Trapianto di pelle murina

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Trapianto allogenico pelle è un modello standard per le risposte T test della cellula ospite per diversi antigeni MHC-donatore. Questo video-articolo fornisce un tutorial visivo di ogni passo coinvolti in esecuzione di un trapianto di BALB/c--> C57BL / 6 della pelle.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Come uno dei modelli più rigorosi e meno tecnicamente impegnativo, il trapianto di pelle è un metodo standard per le risposte T test della cellula ospite per diversi antigeni MHC-donatore. Lo scopo di questo video-articolo è di fornire allo spettatore con uno step-by-step dimostrazione visiva del trapianto di cute utilizzando il modello murino. Il protocollo è suddiviso in 5 componenti principali: 1) donatore pelle raccolta; 2) la preparazione del destinatario per il trapianto; 3) trapianto di pelle, 4) la rimozione bendaggio e il rigetto del trapianto di monitoraggio; 5) utili suggerimenti. Una volta esperti, la stessa procedura dovrebbe prendere <10 minuti per eseguire.

Protocol

Prima dell'inizio della sperimentazione:

  • Ottenere l'approvazione IACUC
  • Sterilizzare strumenti chirurgici e Q-tips

I. Harvest tessuto del donatore

  1. Euthanize topo donatore (in conformità con SOP dell'istituzione)
  2. Capelli bagnati dalla base dell'orecchio con l'alcol
  3. Harvest pelle donatore tagliando orecchio alla base
  4. Tessuto posto in lamiera su ghiaccio
  5. Orecchio Spalato: i lati pizzico ventrale e dorsale del tessuto alla base di orecchio con denti di topo forcipe; delicatamente separare tessuti; tessuto galleggiante dorsale, superficie interna verso il basso, in PBS su ghiaccio; scartare collagene lembo ventrale

II. Preparare destinatari per trapianti

  1. Anestetizzare il mouse utilizzando la procedura approvata
  2. Somministrare analgesici per il post-operatorio del dolore (cioè 0,05-0,1 mg / g ip Bupernex)
  3. Del mouse posto in posizione laterale
  4. Eseguire pizzico dito per assicurare animale è sufficientemente sedato
  5. Capelli bagnati con l'alcol e la barba torace
  6. Pulire zona pulita con tampone imbevuto di alcool

III. Trapianto di pelle

  1. Fare ~ 1 incisione cm: pelle tenda con denti di topo pinze e tagliare ~ 0,25-0,5 cm sotto forcipe
  2. Togliere la pelle del donatore da PBS, posto in cima a letto innesto (con superficie interna della pelle dell'orecchio di fronte letto innesto), e rimuovere l'eccesso con PBS sterile Q-tip
  3. Rifilare con cura il via l'eccesso di pelle del donatore così che il trapianto è nettamente in letto innesto (assicurandosi che i bordi del trapianto non siano piegati sotto e che non sbornia innesto sulla pelle del tronco destinatario)
  4. Destinatario avvolgere in bendaggio sterile (con la non-adesivo segmento garza posta sopra l'innesto di pelle)
  5. Assicurarsi che bendaggio non troppo stretto (valutare la respirazione animale) e che le armi sono liberamente mobili
  6. Bendaggio sicuro con un unico 2-0 di sutura di seta
  7. Luogo animale in gabbia pulita (sotto la lampada di riscaldamento fino a animale ha sufficientemente recuperato da anestesia)
  8. Monitor destinatario 1-2/day per i segni di disagio e, se necessario somministrare analgesici per alleviare il dolore

IV. Bendaggio di rimozione (6-7 giorni dopo il trapianto)

  1. Anestetizzare il mouse utilizzando la procedura approvata
  2. Tagliare e rimuovere sutura di seta
  3. Utilizzando le forbici senza punta, con attenzione tagliare bendaggio (facendo attenzione a non disturbare innesto) e rimuovere delicatamente
  4. Ritorna mouse per gabbia pulita
  5. Controllare innesto ~ 8 ore dopo la rimozione del bendaggio per i segni di formazione di croste o di contrazione. Se presente, innesto potrebbe non essere riuscito a vascolarizzano e dovrebbe essere considerato un guasto tecnico.
  6. Monitorare giorno per segni di rifiuto (di solito definito come necrosi ~ 80% del tessuto del donatore)
  7. Trapianti di pelle allogenico di solito rifiutano tra D8-12 post-op

Suggerimenti utili V.

  1. La raccolta dei tessuti del donatore vicino alla base dell'orecchio saranno: 1) massimizzare la dimensione dell'innesto, e 2) forniscono una sporgenza irregolare ventrale che faciliterà la suddivisione
  2. Usare sempre una nuova lama di rasoio per radersi destinatario
  3. Se analgesico deve essere dato ip, somministrare prima del trapianto procedura per ridurre al minimo la gestione post-op (ridurre al minimo la possibilità di interrompere il trapianto)
  4. Se possibile, rimuovere i guanti prima di applicare la benda. Guanti tendono ad attaccare la benda e complicare l'applicazione
  5. Esecuzione di una sutura singola, alla fine bendaggio minimizzare prematura rimozione
  6. Avvolgere bendaggio stretto quanto consentito e valutare la respirazione Prima di immettere sutura. Se la fasciatura è troppo stretta, animale smettere di respirare. Se la fasciatura è troppo lenta, animale rimuoverlo.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Come dimostrato in questo video-articolo, il modello di trapianto di pelle è un metodo rapido e semplice per monitorare le risposte delle cellule T allogeniche. Trapianto allogenico pelle ha una vasta gamma di applicazioni ed è stato utilizzato per il test di efficienza di una varietà di agenti immunosoppressivi e protocolli di induzione della tolleranza, come pure per studiare gli effetti biologici dei vari anticorpi di blocco.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

NIH Immunologia formazione di Grant T32 AI 60573 (KRG) e NIH concedere GM 41514 (MDC)

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro-dissecting forceps (curved) Sigma-Aldrich F4142
Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) Fine Science Tools 11053-10 n=2
Strabismus scissors (blunt end) Fine Science Tools 14074-11
Iris forceps (curved) Fine Science Tools 11065-07
Spring scissors (angled) Fine Science Tools 15006-09
Halsey micro needle holder Fine Science Tools 12500-12
10 cm plates Corning 430167
PBS Cellgro 21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) Reckitt Benckiser 517201
Insulin syringes (29 Ga) Monoject 8881 600145
Q-tips Solon Manufacturing Company 362
Single edge razor blades (#9) Smith & Nephew Inc. 67-0238
Silk suture (2-0; PS-2) Ethicon Inc. 583H

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Comments

20 Comments

  1. Kym, I would really be interested to see a histologic profile of the post-op period - do you have the respective images?
    Thank you in advance,
    Peter

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 4:34 PM
  2. Dear Peter- Thanks for the great suggestion. I've contacted JoVE to see if a section can be added to the article containing histo pics from allo- and syn- transplants.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 7:33 PM
  3. The connecting speed is too slow, it spends loog time to watch the whole video. Can we download the video?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 9:35 AM
  4. Hi Merlin. I am sorry you are having trouble.  Is it your connection that is slow or ours?  Please use www.speedtest.net to test your connection.  If the problem is on your end, we are now working on a solution to help people with slow connections.  If you would like to discuss this, please send me an email directly to support@jove.com and I'll see what may be the problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 11:09 AM
  5. Hi,nikitab. Thank your help. I am from China, I test my connection, the connection is slow from USA to my city. could you tell me how to fix this problem?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:04 PM
  6. If you click the pause pause/play button, the video will buffer and you should be able to play it without interruptions after some time.  Hope tihs helps!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:21 PM
  7. Merin, just wanted to let you know that we've upgraded the video player.  How are the videos playing now?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 15, 2008 - 6:34 PM
  8.  wow ive learned alot from this can you tell me more about this? is it different from human skin transplants? there is alot going on with stem cell, is this simular, this is intresting, would this maby help people that have bad skin burns?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:16 PM
  9. hello this is interesting, is this simular to human skin transplants? dŒs this help people with bad skin burns?  theres alot going on with stem cell research is this simular? i have learned alot from this vidio, i wait for your answers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:32 PM
  10. Hi, Kym, I learn the technique of ear-skin graftting through the video. Well, in the articles about skin graft in mice, most of them just use the method of back-back or tail-back skin transplantation. And do you provide some articles about ear-back skin graft to me? Thank you very much.
    cai

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 9, 2009 - 7:37 PM
  11. beautiful video. we use a similar technique at the Diamantina Institute, but I got some handy hints watching your technique. thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 5, 2009 - 1:41 AM
  12. Are donor and recipient mice females or males?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 24, 2009 - 12:54 PM
  13. Hi Kym. I was wondering if you or your colleges transplant embryonic skin that way, or if there has to be special protocol for that?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 21, 2010 - 4:29 PM
  14. Hi Kim,
    we do skin grafts and we have problems with the bandage. I use band-aids (the ones sold in the regular pharmacy for cuts and bruises) and mice chew them off as soon as they weak up from anesthesia. I do not see in your materials list what kind of bandage you use. Would you please tell me where do you buy it and the catalog number? I would really appreciate.
    best regards
    sg

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 28, 2010 - 3:03 PM
  15. why i can't see it? is it because the subscription lock? Our school don't have this database. How can i see it ? is it mean that that i need to buy it ?

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 16, 2011 - 8:02 AM
  16. Access to this article is only available through an institutional subscription. Please contact your Librarian and include me on cc, and we will arrange a ² weeks FREE trial to the entire institution. Not only will this give you access to this article but will provide you with the opportunity to access other content.

    I hope this helps bridge the gap a little and I look forward to speaking with you soon.

    Best wishes,

    Ward Parry
    Director of Library Relations
    Journal of Visualized Experiments (JoVE)
    48 Grove Street, Suite 305, Somerville, MA 0²144
    T. 617.996.9161
    E. ward.parry@jove.com

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 16, 2011 - 6:40 PM
  17. I am very sorry that i reply so late. At first, i try to contact you through email, but it was rejected by the recipient domain.
    I am from China and our school librarian didn't have this service now, so i only to contact you, and thank you to arrange a free trial for me. Please tell me what should i do to apply the free trial, you can send the details to me. If i can't receive your email. i will post message on jove.thank you again.
    Best wishes
    jin liu
    Chengdu, China. Chengdu medical college
    Sichuan Province, Chengdu Chengdu City Jinniu District Road No. 601

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 19, 2011 - 9:37 PM
  18. Dear Jin,
    I have forwarded your response to our account manager in China. She will be in touch in due course. Thank you for your interest in JoVE.

    Best,
    Ward

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 20, 2011 - 12:14 PM
  19. thank you!

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 21, 2011 - 9:37 AM
  20. Hi,Kym, I am doing mouse ear skin grafts recently, I want to ask did mice ear cartilage layer, in the video is the inner or outer ear skin transplantation.Thank you very much!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 14, 2017 - 4:17 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics