בחירה אין ברירה מבחני לבחינות ההתנגדות של thaliana א 'חרקים לעיסת

Biology
 

Summary

עמידות הצמח אל אוכלי צמחים חרקים לעיסה ניתן לבדוק בכמה דרכים. כאן, אנו מדגימים כיצד הגדרת בחירה ניסוי אין ברירה עם thaliana הצמח ארבידופסיס מודל לזהות התנגדות המינים הדברה פיאריס ראפא.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

De Vos, M., Jander, G. Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects. J. Vis. Exp. (15), e683, doi:10.3791/683 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

הזחלים של פרפר כרוב קטן הלבן הם מזיקים במסגרות חקלאיות. זה מין זחל הזנות מצמחים במשפחה כרוב, הכוללים יבולים רבים כגון כרוב, ברוקולי, כרוב ניצנים ועוד לגידול חרקים מתרחשת על צמחים כרוב בחממה. לפחות שני כלובים יש צורך בגידול של פיאריס ראפא. אחת עבור הזחלים והשני להכיל את המבוגרים, את הפרפרים. כדי לחקור את תפקידה של הורמונים צמחיים וכימיקלים רעילים המפעל התנגדות הדברה זה חרק, אנחנו מדגימים שני ניסויים. ראשית, קביעת תפקידה של חומצה jasmonic (JA - הורמון צמחי ציינו לעתים קרובות התנגדות חרקים) ב התנגדות החרק לעיסה פיאריס ראפא. צמיחה קטרפילר ניתן להשוות על צמחי בר, ​​סוג מוטציה לקויי בייצור של JA. ניסוי זה נחשב "אין ברירה", כי הזחלים נאלצים להתקיים על מפעל בודד אשר מסנתז או חסר JA. שנית, אנו להדגים ניסוי חוקר את תפקידם של glucosinolates, אשר משמשים ההטלה (הטלה) אותות. כאן, אנו משתמשים ארבידופסיס WT ו מוטנטים לקויה בייצור glucosinolate ב ניסוי "בחירה" שבו פרפרים נקבה רשאים לבחור להטיל את ביציהם על צמחים או של גנוטיפ. וידאו זה מדגים את הגדרת הניסוי עבור שני מבחני כמו גם תוצאות נציג.

Protocol

אין ניסוי בחירה:

  1. בזהירות להקיף את הצמח ארבידופסיס עניין בכוס פלסטיק. במקרה זה: Col-0 (WT) ו מוטציה לקויה בייצור של JA. ודא שיש לך להגביל את הנזק על העלים. לשם כך אני משתמש האחורי של מכחול זה.
  2. שימוש במכחול דק לקחת זחלים שבקעו זה עתה מן המושבה על כרוב.
  3. בזהירות במקום זחל על צמחי ארבידופסיס.
  4. משקל זחל על 4 ביממה, 7, 10. טיפ: לגדל צמחים בתנאים שלך יום קצר (8 שעות אור) כדי להגדיל את הצמיחה של צמח (1 הזחל יכול למלא את מחזור החיים המלא על צמח 1).

הבחירה ניסוי:

  1. שני צמחים נבחרים, אחד לכל גנוטיפ. הטוב ביותר הוא לגדל צמחים בסיר עם זאת, כדי להגביל גורמים אחרים, כגון אפקטים מגש, וכו '
  2. הנח את הצמחים בכלוב פרפר.
  3. בחר נקבה פורייה. אני בדרך כלל לתפוס נקבה כי הוא פעיל המטילה ביצי במושבה גידול.
  4. שחרר את הנקבה בכלוב עם הבחירה של שני מפעלים למשך 24 שעות.

טיפ 1: כדי למנוע להשפיע על למידה, אין שימוש חוזר נשים לבדיקות הבחירה הבאים.

טיפ 2: אפשר רק להשוות צמחים בעלי פנוטיפ צמיחה דומה. לחלופין, תוכל לעלות עלה מ גנוטיפ על גבי כל בקבוק Erlenmeyer ולהשוות את האטרקטיביות שלהם נקבה.

בקר ביקורות שנתי של ביולוגיה הצמח לקבלת מידע נוסף על חסינות פרוטוקול צמח זה herbivory חרקים.

Comments

6 Comments

  1. I thought you did an excellent job, nice and clear explainations, good transitions and summary.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 14, 2008 - 3:06 PM
  2. 1. perhaps you could explain why you use  arabidopsis instead of cabbage. My assumption is that much work, including sequencing of the genome, had been done on the arabidopsis so you were able to add-remove genetic components you wanted to test for. ². how long is a generation of the cabbage butterfly? 3. Choice experiment. Why did you not use multiple larvae released into cage with the two types of arabidopsis? Some what confusing because there were two different growth stages and two different stimuli tested for in the same testing 4. Excellent job of editing and presenting. It fit nicely on the video   Jay

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 6, 2008 - 8:00 AM
  3. Dear Jay, Thank you for your comments. Let me answer your questions and give you some additional information on the life cycle of Pieris rapae. 1. Larvae of the small white butterfly will feed from almost all cruciferous plants. We use Arabidopsis thaliana because of its short generation time, small size and above all its sequenced genome and vast number of available mutants. These mutants allow us to unravel the defense responses during the host-insect interaction. As demonstrated in the video, we show that jasmonic acid plays a major role in the plant's defensive capacities towards Pieris rapae. Interestingly, we also show that glucosinolates, whose breakdown products are toxic to many generalist caterpillars, are used as by Pieris rapae female butterflies (specialist on cruciferous plants) as oviposition cues. We have recently published a paper in Plant Physiology (March ²008) on this topic. ². Pieris rapae life cycle. The development of Pieris rapae strongly depends on the temperature and ranges from 5-7 weeks. We rear our insects at ²3C. Eggs hatch in 3-7 days; Larvae have 5 larval stages (L1-L5; ~ 10-14 day); Pupae (7-14 days); Adults (~14-²0 days). Under our rearing conditions eggs hatch in 5 days, complete larval development until pupation takes 1² days, pupa take ~7 days to eclosion, adult life is ~² weeks. 3. Using the video we wanted to show different experimental set-ups for testing plant-insect interaction. A choice test (preference) will give you additional insights that are not necessarily displayed in a no-choice test (edibility). There are other possibilities for choice tests, including the one you mentioned. The results obtained with this approach, e.g. leaf area eaten, are hard to quantify and rather subjective. Therefore, we mostly use the no-choice set-up to determine the effect on caterpillar performance. Martin 

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 7, 2008 - 11:05 AM
  4. The demo was very clear to me, but the music was .........
    Maybe you should point out in the video, that these experiments have to repeated.

    Reply
    Posted by: Birgid B. S.
    July 7, 2009 - 2:13 AM
  5. I had a question regarding the increase of weight of the Caterpillar.well the readings are taken on 4,7,10 day.The coi1 plants if are consumed earlier ,how come the weight is increased,if no plant material is left till 10th day?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 14, 2012 - 11:19 PM
  6. I love this vedio and may you tag this vedio to me

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 16, 2012 - 11:44 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics