפליקטים של עניין מוצהר.

Acknowledgments

עבודה זו הייתה נתמכת על ידי חבילת ההתחלה של אוניברסיטת ג'ינאן כדי S.J. ועל ידי המדע והטכנולוגיה תוכנית של סין גואנגג'ואו (גרנט No. 201704020209 כדי S.J.). אנו מודים לאמי בוטה (מחלקת הביולוגיה, אוניברסיטת יורק, טורונטו, על M3J 1P3, קנדה) להגהה ועריכה של כתב היד.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
0.5% Povidone iodine Shanghai Likang Distinfectant Hi-Tech Co.Ltd 20171113
0.9% Sodium Chloride Injection Shandong Qilu Pharmaceuyical Co.Ltd 2C17112101
1 mL Sterile syringe Solarbio YA1090
2’-Deoxyguanosine MEC HY-17563 1M in DMSO, 1:800 using (final 1.25mM)
24 Well Plate Corning Incorporated Costar 3524
4-0 Surgical suture needles with thread NingBo Cheng-He Microsurgical Instruments Factory China YY0166-2002
60mm Cell Culture Dish Corning Incorporated 430166
70% ETOH LIRCON 20181221
APC anti-mouse CD8a antibodies Biolegend 100711 1:100
Bent-tip fine forceps, JZ 10 cm Shanghai Medical Devices Group Co.,Ltd. JD1060 To sterilize before use
Cefmetazole Sodium for Injection Sichuan Hexin Pharmaceutical co,Ltd 17062111 079 6mg in 0.5ml 0.9% NaCl solution, 7.5ul/g body weight
Dissecting scissors, JZ 10 cm Shanghai Medical Devices Group Co.,Ltd. JC2303 To sterilize before use
Fetal bovine serum (FBS? GIBCO 10270-106
Fine forceps, JZ 10 cm Shanghai Medical Devices Group Co.,Ltd. JD1050 To sterilize before use
Flow cytometry BD FACSCanto II
Flunixin meglumine MACLIN F810147 1mg in 1ml 0.9% NaCl solution,2ul/g body weight
Forceps, Dumont#5 World Precision Instruments 14098 To sterilize before use
Infrared lamp OTLAN MT-810
Needle holder, JZ 14 cm Shanghai Medical Devices Group Co.,Ltd. J32010 To sterilize before use
PE anti-mouse CD4 Biolegend 100511 1:100
Penicillin-Streptomycin mixture GIBCO 15140122 1:100
Pentobarbital sodium salt Sigma P3761 1.5% solution in PBS, 75ug/g body weight
RPMI1640 Medium GIBCO C14-11875-093
Scalp vein needle Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd XC001
Spring scissors VANNAS S11014-12 To sterilize before use
stereomicroscope OLYMPUS SZ61
Sterile 15cm cotton swab Guangzhou Haozheng 20150014
Sterile gauze 5 cm x 7 cm-8P Guangzhou Haozheng 20172640868
Sterile PBS (1x) GENOM GNM20012
Tissue forceps, JZ 12.5 cm Shanghai Medical Devices Group Co.,Ltd. J41010 To sterilize before use

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Klein, L., Kyewski, B., Allen, P. M., Hogquist, K. A. Positive and negative selection of the T cell repertoire: what thymocytes see (and don't see). Nature Reviews Immunology. 14, 377-391 (2014).
  2. Hogquist, K. A., Baldwin, T. A., Jameson, S. C. Central tolerance: learning self-control in the thymus. Nature Reviews Immunology. 5, 772-782 (2005).
  3. Spits, H., Touraine, J. L., Yssel, H., de Vries, J. E., Roncarolo, M. G. Presence of host-reactive and MHC-restricted T cells in a transplanted severe combined immunodeficient (SCID) patient suggest positive selection and absence of clonal deletion. Immunological Reviews. 116, 101-116 (1990).
  4. Nagamine, K., et al. Positional cloning of the APECED gene. Nature Genetics. 17, 393-398 (1997).
  5. Yanagihara, T., et al. Intronic regulation of Aire expression by Jmjd6 for self-tolerance induction in the thymus. Nature Communications. 6, (8820), (2015).
  6. Jenkinson, W., Jenkinson, E., Anderson, G. Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. Journal of Visualized Experiments. (18), (2008).
  7. T-Cell Development: Methods and Protocols. Bosselut, R., Vacchio, M. S. Methods in Molecular Biology, vol. 1323 (2016).
  8. Anderson, M. S., et al. Projection of an immunological self shadow within the thymus by the aire protein. Science. 298, (5597), 1395-1401 (2002).
  9. Takaba, H., et al. Fezf2 Orchestrates a Thymic Program of Self-Antigen Expression for Immune Tolerance. Cell. 163, (4), 975-987 (2015).
  10. Morillon, Y. M. 2nd, Manzoor, F., Wang, B., Tisch, R. Isolation and transplantation of different aged murine thymic grafts. Journal of Visualized Experiments. (99), e52709 (2015).
  11. Caetano, S. S., Teixeira, T., Tadokoro, C. E. Intravital imaging of the mouse thymus using 2-photon Microscopy. Journal of Visualized Experiments. (59), e3504 (2012).
  12. JoVE Science Education Database. Blood Withdrawal I. Lab Animal Research. JoVE. Cambridge, MA. (2019).
  13. Gierl, M. S., Karoulias, N., Wende, H., Strehle, M., Birchmeier, C. The zinc-finger factor Insm1 (IA-1) is essential for the development of pancreatic beta cells and intestinal endocrine cells. Genes & Development. 20, (17), 2465-2478 (2006).
  14. Tao, W., et al. Haploinsufficiency of Insm1 Impairs Postnatal Baseline β-Cell Mass. Diabetes. 67, (12), 2615-2625 (2018).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics