जीवन इतिहास ज्ञान और प्रभावी पूर्व सीटू संरक्षण तकनीकों को बढ़ाने के लिए जोखिम तितली कैप्टिव प्रचार कार्यक्रम

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Summary

यहां, हम 1 के लिए प्रोटोकॉल पेश करते हैं) संघीय रूप से लुप्तप्राय मियामी ब्लू तितली(साइक्लरगुस थॉमसी बेथुनेबेकरी)और 2) के प्रयोगशाला कैप्टिव प्रचार अपरिपक्व विकास समय और लार्वा स्टेडियमों की संख्या जैसे बुनियादी जीवन इतिहास की जानकारी का आकलन करते हैं। दोनों तरीकों को अन्य पूर्व सीटू संरक्षण कार्यक्रमों के साथ उपयोग के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।

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Daniels, J. C., Hill, G. M., Rossetti, K. A., Sanchez, S. J., Hornfeldt, J. A. At-Risk Butterfly Captive Propagation Programs to Enhance Life History Knowledge and Effective Ex Situ Conservation Techniques. J. Vis. Exp. (156), e60591, doi:10.3791/60591 (2020).

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Abstract

जोखिम वाली तितलियों के लिए पूर्व सीटू सर्वोत्तम प्रथाओं के ज्ञान में सुधार सफल संरक्षण और वसूली कार्यक्रम परिणामों को उत्पन्न करने के लिए महत्वपूर्ण है। ऐसी कैप्टिव आबादी पर अनुसंधान भी मूल्यवान डेटा के लिए व्यवहार, जीवन के इतिहास, और लक्ष्य टैक्सा की पारिस्थितिकी के बारे में महत्वपूर्ण जानकारी अंतराल को संबोधित कर सकते हैं । हम संघीय रूप से लुप्तप्राय साइक्लरगुरास थॉमसी बेथुनेबेकरी के कैप्टिव प्रचार के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं जिसे अन्य जोखिम वाले तितली पूर्व सीटू कार्यक्रमों के लिए एक मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, विशेष रूप से परिवार लाइकेनिडी में। हम आगे विभिन्न जीवन इतिहास मैट्रिक्स रिकॉर्डिंग के लिए एक सरल और सीधा प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं जो पूर्व सीटू पद्धतियों को सूचित करने के साथ-साथ अन्य लेपिडोप्टेराके प्रयोगशाला अध्ययन के लिए अनुकूलित करने के लिए उपयोगी हो सकता है।

Introduction

अध्ययनों की बढ़ती सूची में तितली आबादी1,2,3,4,5में व्यापक और गंभीर वैश्विक गिरावट का संकेत है . इसमें जोखिम वाली प्रजातियों का विशाल बहुमत शामिल है। इस तरह की गिरावट को कम करने के लिए डिज़ाइन किए गए संरक्षण कार्यक्रम अक्सर जनसंख्या निगरानी, आवास प्रबंधन और बहाली, वैज्ञानिक अनुसंधान, कैप्टिव प्रचार, और जीव स्थानांतरण6सहित रणनीतियों का मिश्रण रोजगार देते हैं। अमेरिका और उसके क्षेत्रों के भीतर अकेले, 30 तितली टैक्सा की कुल लुप्तप्राय प्रजातियों अधिनियम (ESA) के तहत सूचीबद्ध कर रहे है के रूप में या तो धमकी दी या लुप्तप्राय, इनमें से 21 के साथ मसौदा या अंतिम वसूली की योजना को मंजूरी दे दी । इस तरह के टैक्सा के लिए, आधे से अधिक चिन्हित वसूली रणनीतियां बंदी प्रचार या यह बताने की सलाह देते हैं कि बंदी प्रचार का आकलन7किया जाना चाहिए । हाल केवर्षोंमें तितलियों के लिए पूर्व सीटू संरक्षण प्रयासों का उपयोग काफी बढ़ गया है और इसमें वसूली के प्रयासों में सहायता करने के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण होनेकीक्षमता है । कई संस्थाएं, संगठन और एजेंसियां वर्तमान में कम से कम 11 ईएसए-सूचीबद्ध तितली टैक्सा (यानी, साइक्लेरियस थॉमसी बेथुनेबेकरी, यूफिड्रियास एडिटा क्विनो के लिए पूर्व सीटू प्रयासों के साथ शामिल हैं, यूफिड्रियास एडिटा टेलरी, हेराक्लिड्स अरिस्टोडेमस, हेस्पेरिया डाकोटे, लाइकेडेस मेलिसा सैमुअलिस, ओअरिज्मा पोवेशिएक, पाइर्गस रूरलिस लागुना, और स्पेरिया जीरोन हिप्पोलिटा)और कई अन्य जोखिम वाले टैक्सा (जैसे, कैलोफ्रेस इरस, यूफिडास फाटेन यूमियस अटाला)11। मजबूत और सफल प्रयासों की संख्या के बावजूद, कार्यक्रमों में और विचारों, डेटा, प्रभावी तरीकों और परिणामों के आदान-प्रदान से जुड़े संरक्षण चिकित्सकों के बीच नियमित संचार की कमी बनी हुई है । इस तरह के ज्ञान साझा करने के रूप में यह प्रयास के दोहराव को कम करने में मदद करता है, समग्र सर्वोत्तम प्रथाओं में सुधार, और संरक्षण प्रभाव को बढ़ाता है आवश्यक है । कुछ प्रकाशित सिर शुरू, कैप्टिव पालन, प्रजनन, या पशुपालन प्रोटोकॉल पर जोखिम तितली टैक्सा के लिए आसानी से उपलब्ध हैं, और उन है कि अक्सर पर्याप्त कथा विस्तार और/या चित्र की कमी है । ये अक्सर सीमित चरण-दर-कदम निर्देशों और साथ छवियों के साथ ज्यादातर सारांश विवरण प्रदान करते हैं, जिससे प्रतिकृति चुनौतीपूर्ण हो जाती है या अन्य टैक्सा के लिए आवेदन12,13,14,15का आकलन करना मुश्किल हो जाता है। उपलब्ध प्रोटोकॉल के कई किसी तरह से सीमित हैं: वे केवल ग्रे साहित्य में मौजूद हैं, या विस्तार के अलग स्तर में, प्रकाशन की उंर, या संगोष्ठी कार्यवाही में घटक भागों के रूप में, एजेंसी/funder रिपोर्ट, या घर में मैनुअल16,17,18, 19,20,21,22,23,24

अधिकांश संरक्षण कार्यक्रमों के लिए, कैप्टिव प्रचार मुख्य रूप से संरक्षण स्थानांतरण का समर्थन करने के लिए आयोजित किया जाता है, जिसमें पुनर्परिचय, सुदृढीकरण (यानी, वृद्धि) और परिचय25,26शामिल हैं। इस तरह की गतिविधियों को रणनीतिक रूप से समग्र वसूली रणनीति के घटक के रूप में लागू करने का इरादा है ताकि सूचीबद्ध प्रजातियों, उपप्रजातियों या आबादी के विलुप्त होने को रोकने में मदद मिल सके। हालांकि, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि यह कई अन्य संभावित भूमिकाओं में से एक है जो इस तरह के पूर्व सीटू कार्यक्रमों की सेवा कर सकते हैं। इनमें बीमा (यानी रिफुगिया) आबादी, अस्थायी जीव बचाव, वसूली से संबंधित अनुसंधान और/या प्रशिक्षण का समर्थन करना और संरक्षण से संबंधित शिक्षा और जागरूकता प्रयासों को बढ़ावादेना, 27,28भी शामिल हो सकते हैं । भले ही पूर्व सीटू कार्यक्रमों में एक परिभाषित लक्ष्य या कई का मिश्रण हो, संरक्षण चिकित्सकों को डेटा संग्रह के अवसरों को अधिकतम करना चाहिए ताकि संभव होने पर प्रमुख जानकारी अंतराल को भरा जा सके। यह विशेष रूप से महत्वपूर्ण है क्योंकि जोखिम वाले टैक्सा के विशाल बहुमत आम तौर पर खराब पर्याप्त जंगली आबादी में गिरावट से पहले अध्ययन किया गया है । फोकल टैक्सन के विभिन्न व्यवहार, पारिस्थितिक, या जीवन इतिहास पहलुओं पर प्राप्त ज्ञान के परिणामस्वरूप प्रभावी प्रजातियों के संरक्षण और प्रबंधन29को आगे बढ़ाने में मदद करने के लिए काम कर सकता है।

यहां, हम विस्तार से बंदी प्रचार प्रोटोकॉल है कि संघीय लुप्तप्राय मियामी ब्लू तितली के लिए विकसित किया गया था का वर्णन(Cyclargus थॉमसी bethunebakeri)(अनुपूरक चित्रा 1)एक बड़ा संरक्षण और वसूली कार्यक्रम के भाग के रूप में । इस मामले में, कैप्टिव प्रचार कार्यक्रम तीन विशिष्ट पहचान भूमिकाओं में कार्य करता है: 1) एक बीमा आबादी मौजूदा जंगली आबादी खो जाना चाहिए, 2) एक अनुसंधान की आबादी की पहचान पारिस्थितिकी और जीवन के इतिहास ज्ञान अंतराल है कि मदद कर सकता है वसूली और/या प्रबंधन को सूचित करने में शामिल करने के लिए डिज़ाइन किया गया है, और 3) है taxon ऐतिहासिक रेंज के भीतर साइटों में संरक्षण स्थानांतरण के लिए व्यवहार्य जीवों का उत्पादन । जिसके परिणामस्वरूप प्रोटोकॉल अच्छी तरह से संचालित किया गया है और साबित, उपयोग किया गया है और एक दशक से अधिक के लिए सुधार हुआ है । नतीजतन, हमें लगता है कि वर्णित तकनीकों और पद्धतियों एक व्यवहार्य मॉडल है कि करने के लिए लागू किया जा सकता है या आसानी से अंय पूर्व सीटू पर जोखिम तितली कार्यक्रमों, विशेष रूप से Lycaenidae या संबंधित टैक्सा शामिल उन लोगों के लिए अनुकूलित प्रतिनिधित्व करते हैं । हालांकि हम यह सुझाव नहीं देते कि वर्णित प्रोटोकॉल दूसरों से बेहतर है, हमें लगता है कि उत्पादकता, देखभाल या दक्षता बढ़ाने में मदद करने के लिए कुछ तरीकों को अधिक मोटे तौर पर लागू करने के अवसर हैं। यह विशेष रूप से सच है क्योंकि हमारे प्रजनन सीमित स्थान के साथ इनडोर प्रयोगशाला की स्थितियों के तहत किया जाता है, जो यूफिड्रियाए एडिटा टेलरी और स्पेरिरिया ज़ेरीन हिप्पोटिटा17,23से जुड़े संरक्षण कार्यक्रमों के समान है। कई अन्य प्रोटोकॉल अक्सर ओविपोजिशन या लार्वा पालन के लिए कमरों की सामग्री का उपयोग करते हैं, जो कभी-कभी शिकारी नियंत्रण, पर्यावरण नियंत्रण (यानी, आर्द्रता, तापमान), पशुधन निगरानी, डेटा संग्रह, पौधों कीट मुद्दों और अंतरिक्ष से संबंधित जटिलताओं को बढ़ा सकते हैं कुछ21,22का नाम देसकते हैं। अंत में, प्रस्तुत प्रोटोकॉल कैप्टिव प्रजनन के तरीकों को रेखांकित करता है। कई अन्य जोखिम वाले तितली संरक्षण कार्यक्रमों में उन मतभेदों को दर्शाती प्रतिनिधि प्रोटोकॉल के साथ सिर-स्टार्टिंग या कैप्टिव पालन शामिल है। जबकि अक्सर मामूली, हमें लगता है कि यह अन्य कार्यक्रमों की समीक्षा करने के लिए उपलब्ध जानकारी के मौजूदा पूल को व्यापक बनाने में मदद करता है। यह महत्वपूर्ण है, क्योंकि अधिकांश पूर्व सीटू कार्यक्रम दुर्लभ और अक्सर खराब अध्ययन किए गए टैक्सा की वसूली को सुविधाजनक बनाने में मदद करने के लिए अग्रणी प्रयासों का प्रतिनिधित्व करते हैं। उपलब्ध प्रोटोकॉल मूल्यवान अंतर्दृष्टि प्रदान करने, प्रयास के दोहराव को कम करने और नवाचार को बढ़ावा देने में मदद करने के लिए एक उत्कृष्ट प्रारंभिक बिंदु के रूप में काम कर सकते हैं। "तितली व्यवहार की व्यापक अंतरविशिष्ट विविधता, जीवन इतिहास लक्षण, और पारिस्थितिक आवश्यकताओं के कारण अक्सर कार्यक्रम सुविधाओं, बजट, प्रैक्टिशनर विशेषज्ञता" और अन्य अंतर्निहित मतभेदों में अक्सर चिह्नित मतभेदों के साथ संयुक्त, एक ही पद्धति के लिए निर्भरता, यहां तक कि बारीकी से संबंधित टैक्सा के लिए, अक्सर सीमित और अनुचित30है । विशिष्ट टैक्सा या कार्यक्रमों की जरूरतों के अनुरूप नए प्रोटोकॉल को परिष्कृत या विकसित करने के लिए लचीलापन सफलता के लिए आवश्यक है और इसलिए इस पर जोर दिया जाना चाहिए । इसके अतिरिक्त हम कैप्टिव परिस्थितियों में जीव विकास पर मैट्रिक्स एकत्र करने के लिए प्रयोगशाला तकनीकों का वर्णन करते हैं जिनमें लार्वा इनस्टार्स की संख्या, व्यक्तिगत विकासचरणों की अवधि, कुल विकास समय और लार्वा और प्यूपल लंबाई शामिल हैं। इन तकनीकों में लेपिडोप्टेरा के जीवन इतिहास अध्ययनों के लिए व्यापक प्रयोज्यता है जिसका उपयोग पूर्व सीटू प्रोटोकॉल को परिष्कृत करने या क्षेत्र डेटा को सूचित करने के लिए किया जा सकता है।

Protocol

1. सफल वयस्क प्रणय निवेदन और संभोग हासिल करना

  1. सफल eclosion के बाद, एक सुरक्षित, चलने में व्यवहार्य वयस्क तितलियों जारी, एक तापमान नियंत्रित ग्रीनहाउस(अनुपूरक चित्रा 2)में स्थित उड़ान पिंजरे की जांच की ।
    नोट: वयस्कों को स्थायी स्याही मार्कर के साथ पंखों की वेंट्रल सतह पर चिह्नित किया जा सकता है यदि विशिष्ट व्यक्तियों की पहचान आनुवंशिक रेखाओं, स्टॉक मूल, या जीव दीर्घायु, व्यवहार से संबंधित विशिष्ट डेटा संग्रह के पृथक्करण के लिए वांछित है, आदि.
    1. जबकि सटीक पिंजरे आयाम भिन्न हो सकते हैं, यह सुनिश्चित करें कि रखे गए वयस्क तितलियों के घनत्व का समर्थन करने के लिए आवश्यक पर्याप्त अमृत संयंत्र सामग्री को समायोजित करने के लिए पर्याप्त जगह है और एक मानव को स्वतंत्र रूप से खड़े होने और धुरी के लिए जगह प्रदान करना है।
    2. तापमान विनियमन से परे, सुनिश्चित करें कि ग्रीनहाउस सुरक्षित है ताकि यह खराब मौसम (जैसे, भारी बारिश, हवा) से सुरक्षा के साथ रोकथाम की दूसरी परत प्रदान कर सके।
  2. कमरों का अमृत संयंत्र सामग्री तरक्की ताकि पिंजरे के आंतरिक शीर्ष से उच्चतम खिलने वाले फूलों(अनुपूरक चित्रा 2)तक 30 सेमी से अधिक जगह न हो। यह उपलब्ध अमृत संसाधनों तक इष्टतम पहुंच प्रदान करता है, पर्याप्त वयस्क पर्चों प्रदान करता है, और बाहरी उड़ान गतिविधि को कम करता है।
  3. उड़ान पिंजरे में एक कमरों का मेजबान संयंत्र रखें। यह सुनिश्चित करता है कि भले ही एक संभोग जोड़ी को याद किया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप अंडे रखे जा सकते हैं।
  4. लगातार एयरफ्लो प्रदान करें। यह प्रेमालाप गतिविधि और संभोग की सफलता को बढ़ाता है। ग्रीनहाउस सेटिंग में, ब्लोअर्स और फिक्स्ड माउंट सर्कुलेशन प्रशंसकों का सबसे अच्छा उपयोग वेंटिलेशन और वायु आंदोलन को बढ़ाने में मदद करने के लिए किया जाता है। बॉक्स या डेस्क प्रशंसकों जैसे छोटे पोर्टेबल वेंटिलेशन का भी उपयोग किया जा सकता है।
  5. इष्टतम वयस्क गतिविधि और संभोग सफलता को बढ़ावा देने के लिए 27 डिग्री सेल्सियस और 32 डिग्री सेल्सियस के बीच आंतरिक ग्रीनहाउस तापमान बनाए रखें। पिंजरे के अंदर तापमान एक ट्रेस करने योग्य स्मृति निगरानी थर्मामीटर का उपयोग कर निगरानी की है।
  6. एक हैंडपंप, प्लास्टिक टैंक स्प्रेयर, या बगीचे नली का उपयोग कर पानी के साथ नियमित रूप से (लगभग एक बार हर 2 घंटे) जांच की उड़ान पिंजरे धुंध ।
  7. धीरे से एक 50 ड्राम स्पष्ट प्लास्टिक स्नैप कैप शीशी(सामग्री की तालिका)का उपयोग करके जांच की उड़ान पिंजरे से व्यक्तिगत संभोग जोड़े इकट्ठा करें, एक से दो जोड़े प्रति शीशी रखकर, और एक इनडोर पालन कक्ष या प्रयोगशाला(अनुपूरक चित्रा 3)में परिवहन करें।

2. अंडा उत्पादन को अधिकतम करना

  1. ओविपोजिशन चैंबर को इकट्ठा करें।
    1. एक 12 औंस सादे सफेद कागज कप ले लो और एक तस्वीर ब्लेड उपयोगिता चाकू का उपयोग कर, एक दूसरे से भर में कप के प्रत्येक पक्ष पर दो क्षैतिज कटौती करते हैं । प्रत्येक कट रिम के नीचे लगभग 1 सेमी होना चाहिए।
    2. आधे में एक कपास झाड़ू काटें और कागज कप के प्रत्येक पक्ष पर दो क्षैतिज कटौती में प्रत्येक के रॉड अंत डालें ताकि कपास झाड़ू भाग कप के इंटीरियर की ओर लगभग 2 सेमी तक फैली रहे।
    3. एक स्नैप ब्लेड उपयोगिता चाकू का उपयोग करना, कागज कप के नीचे में दो "एक्स" कटौती करते हैं । प्रत्येक विकर्ण कटौती लगभग 1 सेमी लंबी होनी चाहिए।
    4. एक 9 औंस प्लास्टिक कप ले लो और नल के पानी के लगभग 2 सेमी के साथ नीचे भरें।
    5. नीचे में "एक्स" कटौती में से एक के माध्यम से स्टेम डालने के द्वारा कागज कप में टर्मिनल लार्वा मेजबान संयंत्र वृद्धि के लगभग 15 सेमी लंबे, एक ताजा काटने, लगभग 15 सेमी लंबा रखें। कट के माध्यम से तने को पुश करें ताकि लगभग 4-5 सेमी नीचे फैल जाए।
    6. प्लास्टिक कप में मेजबान सामग्री के साथ कागज कप रखें, यह सुनिश्चित करना है कि संयंत्र स्टेम पानी में है ।
    7. एक स्वाद खेल पेय के साथ एक 1 मिलीलीटर उप क्यू सिरिंज (0.45 मिमी x 16 मिमी) भरें और पेपर कप में दोनों कपास झाड़ू संतृप्त करें। ये कृत्रिम फूल ों के रूप में कार्य करते हैं।
      नोट: तरबूज और फल पंच स्वाद खेल पेय सबसे अच्छा अमृत विकल्प प्रदान करते हैं ।
    8. एक बार जब प्रत्येक संभोग जोड़ी अलग हो जाती है, तो इकट्ठे कप विन्यास (यानी, ओविपोजिशन चैंबर) में 2-3 ग्राविद मादाओं को रखें।
    9. कप को काले ट्यूल (लगभग 15 सेमी x 15 सेमी) के कट स्क्वायर टुकड़े के साथ कवर करें और इसे ढक्कन(सप्लीमेंट्री फिगर 4)के चारों ओर रबर बैंड के साथ सुरक्षित करें। ब्लैक ट्यूल कप में सबसे अच्छी दृश्यता प्रदान करता है और किसी भी अंडे की आसान पहचान करता है जिसे कभी-कभी ट्यूल पर रखा जा सकता है।
  2. वयस्क तितली गतिविधि और अंडाशय को उत्तेजित करें।
    1. प्रत्येक ओविपोजिशन चैंबर को 8.5 इंच (21.59 सेमी) क्लैंप लाइट के नीचे एक प्रयोगशाला बेंच या टेबल पर रखें, जिसमें एल्यूमीनियम रिफ्लेक्टर आवास 40 डब्ल्यू गरमागरम बल्ब(अनुपूरक चित्रा 5)है।
      नोट: गरमागरम प्रकाश वयस्क गतिविधि और oviposition को प्रोत्साहित करने के लिए आवश्यक उज्ज्वल गर्मी प्रदान करता है।
    2. रोशनी से सटे थर्मामीटर की निगरानी करने वाली एक ट्रेस करने योग्य मेमोरी रखें और तापमान सेंसर को चलाएं ताकि यह एक क्लैंप लाइट के नीचे सीधे स्थित ओविपोजिशन चैंबर के शीर्ष पर रहे।
      नोट: लक्ष्य तापमान सीमा 27.5 डिग्री सेल्सियस-29 डिग्री सेल्सियस के बीच है।
    3. तैनात ओविपोजिशनल कक्षों की कुल संख्या के आधार पर आवश्यक के रूप में पूरक क्लैंप रोशनी जोड़ें।
    4. दो आउटलेट (30 मिन समय अंतराल में प्रोग्राम करने योग्य) के साथ एक प्रोग्रामेबल 15 Amp 24 h इनडोर प्लग-इन मैकेनिकल टाइमर में क्लैंप लाइट्स प्लग करें।
    5. 30 मिन अंतराल के लिए क्लैंप लाइट चालू करने के लिए टाइमर सेट करें (यानी, 30 मिन का दोहराने योग्य चक्र, 30 मिन ऑफ)।
      नोट: यह प्रकाश चक्र वयस्क तितली गतिविधि और ओविपोजिशन को प्रोत्साहित करने के लिए रोशनी की दोहराने योग्य अवधि प्रदान करके अंडे के उत्पादन को अधिकतम करने में मदद करता है जिसके बाद कम अंधेरे आराम अवधि होती है।
    6. प्रत्येक कप में कपास झाड़ू को उप-क्यू सिरिंज के माध्यम से स्वाद वाले खेल पेय के साथ ताज़ा करें और नियमित रूप से पानी के साथ प्लास्टिक स्प्रे की बोतल का उपयोग करके लगभग हर 2-3 एच या आवश्यकतानुसार धुंध।
      नोट: यह तितलियों को वांछित के रूप में मुक्त फ़ीड करने में सक्षम बनाने के लिए पर्याप्त कृत्रिम अमृत और नमी प्रदान करता है। यह इस प्रकार प्रयोगशाला की स्थिति के तहत वयस्क दीर्घायु और अंडाशय उत्पादकता दोनों को बढ़ाता है जहां रहने, पौधे की सामग्री को खिलने का आसानी से उपयोग नहीं किया जा सकता है।
    7. नियमित रूप से कप की निगरानी करें और मेजबान पौधे को आवश्यक रूप से ताजा कलमों के साथ प्रतिस्थापित करें।
    8. जब अंडे निकलने लगते हैं या अंडे का घनत्व अधिक हो जाता है, तो मादा (एस) को ताजा मेजबान के साथ एक नए कप में ले जाएं और नवजात ों के साथ लार्वा प्रोटोकॉल शुरू करें।

3. लार्वा देखभाल और रखरखाव

  1. लार्वा के लिए कप इकट्ठा करने के लिए चरण 2.3-2.6 दोहराएं।
  2. जब अंडे निकलने लगते हैं, तो अंडे और नवजात लार्वा के साथ मेजबान पौधे सामग्री को एक नए इकट्ठे कप में स्थानांतरित करें, नीचे में दूसरे "एक्स" के माध्यम से स्टेम को रखते हुए यह सुनिश्चित करें कि पौधे का तना पानी में है और पत्तियां आसन्न ताजा मेजबान काटने को छूती हैं।
  3. जब लार्वा युवा (नवजात-2 इंस्टार) होते हैं, तो मेजबान पौधे की सामग्री की ताजगी और मोल्ड या अत्यधिक फ्रास की उपस्थिति के लिए रोजाना लार्वा कप की जांच करें।
    नोट: मेजबान सामग्री को दैनिक हटाने की सिफारिश नहीं की जाती है जब लार्वा युवा होते हैं क्योंकि इसके परिणामस्वरूप ताजा मेजबान सामग्री की हैंडलिंग और/या अनावश्यक बर्बादी के कारण जीव की चोट हो सकती है।
  4. यदि मेजबान सामग्री मुरझाई हुई है या अन्यथा खराब स्थिति में है, तो ताजा मेजबान सामग्री की एक और काटने को कप में रखें ताकि यह मौजूदा पत्ते को छू सके और लार्वा को अपने दम पर नए मेजबान में जाने की अनुमति दे।
  5. एक बार लार्वा 3बजे के इनस्टार तक पहुंचने के बाद, पेपर कप को बदलें और रोजाना ताजा मेजबान सामग्री जोड़ें।
  6. नए कप में पुराने मेजबान सामग्री या कप सतह से लार्वा को ताजा मेजबान सामग्री में धीरे-धीरे स्थानांतरित करने के लिए एक छोटे ऊंट बाल वाटरकलर पेंट ब्रश का उपयोग करें।
  7. पुरानी मेजबान सामग्री को एक खाली आयताकार प्लास्टिक खाद्य भंडारण कंटेनर में रखें।
  8. दैनिक चरण 3.5-3.7 दोहराएं और जब तक लार्वा वाले सभी कप संसाधित नहीं हो जाते।
  9. पूरा होने पर, खाद्य भंडारण कंटेनर में पौधे के कचरे के शीर्ष पर ताजा मेजबान सामग्री की एक छोटी राशि जोड़ें और शिथिल शीर्ष पर एक ढक्कन रखें।
    नोट: यह एक सुरक्षा के रूप में कार्य करता है यदि दैनिक प्रसंस्करण के दौरान किसी भी लार्वा की अनदेखी की जाती है क्योंकि वे पौधे के कचरे के शीर्ष पर नई मेजबान सामग्री पर क्रॉल करेंगे और अगले दिन हटाया जा सकता है।
  10. इष्टतम लार्वा गतिविधि और विकास(अनुपूरक चित्रा 6)के लिए प्रयोगशाला तापमान के तहत कप 25 डिग्री सेल्सियस-28 डिग्री सेल्सियस के बीच बनाए रखें ।
    नोट: इनडोर स्थितियों के तहत इष्टतम पालन तापमान तक पहुंचने के लिए, एल्यूमीनियम रिफ्लेक्टर आवास 40 डब्ल्यू गरमागरम बल्ब के साथ क्लैंप रोशनी के तहत कप रखना अक्सर आवश्यक होता है। तापमान तो सक्रिय रूप से एक ट्रेस स्मृति की निगरानी थर्मामीटर और प्रकाश ऊंचाई इष्टतम पालन शर्तों तक पहुंचने के लिए समायोजित का उपयोग कर निगरानी की जा सकती है ।

4. प्यूशन चैंबर का निर्माण

  1. एक चेहरे नालीदार कागज रोल को 3.8 सेमी x 3.8 सेमी वर्गों में काट लें।
  2. एक वर्ग को 2 औंस स्पष्ट प्लास्टिक भाग कप में रखें।
  3. कप को एक स्पष्ट प्लास्टिक कप ट्रे(सप्लीमेंट्री फिगर 7)पर रखें।

5. पिल्ला के लिए लार्वा तैयार करना

  1. दैनिक कॉलोनी प्रसंस्करण के दौरान प्यूपेड करने के लिए तैयार परिपक्व लार्वा की पहचान करें।
    नोट: इस तरह के लार्वा एक समान सुस्त हरे-भूरे रंग को बदल देंगे, अपने धरण खो देंगे, और अक्सर मेजबान से भटकते हैं।
  2. धीरे-धीरे प्रत्येक परिपक्व लार्वा को एक छोटे ऊंट बाल वाटरकलर पेंट ब्रश या संदंश के साथ हटा दें और प्रत्येक पिल्ला कक्ष में एक रखें।
  3. दृढ़ता से पिल्ला कक्ष पर स्पष्ट प्लास्टिक के ढक्कन तस्वीर ।
  4. तब तक चरण 5.1-5.3 दोहराएं जब तक कि प्यूपे के लिए तैयार सभी लार्वा को आवश्यक रूप से नई प्लास्टिक ट्रे जोड़ने वाले पिल्ला कक्षों में स्थानांतरित नहीं किया गया है(अनुपूरक चित्रा 8)।

6. पुपी को बनाए रखना

  1. प्यूशन कक्षों की प्रत्येक ट्रे के लिए, पहले पिल्ला की तारीख और किसी भी अन्य प्रासंगिक जानकारी की आवश्यकता (यानी, आनुवंशिक रेखा, प्रयोगात्मक परीक्षण, आदि) रिकॉर्ड करें।
  2. प्रयोगशाला(अनुपूरक चित्रा 8)के भीतर एक सुरक्षित स्थान में तारीख और स्थान पर ट्रे व्यवस्थित करें।
  3. वयस्क eclosion के लिए दैनिक ट्रे की निगरानी करें।
    नोट: तापमान जैसी प्रयोगशाला की स्थिति विकास के समय को दृढ़ता से प्रभावित करेगी।
  4. वयस्क eclosion से पहले (आम तौर पर पहले पिल्ला के 10 दिनों के भीतर), व्यक्तिगत पिल्ला कक्षों से lids हटा दें और एक ३४.२९ सेमी x ३४.२९ सेमी x ६०.९६ सेमी टूट जाल पॉप अप पालन पिंजरे में ट्रे जगह(अनुपूरक चित्रा 9)
    नोट: नालीदार कागज वर्गों के खांचे के भीतर सुरक्षित रूप से संलग्न पिल्ला सफल वयस्क eclosion(अनुपूरक चित्रा 10)की सुविधा ।
  5. बाद में कैप्टिव जनरेशन के लिए चरण 1.1 से पूरे प्रोटोकॉल को दोहराएं।

7. अपरिपक्व चरणों के विकास के समय और स्टेडियमों की संख्या का आकलन

  1. एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे एक लार्वा रखें। जीव को चोट से बचने के लिए लार्वा को सावधानी से स्थानांतरित करने और अलग करने के लिए एक छोटे ऊंट बाल वाटरकलर पेंट ब्रश का उपयोग करें।
  2. नॉनटॉक्सिक चमकदार पेंट(सामग्री की तालिका)में तूलिका के एक बाल को डुबोएं और सावधानी से लार्वा की पीठ (डोरसम) पर पेंट की एक छोटी सी बूंद डालें। एक पेंट रंग का उपयोग करें जो लार्वा के पृष्ठभूमि रंग और पैटर्न रंग(पूरक चित्रा 11)से बाहर खड़ा है। लार्वा के सिर पर पेंट रखने से बचें।
  3. एक बार पेंट सूख जाता है (लगभग 30 एस या तो), प्रत्येक व्यक्ति लार्वा को अपने 2 औंस स्पष्ट प्लास्टिक भाग कप में रखें जिसमें ताजा टर्मिनल होस्ट सामग्री की लगभग 1-3 छोटी पत्तियां होती हैं और कप और ढक्कन(अनुपूरक चित्रा 12)पर एक अद्वितीय पहचानकर्ता लिखें।
  4. ध्यान से प्रत्येक लार्वा की दैनिक जांच करें। पत्तियों को हटादें और सफेद सतह पर सेट करें। कप, स्पष्ट ढक्कन का निरीक्षण करें, और लार्वा एक्सुविये (कास्ट खाल) और/या सिर कैप्सूल की उपस्थिति के लिए एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे पत्तियों की जांच करें।
  5. यदि एक लार्वा एक्सुविया पाया जाता है, तो इसे कप से हटा दें और इसे इसी कप संख्या और तारीख के साथ लेबल किए गए माइक्रोसेंट्रिफ्यूज ट्यूब में रखें (नीचे चरण 8.1-8.6 देखें)।
  6. प्रत्येक मोल्ट और रिकॉर्ड मोल्ट तिथियों के बाद लार्वा को फिर से पेंट करें।
  7. डिजिटल कैलिपर्स का उपयोग करके दैनिक प्रत्येक लार्वा के कुल शरीर की लंबाई (सिर से अंतिम पेट खंड) को मापें। तीन माप लें और तारीख और समय के साथ-साथ तीनों के औसत को रिकॉर्ड करें। शुरुआती इंस्टार लार्वा के लिए, सटीक माप सुनिश्चित करने के लिए मापने के दौरान एक आवर्धक ग्लास या विच्छेदन गुंजाइश का उपयोग किया जाना चाहिए।
  8. अपने इसी प्लास्टिक भाग कप के लिए लार्वा वापसी।
  9. जरूरत के अनुसार ताजा मेजबान सामग्री जोड़ें और सभी फ्रास और पुराने मेजबान मलबे को हटा दें। यदि कप में मोल्ड पाया जाता है, तो एक नए कप को निपटाएं और उपयोग करें। नए कप पर सही यूनिक आइडेंटिजर नंबर लिखें।
  10. जब तक सभी लार्वा अपने अंतिम इंस्टार तक नहीं पहुंचते और प्रीपुकल चरण शुरू नहीं करते तब तक चरण 7.5-7.9 दोहराएं। जब लार्वा खिलाना बंद कर देते हैं, तो एक समान सुस्त हरे-भूरे रंग को बदल दें, अपने शेवरॉन खो दें, और अक्सर मेजबान से भटकते हैं, उन्हें परेशान करने को कम करते हैं।
  11. कप में नालीदार कागज का एक छोटा सा टुकड़ा रखें (चरण 4.1 देखें)।
  12. एक बार जब प्रत्येक लार्वा पूरी तरह से प्यूपेट हो जाता है, तो इसकी कुल लंबाई को ऊपर चरण 7.8 के रूप में मापें और पिल्ला की तारीख रिकॉर्ड करें। यह प्रत्येक व्यक्ति का अंतिम मोल्ट होगा।
  13. पिल्ला दैनिक पर जाँच करें और प्रत्येक परिणामी वयस्क तितली के eclosion तिथि और सेक्स रिकॉर्ड करें।
  14. डिजिटल कैलिपर्स का उपयोग करके प्रत्येक तितली की पंख तार लंबाई को मापें। तितलियों को माप के लिए संदंश के साथ धीरे-धीरे आयोजित किया जा सकता है। यदि तितली आसानी से मापने के लिए बहुत सक्रिय है, तो अस्थायी रूप से इसे 30 एस या उससे कम समय के लिए फ्रिज में रखें और फिर से कोशिश करें।

8. लार्वा एक्सुविया का संग्रह

  1. जब एक लार्वा एक्सुविया मनाया जाता है, तो ग्लिसरीन के 0.2 माइक्रोन के साथ एक माइक्रोसेंटरिफ्यूज ट्यूब भरें। ढक्कन के शीर्ष और लार्वा संख्या, मोल्ट की तारीख, और हेड कैप्सूल (एचसी) के साथ साइड को लेबल करें।
    नोट: कुछ लेपिडोप्टेरन लार्वा का लार्वा नियमित रूप से अपने एक्सुविज़ल का उपभोग करता है लेकिन सिर कैप्सूल रहना चाहिए।
  2. लार्वा एक्सुविया और उससे जुड़े हेड कैप्सूल को एक स्पष्ट प्लास्टिक भाग कप ढक्कन में रखें और इसमें इथेनॉल की कुछ बूंदों को रखें।
  3. एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत लार्वा एक्सुविया की जांच करें इसे एक स्पष्ट प्लास्टिक भाग कप ढक्कन में रखकर और उस पर इथेनॉल की कुछ बूंदें डाल कर। यदि लार्वा सिर कैप्सूल पहले से ही एक्सुविया से अलग है, तो नुकीले एंटोमोलॉजिकल संदंश की नोक पर ग्लिसरीन की एक बूंद रखें और धीरे-धीरे सिर कैप्सूल को ग्लिसरीन से स्पर्श करें। हेड कैप्सूल को संबंधित माइक्रोसेंट्रोफ्यूज ट्यूब में रखें।
  4. यदि सिर कैप्सूल अभी भी लार्वा एक्सुविया से जुड़ा हुआ है, तो लार्वा एक्सुविया से सिर कैप्सूल को अलग करने के लिए नुकीले संदंश और एक कीट पिन का उपयोग करें।
  5. एक बार अलग होने के बाद, हेड कैप्सूल लेने के लिए ग्लिसरीन तकनीक का उपयोग करें। यदि बहुत अधिक इथेनॉल है, तो आप कुछ को हटाने के लिए एक छोटे से पेपर तौलिया का उपयोग कर सकते हैं, लेकिन सावधान रहें कि गलती से सिर कैप्सूल को हटा दें।
  6. सिर कैप्सूल को एक लेबल वाली ग्लिसरीन से भरी शीशी और बंद ढक्कन में कसकर रखें।

Representative Results

फरवरी 2003 से दिसंबर 2010 तक और नवंबर 2016 से वर्तमान तक साइक्लरगुस थॉमसी बेथुनेबेकरी की वसूली को लक्षित करने वाली दो अलग-अलग संरक्षण पहलों के दौरान, इस प्रोटोकॉल का उपयोग 51,052 व्यवहार्य जीवों की अधिकता का सफलतापूर्वक उत्पादन करने के लिए किया गया था। जून 2018 से जून 2019 तक समग्र कैप्टिव जनसंख्या उत्पादकता के एक साल के सारांश स्नैपशॉट के आधार पर, कुल 10,166 व्यवहार्य जीवों का उत्पादन किया गया, जो 13 पीढ़ियों में प्रति माह 782.00 ± 118.93 जीवों का प्रतिनिधित्व करता है। इसी तरह, प्रयोगशाला की स्थिति के तहत प्रति महिला कुल अंडा उत्पादन 114.00 ± 26.12 (एन = 12)31था। परिणामस्वरूप पर्याप्त जीव उत्पादकता अमेरिका में इस तरह के सबसे बड़े पूर्व सीटू प्रयासों में इस कार्यक्रम को रैंक करती है, साथ ही यूफिड्रियाएस एडिटा टेलरी, स्पाइएरिया ज़ेरीन हिप्पोलिटा और लाइकेडेस मेलिसा सैमुअलिस24के साथ। इस उत्पादकता का एक हिस्सा इस तथ्य के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है कि तितली लगातार ब्रूड की जाती है, जो लगभग हर 4-6 सप्ताह कैद में एक पीढ़ी का उत्पादन करती है। अधिकांश अन्य संरक्षण प्रजनन कार्यक्रमों में टैक्सा शामिल है जो यूनिवोल्टिन या बाइवोल्टिन हैं। फिर भी, यहां तक कि स्पीयरिया एसपीपी जैसे बेहद फेकंड टैक्सा से जुड़े कार्यक्रमों के लिए, वार्षिक आधार पर संरक्षण स्थानांतरण के लिए उत्पादित व्यवहार्य जीवों की कुल संख्या शायद ही कभी कुछ हजार32से अधिक है। तदनुसार, हमारी कैप्टिव आबादी ने सर्वोत्तम प्रयोगशाला प्रजनन और पशुपालन प्रथाओं(चित्रा 1)में सुधार करने के साथ-साथ वसूली और प्रबंधन निर्णयों को सूचित करने में मदद करने के लिए महत्वपूर्ण कई प्रमुख डेटा अंतरालों पर अनुसंधान और व्यापक डेटा संग्रह का निर्देश दिया है।

मतलब नवजात लार्वा से वयस्क तक कुल विकास समय 28.63 दिन(तालिका 1)था। अधिकांश लार्वा में चार मोल्ट(चित्रा 2, चित्रा 3)थे, हालांकि दो में पांच मोल्ट थे, और एक में छह मोल्ट थे। सभी लार्वा इनस्टार्स की समग्र औसत लंबाई 5.97 मिमी थी, और लार्वा चौथे और प्रीपुपल जीवन चरणों(तालिका 1)में सबसे बड़े थे। जब केवल 30 से अधिक टिप्पणियों वाले चर शामिल होते हैं, तो सबसे कम समय पहले इंस्टार और प्रीपुप्लिक चरणों में बिताया जाता था, और सबसे लंबा पिल्ला(तालिका 1, चित्रा 2)के रूप में खर्च किया जाता था। महिलाओं को आम तौर पर पुरुषों की तुलना में सभी अपरिपक्व चरणों में जल्दी विकसित की है, हालांकि यह एक महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं था (पी = 0.625). RStudio संस्करण 1.1.463 (आर कोर टीम 2016)33का उपयोग करके सांख्यिकीय विश्लेषण किए गए। मतलब वयस्क विंग तार लंबाई 12.64 मिमी(तालिका 2)थी, और लिंगों (पी = 0.047) के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर था। लिंगों के बीच विंग राग अंतर का मूल्यांकन करने के लिए दो तरफा टी-टेस्ट चलाया गया था । प्रत्येक जीवन चरण की औसत लंबाई के लिए रैखिक प्रतिगमन मॉडल और स्टेपवाइज प्रतिगमन से पता चला कि वयस्क विंग तार लंबाई(तालिका 3, तालिका 4)के लिए प्यूपल की लंबाई सबसे अच्छा कारक था। विकास के समय के लिए प्रतिगमन मॉडल से पता चला है कि दूसरे और चौथे इनस्टार्स में बिताए गए दिनों की संख्या और दिनों की कुल संख्या वयस्क विंग तार लंबाई के लिए सबसे अच्छा भविष्यवक्ताथे, लेकिन केवल चौथे इंस्टार में दिनों की संख्या महत्वपूर्ण थी(तालिका 5, तालिका 6)। क्योंकि चर निरंतर थे, प्रत्येक जीवन चरण के विकास के समय के साथ-साथ प्रत्येक जीवन चरण की लंबाई के लिए दो रैखिक प्रतिगमन मॉडल चलाए गए थे, जिसमें वयस्क पंख तार लंबाई निर्भर चर के रूप में थी। वयस्क विंग तार लंबाई के सर्वश्रेष्ठ भविष्यवक्ताओं का निर्धारण करने के लिए दोनों प्रतिगमन मॉडल पर स्टेपवाइज प्रतिगमन चलाए गए थे।

Supplementary Figure 1
अनुपूरक चित्र 1: वयस्क साइक्लरगुस थॉमसी बेथुनेबैकरीके पिन किए गए नमूने । (क)वयस्क पुरुष, पृष्ठीय (बाएं), वेंट्रल (दाएं)। (ख)वयस्क महिला, पृष्ठीय (बाएं), वेंट्रल (दाएं) । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Supplementary Figure 2
अनुपूरक चित्रा 2: तापमान नियंत्रित ग्रीनहाउस में रखे गए जांच उड़ान पिंजरे। (A)इंटीरियर कमरों का वयस्क अमृत पौधों और एक भी कमरों का लार्वा मेजबान संयंत्र से पता चलता है । (ख)धातु ठंडे बस्ते में डालने से कमरों के अमृत पौधों को ऊंचा करने में मदद मिलती है ताकि पिंजरे के आंतरिक शीर्ष से सबसे अधिक खिलने वाले फूलों तक 30 सेमी से अधिक जगह न हो । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Supplementary Figure 3
अनुपूरक चित्र 3: कोपुला में वयस्क जोड़े एकत्र करने की प्रक्रिया। (A)जांच की उड़ान पिंजरे (महिला, दाएं और पुरुष, बाएं) के अंदर वयस्क साइक्लरगुस थॉमसी बेथुनेबेकरी की संभोग जोड़ी। (ख)स्नैप कैप शीशियों में उड़ान पिंजरे से एकत्र किए गए संभोग जोड़े और प्रयोगशाला में लाए गए । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Supplementary Figure 4
अनुपूरक चित्र4: ओविपोजिशन चैंबर को कोडांतरण करने की प्रक्रिया। (A)टर्मिनल होस्ट सामग्री और कपास झाड़ू के साथ दो कप प्रणाली। (ख)पेपर कप में 1 मिलीलीटर उप-क्यू सिरिंज (0.45 मिमी x 16 मिमी) स्वाद वाले स्पोर्ट्स ड्रिंक सैचुरेटेड कॉटन झाड़ू के साथ। (ग)कप आवास gravid महिलाओं काले tulle के साथ सुरक्षित । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Supplementary Figure 5
अनुपूरक चित्र5: अंडा उत्पादन को अधिकतम करने के लिए प्रयोगशाला सेटअप। (A)40 डब्ल्यू गरमागरम बल्ब के साथ क्लैंप लाइट के नीचे प्रयोगशाला पीठ पर रखे गए ओविपोजिशन कक्ष। (ख)एक ट्रेस करने योग्य मेमोरी मॉनिटरिंग थर्मामीटर को रोशनी से सटा हुआ रखा गया है जिसमें तापमान सेंसर एक क्लैंप लाइट के तहत सीधे स्थित ओविपोजिशन चैंबर के शीर्ष पर आराम कर रहा है । (ग)एक 1 मिलीलीटर उप-क्यू सिरिंज और छोटे बीकर होल्डिंग फ्लेवर्ड स्पोर्ट्स ड्रिंक को ओविपोजिशन चैम्बर्स के निकट रखा गया है ताकि दिन भर में नियमित रूप से कपास झाड़ू को ताज़ा करने की सुविधा मिल सके । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Supplementary Figure 6
अनुपूरक चित्र6: लार्वा देखभाल और रखरखाव के लिए प्रयोगशाला सेटअप। (A)दो कप प्रणाली जिसमें प्रत्येक में ताजा टर्मिनल होस्ट सामग्री और लार्वा होता है। (ख)कपों में तापमान 40 डब्ल्यू गरमागरम बल्बों के साथ ओवरहेड क्लैंप लाइट्स द्वारा इष्टतम लार्वा गतिविधि और विकास के लिए 25 डिग्री सेल्सियस-28 डिग्री सेल्सियस के बीच बनाए रखा जाता है। (C)एक कप में सीधे रखे तापमान सेंसर के साथ थर्मामीटर की निगरानी करने वाली एक ट्रेस करने योग्य मेमोरी का उपयोग तापमान की निगरानी के लिए किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Supplementary Figure 7
अनुपूरक चित्र 7: तैयार पिल्ला कक्ष। (A)व्यक्तिगत प्लास्टिक भाग कप स्पष्ट प्लास्टिक कप ट्रे पर रखे । (ख)प्रत्येक प्लास्टिक भाग कप में एक नालीदार पेपर स्क्वायर रखा जाता है। (ग)प्रत्येक तैयार प्लास्टिक भाग कप में एक ही परिपक्व लार्वा रखा जाएगा ताकि प्यूपेड किया जा सके । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Supplementary Figure 8
अनुपूरक चित्र 8: पिल्ला और प्यूपल रखरखाव के लिए लार्वा तैयार करना। (क)प्रौढ़ लार्वा नालीदार कागज पर प्यूपेड करने के लिए तैयार है। यह एक समान सुस्त हरे-भूरे रंग का है और किसी भी धरण खो दिया है। (ख)भोजन लार्वा के साथ कप से सटे परिपक्व लार्वा प्राप्त करने के लिए तैयार पिल्ला कक्ष। ढक्कन घर लार्वा के साथ सभी प्यूपेशन कक्ष जो प्यूपकरने की तैयारी कर रहे हैं। (ग)प्यूपे के साथ प्यूपेशन चैंबर। (D)आज तक पुपे के साथ प्यूपेेशन कक्षों के बैंकों का आयोजन किया गया और प्रयोगशाला की परिस्थितियों में बनाए रखा गया । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Supplementary Figure 9
अनुपूरक चित्र 9: प्रयोगशाला उद्भव पिंजरे । (A)एक ढह जाल पॉप-अप पालन पिंजरे कब्जे वाले पिल्ला कक्षों आवास । (ख)सफल वयस्क एक्लोजन की सुविधा के लिए सभी प्यूपेशन कक्षों के ढक्कन हटा दिए जाते हैं । (ग)सफल मैथुन को सुरक्षित करने के लिए सभी परिणामी व्यवहार्य वयस्क तितलियों को जांच की गई उड़ान पिंजरे में छोड़ा जाएगा । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Supplementary Figure 10
अनुपूरक चित्र 10: वयस्क पुरुष तितली सफलतापूर्वक एक नालीदार कागज वर्ग पर पिल्ला से eclosing । (A)पिल्ला से वयस्क संलग्न। (ख)वयस्क पूरी तरह से पुपल आवरण से हटा दिया । (ग)वयस्क अपने पंखों का विस्तार करने के लिए तैनात। (D)वयस्क अपने पंखों का विस्तार। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Supplementary Figure 11
अनुपूरक चित्र 11: पांचवां इंस्टार लार्वा नॉनटॉक्सिक चमकीले रंग के साथ चिह्नित । (क)लार्वा को सफलतापूर्वक चिह्नित करने के लिए तूलिका का उपयोग करके डोरसम पर लाल, नॉनटॉक्सिक चमकीले रंग को विषम करने की एक छोटी सी बूंद रखी जाती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Supplementary Figure 12
अनुपूरक चित्र 12: जीवन इतिहास अध्ययन के लिए पालन सेट-अप । (A)विशिष्ट 2 औंस स्पष्ट प्लास्टिक भाग कप लेबल । (ख)प्रत्येक कप में एक भी लार्वा तनहा होता है । (ग)सभी लार्वा को नवजात से वयस्क तितली तक सभी विकासात्मक चरणों के माध्यम से व्यक्तिगत रूप से ट्रैक किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 1
चित्रा 1: एक चलने में, एक तापमान नियंत्रित ग्रीनहाउस में रखे उड़ान पिंजरे की जांच के भीतर तापमान (डिग्री सेल्सियस) के आधार पर कोपुला में दर्ज जोड़े की संख्या । तापमान एक सफल बांधना घटना (एन = 411) के पहले 2 मिनट के भीतर दर्ज किया गया था। जिसके परिणामस्वरूप डेटा को नियंत्रित पर्यावरणीय स्थितियों को परिष्कृत करने में मदद करने के लिए इस्तेमाल किया गया ताकि संभोग की सफलता और अंततः समग्र कैप्टिव प्रचार उत्पादकता को अधिकतम किया जा सके । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: प्रत्येक अपरिपक्व जीवन चरण का विकास समय (दिनों की संख्या) का मतलब है। (A)बार प्रत्येक समूह का मतलब दिखाते हैं, और त्रुटि सलाखों के प्रत्येक समूह के लिए ऊपरी और निचले मानक विचलन मूल्यों का प्रतिनिधित्व करते हैं । (ख)गहरे नीले रंग की सलाखों महिलाओं का प्रतिनिधित्व करते हैं, और हल्के नीले पुरुषों का प्रतिनिधित्व करते हैं । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3: जीवन इतिहास प्रोटोकॉल का उपयोग करके व्यक्तिगत #25 से एकत्र किए गए हेड कैप्सूल। हेड कैप्सूल जोनाथन ब्रेमर द्वारा ऑटोमोंटेज सिस्टम का उपयोग करके फोटो खिंचवाए गए थे। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

जीवन स्तर मतलब शरीर की लंबाई (मिमी) एसटीडी त्रुटि (लंबाई) मतलब विकास का समय (num. दिन) एसटीडी त्रुटि (देव समय)
इंस्टार मैं 1.69478261 (n=23) 0.02152643 2.90625 (n=32) 0.08229783
इंस्टार द्वितीय 2.77248958 (n=32) 0.04302826 3.375 (n=32) 0.16649857
इंस्टार III 5.45751042 (n=32) 0.12120829 3.5 (n=32) 0.20080483
इंस्टार चतुर्थ 10.2369688 (n=32) 0.23653991 3.875 (n=32) 0.18917265
इंस्टार वी 8.7625 (n=2) 2.6125 1.5 (n=2) 0.5
इंस्टार छठी 10.2666667 (n=1) ना 3 (n=1) ना
प्री-प्यूपा 11.0858333 (n=24) 0.23948251 2.9375 (n=32) 0.21504641
पिल्ला 9.0316129 (n=31) 0.12106792 11.6578947 (n=38) 0.3272288

तालिका 1: प्रत्येक जीवन चरण की लंबाई और विकास का समय मतलब है। मानक त्रुटि प्रत्येक चर के लिए शामिल है, और कोष्ठक में नमूना आकार ।

जीवन स्तर मतलब विंग तार लंबाई (मिमी) एसटीडी त्रुटि
वयस्क 12.63895 (n=38) 0.1365516
महिला 12.960 (n=13) 0.1465588
पुरुष 12.472 (n=25) 0.1863205

तालिका 2: वयस्क तितलियों के लिए विंग तार लंबाई का मतलब है। महिलाओं, पुरुषों और सभी वयस्कों (दोनों लिंगों संयुक्त) के लिए साधन शामिल हैं।

एलएम मॉडल 1 अनुमान की एसटीडी त्रुटि टी वैल्यू पी-वैल्यू
अवरोधन 1.9179 3.128 0.0046 **
औसत लंबाई दूसरा इंस्टार 0.6822 -1.11 0.278
औसत लंबाई तीसरा इंस्टार 0.2928 0.476 0.6381
औसत लंबाई चौथा इंस्टार 0.1373 -0.57 0.5739
औसत लंबाई पिल्ला 0.246 3.957 0.0005 ***
पी एंड एलटी; 0.001; ** पी एंड एलटी; 0.01; * पी एंड एलटी; 0.05।

तालिका 3: प्रत्येक जीवन चरण की औसत लंबाई (विश्लेषण में शामिल एन एंड जीटी; 30) और वयस्क विंग तार लंबाई के बीच संबंधों का मूल्यांकन करने के लिए रैखिक प्रतिगमन मॉडल (एलएम मॉडल 1) के लिए गुणांक तालिका। आश्रित चर: वयस्क विंग तार लंबाई (मिमी)।

गुणांक अनुमान की एसटीडी त्रुटि टी वैल्यू जनसंपर्क (>..t.)
अवरोधन 1.7091 3.031 0.0053 **
औसत लंबाई पिल्ला 0.1878 4.414 0.0002 ***

तालिका 4: स्टेपवाइज प्रतिगमन (स्टेपवाइज 1)। आश्रित चर: वयस्क विंग तार लंबाई (मिमी)।

एलएम मॉडल 2 अनुमान की एसटीडी त्रुटि टी वैल्यू पी-वैल्यू
अवरोधन 1.1888 12.643 4.21e-12 ***
Num. दिन पहले इंस्टार 0.3486 0.937 0.3583
Num. दिन दूसरा इंस्टार 0.2603 -0.686 0.4993
Num. दिन तीसरे इंस्टार 0.2281 1.028 0.3141
Num. दिन चौथे इंस्टार 0.2048 2.378 0.0257 *
Num. दिन पूर्व पिल्ले 0.222 1.133 0.2686
Num. दिन पिल्ले 0.2495 0.616 0.5435
कुल अंक दिन। 0.1913 -1.454 0.1589
पी एंड एलटी; 0.001; ** पी एंड एलटी; 0.01; * पी एंड एलटी; 0.05।

तालिका 5: विकास समय और वयस्क विंग तार लंबाई के बीच संबंधों का मूल्यांकन करने के लिए रैखिक प्रतिगमन मॉडल (एलएम मॉडल 2) के लिए गुणांक तालिका। आश्रित चर: वयस्क विंग तार लंबाई (मिमी)।

गुणांक अनुमान की एसटीडी त्रुटि टी वैल्यू पी-वैल्यू
अवरोधन 0.89304 16.314 7.86e-16 ***
Num. दिन दूसरा इंस्टार 0.17974 -1.809 0.0811
Num. दिन चौथे इंस्टार 0.16917 2.075 0.0473 *
कुल अंक दिन। 0.04184 -1.787 0.0848
पी एंड एलटी; 0.001; ** पी एंड एलटी; 0.01; * पी एंड एलटी; 0.05; पी एंड एलटी; 0.1

तालिका 6: विकास के समय के लिए स्टेपवाइज प्रतिगमन (स्टेपवाइज 2) । आश्रित चर: वयस्क विंग तार लंबाई (मिमी)।

Discussion

यहां, हम जोखिम वाली तितलियों के बड़े पैमाने पर उत्पादन के लिए इस सिद्ध पूर्व सीटू संरक्षण प्रजनन प्रोटोकॉल की प्रभावशीलता को दर्शाते हैं, और प्रमुख व्यवहार, जीवन इतिहास या पारिस्थितिक डेटा अंतराल को संबोधित करने में मदद करने के लिए इसे वैज्ञानिक अनुसंधान के लिए कैसे अनुकूलित किया जा सकता है। मतलब कुल विकास समय (वयस्क के लिए अंडा), प्रत्येक जीवन चरण में मतलब अवधि, और संभोग के लिए इष्टतम तापमान की समझ में वृद्धि, उदाहरण के लिए, प्रोटोकॉल को परिष्कृत करने और समग्र कार्यक्रम की सफलता को बढ़ाने में मदद करने के लिए इस्तेमाल किया गया । मौजूदा प्रोटोकॉल के विशाल बहुमत केवल जीव पशुपालन तरीकों का विस्तार और डेटा संग्रह, वैज्ञानिक अनुसंधान, या इस तरह के परिणामों के उपयोग पर चर्चा नहीं करने में मदद करने के लिए सूचित और संभावित पूर्व सीटू तरीकों अनुकूलित ।

इस प्रोटोकॉल के लिए दैनिक जीव पालन की आवश्यकता होती है। जीव स्वास्थ्य और उत्पादकता को स्वच्छ पालन की स्थिति, जीव भीड़ की कमी और उच्च गुणवत्ता वाले लार्वा मेजबान संयंत्र सामग्री की उपलब्धता से अधिकतम किया जाता है। अधिकांश भाग के लिए, हम डिस्पोजेबल पालन आपूर्ति और कंटेनरों (जैसे, कागज और प्लास्टिक कप) का उपयोग करते हैं, और आम तौर पर उन्हें नियमित रूप से बदलते हैं, अक्सर दैनिक, और सामग्री का पुन: उपयोग कभी नहीं। यह दोनों लागत प्रभावी है और सामग्री के अधिक श्रम-प्रधान स्वच्छता की आवश्यकता को कम करता है। आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले उपकरण, हालांकि, एंटोमोलॉजिकल संदंश, वॉटरकलर पेंट ब्रश, और छोटे पॉप-अप उड़ान पिंजरों, साथ ही टेबलटॉप और प्रयोगशाला बेंच टॉप जैसी सभी पालन सतहों को नियमित रूप से 5% ब्लीच समाधान का उपयोग करके साफ किया जाता है। स्वच्छता की सटीक अनुसूची उपयोग, जीव विज्ञान और अन्य चरों की आवृत्ति पर अत्यधिक निर्भर है, और प्रत्येक पूर्व सीटू कार्यक्रम की विशिष्ट आवश्यकताओं के अनुरूप होना चाहिए। हम इसके अतिरिक्त पाते हैं कि सफेद कसाई कागज सभी पालन सतहों को कवर करने के लिए उपयोगी है। यह एक सस्ती, आसानी से तैनात स्वच्छ सब्सट्रेट प्रदान करता है, और सफेद पृष्ठभूमि का रंग किसी भी आवारा जीवों के sighting की सुविधा प्रदान करता है। दैनिक पशुपालन के लिए, सभी प्रयोगशाला कर्मियों को हमेशा डिस्पोजेबल प्रयोगशाला परीक्षा दस्ताने पहनने के लिए संदूषण को कम करने और संयंत्र या जीव हैंडलिंग के परिणामस्वरूप किसी भी संभावित त्वचा जलन से कर्मियों की रक्षा करनी चाहिए । यह विशेष रूप से महत्वपूर्ण है यदि किसी प्रयोगशाला कर्मियों के पास घरेलू पालतू जानवर होते हैं जिनके लिए सामयिक पिस्सू उपचार की आवश्यकता होती है। यहां तक कि सक्रिय घटक अवशेषों की एक छोटी राशि कैप्टिव पशुधन के लिए खतरनाक हो सकती है।

इसके अतिरिक्त, जीव भीड़ को कम करने के लिए देखभाल की जानी चाहिए। लार्वा की भीड़ जल्दी से कुछ टैक्सा, विशेष रूप से Lycaenidae में कम जीव स्वास्थ्य और यहां तक कि नरभक्षी के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । नियमित रूप से लार्वा को अलग करने के लिए कंटेनरों पालन के भीतर संख्या को कम करने और/या यहां तक कि प्रोटोकॉल के जीवन इतिहास भाग में वर्णित व्यक्तिगत लार्वा को अलग करना आवश्यक हो सकता है । विशेष टैक्सन और उपलब्ध बजट, प्रयोगशाला सुविधाओं और पशुपालन कर्मियों की कुल संख्या जैसे विभिन्न पूर्व सीटू कार्यक्रम की बाधाओं के आधार पर प्रति कंटेनर आदर्श संख्या काफी भिन्न हो सकती है। हम इसी तरह कंटेनरों के बीच जीव आंदोलन की क्षमता को कम करने के लिए कप आवास लार्वा के बीच पर्याप्त जगह छोड़ने की सलाह देते हैं। अंत में, बड़ी कैप्टिव आबादी के लिए, एक या एक से अधिक प्रयोगशाला सुविधाओं के बीच स्टॉक को अलग करने की पुरजोर सिफारिश की जाती है। यह सुरक्षा रणनीति रोग या अन्य अप्रत्याशित प्रभावों के कारण पूरी आबादी के भयावह नुकसान को कम करने में मदद कर सकती है ।

लार्वा मेजबान संयंत्र की गुणवत्ता और उपलब्धता पशुधन उत्पादन को चलाती है और लार्वा विकास दरों और समग्र जनसंख्या स्वास्थ्य दोनों को दृढ़ता से प्रभावित करती है। बहरहाल, कुछ प्रकाशित रिपोर्ट या अध्ययन इस मंच के पीछे की आवश्यकता पर प्रकाश डाला या सबसे अच्छा नर्सरी प्रथाओं पर चर्चा की । सफल पूर्व सीटू कार्यक्रम योजना पर्याप्त संयंत्र मात्रा, उत्पादन, और रखरखाव के लिए खाते चाहिए। के रूप में कई लार्वा भी आवश्यकता है या कुछ पौधे भागों (जैसे, टर्मिनल नई वृद्धि, फूल कलियों और फूलों की चमक, फल, आदि) पसंद करते हैं, उचित पौधे विज्ञान सुनिश्चित करने के लिए प्रभावी मंचन की आवश्यकता है।

अतिरिक्त विचारों में उचित जनसांख्यिकीय और आनुवंशिक प्रबंधन, और कैद के किसी भी संभावित नकारात्मक प्रभावों को कम करना शामिल है। हम एक आनुवंशिक प्रबंधन योजना के विकास की सलाह देते हैं। इसमें नियमित आधार पर नई आनुवंशिक सामग्री के अर्क को शामिल करने, विविधता को अधिकतम करने और करीबी प्रजनन को रोकने, प्रमुख जीव फिटनेस चर का समय-समय पर मूल्यांकन करने और मौजूदा आबादी की तुलना करने और कैप्टिव स्टॉक स्वास्थ्य की जांच करने के लिए कुछ स्तरों पर आनुवंशिकी की निगरानी करने की रणनीतियां शामिल हो सकती हैं। कैप्टिव व्यक्तियों की संस्थापक आबादी के व्यक्तियों की विशेषताओं की आवधिक तुलना भी34,35की आवश्यकता है .

ये प्रोटोकॉल सिद्ध सर्वोत्तम प्रथाओं का प्रतिनिधित्व करते हैं। वे शोधकर्ताओं और संरक्षण चिकित्सकों की एक किस्म है कि सीधे लागू करने या अपने स्वयं के अध्ययन और पूर्व सीटू पर जोखिम तितली या कीट संरक्षण और वसूली कार्यक्रमों के लिए हमारे तरीकों के अनुकूल कर सकते है के लिए फायदेमंद होना चाहिए । विशिष्ट उल्लिखित कैप्टिव प्रजनन प्रोटोकॉल अन्य लाइकेनिडी, संबंधित टैक्सा, या छोटे आकार के टैक्सा पर केंद्रित कार्यक्रमों पर सबसे अधिक लागू होने की संभावना है। फिर भी, सफल प्रणय निवेदन और मैथुन, कृत्रिम अमृत के साथ वयस्क रखरखाव, ओविपोजिशन को अधिकतम करने और सामान्य लार्वा देखभाल को शामिल करने वाले कई घटकों को यकीनन अधिक मोटे तौर पर लागू किया जा सकता है या एक व्यापक सरणी के अनुकूल किया जा सकता है टैक्सा की। जैसा कि पहले उल्लेख किया गया है, जबकि प्रोटोकॉल लचीलेपन पर जोर दिया जाना चाहिए, अन्य स्थापित पद्धतियों तक पहुंच मूल्यवान अंतर्दृष्टि और अनुकूलन और नवाचार के लिए एक व्यवहार्य प्रस्थान बिंदु प्रदान करने में मदद कर सकती है । लार्वा विकास समय और लार्वा स्टेडियमों की संख्या जैसे विभिन्न जीवन इतिहास विशेषताओं का आकलन करने के लिए प्रस्तुत तरीकों में यकीनन अन्य संरक्षण प्रजनन कार्यक्रमों और जोखिम वाले टैक्सा के लिए व्यापक प्रयोज्यता है। हम दूसरों को संभव होने पर प्रमुख पारिस्थितिक डेटा अंतराल को संबोधित करने और पुनरीक्षित प्रोटोकॉल और कार्यक्रम परिणामों को प्रकाशित करने में मदद करने के लिए प्रोत्साहित करते हैं ।

Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस काम को अमेरिकी मछली और वन्यजीव सेवा के संरक्षण वसूली पहल (F17AP00467) और डिज्नी संरक्षण कोष से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था । फ्लोरिडा म्यूजियम ऑफ नेचुरल हिस्ट्री और फ्लोरिडा यूनिवर्सिटी में कीट विज्ञान और नेमेटोलॉजी विभाग द्वारा अतिरिक्त सहायता प्रदान की गई थी।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
12 oz plain white paper cups (Karat) Lollicup C-KC16
15-Amp 2-Outlet Mechanical Residential Plug-in Countdown Lighting Timer Lowes UTTNI2423
1ml sub-Q syringes (0.45 mm x 16 mm) Fisher Scientific 14-829-10F
2 oz clear plastic portion cup lids Party City #791091
2 oz Clear Plastic Portion Cups Party City #791088
34.29 cm x 34.29 cm x 60.96 cm collapsible mesh popup rearing cage Bioquip 1466BV
8.5" 1-Watt Incandescent Clamped Work Light Lowes PTC301L
Adoric Electronic Digital Caliper Amazon.com B07QX2SK2F
Big Kid's Choice Arts & Crafts Brush Set-12/Pkg, assorted sizes Walmart #10965135
Clear Plastic Cup Tray Frontier Scientific Services AG_9040
Fisher Scientific traceable memory monitoring thermometer Fisher Scientific 15-077-8D
Forceps, Straight Points, Swiss Style #4, Stainless BioQuip 4531
Humco Glycerin 6 oz Walmart #303951037966
Luminous Paint Kit, Blue, Red, Yellow, 4 Dram Bioquip 1166A
Melon flavored Gatorade Fierce Thirst Quencher or fruit punch flavored Gatorade Thirst Quencher sports drink Walmart #568456137
Neoteck Digital 2 in 1 Hygrometer-Thermometer Amazon.com NTK026
Olympus 0.6 ml Microtubes, Clear, Polypropylene, Nonsterile Amazon.com 24-272C
Plastic Tank Sprayer Lowes #5318
Q-tips Cotton swabs Walmart #551398298
Rectangular plastic tupperware container with lid (Rubbermaid) Walmart #554320171
Showgard 903 Stamp Tongs, 4 5/8 inch Spade Tip Amazon.com #787793151378
Single face corrugated paper roll Amazon.com BXSF12
Snap blade utility knife OLFA #5023
Solo 9 oz plastic cups Solo SQ950
Thorton Plastics 50 dram clear plastic snap cap vial (6.25 oz.) Thorton Plastics #50
Tulle Spool 9 inch x 150 feet - Black Jo Ann Fabrics #16029696
Zep 32 oz Plastic Spray Bottle Lowes HDPRO36

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