Демонстрация линейной взаимосвязи между сосудистым эндотелиальным фактором роста и лютеинизирующим гормоном в экстрактах коры почки

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Представлен протокол для использования корковой подготовки экстракта почки и полной нормализации белка, чтобы продемонстрировать корреляцию между сосудистым эндотелиальным фактором роста и лютеинизирующим гормоном в почках млекопитающих.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Muthusamy, A., Arivalagan, A., Movsas, T. Z. Demonstrating a Linear Relationship Between Vascular Endothelial Growth Factor and Luteinizing Hormone in Kidney Cortex Extracts. J. Vis. Exp. (155), e60785, doi:10.3791/60785 (2020).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF) помогает контролировать ангиогенез и проницаемость сосудов в почках. Почечные расстройства, такие как диабетическая нефропатия, связаны с дисрегуляцией VEGF в почках. Факторы, которые регулируют VEGF в физиологических условиях в почках, не очень хорошо поняты. Лютеинизирующий гормон (ЛГ), проангиогенный гормон, помогает регулировать физиологическое экспрессию VEGF в репродуктивных органах. Учитывая, что LH-рецепторы находятся в почках, мы, в научно-исследовательском институте Зичика, предположили здесь, что LH также помогает регулировать экспрессию VEGF в почках, а также. Чтобы представить доказательства, мы стремились показать, что уровни ЛГ способны предсказать уровень VEGF в почках млекопитающих. Большинство исследований, связанных с VEGF, связанных с почками, использовали млекопитающих более низкого порядка в качестве моделей (т.е. грызунов и кроликов). Чтобы перевести эту работу на человеческое тело, было решено изучить взаимосвязь между VEGF и LH в более высоком порядке млекопитающих (т.е. бычьих и свиных моделей). Этот протокол использует общий лизат белка из коры почек. Ключи к успеху этого метода включают закупку почек у скотобойни животных сразу после смерти, а также нормализацию уровня анализов (в экстракте почек) по общему белку. Это исследование успешно демонстрирует значительную линейную связь между LH и VEGF как в бычьих, так и в свиных почках. Результаты воспроизводимы в двух различных видах. Исследование предоставляет подтверждающие доказательства того, что использование экстрактов почек из коров и свиней являются отличным, экономичным и обильным ресурсом для изучения почечной физиологии, особенно для изучения корреляции между VEGF и другими анализами.

Introduction

Сосудистый эндотелиальный фактор роста А (VEGF-A), помогает регулировать ангиогенез и проницаемость сосудов в почках и других органах1,2 (далее, VEGF-A будет называться VEGF). Уровни VEGF в почках находятся под жестким гомеостатическим контролем. Когда почечные уровни VEGF повышены или подавлены, почка может выйти из строя. Например, в течение 3 недель после рождения у мышей с подоцит-специфической гетерозиготностью для VEGF развивается эндотелиоз и бескровные гломерули (т.е. поражения почек, наблюдаемые в преэклампсии человека), а конечная стадия почечной недостаточности возникает в этих гетерозиготах к 3 месяцам возраста. Подоцит-специфические гомозиготические нокауты умирают от гидропов и почечной недостаточности в течение 1 дня после рождения3,4.

С другой стороны, переэкспрессия почечной VEGF вызывает протеинурию и гломерулярную гипертрофию3,4. Например, трансгенные кролики, которые переэкспрессveve VEGF экспонат прогрессивной протеинурии с повышенной гломерулярной фильтрации ставки на ранних стадиях нефропатии, а затем снижение гломерулярной фильтрации ставки на более поздних стадиях3. Диабетическая нефропатия, основная причина почечной болезни конечной стадии у взрослых диабетиков, тесно связана с VEGF дисрегуляции2,5. Большое внимание было уделено роли гипоксии в индуцировании экспрессии VEGF при патологических условиях5. Тем не менее, факторы, регулирующие VEGF в физиологических условиях (как в почках и других органах) не очень хорошопонимали2,6. Выявление этих факторов (кроме кислорода), которые участвуют в физиологической и патологической регуляции VEGF является важным мероприятием.

Лютеинизирующий гормон (ЛГ), проангиогенный гормон, помогает регулировать физиологическое экспрессию VEGF в репродуктивных органах, таких как яичники и яички7,8. Предыдущие исследования показали, что LH также помогает регулировать VEGF в невоспроизводственных органов, таких как глаза6,9,10. LH-рецепторы находятся в медулле и коре почек11,12. Следует отметить, что почечные трубчатые эпителиальные клетки, а также lH-рецептор, выражают VEGF11,12,13,14. Принимая эти два наблюдения вместе, мы предположили, что LH также помогает регулировать экспрессию VEGF в почках13,14. Чтобы представить доказательства этой взаимосвязи LH/VEGF, представленный протокол призван показать, что уровни ЛГ способны предсказывать уровни VEGF в почках. Многие предыдущие исследования, связанные с VEGF, связанные с почками, использовали модели млекопитающих более низкого порядка (т.е. грызуны и кролики)2. Для перевода этой работы на человеческое тело, исследование рассматривает связь между VEGF и LH в более высоком порядке млекопитающих (здесь, бычьих и свиных моделей). Для достижения этой цели из области коры бычьего и свиного почек был приготовлен тотальный белковый лизат.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Для этого исследования не использовались живые или экспериментальные животные.

1. Обработка тканей

  1. Закупаем бычьи и свиные целые почки сразу после забоя из скотобойни. Транспортировка по льду в лабораторию.
  2. По прибытии в лабораторию промыть почки 50 мл ледяного фосфата буферного солья (PBS). Повторите этот шаг 2x, чтобы удалить кровь полностью.
  3. Храните почки на льду (или в холодильнике) до дальнейшей экстракции.

2. Рассечение почек

  1. Используйте стерильные ножницы, щипцы, нож и блюда Петри, чтобы вскрыть почки и подрезать необходимую часть ткани.
  2. Подготовьте буфер лиза РИПА до вскрытия почек. Растворите 5 мМ NaCl, 0.5 M EDTA, 1 M Tris (pH 8.0), NP-40 (ID - GEPAL CA-630), 10% дезоксихолят натрия и 10% SDS в двойной дистиллированной воде, затем тщательно перемешайте. Охладите буфер лиза RIPA, когда он не используется.
  3. Аккуратно разрежьте почку пополам (сагиттальная плоскость) и вырежьте кусок ткани (50-70 мм2)из области коры головного мозга в центре почки (весом 80-100 мг при влажном весе).
  4. Фарш ткани блок на мелкие кусочки с ножом, чтобы помочь процесс уговоренности.
  5. После измельчения тканей, перенесите их в микрофугую трубку с 1 мл ледяного 1x буфера извлечения лиза RIPA. Поместите трубки во льду до дальнейшей добычи.

3. Гомогенизация тканей

  1. Пометьте микрофуг-трубки конкретными деталями образца для сбора супернатантов тканей.
  2. Использование портативного гомогенизатора со стерильным зондом, а затем гомогенизировать ткани в течение 1-2 мин в холодных условиях (образцы на льду ведро) до тех пор, пока куски тканей не видны.
  3. Обязать тканевые экстракты сразу для центрифугирования в охлажденной центрифуге при 9600 х г в течение 5 мин при 4 градусах Цельсия.
  4. Удалите трубки из центрифуги и поместите их на ведро со льдом.
  5. Соберите супернатант в новую помеченную микрофугую трубку и храните на льду. Отбросьте гранулы.
  6. Подготовьте отдельные аликвоты супернациантов для LH и VEGF-A, связанных с ферментами иммуносорбентных анализов (ELISA) и тотального анализа белка, соответственно, чтобы избежать циклов замораживания-оттепели.

4. Бовин и свинина LH ELISA Ассей

  1. Храните все компоненты анализа ELISA, включенные в коммерчески доступный лютеинизирующий гормон (LH) ELISA (см. Таблицу Материалов) при 2-8 градусах По Цельсию. Это включает в себя антитела, HRP-конъюгированная, ассса пластина (96 хорошо), калибраторы, мыть буфер (20x концентрат), субстрат А, субстрат B, и стоп-решение. Подготовьте все реагенты в соответствии с инструкциями производителя.
  2. Перед началом асссе доведите все реагенты и пластины для комнатной температуры (RT). Используйте необходимое количество скважин для проведения асссея, уплотнения и держите неиспользованные скважины при 4 градусах Цельсия до использования.
  3. Разбавить буфер для мытья (15 мл 20-х концентрата) до 300 мл с двойной дистиллированной водой
  4. Настройка пустых скважин без какого-либо решения.
  5. Добавьте 50 qL стандарта или образца к каждому колодцу (n no 2), затем добавьте еще 50 евро пероксидазы хрена (hrp)-спрягивайте к каждой скважине. Немедленно добавьте еще 50 л антител раствора для каждого хорошо. Печать пластины, хорошо перемешать, и инкубировать в течение 1 ч при 37 градусов по Цельсию.
  6. Вымойте скважины с 1x мыть буфер (200 л/хорошо) и повторить 4x.
  7. Добавьте 50 кЛ субстрата А и 50 л субстрата B к каждой скважине и хорошо перемешайте, осторожно нажав на тарелку. Печать пластины и инкубировать в течение 15 минут при 37 градусов по Цельсию в темноте в течение 15 минут.
  8. Добавьте 50 qL стоп-решения к каждому колодцу, аккуратно коснитесь пластины и прочитайте пластину с помощью спектрофотометра, установленного на длину волны 450 нм.
  9. Нормализуйте уровни крупного рогатого скота и свинины LH до общего белка (см. раздел 6).

5. Бовин и свинина VEGF-A ELISA Анализа

  1. Храните все компоненты анализа ELISA, включенные в коммерчески доступные комплекты Vascular Endothelial Growth Factor-A ELISA (см. Таблица материалов)при 2-8 градусах по Цельсию. Это включает в себя антитела, HRP-конъюгированная, ассса пластина (96 хорошо), калибраторы, мыть буфер (20x концентрат), субстрат А, субстрат B, и стоп-решение. Подготовьте все реагенты в соответствии с инструкциями производителя.
  2. Перед началом асссе, принести все реагенты и ассси пластины RT. Используйте необходимое количество скважин для проведения, печать, и держать неиспользованные скважины на 4 градусов по Цельсию до использования.
  3. Разбавить буфер для мытья (15 мл 20-х концентрата) до 300 мл с двойной дистиллированной водой
  4. Добавьте 100 qL стандарта или образца к каждому колодцу (n no 2). Печать пластины, хорошо перемешать, и инкубировать в течение 2 ч при 37 градусов по Цельсию.
  5. Снимите жидкость в каждой скважине и добавьте 100 qL реагента обнаружения А к каждой скважине, запечатайте тарелку и инкубируйте по 1 ч при 37 градусах Цельсия.
  6. Вымойте скважины с 1x мыть буфер (400 л/хорошо) и повторить 4x.
  7. Добавьте 100 зл и зол обнаружения реагента B к каждой скважине и хорошо перемешайте, осторожно нажав на тарелку на стороне. Печать пластины и инкубировать пластину в течение 1 ч при 37 градусов по Цельсию.
  8. Вымойте скважины с 1x мыть буфер (400 л/хорошо) и повторить 4x.
  9. Добавьте в каждый колодец 90 кл.л. субстратного раствора, аккуратно коснитесь тарелки и инкубируйте 1 ч при 37 градусах Цельсия.
  10. Добавьте 50 qL стоп-решения к каждому колодцу, аккуратно коснитесь пластины и прочитайте пластину с помощью спектрофотометра, установленного на длину волны 450 нм.
  11. Нормализация уровня крупного рогатого скота и свинины VEGF-A до общего белка (раздел 6).

6. Общая оценка белка

  1. Оцените общий объем белка бычьего и свиного почек экстракты стандартным сывороточных альбумина крупного рогатого скота (BSA) анализ с помощью коммерческого комплекта (см. Таблица материалов) в соответствии с рекомендациями производителя.

7. Статистический анализ

  1. Рассчитайте среднее, среднее и стандартное отклонение каждого из них.
  2. Проверьте дивергенцию распределения образцов от нормального использования теста Колмогорова-Смирнова, чтобы принять решение, при использовании, между параметрическим против. непараметрические статистические тесты. Если данные обычно распределены, то выполните статистическое тестирование с помощью параметрических тестов.
  3. При соответствующих обстоятельствах (таких, как обычное распределение данных) используйте регрессионные модели для изучения линейных отношений между LH и VEGF-A.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Средние и средние уровни LH и VEGF по типу животных и по полу показаны в таблице 1. После проверки нормальности данных Колмогорова-Смирнова тестирование нормальности, линейные регрессионные модели были использованы для изучения взаимосвязи между LH и VEGF. Было установлено, что LH является сильным и значительным предиктором VEGF как в бычьих, так и в свиных почках (модель почек бычи: n No 7, R2 и 0,86, р 0,002; модель свиных почек: n no 7; R2 и 0,66, р 0,025).

Линейные отношения LH/VEGF иллюстрируются на рисунке 1 (модель регрессии крупного рогатого скота) и на рисунке 2 (модель регрессии свиней). Линейное уравнение крупного рогатого скота таково: уровень VEGF 2,156 х LH уровень 68,75. Свиное линейное уравнение таково: уровень VEGF - 196,7 х LH- уровни 47,94.

Тип образца Мужчин Женщин Все
Почки крупного рогатого скота n No 4 n No 3 n No 7
LH (mIU/mg общий белок) Средние значения: 27.47 (SD 13.3) Средние значения: 19.5 (SD 2.1) Средние значения: 24.06 (SD 10.8)
Средний ум: 25,7 Средний ум: 19.9 Средний ум: 19.9
VEGF (гг/мг общего белка) Средние значения: 126.2 (SD 25.8) Средние значения: 106.0 (SD 14.5) Средние значения: 120,6 (SD 25.1)
Средний ум: 131,6 Средний ум: 103.5 Средний ум: 110.8
Свиные почки n No 4 n No 3 n No 7
LH (mIU/mg общий белок) Средние значения: 13,2 (SD 3.6) Средние значения: 12,3 (SD 5.5) Средние значения: 12,8 (SD 4.5)
Средний ум: 13,6 Средний ум: 10.3 Средний ум: 11,2
VEGF (гг/мг общего белка) Средние значения: 2987.2 (SD 772.5) Средние значения: 2354.1 (SD 932.4) Средние значения: 2715.9 (SD 901.0)
Средний унасис: 3324.67 Средний унасицена: 2377,3 Средний ум: 3226.4

Таблица 1: Средние и средние уровни LH и VEGF по типу животных и полу.

Figure 1
Рисунок 1: Линейные отношения LH/VEGF во взрослых почках крупного рогатого скота (n No 7). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Figure 2
Рисунок 2: Линейные отношения LH/VEGF во взрослых свиных почках (n No 7). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Приобретение почек из скотобойни сразу после смерти животного является ключом к успеху в этой методологии. Это главное преимущество использования органов коров и свиней вместо человеческих трупов. Существует, как правило, по крайней мере 12-24 ч задержки с момента смерти, пока человеческие органы трупа закуплены. Потому что химический состав органов тела значительно изменяется в течение 2 чпосмертно15,16, VEGF-исследования в человеческих трупных почек не может отражать реальные обстоятельства. Хотя протокол подчеркивает важность немедленного приобретения и размещения органов животных на льду после извлечения, неизвестно, если другие исследователи также приоритеты этого шага. Например, в методологическом разделе недавнего исследования (использование бычьих и свиных почек для обнаружения остатков антибиотиков) не указывается задержка времени между гибелью животных и закупкой/охлаждением органов17.

Это исследование измеряет прогнозы, представляющие интерес (VEGF и LH) с коммерчески доступными, специфическими для видов ELISA. ELISAs очень чувствительны, просты для выполнения анализов с, и дают надежные результаты18. Важным шагом в протоколе является нормализация (ELISA-измеряется) анализ уровня общего белка. Экстракт корковой почки является очень разнородным биологическим веществом. В свете этого, фактор коррекции имеет важное значение, так что уровень аналита можно сравнить между животными. Таким образом, нормализуется общим белком было выполнено, так как мы и другие успешно нормализовали другие неоднородные биологические вещества (т.е. моча, высушенные пятна крови, и стекловидное жидкость) таким же образом9,19,20.

Предыдущее исследование показало, что корреляция между LH и VEGF в стекловидной жидкости (из бычьего и свиного глаза) проявляется только после нормализации общим белком6. Важно отметить, что этот шаг нормализации часто опускается в опубликованных исследованиях VEGF, особенно в тех, которые связаны с анализами ELISA. Вместо этого уровни VEGF часто выражаются в единицах, таких как пикограмма на миллилитр (а не как пикограмма на миллиграмм общего белка). Например, ни одно из стекловидного VEGF измерений в девяти различных исследованиях ELISA (которые были включены в стекловидное VEGF обзор статьи) были нормализованы любым методом коррекции21,22. Отсутствие нормализации VEGF в исследованиях ELISA может частично объяснить, почему VEGF еще не был проверен как действительный биомаркер21,22.

Несмотря на ограниченный размер выборки репрезентативных данных (bovine, n no 7; свиной, n no 7), этот протокол демонстрирует сильную и значительную линейную связь между LH и VEGF как в бычьих, так и в свиных почках. Тем не менее, не было достаточно большого размера выборки для проведения многовариантных анализов с поправкой на пол. Мы планируем повторить это исследование с большими размерами выборки, чтобы такие анализы могли быть выполнены. Тем не менее, представленные результаты поддерживают потенциальную связь между LH и VEGF в почках млекопитающих.

Ожидается, что эта работа будет способствовать дальнейшему пониманию гомеостатической регуляции VEGF в почках. Как качество этой методологии, так и надежность полученных результатов иллюстрируются воспроизводимостью результатов у двух различных видов. Поскольку животные, предназначенные для производства мяса, здоровы, использование экстрактов почек из скотобойни животных в первую очередь для изучения физиологии; однако, их органы менее полезны для изучения патологии, которая является основным ограничением их использования. В целом, использование почечных экстрактов из коров и свиней являются отличным, экономичным и обильным ресурсом для изучения нормальных взрослых почек. Наконец, протокол демонстрирует эффективность использования общего белка для нормализации, особенно при изучении корреляций между VEGF и другими анализами.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Научно-исследовательский институт Зитчик (ЗРИ) является частным (некоммерческим) научно-исследовательским институтом, а д-р Тэмми Мовсас (основатель и директор ЗРИ) имеет ожидающие патентных заявок и проверенные патенты на использование антагонистов гонадотропина в лечении глазных заболеваний и диабета. Помимо того, что он является сотрудником (биохимиком) в компании «ЗРИ», у д-ра А. Мутузами нет других финансовых конфликтов. А. Arivalagan (летний стажер в ЗРИ, студент Мичиганского университета) не имеет других финансовых конфликтов, чтобы сообщить.

Acknowledgments

Авторы благодарят Бойню Шолля (Blissfield, MI) за предоставление бычьих и свиных почек. Для этого исследования не было использовано грантового финансирования.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bovine LH ELISA Kit MyBiosource, San Diego, CA. MBS700951
Bovine VEGF-A ELISA Kit MyBiosource, San Diego, CA. MBS2887434
Micro BCA Protein Assay Kit ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. 23235
Porcine LH ELISA Kit MyBiosource, San Diego, CA. MBS009739
Porcine VEGF-A ELISA Ray Biotech, Norcross, GA. ELP-VEGFA-1
RIPA Lysis and Extraction Buffer ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. 89901

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Advani, A., et al. Role of VEGF in maintaining renal structure and function under normotensive and hypertensive conditions. Proceedings of the National Academy of Science U. S. A. 104, (36), 14448-14453 (2007).
  2. Majumder, S., Advani, A. VEGF and the diabetic kidney: More than too much of a good thing. Journal of Diabetes and its Complications. 31, (1), 273-279 (2017).
  3. Liu, E., et al. Increased expression of vascular endothelial growth factor in kidney leads to progressive impairment of glomerular functions. Journal of the American Society of Nephrology. 18, (7), 2094-2104 (2007).
  4. Eremina, V., et al. Glomerular-specific alterations of VEGF-A expression lead to distinct congenital and acquired renal diseases. Journal of Clinical Investigation. 111, (5), 707-716 (2003).
  5. Ferrara, N. Vascular endothelial growth factor: basic science and clinical progress. Endocrine Reviews. 25, (4), 581-611 (2004).
  6. Movsas, T. Z., Sigler, R., Muthusamy, A. Vitreous Levels of Luteinizing Hormone and VEGF are Strongly Correlated in Healthy Mammalian Eyes. Current Eye Research. 43, (8), 1041-1044 (2018).
  7. Babitha, V., et al. Luteinizing hormone, insulin like growth factor-1, and epidermal growth factor stimulate vascular endothelial growth factor production in cultured bubaline granulosa cells. General and Comparative Endocrinology. 198, 1-12 (2014).
  8. Trau, H. A., Davis, J. S., Duffy, D. M. Angiogenesis in the Primate Ovulatory Follicle Is Stimulated by Luteinizing Hormone via Prostaglandin E2. Biology of Reproduction. 92, (1), 15 (2015).
  9. Movsas, T. Z., et al. Confirmation of Luteinizing Hormone (LH) in Living Human Vitreous and the Effect of LH Receptor Reduction on Murine Electroretinogram. Neuroscience. 385, 1-10 (2018).
  10. Movsas, T. Z., Sigler, R., Muthusamy, A. Elimination of Signaling by the Luteinizing Hormone Receptor Reduces Ocular VEGF and Retinal Vascularization during Mouse Eye Development. Current Eye Research. 43, (10), 1286-1289 (2018).
  11. Hipkin, R. W., Sanchez-Yague, J., Ascoli, M. Identification and characterization of a luteinizing hormone/chorionic gonadotropin (LH/CG) receptor precursor in a human kidney cell line stably transfected with the rat luteal LH/CG receptor complementary DNA. Molecular Endocrinology. 6, (12), 2210-2218 (1992).
  12. Lei, Z. M., et al. Targeted disruption of luteinizing hormone/human chorionic gonadotropin receptor gene. Molecular Endocrinology. 15, (1), 184-200 (2001).
  13. Schrijvers, B. F., Flyvbjerg, A., De Vriese, A. S. The role of vascular endothelial growth factor (VEGF) in renal pathophysiology. Kidney International. 65, (6), 2003-2017 (2004).
  14. Apaja, P. M., Aatsinki, J. T., Rajaniemim, H. J., Petaja-Repo, U. E. Expression of the mature luteinizing hormone receptor in rodent urogenital and adrenal tissues is developmentally regulated at a posttranslational level. Endocrinology. 146, (8), 3224-3232 (2005).
  15. Ondruschka, B., et al. Post-mortem in situ stability of serum markers of cerebral damage and acute phase response. International Journal of Legal Medicine. 133, (3), 871-881 (2019).
  16. Swain, R., et al. Estimation of post-mortem interval: A comparison between cerebrospinal fluid and vitreous humour chemistry. Journal of Forensic and Legal Medicine. 36, 144-148 (2015).
  17. Thompson, C. S., Traynor, I. M., Fodey, T. L., Faulkner, D. V., Crooks, S. R. H. Screening method for the detection of residues of amphenicol antibiotics in bovine, ovine and porcine kidney by optical biosensor. Talanta. 172, 120-125 (2017).
  18. Konstantinou, G. N. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Methods in Molecular Biology. 1592, 79-94 (2017).
  19. Levesque, B. M., et al. Low urine vascular endothelial growth factor levels are associated with mechanical ventilation, bronchopulmonary dysplasia and retinopathy of prematurity. Neonatology. 104, (1), 56-64 (2013).
  20. Leviton, A., et al. Antecedents and early correlates of high and low concentrations of angiogenic proteins in extremely preterm newborns. Clinica Chimica Acta. 471, 1-5 (2017).
  21. Simo-Servat, O., Hernandez, C., Simo, R. Usefulness of the vitreous fluid analysis in the translational research of diabetic retinopathy. Mediators of Inflammation. 872978 (2012).
  22. Sharma, R. K., Rowe-Rendleman, C. L. Validation of molecular and genomic biomarkers of retinal drug efficacy: use of ocular fluid sampling to evaluate VEGF. Neurochemical Research. 36, (4), 655-667 (2011).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics