Murine Hauttransplantation

Biology

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Summary

Allogene Hauttransplantation ist ein Standard-Modell zum Testen Host T-Zell-Antworten auf MHC-disparate Spender-Antigene. Dieses Video-Artikel bietet eine visuelle Anleitung für jeden Schritt bei der Durchführung einer BALB/c--> C57BL / 6 Hauttransplantat beteiligt.

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Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).

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Abstract

Als einer der härtesten und am wenigsten technisch anspruchsvollen Modellen ist Hauttransplantation eine standardisierte Methode, um Test-Host T-Zell-Antworten auf MHC-disparate Spender-Antigene. Das Ziel dieses Video-Artikels ist es, den Betrachter mit einer Schritt-für-Schritt-visuelle Demonstration der Hauttransplantation am Mausmodell liefern. ; 2) vorzubereiten Empfänger für die Transplantation, 3) Hauttransplantat; 4) Bandage entfernt und Überwachung Abstoßung des Transplantats; 5) hilfreiche Hinweise 1) Ernte Spenderhaut: Das Protokoll ist in 5 Hauptkomponenten unterteilt. Sobald beherrschen, sollte das Verfahren selbst zu nehmen <10 min zu erfüllen.

Protocol

Vor Beginn des Experiments:

  • Erhalten IACUC Genehmigung
  • Sterilisieren Instrumente und Q-Tipps

I. Ernte Spendergewebe

  1. Euthanize Spender Maus (in Übereinstimmung mit Institution SOP)
  2. Nasses Haar zurück von der Basis des Ohres mit Alkohol
  3. Ernte Spenderhaut indem Ohr ab an der Basis
  4. Legen Gewebe in der Platte auf Eis
  5. Split Ohr: pinch ventralen und dorsalen Seiten des Gewebes an der Basis der Ohren mit Ratten-Zahn-Zange; vorsichtig auseinander ziehen Gewebe; float dorsal Gewebe, innere Oberfläche nach unten, in PBS auf Eis; verwerfen kollagenen ventralen Klappe

II. Bereiten Empfänger für Transplant

  1. Anesthetize Maus mit zugelassenen Verfahren
  2. Verwalten für post-op Schmerzlinderung (dh 0.05-0.1 mg / g Bupernex ip) analgetische
  3. Bewegen Sie die Maus in Seitenlage
  4. Führen Zeh kneifen, um zu gewährleisten, Tier ausreichend sediert
  5. Nasses Haar mit Alkohol und rasieren Thorax
  6. Wischen Sie den Bereich zu säubern mit Alkoholtupfer

III. Hauttransplantat

  1. Machen Sie ~ 1 cm Schnitt: Zelthaut mit Ratten-Zahn-Pinzette und schneiden ~ 0,25-0,5 cm unterhalb Zange
  2. Entfernen Spenderhaut von PBS, Platz oben auf graft Bett (mit inneren Oberfläche der Ohren Haut nach graft Bett), und entfernen Sie überschüssiges PBS mit einem sterilen Wattestäbchen
  3. Sorgfältig entfernt trim überschüssiger Haut, so dass Spender Transplantation liegt flach im Transplantat Bett (um sicherzustellen, dass Transplantat Kanten nicht unter eingerollt und das Transplantat nicht Kater auf Empfängers Stamm Haut)
  4. Wrap Empfänger in sterilen Verband (mit der nicht klebenden Gaze-Segment über die Hauttransplantation platziert)
  5. Stellen Sie sicher, dass Bandage ist nicht zu eng (zu beurteilen Tieres Atmung) und dass die Arme frei beweglich sind
  6. Sichere Bandage mit einem 2-0 Seidenfaden
  7. Tier in den Käfig sauber (unter Wärmelampe bis Tier hat genügend aus der Narkose erholt)
  8. Monitor-Empfänger 1-2/day für Anzeichen von Leiden und verwalten analgetische als zur Schmerzlinderung erforderlich

IV. Bandage Removal (6-7 Tage nach Transplantation)

  1. Anesthetize Maus mit zugelassenen Verfahren
  2. Cut und entfernen Seidennaht
  3. Mit stumpfen Ende einer Schere, vorsichtig durch Verband (achten Sie darauf nicht zu stören graft) geschnitten und schonend entfernen
  4. Zurück Maus zu reinigen Käfig
  5. Überprüfen Sie Transplantat ~ 8 Stunden nach dem Verband Entfernung auf Anzeichen von Schorfbildung oder Kontraktion. Falls vorhanden, kann Transplantat nicht vaskularisieren haben und sollte als ein technischer Defekt sein.
  6. Monitor täglich auf Anzeichen von Ablehnung (in der Regel als ~ 80% Nekrose des Spendergewebe definiert)
  7. Allogene Hauttransplantationen wird in der Regel zwischen d8-12 post-op ablehnen

V. Hilfreiche Tipps

  1. Harvesting Spendergewebe der Nähe der Basis des Ohres werden: 1) zu maximieren Transplantat Größe und 2) eine ungleichmäßige ventralen Überhang, dass die Aufspaltung erleichtern
  2. Verwenden Sie immer eine neue Rasierklinge zum Rasieren Empfänger
  3. Wenn Schmerzmittel gegeben ip werden, bevor verwalten, um den Vorgang Transplantation post-op Handhabung zu minimieren (Minimierung Chance Störung des Transplantats)
  4. Wenn möglich, entfernen Handschuhe vor dem Auftragen der Verband. Handschuhe neigen dazu, den Verband kleben und erschweren Anwendung
  5. Platzieren einer einzigen Naht an den Verband Ende minimiert vorzeitige Entfernung
  6. Wrap Bandage so fest wie erlaubt und bewerten Atmung Bevor Naht. Wenn Verband zu eng ist, wird Tier den Atem anhalten. Wenn Verband ist zu locker, wird Tieres zu entfernen.

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Discussion

Wie in diesem Video-Beitrag gezeigt hat, ist die Hauttransplantationsmodell eine schnelle und einfache Methode zur Überwachung von allogenen T-Zell-Antworten. Allogene Hauttransplantation hat eine breite Palette von Anwendungen und hat Assay wurde die Effizienz einer Vielzahl von Immunsuppressiva und Toleranzinduktion Protokollen, sowie zur Untersuchung der biologischen Wirkungen der verschiedenen blockierende Antikörper eingesetzt.

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Acknowledgements

NIH Immunologie Training Grant T32 AI 60573 (KRG) und NIH GM 41514 (MDC)

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro-dissecting forceps (curved) Sigma-Aldrich F4142
Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) Fine Science Tools 11053-10 n=2
Strabismus scissors (blunt end) Fine Science Tools 14074-11
Iris forceps (curved) Fine Science Tools 11065-07
Spring scissors (angled) Fine Science Tools 15006-09
Halsey micro needle holder Fine Science Tools 12500-12
10 cm plates Corning 430167
PBS Cellgro 21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) Reckitt Benckiser 517201
Insulin syringes (29 Ga) Monoject 8881 600145
Q-tips Solon Manufacturing Company 362
Single edge razor blades (#9) Smith & Nephew Inc. 67-0238
Silk suture (2-0; PS-2) Ethicon Inc. 583H

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Comments

20 Comments

  1. Kym, I would really be interested to see a histologic profile of the post-op period - do you have the respective images?
    Thank you in advance,
    Peter

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 4:34 PM
  2. Dear Peter- Thanks for the great suggestion. I've contacted JoVE to see if a section can be added to the article containing histo pics from allo- and syn- transplants.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 7:33 PM
  3. The connecting speed is too slow, it spends loog time to watch the whole video. Can we download the video?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 9:35 AM
  4. Hi Merlin. I am sorry you are having trouble.  Is it your connection that is slow or ours?  Please use www.speedtest.net to test your connection.  If the problem is on your end, we are now working on a solution to help people with slow connections.  If you would like to discuss this, please send me an email directly to support@jove.com and I'll see what may be the problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 11:09 AM
  5. Hi,nikitab. Thank your help. I am from China, I test my connection, the connection is slow from USA to my city. could you tell me how to fix this problem?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:04 PM
  6. If you click the pause pause/play button, the video will buffer and you should be able to play it without interruptions after some time.  Hope tihs helps!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:21 PM
  7. Merin, just wanted to let you know that we've upgraded the video player.  How are the videos playing now?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 15, 2008 - 6:34 PM
  8.  wow ive learned alot from this can you tell me more about this? is it different from human skin transplants? there is alot going on with stem cell, is this simular, this is intresting, would this maby help people that have bad skin burns?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:16 PM
  9. hello this is interesting, is this simular to human skin transplants? dŒs this help people with bad skin burns?  theres alot going on with stem cell research is this simular? i have learned alot from this vidio, i wait for your answers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:32 PM
  10. Hi, Kym, I learn the technique of ear-skin graftting through the video. Well, in the articles about skin graft in mice, most of them just use the method of back-back or tail-back skin transplantation. And do you provide some articles about ear-back skin graft to me? Thank you very much.
    cai

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 9, 2009 - 7:37 PM
  11. beautiful video. we use a similar technique at the Diamantina Institute, but I got some handy hints watching your technique. thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 5, 2009 - 1:41 AM
  12. Are donor and recipient mice females or males?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 24, 2009 - 12:54 PM
  13. Hi Kym. I was wondering if you or your colleges transplant embryonic skin that way, or if there has to be special protocol for that?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 21, 2010 - 4:29 PM
  14. Hi Kim,
    we do skin grafts and we have problems with the bandage. I use band-aids (the ones sold in the regular pharmacy for cuts and bruises) and mice chew them off as soon as they weak up from anesthesia. I do not see in your materials list what kind of bandage you use. Would you please tell me where do you buy it and the catalog number? I would really appreciate.
    best regards
    sg

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 28, 2010 - 3:03 PM
  15. why i can't see it? is it because the subscription lock? Our school don't have this database. How can i see it ? is it mean that that i need to buy it ?

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 16, 2011 - 8:02 AM
  16. Access to this article is only available through an institutional subscription. Please contact your Librarian and include me on cc, and we will arrange a ² weeks FREE trial to the entire institution. Not only will this give you access to this article but will provide you with the opportunity to access other content.

    I hope this helps bridge the gap a little and I look forward to speaking with you soon.

    Best wishes,

    Ward Parry
    Director of Library Relations
    Journal of Visualized Experiments (JoVE)
    48 Grove Street, Suite 305, Somerville, MA 0²144
    T. 617.996.9161
    E. ward.parry@jove.com

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 16, 2011 - 6:40 PM
  17. I am very sorry that i reply so late. At first, i try to contact you through email, but it was rejected by the recipient domain.
    I am from China and our school librarian didn't have this service now, so i only to contact you, and thank you to arrange a free trial for me. Please tell me what should i do to apply the free trial, you can send the details to me. If i can't receive your email. i will post message on jove.thank you again.
    Best wishes
    jin liu
    Chengdu, China. Chengdu medical college
    Sichuan Province, Chengdu Chengdu City Jinniu District Road No. 601

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 19, 2011 - 9:37 PM
  18. Dear Jin,
    I have forwarded your response to our account manager in China. She will be in touch in due course. Thank you for your interest in JoVE.

    Best,
    Ward

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 20, 2011 - 12:14 PM
  19. thank you!

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 21, 2011 - 9:37 AM
  20. Hi,Kym, I am doing mouse ear skin grafts recently, I want to ask did mice ear cartilage layer, in the video is the inner or outer ear skin transplantation.Thank you very much!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 14, 2017 - 4:17 AM

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