Keuze en No-keuze Assays voor het testen van de weerstand van A. thaliana te kauwen Insecten

Biology
 

Summary

Plant de weerstand tegen kauwen insect herbivoren kunnen worden getest op verschillende manieren. Hier hebben we laten zien hoe je set-up een keuze en een no-keuze-experiment met de modelplant Arabidopsis thaliana te identificeren weerstand tegen de plaagsoorten Pieris rapae.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

De Vos, M., Jander, G. Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects. J. Vis. Exp. (15), e683, doi:10.3791/683 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Larven van de kleine witte kool vlinder zijn een plaag in de landbouw-instellingen. Deze rups soort feeds van planten in de kool familie, die veel gewassen zoals kool omvatten, broccoli, spruitjes etc. grootbrengen van de insecten vindt plaats op kool planten in de kas. Minstens twee kooien zijn nodig voor de opfok van Pieris rapae. Een voor de larven en de andere aan de volwassenen, de vlinders bevatten. Met het oog op de rol van de plantenhormonen en giftige plant chemicaliën in verzet tegen dit insect plaag te onderzoeken, tonen we aan twee experimenten. De eerste, de bepaling van de rol van jasmonzuur (JA - een plantenhormoon vaak aangegeven in resistentie tegen insecten) in het verzet tegen de kauwen insect Pieris rapae. Rups groei kan worden vergeleken op wild-type en mutant planten verminderde in de productie van JA. Dit experiment wordt beschouwd als "No Choice", omdat de larven worden gedwongen om van te leven op een enkele plant die synthetiseert of een tekort in JA. Ten tweede tonen we aan een experiment dat de rol van de glucosinolaten, die worden gebruikt als ovipositie (leg) signalen onderzoekt. Hier gebruiken we WT en mutant Arabidopsis verminderde in glucosinolaten de productie in een 'Choice "experiment waarin de vrouwelijke vlinders mogen kiezen om hun eieren te leggen op planten van een van beide genotype. Deze video toont de experimentele opstelling voor beide testen alsmede representatieve resultaten.

Protocol

No Choice Experiment:

  1. Voorzichtig omsluiten de Arabidopsis plant van belang in een plastic beker. In dit geval: Col-0 (WT) en een mutant verminderde in de productie van JA. Zorg ervoor dat je beperking van schade aan de bladeren. Voor dat gebruik ik de achterkant van dit penseel.
  2. Gebruik een fijn penseel met een vers uitgekomen larven te nemen van de kolonie op kool.
  3. Plaats voorzichtig de larve op de Arabidopsis-planten.
  4. Gewicht larve op dag 4, 7, 10. TIP: Kweek je planten onder korte dag omstandigheden (acht uur licht) tot vegetatieve groei (een larve kan zijn volledige levenscyclus te voldoen op een plant) te verhogen.

Keuze Experiment:

  1. Twee planten zijn geselecteerd, een van elk genotype. Het beste is om planten groeien in dezelfde pot, met andere factoren, zoals de lade effecten, enz. te beperken
  2. Zet de planten in een vlinder kooi.
  3. Selecteer een vruchtbaar vrouwtje. Ik meestal vangen een vrouw die actief is eieren leggen in de opvoeding kolonie.
  4. Laat de vrouw in de kooi met de keuze uit twee planten voor 24 uur.

TIP 1: Om een invloed van het leren te sluiten, mag niet aan vrouwen hergebruiken voor de volgende keuze tests.

TIP 2: Men kan alleen maar vergelijken met planten die een vergelijkbare groei fenotype hebben. Als alternatief kun je een blad monteren van elk genotype op de top van een erlenmeyer en vergelijken hun aantrekkelijkheid voor een vrouwtje.

Ga naar Annual Reviews van Plant Biology voor meer informatie over dit protocol en de plant immuun voor insecten herbivorie.

Comments

6 Comments

  1. I thought you did an excellent job, nice and clear explainations, good transitions and summary.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 14, 2008 - 3:06 PM
  2. 1. perhaps you could explain why you use  arabidopsis instead of cabbage. My assumption is that much work, including sequencing of the genome, had been done on the arabidopsis so you were able to add-remove genetic components you wanted to test for. ². how long is a generation of the cabbage butterfly? 3. Choice experiment. Why did you not use multiple larvae released into cage with the two types of arabidopsis? Some what confusing because there were two different growth stages and two different stimuli tested for in the same testing 4. Excellent job of editing and presenting. It fit nicely on the video   Jay

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 6, 2008 - 8:00 AM
  3. Dear Jay, Thank you for your comments. Let me answer your questions and give you some additional information on the life cycle of Pieris rapae. 1. Larvae of the small white butterfly will feed from almost all cruciferous plants. We use Arabidopsis thaliana because of its short generation time, small size and above all its sequenced genome and vast number of available mutants. These mutants allow us to unravel the defense responses during the host-insect interaction. As demonstrated in the video, we show that jasmonic acid plays a major role in the plant's defensive capacities towards Pieris rapae. Interestingly, we also show that glucosinolates, whose breakdown products are toxic to many generalist caterpillars, are used as by Pieris rapae female butterflies (specialist on cruciferous plants) as oviposition cues. We have recently published a paper in Plant Physiology (March ²008) on this topic. ². Pieris rapae life cycle. The development of Pieris rapae strongly depends on the temperature and ranges from 5-7 weeks. We rear our insects at ²3C. Eggs hatch in 3-7 days; Larvae have 5 larval stages (L1-L5; ~ 10-14 day); Pupae (7-14 days); Adults (~14-²0 days). Under our rearing conditions eggs hatch in 5 days, complete larval development until pupation takes 1² days, pupa take ~7 days to eclosion, adult life is ~² weeks. 3. Using the video we wanted to show different experimental set-ups for testing plant-insect interaction. A choice test (preference) will give you additional insights that are not necessarily displayed in a no-choice test (edibility). There are other possibilities for choice tests, including the one you mentioned. The results obtained with this approach, e.g. leaf area eaten, are hard to quantify and rather subjective. Therefore, we mostly use the no-choice set-up to determine the effect on caterpillar performance. Martin 

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 7, 2008 - 11:05 AM
  4. The demo was very clear to me, but the music was .........
    Maybe you should point out in the video, that these experiments have to repeated.

    Reply
    Posted by: Birgid B. S.
    July 7, 2009 - 2:13 AM
  5. I had a question regarding the increase of weight of the Caterpillar.well the readings are taken on 4,7,10 day.The coi1 plants if are consumed earlier ,how come the weight is increased,if no plant material is left till 10th day?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 14, 2012 - 11:19 PM
  6. I love this vedio and may you tag this vedio to me

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 16, 2012 - 11:44 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics