चबाने वाली कीड़े ए thaliana के प्रतिरोध परीक्षण के लिए च्वाइस और नहीं, च्वाइस Assays

Biology
 

Summary

संयंत्र चबाने कीट शाकाहारी करने के लिए प्रतिरोध कई मायनों में परीक्षण किया जा सकता है. यहाँ, हम प्रदर्शन कैसे एक विकल्प और कोई विकल्प मॉडल संयंत्र Arabidopsis thaliana कीट प्रजातियों pieris rapae के खिलाफ प्रतिरोध की पहचान के साथ एक प्रयोग स्थापित करने के लिए.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

De Vos, M., Jander, G. Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects. J. Vis. Exp. (15), e683, doi:10.3791/683 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

छोटे सफेद गोभी की तितली का लार्वा कृषि सेटिंग में एक कीट हैं. यह कमला प्रजातियों गोभी परिवार में पौधों, जो गोभी जैसे कई फसलों में शामिल से खिलाती है, ब्रोकोली, ब्रसेल्स स्प्राउट्स आदि कीड़े के पालन गोभी के पौधों पर ग्रीनहाउस में जगह लेता है. कम से कम दो पिंजरों pieris rapae के पालन के लिए आवश्यक हैं. लार्वा और वयस्कों, तितलियों होते अन्य के लिए. आदेश में संयंत्र हार्मोन और इस कीट प्रतिरोध में विषाक्त रसायन संयंत्र की भूमिका की जांच करने के लिए, हम दो प्रयोगों का प्रदर्शन. सबसे पहले, चबाने कीट pieris rapae प्रतिरोध में jasmonic एसिड (जावेद - एक संयंत्र हार्मोन कीड़ों के लिए प्रतिरोध में अक्सर संकेत) की भूमिका का निर्धारण. कमला विकास जंगली प्रकार और उत्परिवर्ती जावेद के उत्पादन में बिगड़ा पौधों पर तुलना की जा सकती है. यह प्रयोग "कोई विकल्प" माना जाता है, क्योंकि लार्वा के लिए एक एकल संयंत्र जो synthesizes या जावेद की कमी है पर निर्वाह करने के लिए मजबूर कर रहे हैं. दूसरा, हम एक प्रयोग है कि glucosinolates, जो oviposition (अंडे बिछाने) संकेतों के रूप में उपयोग किया जाता है की भूमिका की जांच प्रदर्शित करता है. यहाँ, हम एक "विकल्प" है जो प्रयोग में महिला तितलियों के करने के लिए या तो जीनोटाइप के पौधों पर अपने अंडे देना चुन अनुमति दी जाती है में glucosinolate उत्पादन में WT और उत्परिवर्ती बिगड़ा Arabidopsis का उपयोग करें. इस वीडियो दोनों के रूप में के रूप में अच्छी तरह assays प्रतिनिधि परिणाम के लिए प्रयोगात्मक स्थापना को दर्शाता है.

Protocol

नहीं च्वाइस का प्रयोग करें:

  1. ध्यान से एक प्लास्टिक के कप में ब्याज की Arabidopsis संयंत्र रखें. इस मामले में: कर्नल (WT) शून्य और एक उत्परिवर्ती जावेद के उत्पादन में बिगड़ा. यकीन है कि तुम पत्तियों को नुकसान की सीमा. के लिए कि मैं इस तूलिका के पीछे का उपयोग करें.
  2. गोभी पर कॉलोनी से एक हौसले से रची लार्वा रखना ठीक तूलिका का प्रयोग करें.
  3. Arabidopsis पौधों पर ध्यान लार्वा जगह.
  4. दिन 4, 7, 10 में वजन लार्वा. सुझाव: कम दिन (8 घंटा प्रकाश) शर्तों के वनस्पति वृद्धि (1 लार्वा एक संयंत्र पर अपनी पूरी जीवन चक्र को पूरा कर सकते हैं) को बढ़ाने के तहत अपने संयंत्रों आगे बढ़ें.

च्वाइस प्रयोग:

  1. दो पौधों चयनित प्रत्येक जीनोटाइप. एक ही बर्तन में पौधों बढ़ने, ट्रे प्रभाव के रूप में अन्य कारकों, आदि की सीमा
  2. एक तितली के पिंजरे में पौधों रखें.
  3. एक उपजाऊ महिला का चयन करें. मैं आमतौर पर एक महिला है कि सक्रिय रूप से पालन कॉलोनी में अंडे बिछाने को पकड़ने.
  4. 24 घंटे के लिए दो संयंत्रों की पसंद के साथ पिंजरे में महिला रिलीज.

टिप 1: करने के लिए सीखने का एक असर को खत्म करने, महिलाओं में बाद में पसंद परीक्षण के लिए पुनः प्रयोग नहीं करते.

टिप 2: एक ही पौधों है कि एक समान विकास phenotype है की तुलना कर सकते हैं. वैकल्पिक रूप से, आप प्रत्येक जीनोटाइप से एक Erlenmeyer फ्लास्क के शीर्ष पर एक पत्ती और माउंट सकता है एक महिला अपने आकर्षण की तुलना.

कृपया यात्रा संयंत्र जीवविज्ञान की वार्षिक समीक्षा के बारे में अधिक जानकारी के लिए इस प्रोटोकॉल और संयंत्र कीट herbivory के लिए प्रतिरक्षा.

Comments

6 Comments

  1. I thought you did an excellent job, nice and clear explainations, good transitions and summary.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 14, 2008 - 3:06 PM
  2. 1. perhaps you could explain why you use  arabidopsis instead of cabbage. My assumption is that much work, including sequencing of the genome, had been done on the arabidopsis so you were able to add-remove genetic components you wanted to test for. ². how long is a generation of the cabbage butterfly? 3. Choice experiment. Why did you not use multiple larvae released into cage with the two types of arabidopsis? Some what confusing because there were two different growth stages and two different stimuli tested for in the same testing 4. Excellent job of editing and presenting. It fit nicely on the video   Jay

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 6, 2008 - 8:00 AM
  3. Dear Jay, Thank you for your comments. Let me answer your questions and give you some additional information on the life cycle of Pieris rapae. 1. Larvae of the small white butterfly will feed from almost all cruciferous plants. We use Arabidopsis thaliana because of its short generation time, small size and above all its sequenced genome and vast number of available mutants. These mutants allow us to unravel the defense responses during the host-insect interaction. As demonstrated in the video, we show that jasmonic acid plays a major role in the plant's defensive capacities towards Pieris rapae. Interestingly, we also show that glucosinolates, whose breakdown products are toxic to many generalist caterpillars, are used as by Pieris rapae female butterflies (specialist on cruciferous plants) as oviposition cues. We have recently published a paper in Plant Physiology (March ²008) on this topic. ². Pieris rapae life cycle. The development of Pieris rapae strongly depends on the temperature and ranges from 5-7 weeks. We rear our insects at ²3C. Eggs hatch in 3-7 days; Larvae have 5 larval stages (L1-L5; ~ 10-14 day); Pupae (7-14 days); Adults (~14-²0 days). Under our rearing conditions eggs hatch in 5 days, complete larval development until pupation takes 1² days, pupa take ~7 days to eclosion, adult life is ~² weeks. 3. Using the video we wanted to show different experimental set-ups for testing plant-insect interaction. A choice test (preference) will give you additional insights that are not necessarily displayed in a no-choice test (edibility). There are other possibilities for choice tests, including the one you mentioned. The results obtained with this approach, e.g. leaf area eaten, are hard to quantify and rather subjective. Therefore, we mostly use the no-choice set-up to determine the effect on caterpillar performance. Martin 

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 7, 2008 - 11:05 AM
  4. The demo was very clear to me, but the music was .........
    Maybe you should point out in the video, that these experiments have to repeated.

    Reply
    Posted by: Birgid B. S.
    July 7, 2009 - 2:13 AM
  5. I had a question regarding the increase of weight of the Caterpillar.well the readings are taken on 4,7,10 day.The coi1 plants if are consumed earlier ,how come the weight is increased,if no plant material is left till 10th day?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 14, 2012 - 11:19 PM
  6. I love this vedio and may you tag this vedio to me

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 16, 2012 - 11:44 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics