Трансплантация кожи мышей

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Аллогенная пересадка кожи является стандартной модели для анализа хост Т-клеток ответы на MHC-антигенов разных доноров. Это видео-статья предусматривает визуальный учебник каждого шага, участвующих в выполнении BALB/c--> C57BL / 6 кожи трансплантации.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Как один из самых строгих и наименее технически сложных моделей, пересадки кожи является стандартным методом для анализа хост Т-клеток ответы на MHC-антигенов разрозненных донора. Целью этого видео-статья является предоставление зрителю шаг за шагом, наглядной демонстрации пересадки кожи с помощью мыши модели. Протокол состоит из 5 основных компонентов: 1) заготовка донорской кожи, 2) подготовка получателя для трансплантации, 3) пересадка кожи, 4) снятие повязки и отторжение трансплантата мониторинга, 5) полезные советы. Как только опытными, сама процедура должна занять <10 мин для выполнения.

Protocol

До начала эксперимента:

  • Получить одобрение IACUC
  • Стерилизовать хирургических инструментов и Q-советы

И. Урожай донорской ткани

  1. Эвтаназии доноров мыши (в соответствии с SOP учреждения)
  2. Влажные волосы назад от основания уха с алкоголем
  3. Урожай донорской кожи, сокращая ухо у основания
  4. Место ткани в пластину на льду
  5. Сплит ухо: щепотку брюшной и спинной сторонах ткани у основания уха с крысами зуб щипцами, осторожно потяните за исключением тканей; плавать спинной ткани внутренней поверхности вниз, в ФСБ на льду; отказаться коллагеновых вентральной лоскут

II. Подготовка получателей для трансплантации

  1. Анестезию мыши с использованием утвержденных процедур
  2. Администрирование анальгетик для послеоперационной боли (например, 0,05-0,1 мг / г Bupernex ф)
  3. Наведите в боковом положении
  4. Выполните палец щепотку обеспечить животному достаточно седативные
  5. Мокрые волосы с алкоголем и бриться грудной клетки
  6. Протрите место в чистоте с тампоном, смоченным спиртом

III. Кожа трансплантации

  1. Сделать ~ 1 см разрез: палатка кожу крыс зуб щипцами и сократить ~ 0,25-0,5 см ниже щипцы
  2. Удалить донорской кожи от PBS, место на вершине трансплантата кровать (с внутренней поверхности уха кожи перед трансплантата кровать), и удалить избыток PBS стерильным Q-Tip
  3. Аккуратно обрежьте избыток кожи донора, так что пересадка лежит прямо в постели трансплантата (убедившись, что трансплантат края не свернулся под и, что трансплантат не похмелье на стволе кожи получателя)
  4. Оберните получателя в стерильную повязку (с неклейкой марли сегмент располагается над кожного лоскута)
  5. Убедитесь, что повязка не слишком плотно (оценка дыхания животного), а руки свободно мобильных
  6. Безопасные повязку с одного шва 2-0 шелковые
  7. Место животных в чистой клетке (при нагревании лампы пока животное достаточно оправилась от наркоза)
  8. Монитор получателя 1-2/day признаки дистресса и администрировать болеутоляющее при необходимости для облегчения боли

IV. Бинты удаления (6-7 дней после трансплантации)

  1. Анестезию мыши с использованием утвержденных процедур
  2. Вырезать и удалить шелковых шва
  3. Использование тупыми ножницами конца, аккуратно разрезать бинт (убедитесь, чтобы не нарушать трансплантата) и осторожно удалите
  4. Вернуться мышь чистить клетку
  5. Проверьте трансплантата ~ 8 часов после удаления повязки на наличие признаков струпьев или сокращения. Если присутствует, взяточничество, возможно, не удалось vascularize и должны рассматриваться как техническая неисправность.
  6. Монитор ежедневно на наличие признаков отторжения (как правило, определяется как ~ 80% некроз тканей донора)
  7. Аллогенных трансплантатов кожи, как правило, отвергают между d8-12 послеоперационной

В. Полезные советы

  1. Сбор донорской ткани близко к основанию уха будет: 1) максимального размера трансплантата, и 2) обеспечивают неравномерное вентральной навес, который будет способствовать расщеплению
  2. Всегда используйте новые лезвия для бритья получателя
  3. Если обезболивающее должно быть уделено IP, администрирование до пересадки процедура для минимизации послеоперационной обработки (минимизировать возможность срыва трансплантата)
  4. Если возможно, снимите перчатки перед применением повязку. Перчатки имеют тенденцию придерживаться повязку и осложнить применение
  5. Размещение одного шва на конец бинта позволит свести к минимуму досрочном освобождении
  6. Оберните бинт туго, как разрешается и оценить дыхание перед размещением шва. Если повязка слишком туго, животное остановится дыхание. Если повязка слишком свободно, животное будет его удалить.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Как показано в этом видео-статьи, модель кожи пересадка быстрый и простой метод для мониторинга аллогенных Т-клеточной реакции. Аллогенная пересадка кожи имеет широкий спектр применения и была использована для анализа эффективности различных иммуносупрессивных препаратов и терпимости индукции протоколов, а также для исследования биологических эффектов различных блокирующих антител.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

NIH иммунологии Обучение Грант T32 А.И. 60573 (КРП) и NIH грант GM 41514 (MDC)

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro-dissecting forceps (curved) Sigma-Aldrich F4142
Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) Fine Science Tools 11053-10 n=2
Strabismus scissors (blunt end) Fine Science Tools 14074-11
Iris forceps (curved) Fine Science Tools 11065-07
Spring scissors (angled) Fine Science Tools 15006-09
Halsey micro needle holder Fine Science Tools 12500-12
10 cm plates Corning 430167
PBS Cellgro 21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) Reckitt Benckiser 517201
Insulin syringes (29 Ga) Monoject 8881 600145
Q-tips Solon Manufacturing Company 362
Single edge razor blades (#9) Smith & Nephew Inc. 67-0238
Silk suture (2-0; PS-2) Ethicon Inc. 583H

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Comments

20 Comments

  1. Kym, I would really be interested to see a histologic profile of the post-op period - do you have the respective images?
    Thank you in advance,
    Peter

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 4:34 PM
  2. Dear Peter- Thanks for the great suggestion. I've contacted JoVE to see if a section can be added to the article containing histo pics from allo- and syn- transplants.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 7:33 PM
  3. The connecting speed is too slow, it spends loog time to watch the whole video. Can we download the video?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 9:35 AM
  4. Hi Merlin. I am sorry you are having trouble.  Is it your connection that is slow or ours?  Please use www.speedtest.net to test your connection.  If the problem is on your end, we are now working on a solution to help people with slow connections.  If you would like to discuss this, please send me an email directly to support@jove.com and I'll see what may be the problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 11:09 AM
  5. Hi,nikitab. Thank your help. I am from China, I test my connection, the connection is slow from USA to my city. could you tell me how to fix this problem?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:04 PM
  6. If you click the pause pause/play button, the video will buffer and you should be able to play it without interruptions after some time.  Hope tihs helps!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:21 PM
  7. Merin, just wanted to let you know that we've upgraded the video player.  How are the videos playing now?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 15, 2008 - 6:34 PM
  8.  wow ive learned alot from this can you tell me more about this? is it different from human skin transplants? there is alot going on with stem cell, is this simular, this is intresting, would this maby help people that have bad skin burns?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:16 PM
  9. hello this is interesting, is this simular to human skin transplants? dŒs this help people with bad skin burns?  theres alot going on with stem cell research is this simular? i have learned alot from this vidio, i wait for your answers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:32 PM
  10. Hi, Kym, I learn the technique of ear-skin graftting through the video. Well, in the articles about skin graft in mice, most of them just use the method of back-back or tail-back skin transplantation. And do you provide some articles about ear-back skin graft to me? Thank you very much.
    cai

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 9, 2009 - 7:37 PM
  11. beautiful video. we use a similar technique at the Diamantina Institute, but I got some handy hints watching your technique. thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 5, 2009 - 1:41 AM
  12. Are donor and recipient mice females or males?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 24, 2009 - 12:54 PM
  13. Hi Kym. I was wondering if you or your colleges transplant embryonic skin that way, or if there has to be special protocol for that?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 21, 2010 - 4:29 PM
  14. Hi Kim,
    we do skin grafts and we have problems with the bandage. I use band-aids (the ones sold in the regular pharmacy for cuts and bruises) and mice chew them off as soon as they weak up from anesthesia. I do not see in your materials list what kind of bandage you use. Would you please tell me where do you buy it and the catalog number? I would really appreciate.
    best regards
    sg

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 28, 2010 - 3:03 PM
  15. why i can't see it? is it because the subscription lock? Our school don't have this database. How can i see it ? is it mean that that i need to buy it ?

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 16, 2011 - 8:02 AM
  16. Access to this article is only available through an institutional subscription. Please contact your Librarian and include me on cc, and we will arrange a ² weeks FREE trial to the entire institution. Not only will this give you access to this article but will provide you with the opportunity to access other content.

    I hope this helps bridge the gap a little and I look forward to speaking with you soon.

    Best wishes,

    Ward Parry
    Director of Library Relations
    Journal of Visualized Experiments (JoVE)
    48 Grove Street, Suite 305, Somerville, MA 0²144
    T. 617.996.9161
    E. ward.parry@jove.com

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 16, 2011 - 6:40 PM
  17. I am very sorry that i reply so late. At first, i try to contact you through email, but it was rejected by the recipient domain.
    I am from China and our school librarian didn't have this service now, so i only to contact you, and thank you to arrange a free trial for me. Please tell me what should i do to apply the free trial, you can send the details to me. If i can't receive your email. i will post message on jove.thank you again.
    Best wishes
    jin liu
    Chengdu, China. Chengdu medical college
    Sichuan Province, Chengdu Chengdu City Jinniu District Road No. 601

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 19, 2011 - 9:37 PM
  18. Dear Jin,
    I have forwarded your response to our account manager in China. She will be in touch in due course. Thank you for your interest in JoVE.

    Best,
    Ward

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 20, 2011 - 12:14 PM
  19. thank you!

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 21, 2011 - 9:37 AM
  20. Hi,Kym, I am doing mouse ear skin grafts recently, I want to ask did mice ear cartilage layer, in the video is the inner or outer ear skin transplantation.Thank you very much!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 14, 2017 - 4:17 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics