تصوير الأوعية الفلورية لتقييم تمدد الأوعية الدموية وطب الشرايين الأم في نماذج تمدد الأوعية الدموية الفئران والأرانب

Neuroscience

Your institution must subscribe to JoVE's Neuroscience section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

نقدم بروتوكولًا لتقييم تدفق تمدد الأوعية الدموية وتمدد الأوعية الدموية في الأوعية الدموية في الجرذان الجانبية في الفئران والأرانب بكفاءة، وذلك باستخدام تصوير الأوعية بالفيديو (FVA) القائم على الفلورسين. مع قيمة تنبؤية إيجابية من 92.6٪، بل هو طريقة بسيطة ولكنها فعالة جدا واقتصادية مع عدم وجود معدات خاصة المطلوبة.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Strange, F., Sivanrupan, S., Gruter, B. E., Rey, J., Taeschler, D., Fandino, J., Marbacher, S. Fluorescence Angiography for Evaluation of Aneurysm Perfusion and Parent Artery Patency in Rat and Rabbit Aneurysm Models. J. Vis. Exp. (149), e59782, doi:10.3791/59782 (2019).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

يركز علاج تمدد الأوعية الدموية في الدماغ على تحقيق انسداد كامل، فضلا عن الحفاظ على تدفق الدم في الشريان الأم. وتستخدم الفلورسين الصوديوم والأخضر indocyanine لتمكين مراقبة تدفق الدم وحالة التسريب السفينة، على التوالي. والهدف من هذه الدراسة هو تطبيق FVA للتحقق من تدفق الدم في الوقت الحقيقي، وحالة التسريب السفينة وانسداد تمدد الأوعية الدموية بعد تحريض تمدد الأوعية الدموية الجدار الجانبي في الأرانب والفئران، فضلا عن التحقق من صحة الإجراء في هذه الأنواع.

تم إنشاء عشرين تمدد الأوعية الدموية الجدار الجانبي في 10 الأرانب عن طريق خياطة كيس وعاء الشرياني منزوع الخلايا على الشريان السباتي لأرنب المانحة. وبالإضافة إلى ذلك، تم إنشاء 48 تمدد الأوعية الدموية الجدار الجانبي المجهري في 48 الفئران. خلال المتابعة في شهر واحد بعد الخلق، تم تشريح الشريان الأم / مجمع تمدد الأوعية الدموية وأجري FVA باستخدام الفلورسين الوريدي (10٪، 1 مل) حقن عن طريق قسطرة الوريد الأذن في الأرانب ووريد الفخذ في الفئران. ثم تم حصاد تمدد الأوعية الدموية، وتم تقييم البَرَسّة بشكل مُكُنْكِيّ.

بشكل عياني، أشار 14 من أصل 16 تمدد الأوعية الدموية في الأرانب إلى عدم وجود ضخ الشريان الأم المتبقية مع لومينا مُكَفَّف تماماً، ومع ذلك 11 (79٪) تم الكشف عنها من قبل FVA. واستُبعدت أربع تمددات للأوعية الدموية بسبب مشاكل تقنية. في الفئران، لوحظ التسريب المتبقي لتمدد الأوعية الدموية بشكل عياني في 25 حالة من أصل 48 حالة. من بين 23 دون أدلة العيان من التسريب، أكدت FVA حدوث 22 تمدد الأوعية الدموية (96٪). لم تكن هناك أحداث سلبية مرتبطة بـ FVA. الفلور هو قابل للتطبيق بسهولة وليس هناك حاجة إلى معدات خاصة. وهي طريقة آمنة وفعالة للغاية لتقييم سلامة الشريان الأم وتمدد الأوعية الدموية/ التسريب المتبقي في بيئة تجريبية مع الأرانب والجرذان. FVA باستخدام الفلورسين كعامل تباين يبدو أن تكون فعالة في السيطرة على patency من تمدد الأوعية الدموية والسفينة الكامنة، ويمكن حتى تكييفها لتجاوز الجراحة.

Introduction

دليل على تمدد الأوعية الدموية الكامل وسلامة الشريان الأم هو من الأهمية القصوى في جراحة تمدد الأوعية الدموية. هناك العديد من الخيارات لتأكيد الأوعية الشريانية الأم وانسداد تمدد الأوعية الدموية، مثل التصوير بالموجات فوق الصوتية دوبلر، تصوير الأوعية الدماغية التقليدية (DSA)، تصوير الأوعية المقطعية المحوسبة (CTA) أو تصوير الأوعية بالرنين المغناطيسي (MRA)1، 2. ومع ذلك، هذه هي أساليب مكلفة وتستغرق وقتا طويلا والتي غالبا ما تكون غير متوفرة في بيئة المختبر. وعلاوة على ذلك، قد تكون لها آثار جانبية ذات صلة مثل التعرض للإشعاع أو الحاجة إلى مزيد من التخدير للالحيوانات التجريبية لتجنب نقل القطع الأثرية.

مع ظهور عدد متزايد من الأجهزة الجديدة داخل الأوعية الدموية، هناك حاجة متتالية لاختبار ما قبل السريرية من هذه الأجهزة. ومع ذلك، غالباً ما تعتمد هذه الدراسات على تحليل ما بعد الوفاة (على سبيل المثال، علم الأمراض الكلية وعلم الأنسجة) وتفتقر إلى المعلومات عن التسريب الديناميكي. وعلاوة على ذلك، بالنسبة للباحث قد يكون من الضروري الحصول على معلومات فورية وموثوق بها خلال إجراء جراحي تجريبي. تصوير الأوعية الفلورية هو فعالة من حيثالتكلفة وسهلة لأداء تقنية التصور 1،4.

على هذا النحو، غالباً ما يستخدم التصوير بالأوعية بالفيديو الأخضر indocyanine (ICG) في العمليات الجراحية العصبية السريرية وقد تمت دراسته على نطاق واسع5،6. تصوير الأوعية بالفيديو الفلوري (FVA) هو تقنية بديلة، مع ميزة إضافية لخلق إشارة الفلورة التي تقع ضمن نطاق الطول الموجي للرؤية البشرية، وبالتالي يمكن رؤيتها بالعين المجردة دون كاميرا الأشعة تحت الحمراء الطيف الموسعة 7.الفلورسين تصوير الأوعية والفيديو هو أقل غالبا ما تستخدم في الجراحة الدماغية الوعائية السريرية والتقارير عن FVA في البيئات التجريبية نادرة1،4.

والهدف من هذا التقرير هو إظهار جدوى ونطاق تطبيقات FVA في البحوث الدماغية الأوعية الدموية الفئران والأرانب قبل السريرية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

ووُقِّمت القوارض في مرفق لرعاية الحيوانات، واستعرضت لجنة رعاية الحيوان في جامعة برن، سويسرا (BE65/16) التجارب ووافقت عليها. وتم الحفاظ على جميع الحيوانات على نظام غذائي مختبري قياسي مع إمكانية الحصول مجاناً على الغذاء والماء. وقد أجريت جميع التجارب الحيوانية في إطار دراسة متأنية للعمليات الثلاثة (الاستبدال والتخفيض والصقل). وشملت عشرة أرانب بيضاء نيوزيلندا و 48 الفئران ويستار الذكور. تم اتباع المبادئ التوجيهية وصول بدقة8.

ملاحظة: تم إنشاء عشرين تمدد الأوعية الدموية في 10 أرانب عن طريق خياطة كيس وعاء شرياني منزوع الخلايا على الشريان السباتي لأرنب متبرع. وبالإضافة إلى ذلك، تم إنشاء 48 تمدد الأوعية الدموية الجدار الجانبي المجهري في 48 الفئران كما هو موضح قبل4،9. تم إجراء إجراء التصوير والتحليل العياني بعد 4 أسابيع من إنشاء تمدد الأوعية الدموية.

1. إعداد المواد اللازمة لتصوير الأوعية بالفيديو الفلورية

  1. تعديل مصباح يدوي عن طريق تسجيل على مرشح النطاق الأزرق (انظر جدولالمواد)، والتي سوف تعمل كعامل تصفية الإثارة. يجب أن الشعلة ثم تنبعث منها فقط الضوء الأزرق. استخدام الشريط الأسود لتجنب أي تسرب من الضوء غير المصفاة.
  2. تجهيز الكاميرا (على سبيل المثال، تعلق على المجهر) مع مرشح النطاق الأخضر (انظر جدولالمواد)، والتي سوف تعمل كعامل تصفية ضوء الانبعاثات. فقط الضوء الأخضر يجب أن يكون الآن قادرا على المرور من خلال.

2- إعداد أماكن العمل والمواد

  1. تطهير مساحة العمل مع محلول مطهر.
  2. تغطية الجدول مع الستائر المعقمة لمنع التلوث.
  3. استخدام أدوات معقمة للجراحة.

3. إعداد الحيوانات للجراحة

  1. وزن الحيوانات.
  2. حث التخدير وضبط الجرعة وفقا للوزن.
    1. للأرانب، بدء التخدير المتوازن. حماية عيونهم بيد واحدة أثناء الحقن للحد من رد فعل الخوف. تغطية القفص مع ورقة للمساعدة في تخدير الحيوانات.
    2. التخدير الفئران في غرفة الغاز مع 4٪ isoflurane و 96٪ الأكسجين قبل الحقن.
  3. رصد عمق التخدير. قرصة بين أصابع أقدامهم للتأكد من الحيوانات نائما.
    1. إعادة وضع الأرانب على ظهورهم. لا ينبغي أن يكون رد فعل.
    2. للفئران، قرصة ذيولها وضمان عدم ملاحظة أي رد فعل.
  4. تطبيق مرهم على عيون القوارض لمنع الجفاف. سحب ألسنة الفئران لتجنب أي فرصة للابتلاع.
  5. ابدأ بالحفاظ على التخدير.
    1. للأرانب، القسطرة (22 G القسطرة الرابعة المحمية مع منفذ الحقن ، انظر جدول المواد) والوريد الأذن. الحفاظ على التخدير المتوازن. استخدام stopcock ثلاثية لتمكين حقن متعددة في وقت واحد.
    2. بالنسبة للفئران، حقن 50 ملغ / كغ هيدروكلوريد الكيتامين و 0.5 ملغ / كغ ميثيتوميدين هيدروكلوريد intraperitoneally. مراقبة التخدير مع قرصة اصبع القدم الضارة أثناء الجراحة. في حالة رد الفعل، وإدارة التخدير إضافية.
  6. قم بلصق الحيوانات على اللوحة في وضع السوبين وقمنا بتتبع موقع الشق عن كثب. تطهير المنطقة مع بيتاهاتمال.
    1. للأرانب، وتطهير الرقبة ، وخاصة حول العضلات القص.
    2. للفئران، تطهير المنطقة من المثانة إلى القولون المستعرض.
  7. إدارة الأكسجين من خلال قناع طوال الجراحة والحفاظ على درجة حرارة الجسم مع وسادة التدفئة.

4. إعداد الشريان

  1. للحصول على أفضل النتائج، تشريح السفينةالمختارة بدقة من الأنسجة المحيطة 9،10.
    1. للفئران، وتحديد الوريد الذيل (أقل الغازية ، ويفضل أن تستخدم للالحيوانات الباقين على قيد الحياة) أو تشريح الوريد الفخذي لحقن الفلور4،11.
      ملاحظة: بالنسبة للأرانب، لا حاجة إلى مزيد من تشريح الأوعية لحقن الفلورسين حيث يتم بالفعل استخدام الوريد الأذن للتخدير.
  2. وضع وسادة بيضاء تحت وعاء المختار لزيادة التباين مع الأنسجة المحيطة بها.
  3. ركز الكاميرا المثبتة على المجهر على الشريان الممزق.

5. الفلورسين تصوير الأوعية بالفيديو

  1. تغطية حقنة 5 مل مليئة الصوديوم الفلوريسين (100 ملغ / مل، انظر جدولالمواد) مع رقائق الألومنيوم للحماية من التعرض للضوء. إيقاف الأضواء (قدر الإمكان) وحقن الفلورسين الصوديوم عن طريق الوريد. حقن تحت الظلام لمنع تبييض الصور.
    1. للأرانب،حقن 0.3 مل / كغ من الصوديوم الفلوريسين من خلال ثلاثة طريقة stopcock في الوريد الأذن القسطرة.
    2. للفئران، حقن 0.4 مل / كغ من الصوديوم الفلوريفي الوريد الفخذي عن طريق القسطرة أو إبرة 25 غرام.
  2. اغسل الإبرة أو القسطرة بمحلول ملحي بسعة 0.5 مل لضمان حقن جميع الصبغات.
  3. تضيء المجال الجراحي مع مصباح يدوي المعدلة.
  4. بدء التصوير باستخدام الكاميرا المعدلة. يجب أن يكون تدفق الدم مرئيًا بعد بضع ثوانٍ من الحقن (الشكل 1).
    ملاحظة: هنا، استخدمنا معدل الإطار = 50 إطار/ ث، البعد البؤري = 70 مم، وF3.4.

6. التحليل العياني

  1. استئصال تمدد الأوعية الدموية ومجمع الشريان الأم، وتقييم البطنة العيانية عن طريق فتح الشريان الأم بمقص صغير وتقييم تجويف الشريان الأم وفتحة الأنريسم (انظر الشكل2)9. قياس أحجام تمدد الأوعية الدموية. ويمكن بعد ذلك تخزين تمدد الأوعية الدموية- الأصل- الشريان-مركب لمزيد من التحليل (على سبيل المثال، علم الأنسجة).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

تم رصد معدل ضربات القلب وضغط الدم أثناء الجراحة. وكان متوسط معدل ضربات القلب 193/min في الأرانب و 196/min في الفئران. وتراوح وزن جسم الأرانب بين 3.05 و4.18 كجم، وتزن الفئران 335-690 غرام.

كنا قادرين على أداء FVA في ثمانية من أصل عشرة الأرانب (الشكل1). ولم تسجل أربعة فحوص لتمدد الأوعية الدموية في أرنبين مع الكاميرا بسبب صعوبات تقنية. ولم يبلغ عن أي صعوبات تقنية تتعلق بفوا في الجرذان. ومع ذلك، لا يمكن إجراء FVA في فأر واحد بسبب صعوبات ثقب الوريد الفخذي.

من بين 16 تمدد الأوعية الدموية في ثمانية أرانب، أظهرت اثنين من تمدد الأوعية الدموية التسريب المستمر للشريان الأم (مؤكد ة بعيانية) (انظر الجدول1) في حين حددت FVA خمس حالات مع التسريب المتبقي. 14 وأظهرت تمدد الأوعية الدموية الأرنب لا التسريب المتبقية العيانية، ولكن 11 (79٪) تم الكشف عنها في وقت لاحق باستخدام FVA. وقد لوحظ التسريب المتبقي بعيان في 25من 48 فأراً (الجدول 1)، ولم تظهر الفئران الـ 23 الأخرى أي علامات مجهرية على التسريب المتبقي (الشكل2). ثم تم تأكيد 22 من تلك التمدد اتّهاب ة ال23 باستخدام FVA (96%). وإجمالاً، يمكن تأكيد 25 حالة من أصل 27 حالة، مما أسفر عن قيمة تنبؤية إيجابية تبلغ 92.6 في المائة، ومعدل حساسية قدره 100 في المائة، وخصوصية قدرها 94.1 في المائة. (الجدول2).

وباختصار، أظهرت 25 تمدد الأوعية الدموية التسريب المتبقية، 53 الشرايين الأم كانت براءات الاختراع و 11 تم occluded كما أكد العيانية وعلى تصوير الأوعية الفيديو. لم تكن هناك سوى مضاعفات طفيفة مرتبطة FVA في الأرانب. مثل ثقب وين الأذن الهامشية أثناء القسطرة. ولم تشهد أي ة وقوع أي ة أخرى من الأحداث السلبية. ولم يبلغ عن أي وفيات أو أي ة اعتلال بسبب الإصابة بحالات الوفاة المبكرة.

Figure 1
الشكل 1 تصور اللياقة فيأرنب. (أ) التناط من الشريان الأم واضحة للعيان على صورة الفلورة (يتم رؤية الانبعاثات الخضراء من الفلورسين). (ب) هذا الشريان مغطى (صورة الفلورة). تم فحص كلا الشرايين بعيانية(C-D). لوحة(C) يظهر في الشريان من لوحة A; التجويف مفتوح . لوحة(D) يظهر الشريان من لوحة B حيث يمكن رؤية انسداد العيان. الخطوط المنقطة البرتقالية تميز حدود الشريان الأصلي. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 2
الشكل 2 تصور التسريب في الفئران. (أ) تُظهر هذه اللوحة تمدد الأوعية الدموية المنعكس المتبقي (الخط الأحمر المنقط يشير إلى التسريب المتبقي). (ب) لا يمكن الكشف عن التسريب. لوحة(C) يظهر الشريان من لوحة A أثناء الفحص العياني; فتحة تمدد الأوعية الدموية مفتوحة. (د) عرض منظار من neointima على تمدد الأوعية الدموية occluded. علامات خطوط البرتقال منقط الشريان الأصلي وقبة تمدد الأوعية الدموية. الألواح (A) و (B) هي صور فلورية فقط ويظهر اللون الأخضر انبعاث الفلورسين. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

التسريب/التصريف المتبقي
العيانية + العيانية - الفلورسين + الفلورسين -
الارانب 2 14 سنة 5 11
الفئران 23 25 22 21
مجموع 25 39 27 32

الجدول 1: اختبار الباتنسي. تم اختبار التَرَم َيَرَمَة ُ الوالدفقط في الأرانبِ ويُوضّحُ هنا. اكتشف الفلورسين المزيد من الباتسينات من الشرايين الأم من التقييم العياني. (كان لجميع الفئران في هذا الإعداد الشريان الوالد مفتوحة، كما تم خياطة تمدد الأوعية الدموية على الشريان الأبهر البطني.) تم اختبار تمدد الأوعية الدموية في الفئران فقط. تم تأكيد 22 من 23 patencies المكتشفة بعيانا باستخدام FVA. واحد وعشرون من 25 لم يظهر أي تبّاً على FVA.

العيانية الإيجابية الميكروسكوبية السلبية مجموع
الفلورسين إيجابية 25 2 27
الفلورة السلبية صفر 32 32
مجموع 25 34

الجدول 2: جدولان باثنين يستخدمان لحساب خصوصية وحساسية FVA.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

FVA هو وسيلة واعدة وغير معقدة لفحص السفن في القوارض ويمكن القيام بها مع الأجهزة التجارية والمعدات الجاهزة. يمكن تنفيذ FVA خلال أي عملية جراحية حيث هناك حاجة إلى تقييم أثناء الجراحة لسلامة السفينة حيث تحتاج الأوعية إلى تشريح مناسب أولاً.

فضل المؤلفون الحقن الوريدي على الحقن الشرياني بسبب انخفاض خطر الأحداث غير المقصودة مثل العدوى، نقص التروية ومتلازمة المقصورة12. حقن عن طريق الوريد تمكن يمكن الاعتماد عليها، محدودة مكانيا، وتلطيخ مركزة للغاية، ويتطلب جرعات صبغ صغيرة13،14. بالإضافة إلى ذلك، حقن وريدي يسمح بإزالة سريعة من الفلورسين14،15. طريقة بديلة هي حقن عامل التباين مباشرة في الشريان المختار. لم يتم استخدام هذه الطريقة في هذه التجارب كما أراد المحققون لمنع تلوث المجال الجراحي بالدم والفلورسين. من أجل الحد من هذا الخطر، ينصح حقن عامل التباين الوريدي الطرفية13.

مزايا FVA هي التباين العالي (يمكن الكشف عنها بسهولةمع العين البشرية)، وحساسية عالية كما هو مبين أعلاه (الجدول 2)، وانخفاض التكلفة وسهولة التعامل مع16. وكان الفلورسين الصوديوم عامل التباين المختار لفحص التسريب. يمكن استخدام الضوء المرئي وحده للإثارة من الصبغة وانبعاث الضوء الأخضر النموذجي. ومع ذلك، يعمل هذا العامل التباين بشكل أفضل مع الضوء الأزرق (حوالي 480 نانومتر) وتنبعث منه ضوء أخضر قوي (الطول الموجي حوالي 530 نانومتر)15. وفقا ليوشيوكا وآخرون، فلوريسين الألوان الشريان بسرعة فائقة14. وعلاوة على ذلك ، يمكن ملاحظة تدفق الدم المخصب الفلورسين في الوقت الحقيقي15،17. والوقت القصير اللازم لـ FVA يمثل ميزة أخرى؛ في هذه السلسلة استغرق الأمر في المتوسط 2 دقيقة (± 1min) لإجراء FVA واحد.

العيب في استخدام الفلورسين كعامل تباين هو أنه يعمل بشكل جيد مع جدران الشريان رقيقة فقط التي تتطلب تشريح دقيق جدا. أظهر Ichikawa وآخرون انقراض الصبغة بسبب انبعاث الضوء المحبط من خلال جدران أكثر سمكاً عن طريق التكلس أو الشرايين غير التشريحية15. بعد الحقن ، يتم استقلاب الفلورسين إلى الفلورسين الفلورسنت جلوكورونيد في الكبد. في غضون 30 دقيقة بعد الحقن ، يتجاوز تركيز الفلورسين جلوكورونيد تركيز الفلورسين18. الفلورسين يتطلب وقتا ً طويلاً لإزالة الألغام. لا ينصح بإعادة الحقن الفوري بعد الحقن الوريدي من الفلورسين كما الشريان وتمدد الأوعية الدموية هي بالفعل الفلورسنت من الحقن ة الأولى17.

الوزن الجزيئي للفلورة هو فقط 376 kDa الذي يسمح تسرب الصبغة. جدار الأوعية الدموية يصبح أيضا الفلورسنت التي يمكن أن تؤدي إلى تقييمات تدفق إيجابية كاذبة (زيادة مع مرور الوقت بعد التطبيق). لوحظ تلوين متقطع من جدار السفينة بدءا من حوالي 5 دقائق بعد حقن الفلور سين14. ومع ذلك، لوحظ تلون متقطع فقط في الشرايين أكبر. الشرايين الصغيرة والمتوسطة لم تظهر هذه البنية تلطيخ17. من المستحسن تقييم تمدد الأوعية الدموية على الفور من أجل الكشف عن الملء المتبقية.

على الرغم من أن هناك خطر منخفض جدا من السمية، وقد وصفت بعض حالات الفلورسين مما يؤدي إلى ردود فعل القلب والجهاز التنفسي14. في هذه الدراسة لم يحدث أي حدث سلبي شديد; وكانت المضاعفات الوحيدة 2 حالات ثقب الوريد الأذن. وفقا لين وآخرون، فلورسين الصوديوم ليست ضارة حتى عند استخدامها في البشر17. من ناحية أخرى ، الفلورسين غير مستقر تماما ، ولا ينبغي أن يتعرض للضوء الأبيض16 - يمكن استخدام مصدر الضوء الأحمر بدلا من ذلك.

من أجل اختيار تركيز الفلورسين للأرانب، بدأ المحققون مع أدنى جرعة عمل معروفة في الفئران (0.2 مل من 100 ملغ / مل الفلورسين الصوديوم) وزيادتها تدريجيا إلى 1 مل. تم تسجيل إشارة الفلورة القوية في تلك الجرعة. تم زيادة الجرعة تدريجيا لاختبار ما إذا كان الفلورة يحسن - وهو ما لم يكن الحال. قرر المؤلفون الاستمرار مع 1 مل من 100 ملغ / مل فلورسين الصوديوم13.

وثمة صبغة أخرى متاحة لفحص السفن أثناء الجراحة هي اللجنة الدولية. حجمها هو 775 kDa ومثل هذه بالكاد تخترق الأنسجة المحيطة14. بسبب أطوال الأطوال الموجية الانبعاثات أطول، يتم اختراق الأنسجة بسهولة أكبر لأن الأنسجة هي أكثر شفافية في 800 نانومتر19 والهياكل أعمق تصبح مرئية14،16. مطلوب الطول الموجي الإثارة داخل 750-800 نانومتر16،20 والطول الموجي الانبعاثات من عامل التباين هو ما يقرب من 800 نانومتر16،مما يجعل كلا غير مرئية للعين البشرية. بسبب وقتها نصف العمر القصير في بلازما الدم، يمكن حقن الصبغة وإعادة استخدامها مرارا وتكرارا16. وتشمل القيود المفروضة على استخدام هذه الصبغة مشاكل مع الشرايين سميكة الجدران20 وضرورة الضوء خارج الطيف المرئي13. ونتيجة لذلك، تعتمد اللجنة الدولية على معدات باهظة الثمن ولا يمكن تطبيقها بسهولة في كل مختبر.

في الختام، FVA هو وسيلة سريعة وغير مكلفة وموثوق بها مع حساسية عالية لشدة الشاشة من تمدد الأوعية الدموية والشرايين الأم في نماذج تمدد الأوعية الدموية القوارض. وهو يرتبط تقريبا ً بعدم وجود اعتلال أو وفيات. وهو يسمح بمراقبة تدفق الدم في الوقت الحقيقي أثناء الجراحة والمتابعة. لتحسين فعاليتها، ينبغي أن يتم الحقن في الظلام ويتم أفضل على الأوعية تشريح بدقة. ويمكن تنفيذ هذه الطريقة بسهولة وأمان في مختبر الأوعية الدماغية، ويمكن أن تقلل من تكاليف التجربة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ويؤكد جميع المؤلفين عدم وجود تضارب في المصالح.

Acknowledgments

وقد دعمت هذه الدراسة جزئيا بمنحة بحثية من كانتونسسبيتال آرو، سويسرا.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
For rabbits
Aluminium foil
Animal shaver
Black tape
Blue filter Thorlabs MF475-35
Body warm plate
Camera Sony NEX-5R
Catheter 22G Vasofix Safety
Disinfictant
Fluorescein sodium Fluorescein Faure 10%
Glas plate
Green filter Thorlabs MF539-43
Incontinence pad
Infusion pump Perfusor Secura
Ketamine hydrochloride any generic products
Needle 25G
Oxygen
Ringer's Solution
Sterile sheets
Surgical instruments micro forceps, micro scissor, blunt surgical scissor
Surgical microscope OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany
Syringe 2ml, 5ml, 50ml
Tape
Three-way-stopcock
Torch light
Xylazin any generic products
For rats
Aluminium foil
Animal shaver
Black tape
Blue filter Thorlabs MF475-35
Body warm plate
Camera Sony NEX-5R
Disinfictant
Fluorescein sodium Fluorescein Faure 10%
Green filter Thorlabs MF539-43
Incontinence pad
Isoflurane
Ketamine hydrochloride any generic products
Medetomidine hydrochloride any generic products
Needle 25G
Oxygen
Plate
Ringer's Solution
Sterile sheets
Surgical instruments micro forceps, micro scissor, blunt surgical scissor
Surgical microscope OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany
Syringe 2ml, 5ml
Tape
Torch light

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kakucs, C., Florian, I. A., Ungureanu, G., Florian, I. S. Fluorescein Angiography in Intracranial Aneurysm Surgery: A Helpful Method to Evaluate the Security of Clipping and Observe Blood Flow. World Neurosurgery. 105, 406-411 (2017).
  2. Ajiboye, N., Chalouhi, N., Starke, R. M., Zanaty, M., Bell, R. Unruptured Cerebral Aneurysms: Evaluation and Management. ScientificWorldJournal. 2015, 954954 (2015).
  3. Suzuki, K., et al. Confirmation of blood flow in perforating arteries using fluorescein cerebral angiography during aneurysm surgery. Journal of Neurosurgery. 107, (1), 68-73 (2007).
  4. Gruter, B. E., et al. Fluorescence Video Angiography for Evaluation of Dynamic Perfusion Status in an Aneurysm Preclinical Experimental Setting. Operative Neurosurgery. Hagerstown. (2019).
  5. Raabe, A., et al. Prospective evaluation of surgical microscope-integrated intraoperative near-infrared indocyanine green videoangiography during aneurysm surgery. Journal of Neurosurgery. 103, (6), 982-989 (2005).
  6. Riva, M., Amin-Hanjani, S., Giussani, C., De Witte, O., Bruneau, M. Indocyanine Green Videoangiography in Aneurysm Surgery: Systematic Review and Meta-Analysis. Neurosurgery. (2017).
  7. Kuroda, K., et al. Intra-arterial injection fluorescein videoangiography in aneurysm surgery. Neurosurgery. 72, 2 Suppl Operative 141-150 (2013).
  8. Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. Improving Bioscience Research Reporting: The ARRIVE Guidelines for Reporting Animal Research. PLOS Biology. 8, (6), 1000412 (2010).
  9. Marbacher, S., et al. The Helsinki rat microsurgical sidewall aneurysm model. Journal of Visualized Experiments. (92), e51071 (2014).
  10. Marbacher, S., et al. Complex bilobular, bisaccular, and broad-neck microsurgical aneurysm formation in the rabbit bifurcation model for the study of upcoming endovascular techniques. American Journal of Neuroradiology. 32, (4), 772-777 (2011).
  11. Shurey, S., et al. The rat model in microsurgery education: classical exercises and new horizons. Archives of Plastic Surgery. 41, (3), 201-208 (2014).
  12. Foster, S. D., Lyons, M. S., Runyan, C. M., Otten, E. J. A mimic of soft tissue infection: intra-arterial injection drug use producing hand swelling and digital ischemia. World Journal of Emergency Medicine. 6, (3), 233-236 (2015).
  13. Flower, R. W. Injection technique for indocyanine green and sodium fluorescein dye angiography of the eye. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 12, (12), 881-895 (1973).
  14. Yoshioka, H., et al. Advantage of microscope integrated for both indocyanine green and fluorescein videoangiography on aneurysmal surgery: case report. Neurologia medico-chirurgica (Tokyo). 54, (3), 192-195 (2014).
  15. Ichikawa, T., et al. Development of and Clinical Experience with a Simple Device for Performing Intraoperative Fluorescein Fluorescence Cerebral Angiography: Technical Notes. Neurologia medico-chirurgica. 56, (3), 141-149 (2016).
  16. Alander, J. T., et al. A review of indocyanine green fluorescent imaging in surgery. International Journal of Biomedical Imaging. 2012, 940585 (2012).
  17. Lane, B., Bohnstedt, B. N., Cohen-Gadol, A. A. A prospective comparative study of microscope-integrated intraoperative fluorescein and indocyanine videoangiography for clip ligation of complex cerebral aneurysms. Journal of Neurosurgery. 122, (3), 618-626 (2015).
  18. Blair, N. P., Evans, M. A., Lesar, T. S., Zeimer, R. C. Fluorescein and fluorescein glucuronide pharmacokinetics after intravenous injection. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 27, (7), 1107-1114 (1986).
  19. Hillmann, D., et al. In vivo optical imaging of physiological responses to photostimulation in human photoreceptors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113, (46), 13138-13143 (2016).
  20. Golby, A. J. Image-Guided Neurosurgery. Elsevier Science. (2015).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics